MATERIAL DE LABORATORIO EN BACTERIOLOGIA

I.

OBJETIVOS-.
Caracterizar el material de laboratorio de bacteriologa, para ser un buen uso del mismo.
II.
MARCOTEORICO-.
Un laboratorio de microbiologa, ante todo debe ser extremadamente limpio y funcional. Debe
constar de una sala para preparar los medios de cultivos donde generalmente se ubican: autoclave,
horno Pasteur, destilador de agua y otros equipos. Adems, debe existir una sala destinada a las
manipulacin propiamente tal, donde se realizan los aislamientos y siembras; manipulaciones que
generalmente se ejecutan bajo una cmara de flujo laminar. Es esencial que el laboratorio posea una
pieza para lavado y secado del material utilizado, as como tambin de sistemas de esterilizacin de
desechos. Otra sala importante que debe existir es la de reactivos y en muchas ocasiones es
fundamental tambin exista una para material de vidrio. El laboratorio debe tener instalacin de gas
y agua, as como tambin tomas de vaco, pudiendo estar dotado de un dispositivo productor de gas
inerte para el cultivo de microorganismos anaerbicos.

MATERIAL DE VIDRIO
Se caracteriza porque tiene mucha resistencia qumica (frente a cidos, frente a bases...), tiene
mayor resistencia que el plstico, es muy estable, se caracteriza por su transparencia. Todos los
vidrios no son perfectos para todas las tcnicas, a veces se necesitan vidrios con resistencia tcnica,
con resistencia mecnica. Segn el uso que le queramos dar aparecen vidrios especiales. La
mayora de los utilizados son vidrios borosilicatados, los cuales ofrecen gran resistencia trmica
(vidrio prex, quimas).Cuando se emplea el material de vidrio hay que tomar precauciones.
Constituye una de las principales herramientas para los fines que se persigue en el laboratorio. Los
requisitos necesarios para que un material sea un "buen material", son:
1. Ser de buena calidad; es decir que no sean fcil de quebrarse.
2. Ser de color neutro.
3. Poseer resistencia a las acciones mecnicas y a las variaciones de temperatura as como tambin
a los lcali-libre (no se raje).
4. Poseer bajo coeficiente de dilatacin (que no pierda su forma).

USUARIO

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MATERIALES PARA REALIZAR TECNICAS O PROCEDIMIENTOS

Los siguientes materiales estn formados de uno o varios elementos de los antes mencionados.
MATRAZ ERLENMEYER: Tiene forma acampanada con el fondo plano, graduado, sirve para
preparar o medios de cultivo, reactivos, colorantes, soluciones o para mantener en medio liquido una
gran cantidad de microorganismos. No mide correctamente los lquidos.
VASO DE PRECIPITADO: Tiene forma cilndrica con base plana y en su borde superior una ranura
triangular que le sirve para verter los lquidos son graduados en diferentes capacidades. Sirve para
medir volmenes de lquidos y tambin para calentar y mezclar sustancias
PROBETA: Son cilindros de dimetro variable. La base de la probeta es amplia y plana y en el
extremo superior generalmente tiene doblado el borde en forma de pico su capacidad es muy
variable ya que hay desde 50 ml hasta 1000 ml o ms. Graduada en su exterior con unidades
variables
TUBOS DE ENSAYO: Se emplean como recipientes de medios de cultivo.
TUBOS DE PRUEBA. Deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas, de preferencia
sin rebordes para facilitar el taponamiento.
De 16 x 150 mm
De 15 x 125 mm
De 13 x 100 mm
TUBOS DE CENTRFUGA. De vidrio, pueden ser cnicos o cilndricos, siempre de paredes gruesas,
De paredes gruesas, por estar inmersos rotando a alta velocidad. De polietileno, se utiliza para
centrifugaciones a altas velocidades, de medidas semejantes a los anteriores.
CAJA DE PETRI (PLACA DE PETRI): En forma de plato plano con bordes elevados que consta de
una base y una tapa. Contiene medios de cultivo slidos (Agar), que sirven para el crecimiento,
desarrollo y aislamiento de microorganismos.

USUARIO

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PLACAS BREWER: Para el cultivo y aislamiento de microorganismos anaerbicos. Son idnticas a

las anteriores, con excepcin de las tapas que adems de ser ms pesadas estn adaptadas para
crear anaerobiosis.
PORTA OBJETOS: Placa de vidrio rectangular que sirve para realiza diferentes tipos de frotis.
CUBREOBJETOS: Placa de vidrio muy delgada, de forma cuadrada o rectangular que sirve para
colocarla sobre frotis hmedos o fijos.
MECHERO DE BUNSEN: Es un tubo con un dimetro de 1.5 cm. con una base redonda de
aproximadamente 10 cm. de dimetro, que en la parte baja del tubo se encuentra una entrada para
el gas butano y un anillo regulador. Por la parte superior del tubo se forma la flama del mechero la
cual brinda un margen de seguridad al formar un rea de esterilidad de aproximadamente 15 a 25
cm. de radio.
PIPETAS: Tubos cilndricos delgados terminados en punta, graduados al dcimo o al centsimo de
mI. Se utiliza para medir o transvasar pequeas cantidades de lquidos.
Pueden ser:

Serolgicas: son terminales y con capacidad de 0.1 a 25 ml.

Volumtricas: se reconocen por presentar una dilatacin bulbosa central con unas marcas de
aforamiento conocida, en el extremo proximal angosto de la pipeta, se les llama tambin pipetas
de bola, las medidas ms conocidas son de 10, 25, 50 y 100 ml.

PIPETAS PASTEUR: Confeccionados de varillas de vidrio de dimetro de 4 x 20mm de 30 o 40cm

de longitud. La calidad de vidrio debe facilitar reblandamientos a la accin directa de la llama del
mechero, para conseguir por estiramiento la capilaridad deseada. Se emplea para la toma de
pequeos inculos de siembra.
PROBETAS GRADUADA:
Se utiliza en anlisis qumico para contener o medir volmenes de lquidos de una forma
aproximada.
Es un recipiente con base ancha que generalmente lleva en la parte superior un pico para verter el
lquido con mayor facilidad. Tubo transparente miden volmenes de 250 o hasta 50ml.

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FRASCOS VIALES PARA HEMOCULTIVOS, VACUNAS, CULTIVOS DE TEJIDO

Son de vidrio neutro, resistentes al calor, transparentes y con tapas de rosca, Con capacidad para
50ml y 100ml blancos o de color mbar pueden utilizarse para la reserva de soluciones y medios de
cultivo en stock, previamente taponados con algodn esterilizados, Perlas de

Vidrio Neutro: Se emplean para desfibrilar sangre y para recoger cosechas microbianas en la

preparacin de antgenos, De 4 a 6 mm.

Varilla: de Vidrio Macizo
MATERIAL DE OTRA NATURALEZA
ASA BACTERIOLGICA: Est formada de una base que puede estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en aro o en
punta, este instrumento de laboratorio nos ayuda transportar o arrastrar microorganismos de un
medio a otro medio para su adecuado desarrollo, as como para la realizacin de frotis.
ASA MICOLGICA: Est formada de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y
un filamento ms grueso que el asa bacteriolgica que puede ser de alambre o platino que termina o
en un ngulo de 45 o forma de L, este instrumento de laboratorio nos ayuda transportar o arrastrar
hongos de un medio a otro medio para su adecuado desarrollo, as como para la realizacin de
frotis.
INSTRUCCIONES PARA SIEMBRA BACTERIOLGICA
1. Una vez abierto el tubo de la forma sealada, se flamea en el mechero por algunos segundos por
la parte del orificio, repitiendo dicha operacin una vez realizada la siembra (el tapn nunca debe
dejarse sobre el mesn).
2. Antes de utilizar las asas con hilos de platino, que sirven para las siembras y/o repiques, stas
deben flamearse al rojo en posicin vertical bajo la accin de la llama; tambin debe flamearse el
mango.
3. Antes de efectuar la siembra y/o repique debe esperarse algunos segundos a que se enfren,
pudiendo enfriarse tambin en el borde de la placa de Petri que contiene el medio de cultivo.
Inmediatamente despus de haberlas utilizado, deben flamearse nuevamente. Esta ltima operacin

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as como la de siembra debe realizarse lentamente evitando diseminar el microorganismo en el

medio ambiente.
4. Las placas de Petri deben abrirse mantenindolas en lo posible en posicin vertical. 5. Una vez
utilizadas, las pipetas se depositan en un recipiente para desecho de material corto punzante siendo
recomendable descontaminarla antes de su eliminacin.
TERMMETRO: Medir la temperatura es una de las operaciones fundamentales en los laboratorios
de microbiologa y parasitologa, as como en una gran cantidad de procesos biolgicos. El
termmetro est formado de un tubo de vidrio de paredes gruesas, graduado con un bulbo lleno de
mercurio o alcohol en uno de sus extremos el cual al dilatarse pasa por un tubo capilar en el interior
del t al reaccionar a los cambios de temperatura.
EQUIPOS DE LABORATORIO
POTENCIMETRO: Miden el pH de los medios de cultivo y de las solucione buffer. Constituido de
un par de electrodos sensible a concentraciones de hidrogeniones, conectados a un potencimetro
que indique las mediciones, Los potencimetros emplean un electrodo de vidrio, unido a un
electrodo de calomel como estndar.
MICROSCOPIO: El microscopio, de micro- (pequeo) y scopio (observar), es un instrumento que
permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms
comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico. Que
contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona
por refraccin.
CENTRFUGAS: Se utiliza en la separacin de slidos suspendidos en lquidos. Hay centrfugas de
tamao y velocidades variables, la velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la
cual sedimentaran las partculas en un lquido dependen de varios factores:

Tamao de la partcula.
El peso de la partcula.
La viscosidad del lquido.
La fuerza gravitacional.

Para obtener alteraciones elevadas (mayor o igual a 100 000 g), pueden ser:
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Ultra centrifugacin analtica: para determinacin de caractersticas fsicas de protenas o de

cido nucleicos.
Ultra centrifugacin preparativa: permite la separacin de organelos (mitocondrias, etc.), la
separacin se debe efectuar en gradiente de densidad. Incubadoras y Hornos Los hornos son
capaces de mantener t ms de 100c y las incubadoras menos de 100 c .Los hornos no tienen
salida de aire, las incubadoras s.

CMARAS DE CULTIVO: Las estufas o cmaras de cultivo son unos equipos indispensables en la
seccin de bacteriologa, se utilizan a una temperatura de 37C para realizar cultivos de bacterias,
hongos a una temperatura igual a la del cuerpo humano. Existen estufas especiales al vaco para
cultivo de anaerobios, el aire de la estufa se elimina por una bomba de vaco y se sustituye por
nitrgeno, hasta obtener una atmsfera pura.
AUTOCLAVE: Funciona por las presiones que se dar a una mayor temperatura logrando su
esterilizacin como por ejemplo las conservas.
HORNO PASTEUR: Es como una mufla que tiene tres paredes y la cubierta es de asbesto sirve
para la esterilizacin por el calor seco.
CMARA DE FLUJO LAMINAR: Equipo para manipular muestras biolgicas bajo una atmsfera
microbiolgicamente controlada. Gabinete de seguridad biolgica con ventana frontal deslizable y
alarma que indica el nivel de apertura de la ventana. Flujo de aire vertical y recirculacin de aire
filtrado. De acero inoxidable. Con filtros absolutos de eficiencia del 99.99% (HEPA) y retencin de
partculas de 0.3 micras. Con llave para toma de oxgeno.
III.

IV.

CONCLUCIONES-.
Es muy importante haber reconocido todos los materiales a utilizar en el laboratorio y saber su
utilidad para la prctica.
CUESTIONARIO-.
1. Para qu sirve una caja de Petri?
Son utilizadas en bioqumica para llevar a cabo cultivos de microorganismos.
2. Cul es la finalidad de utilizar materiales estriles en el laboratorio?
El propsito del proceso de esterilizacin es destruir la contaminacin microbiana de los productos
no estriles. La destruccin microbiana mediante agentes fsicos o qumicos sigue una ley
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exponencial, que nos permite calcular la probabilidad de supervivencia de un microorganismo a

partir de la dosis suministrada en el tratamiento. La probabilidad de supervivencia est en funcin del
nmero y tipos de microorganismos (carga biolgica), de la letalidad del proceso de esterilizacin y
en algunos casos, del medio ambiente en el que se encuentren los microorganismos durante la
esterilizacin.
3. De qu est formada el asa bacteriolgica?
Son varillas metlicas o de vidrio que llevan de un extremo alambre de platino; cuando El alambre
es recto se llama aguja y cuando el alambre forma un anillo de dimetro variable en su extremidad
tmale nombre de asa.
4. Utilidad del mechero Bunsen?
Dispositivo que se utiliza mucho en los laboratorios debido a que proporciona una llama caliente,
constante y sin humo. Debe su nombre a Robert Bunsen el que lo creo. Los mecheros Bunsen
constan de un tubo vertical, enroscado en su parte baja a un pie por donde entra el gas. Mediante un
aro metlico mvil se regula la entrada de aire. La mezcla se enciende por la parte superior.
Todas las manipulaciones deben realizarse en un radio de 10 a 15 cm de la llama del mechero o
zona asptica.
5. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de esterilizacin con ms
uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos y para qu materiales se utilizan.
1. METODOS FISICOS
Calor seco: se efecta en estufas de aire seco u hornos Pasteur y se manejan temperaturas entre
160 180C, por un espacio de dos horas aproximadamente. Este mtodo se utiliza para esterilizar
el material de vidrio generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y Erlenmeyer. No se debe emplear
para esterilizar medios de cultivo o agua pues se evaporan hasta secarse. Previo al horneado el
material de vidrio se recubre con papel Kraf y se sella con cinta indicadora de esterilidad, una vez
realizado el proceso de esterilizacin se revisa la cinta la cual debe tornarse de color caf oscuro lo
que indica una correcta esterilizacin. El calor seco tambin se utiliza para secar material de vidrio
como tubos y pipetas, este material se deja en el horno por dos horas a 60C. Las lminas y
laminillas se secan con un trapo suave. Los dems materiales se secan a temperatura ambiente.
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Calor hmedo en autoclave: se utiliza para esterilizar medios de cultivo preparados, escobillones,
gasas entre otros. Adicionalmente se tiene otra autoclave para descontaminar cultivos antes de ser
desechados. La autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer el material a esterilizar a
temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la presin. La autoclave
se opera a presin de 15 lb. Y a 121C. El tiempo de exposicin depende del material y volumen que
se esterilice, pero en general est comprendido entre 15 y 30 minutos.
METODO MECANICO
Flameado: usado principalmente para asas, es otro mtodo de esterilizacin comn usado en el
laboratorio. Consiste en poner el asa con la cual se va a hacer el cultivo, durante unos minutos en la
llama del mechero.
Radiaciones Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los
microorganismos.
Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. Son escasamente
penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.
Rayos Gamma: Su empleo est basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de
esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo
industrial. Puede esterilizar antibiticos vacunas y alimentos
Filtracin: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro
depender del uso al que se va a someter las muestras. Los filtros que se utilizan no retienen virus
ni micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se
utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para
esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas
diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.
Existen tres tipos bsicos de filtros:
-Filtros profundos o Filtros de profundidad:
-Membranas filtrantes:

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-Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo)

6. Establezca las diferencias entre esterilizacin y desinfeccin.
La esterilizacin implica la destruccin de todos los microorganismos, incluyendo los esporos.
La desinfeccin supone la destruccin de los microorganismos vegetativos que pueden causar
enfermedades o en el contexto de las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones.
La desinfeccin no mata necesariamente a los esporos.
7. -Funcin de La cmara de flujo laminar.
Proporciona aislamiento de las muestras y de los medios de cultivo, para evitar contaminaciones.

V.

BIBLIOGRAFIA-.
Introduccin al laboratorio de microbiologa. Prof. Jaime R. Montealegre A. Ctedra de

microbiologa general- 2002 Universidad de Chile

Normas, procedimientos, tcnicas de laboratorio.ISP 1994

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