Alteraes Fisiolgicas e Bioqumicas em Sementes de Milho Tratadas com Inseticidas e

Armazenadas
Elise de M. Pereira1, Luiz H.C. Silva2, Joo A. Oliveira3,Las A.Pereira4, dila V. de R.Von.
Pinho5,Adriano V. Delly6 e Vivian E. Nascimento7
1

Mestranda em Fitotecnia, email: elisedematos@yahoo.com.br; 2 Mestre, Eng. Agr. Syngenta;3,5Professores do Dept de Agricultura, email:
jalmir@dag.ufla.br; edila@dag.ufla.br; 4Graduanda em Agronomia;6 Doutorando em Fitotecnia;7 Doutoranda em Fitotecnia. Universidade
Federal de Lavras, C.P. 3037, Lavras, MG CEP 37.200-000.

Palavras-chave: Isoenzimas, eletroforese, qualidade de sementes e deteriorao.

Introduo
O tratamento de sementes uma importante ferramenta para controle de pragas devido
ao amplo espectro de ao dos produtos utilizados, baixo custo e eficincia no controle. O
avano tecnolgico no tratamento de sementes bastante positivo, mas pouco se sabe sobre o
efeito desse tratamento com inseticidas ao longo do armazenamento. Dvidas sobre qual o
melhor princpio ativo, qual o potencial de armazenamento de uma semente tratada e qual o
efeito deste tratamento na qualidade de sementes so frequentes para fabricantes de
defensivos, produtores de sementes e agricultores.
A perda da qualidade e viabilidade da semente, com a evoluo do seu processo
deteriorativo, durante o armazenamento, pode estar relacionada a alteraes bioqumicas que
conduzem a um comprometimento de suas atividades metablicas. De acordo com Spinola
(2000) as alteraes de enzimas podem ser marcadores mais efetivos do que os testes
utilizados para avaliao da qualidade fisiolgica, por detectar alteraes metablicas no
incio do processo de deteriorao das sementes, durante o armazenamento. Algumas
mudanas deteriorativas geram desorganizao e perda da integridade de membrana, reduo
na capacidade de sintetizar protenas e cidos nuclicos, danos na taxa respiratria, alm de
danos no metabolismo de DNA. A maior parte das protenas em sementes metabolicamente
inativa e possui a funo de reservas que so utilizadas para o crescimento do eixo
embrionrio durante a germinao. As protenas metabolicamente ativas constituem uma
pequena parcela do total, mas so extremamente importantes para o desenvolvimento e
germinao das sementes. Como enzimas, elas catalisam todos os processos metablicos na
digesto, translocao e utilizao de reservas.
Assim os marcadores moleculares de protenas tm sido utilizados em vrias pesquisas
para a elucidao do processo de deteriorao de sementes sob diferentes condies. Ferreira
et. al., 2007 observaram por meio dos padres eletroforticos das enzimas catalase e
superxido dismutase maior atividade dessas enzimas em sementes de milho tratadas com
bioestimulante associado ao tratamento de sementes e armazenadas por seis meses, em
relao s das sementes tratadas na pr-semeadura. Nesta pesquisa objetivou-se avaliar as
alteraes fisiolgicas e bioqumicas em sementes de milho submetidas ao tratamento
inseticida durante 12 meses de armazenamento.

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Material e Mtodos
A pesquisa foi desenvolvida no Laboratrio Central de Sementes do Departamento de
Agricultura da Universidade Federal de Lavras (UFLA).
Foram utilizadas sementes de milho do hbrido 393, fornecidas pela empresa
Monsanto do Brasil. As sementes foram adquiridas com tratamento qumico realizado na
prpria empresa, o qual foi constitudo pelos pelo fungicida (Maxim XL) e inseticidas (KObiol 25 EC e Actellic 500 EC) indicados para armazenamento.
As sementes foram tratadas com inseticidas sistmicos recomendados para o controle
de pragas de solos. Os produtos utilizados no tratamento das sementes foram fornecidos, pela
empresa Syngenta Proteo de Cultivos. Os trs produtos utilizados foram: Thiametoxan,
Thiodicarb e Imidacloprid nas doses recomendadas pelo fabricante.
Aps o tratamento das sementes, aguardou-se um intervalo suficiente para a secagem
do produto e posteriormente as mesmas foram imediatamente acondicionadas em embalagens
de papel multi-foliado. As avaliaes correspondentes poca zero foram realizadas logo
aps o tratamento com os inseticidas.
As sementes foram armazenadas em dois ambientes distintos, sendo um climatizado
(Cmara Fria e Seca/UFLA/Setor de Sementes) com temperatura regulada a 10C e 50% de
umidade relativa e outro no climatizado (Unidade de Beneficiamento de Sementes
UBS/UFLA). Aps zero e 12 meses de armazenamento as sementes foram submetidas aos
testes de germinao, emergncia e ndice de velocidade de emergncia e anlises
isoenzimticas para MDH, ADH, esterase e amilase.
As isoenzimas foram extradas de subamostras 100 mg de sementes modas, aos quais
foram adicionados 350 L de tampo de extrao (Tris-HCl 0,2 M pH 8,0), e 0,1% mercaptoetanol. Em seguida, as amostras foram agitadas em vrtex por 1minuto e colocado
em geladeira overnight. Aps este perodo, as amostras foram centrifugadas a 14.000 rpm a
4oC, por 30 minutos.
Foram aplicados 60 L do sobrenadante nos gis de poliacrilamida a 7,5% (gel
separador) e 4,5% (gel concentrador). O sistema tampo gel/eletrodo utilizado foi tris-glicina
pH 8,9. As corridas foram efetuadas a 120 V, por 6 horas. Em seguida os gis foram
revelados para as enzimas ADH, MDH, -amilase e EST de acordo com Alfenas et al. (2006).
Resultados e Discusso
Observa-se pelos resultados da Tabela 1, referente ao teste de germinao, efeito
fitotxico do produto Imidacloprid logo aps o tratamento. No ambiente no climatizado
houve reduo dos valores de germinao em sementes tratadas com todos os inseticidas
quando comparados testemunha, sem tratamento inseticida exceto o Tiamethoxan. No
perodo de doze meses de armazenamento os valores de germinao das sementes tratadas
com Tiametoxan no diferiram estatisticamente daqueles observados em sementes tratadas
com o inseticida Thiodicarb e foram superiores ao Imidacloprid para sementes armazenadas
em cmara fria.
O produto Tiamethoxan mostrou-se superior aos demais inseticidas. Aps 12 meses de
armazenamento em ambiente no climatizado, a superioridade deste produto ficou mais
evidente, no diferindo da testemunha e superior a Thiodicarb e Imidacloprid (Tabela 1).

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Tabela 1. Germinao de sementes de milho tratadas com diferentes inseticidas, armazenadas

em ambiente climatizado (C) e no climatizado (NC). UFLA, Lavras, MG, 2009.
0 meses

12 meses

Produto
C

NC

NC

Testemunha

95aA

95aA

91aA

49aB

Tiamethoxan

89aA

89aA

81bA

47aB

Thiodicarb

92aA

92aA

86bA

37bB

Imidacloprid

87bA

87bA

67cA

18cB

** mdias seguidas de mesma letra minscula na coluna e maiscula na linha no diferem

estatisticamente a 5% de significncia.
A germinao tambm foi afetada pelo ambiente de armazenamento. Aps o
armazenamento em ambiente no climatizado, foram observados valores inferiores ao mnimo
exigido pela legislao vigente (80%) para todos os tratamentos (MAPA, 2005).
Resultados similares foram obtidos por Nunes (2008). O autor analisou a interao
ambiente x perodos de armazenamento em relao ao desempenho das sementes de milho
tratadas com o inseticida Tiametoxan e observou que as sementes no ambiente com controle
de temperatura de 15o C, durante um ano, no apresentaram reduo em seu porcentual de
germinao. Por outro lado, no ambiente convencional a germinao se manteve por seis
meses, vindo a decrescer a partir deste perodo.
preciso destacar que, com exceo do Imidacloprid, sementes tratadas com os
demais inseticidas mantiveram os valores de germinao superior ao padro nacional do
sistema de certificao de sementes (acima de 80% - MAPA, 2005), em ambiente
climatizado, mesmo aps um ano de armazenamento.
De maneira geral, para o ndice de velocidade de emergncia (IVE) os efeitos
negativos do produto Imidacloprid puderam ser visualizados j no incio do experimento. Os
demais produtos avaliados (Tiametoxan e Thiodicarb) apresentaram os mesmos efeitos
negativos, para emergncia, somente aps o armazenamento. O IVE no foi afetado, para
estes dois produtos, aps o armazenamento (Tabela 2). O IVE foi afetado pelo ambiente de
armazenamento e ao final do experimento (12 meses) os resultados no ambiente climatizado
foram superiores aos do ambiente no climatizado.
Tabela 2. Emergncia e ndice de velocidade de emergncia de plntulas de milho oriundas
de sementes tratadas com diferentes inseticidas, ao longo do armazenamento. UFLA, Lavras,
MG, 2009.
Produto

ndice de Velocidade de Emergncia

Emergncia (%)

Tempo de Armazenamento (meses)

Tempo de Armazenamento (meses)

12

12

Testemunha

3,25 aA

4,21 aB

96 aA

77 aB

Tiametoxan

3,47 Ba

4,26 aB

93 aA

71 bB

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Thiodicarb

3,37 bA

4,18 aB

94 aA

77 aB

3,65 cA
4,59 bB
91 aA
66 cB
Imidacloprid
** mdias seguidas de mesma letra minscula na coluna e maiscula na linha no diferem estatisticamente a 5%
de significncia.

Com relao s analise dos padres enzimticos observa-se que para a enzima lcool
desidrogenase, tanto para as sementes tratadas com Tiametoxan quanto naquelas tratadas
com Imidaclorprid padres semelhantes aos observados na testemunha, no apresentando
diferenas em relao ao tempo e ao tipo de armazenamento (Figura 1). J naquelas tratadas
com o inseticida Thiodicarb, foi observada menor atividade desta enzima quando
armazenadas por 12 meses de armazenamento em ambiente no controlado. Esta enzima est
presente em reaes de fermentao na primeira etapa da respirao, e transforma o
acetaldedo em etanol que em certas quantidades pode ser txico para a clula.
Tiometoxan

0 meses

Thiodicarb

12 meses 12 meses
UBS

0 meses 12 meses

CF

Imidaclorprid

0 meses

12 meses
UBS

12 meses
CF

UBS
Testemunha

12 meses 0 meses
CF

12 meses

12 meses

UBS

CF

Figura 1. Padres enzimticos reveladas para a enzima ADH.

A enzima Malato desidrogenase uma enzima do ciclo de Krebs que transforma o

malato em oxaloacetato produzindo um NADH, o qual utilizado para gerar energia. Desta
forma, esta enzima pode estar ligada a gerao de energia para processos metablicos
importantes como a germinao das sementes. Na Figura 2 observam-se padres semelhantes
em sementes da testemunha, e tratadas com os inseticidas Tiametoxan e Imidaclorprid. Foi
observada menor atividade dessa enzima quando as sementes foram tratadas e armazenadas
por 12 meses em condies no controladas. Quando tratadas com o inseticida Thiodicarb,
nenhuma atividade foi visualizada. Isto pode ser atribudo a algum erro no procedimento, o
mesmo ocorrendo para enzima esterase, durante os processos de extrao, corrida e revelao
da enzima.

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Tiometoxan

0 meses

Thiodicarb

12 meses 0 meses

12 meses

CF

UBS

Imidaclorprid

0 meses

12 meses
UBS

12 meses

12 meses

UBS

CF

Testemunha

12 meses 0 meses
CF

12 meses

12 meses

UBS

CF

Figura 2. Padres enzimticos revelados para a enzima MDH.

A esterase uma enzima que pode estar relacionada com a quebra de lipdeos no
processo de germinao de sementes sendo importante para o crescimento do eixo
embrionrio. Para essa enzima nas sementes no tratadas e tratadas com Tiametoxan no
foram observadas diferenas nos padres enzimticos. J naquelas tratadas com o inseticida
Imidaclorprid, foi verificada menor atividade quando as sementes foram tratadas e
armazenadas por 12 meses sob condies no controladas, Figura 3.

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Tiometoxan

0 meses

Thiodicarb

12 meses 12 meses 0 meses

UBS

UBS

Imidaclorprid

0 meses

CF

Testemunha

12 meses 12 meses
UBS

12 meses 12 meses

CF

12 meses 12 meses

0 meses

CF

UBS

CF

Figura 3. Padres enzimticos revelados para a enzima esterase.

Para a enzima Amilase pode-se observar maior atividade aps o armazenamento
(Figura 4). Esta enzima est relacionada com a quebra de amido e gerao de energia para
etapas importantes do processo de germinao das sementes de milho. Observa-se tambm
maior atividade dessa enzima nas sementes armazenadas em cmara fria.
Tiometoxan

0 meses

12 meses

Thiodicarb

12 meses 0 meses

UBS

Imidaclorprid

0 meses

CF

Testemunha

12 meses 12 meses
UBS

12 meses 12 meses
UBS

CF

CF

0 meses

12 meses 12 meses
UBS

CF

Figura 4. Padres enzimticos revelados para a enzima -Amilase.

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Concluses
- O produto Imidacloprid mostrou efeito fitotxico nas sementes de milho, fato acentuado
com o armazenamento.
- O produto Tiamethoxan mostrou-se superior aos demais inseticidas aps 12 meses de
armazenamento.
- As enzimas esterase e MDH apresentaram menor atividade em sementes tratadas com o
inseticida Imidacloprid e armazenadas por 12 meses sob condies no controladas.
- Maior atividade da enzima amilase foi observada em sementes armazenadas por perodo
de 12 meses.
- Diferenas de atividade da enzima ADH foram observadas em sementes tratadas com o
inseticida Thiodicarb ao longo dos 12 meses de armazenamento.
Agradecimentos
Os autores agradecem o apoio a Fundao de Amparo a Pesquisa de Minas Gerais
FAPEMIG.
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