Curso: Biologa Celular y Molecular

Oscar Nolasco Crdenas MSc.

oscarnol@hotmail.com
Octubre 2016

1865 Gregor Mendel Publico sus

resultados sobre los factores de la
herencia.
Experiments in Plant Hybridization
Natural Science Society

The

1868 descubrimiento de la nucleina (DNA)

Friedrich Miescher

1902 Walter Sutton Interrelaciona la

citologa y el Mendelismo (morfologa &
herencia). Cromosomas son unidades
hereditarias. Esta teora tambin fue
desarrollada por Theodor Boveri

1928 Fred Griffith Propuso la existencia de un principio transformante .

1944 Oswald Avery,Colin MacLeod,Maclyn McCarty. Reportaron que el principio

transformante de Griffith era el DNA.

1952 Martha Chase y Alfred Hershey empleando bacteriofagos marcados con 35S y
32P demostraron que el DNA es una molcula hereditaria

1950 Erwin Chargaff Determino que los organismos vivos

presentan una proporcin constante entre Adeninas
con Timinas y Guaninas con Citosinas.

1950 Rosalind Franklin Obtuvo las fotografas de alta

calidad de difraccin de rayos X del DNA

Rosalind Franklin

Maurice Wilkins

1953 Francis Crick y James

Watson resolvieron la
estructura tridimensional
del DNA.

 ESTRUCTURA DEL DNA

DNA: Dos hebras antiparalelas forman la doble hlice de DNA

Las hebras estan formadas de nucletidos
unidos por enlace fosfodiester generando
el esqueleto azcar fosfato

Las dos hebras se mantienen por el

apareamiento de bases en el DNA
por puentes de hidrgeno

Acido Nuclico: polmero de nucletidos

Componentes de
un nucletido:
base N + pentosa
+ fosfato

Las bases nitrogenadas se unen al

azcar por enlace B glucosidico

Componentes de un nuclesido:
base N + pentosa

La adicin de un fosfato o mas

convierte a un nuclesido en un
nucletido

Azcares de los cidos nuclicos

RNA

DNA
Bases nitrogenadas de los cidos nuclicos

(DNA)

(RNA)

La estructura del ADN provee el mecanismo para la herencia

1958 Matthew Meselson y Frank Stahl empleando la diferencia de densidades de isotopos

demostraron la propiedad semiconservativa de la replicacin del DNA.

EL DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIA

MOLECULAR

DNA

Duplicacin o Replicacin

CCTGAGCCAACTATTGATGAA

transcripcin
Reversa
RNA CCUGAGCCAACUAUUGAUGAA
traduccin
Protena

PEPTIDE

El DNA es altamente comprimido en todos los tipos de genomas

En el bacteriofago

En bacterias

En mamiferos

El ordenamientos de los genes es propio de cada organismo

Organizacin de genes humano

Estadisticas sobre el genoma Humano

Longitud
Numero de genes codifican a protenas

3.2 x 109 pares de nucleotidos

Aprox 21000

Longitud de genes por protena

Tamao promedio de genes codifican protenas
Nmero mnimo de exones por gen
Nmero maximo de exones por gen
Promedio de nmero de exones por gen
Tamao de exon largo
Promedio de tamao de exones
Genes de RNA no codante
Nmero de pseudogenes
Porcentaje de DNA en exones
Porcentaje de DNA altamente conservado
Porcentaje de DNA en elementos repetitivos

2.4 x 106 pares de nucleotidos

27000 pares de nucleotidos
1
178
10.4
17106
145
Aprox 9000
mas de 20000
1.50%
3.50%
aprox 50%

Las caractersticas de los cromosomas en la mitosis forma el kariotipo, lo que

permite el anlisis de cromosomas aberrantes

Cambios del cromosoma a travs del ciclo de vida eucariote

 En eucariotas, el DNA se encuentra empaquetado con protenas

histonas dentro de la cromatina, dividida en dos regiones
cromosomicas: eucromatina y heterocromatina
Las unidades bsicas de la cromatina son los nucleosomas.

Las histonas de los nucleosomas se asocian a la carga

negativa del DNA por su alto contenido de aminocidos
de carga positiva

Los nucleosomas tienen una estructura dinmica y son frecuentemente

sujetos a cambios catalizados por complejos de remodelacin de la
cromatina dependientes de ATP
Las colas de las histonas tambin son un factor importante parala
estabilidad de los nucleosomas

Regulacin de la estructura de la cromatina

Ciertos tipos de estructura de cromatina pueden ser heredados

La extensin de la heterocromatina puede causar el Efecto de posicin

Gen en posicin normal

Barrera
heterocromatina

Inversin

Barrera

Modificaciones covalentes en las histonas participan en la dinamica de la

cromatina

La cromatina adquiere adicional variacin con la insercin de un

pequeo grupo de variantes de histonas

Duplicacin del DNA

Ocurre en un origen de replicacin
nico en DNA circulares (plasmidos)

En eucariotes es complejo y se da en
varios orgenes de replicacin una
vez que se realiza la replicacin el
origen es inactivado

La sntesis de la nueva hebra es en sentido 5

a 3

Organizacin comn de las DNA polimerasa: La palma contiene el sitio

cataltico, los dedos posicionan el molde con el nuevo nucletido y el pulgar
mantiene la asociacin de la polimerasa y su sustrato, es importante en la
procesividad,

c
c

Los nucletidos adicionados son nucletidos

trifosfatos. El mecanismo involucra iones Mg
que coordinan con el grupo fosfato y residuos
Asp de la enzima DNA polimerasa

La DNA polimerasa controla la fidelidad de la replicacin.

Por efecto estrico discrimina un desoxiribonucleotido de
un ribonucleotido
Las enzimas polimeras tienen un mecanismo de relectura o
de proofreading (actividad exonucleasa 3 a 5) Evita la
mala incorporacin de un nucletido
5 3 polimeriacion error 1 en 105
3 5 proofreading error 1 en 102
Reparacion mismatch error 1 en 102

Combinado error 1 en 109

 El desenrrollamiento del DNA

ocasiona un superenrrollamiento
positivo en la direccin de la
maquinaria de replicacin.
DNA girasa es una
topoisomerasa II, que rompe el
DNA e introduce supercoil
negativo a la cabeza de la
horquilla de replicacin
Fluoroquinolona inhibe DNA
girasas en muchas bacterias
gram-negativas:
ciprofloxacina y levofloxacina
(Levaquin)

Actividad de las Enzimas en la horquilla de

replicacin

DNA polimerasas

La sntesis de DNA en E. coli,

Empieza con la unin de protenas

dnaA a la secuencia de origen de replicacin (ori)

Cerca de 20 molculas de DnaA se unen a

los cuatro repeticiones de 9 bases y
hexameros de DnaB (helicasa) se unen a
cada hebra de DNA en colaboracin con
DnaC.
La actividad helicasa requiere de ATP y
provoca la liberacin de dnaA.
El complejo primasoma (dnaB, dnaC y
dnaG) sintetizan el primer de RNA ( 10 a
60 nucletidos)

Composicin de la DNA
pol III holoenzima
3 DNA polimerasa 1 copia
de
una
molcula
portadora de la pinza
deslizante, este incluye
tres copias de protena T
que enlazan a las 3 DNA
polimerasas. La sntesis
conjunta de la hebra lder
y la hebra rezagada
propone
el
modelo
Trombon

La incorporacin de la helicasa en eucariote es dependiente de Cdc6 y Cdt1 y la activacin

de la helicasa y ensamblaje de replicasoma depende de dos quinasas que son activas en
la fase S

El problema de la duplicacin en los extremos en DNA lineal

(telomeros)

Telomeros son capuchones

protectivoscaps sobre el
extremo de los cromosomas
y consisten de repeticiones
cortas en tandem
Previenen desde fusiones
Cromosomas y rearreglos del
kariotipo.

(TTAGGG)muchos

El problema de la duplicacin en los extremos (telomeros) puede resolverse por distintos

mecanismos.
La telomerasa usa su propia molcula de RNA y por transcripcin reversa extiende la hebra en
el extremo 3
Es mas activa en clulas germinales que en las somticas por lo que se encuentra relacionada
con la edad

(TTAGGG)poco

 DEL DNA A RNA

Principales tipos de RNA en una clula

Principales ARN involucrados en los procesos de transcripcin y
traduccin:
-ARNm
-ARNt
-ARNr
-Otros ARN en eucariotes ARNsn (ARN pequeo nuclear, ARN
de edicin), ARNsc (ARN pequeo citoplasmatico, micro ARN)

ARNs en E. coli
Tipo

Sed. Coef.

Mol. Wt.

Residuos

% del total ARN

mRNA

6 - 25

25,000 - 1,000,000

75 -3000

~2

tRNA

~4

23,000 - 30,000

73 - 94

16

rRNA

35,000

120

16

550,000

1,542

23

1,100,000

2,904

82

mRNA procariote

mRNA eucariote

Transcripcin
La informacin gentica almacenada en el DNA es transcrita a una copia de
RNA complementario.
La hebra de ADN que ha servido como molde se denomina hebra
antisentido y la otra hebra de ADN es denominada hebra codante o con
sentido y la secuencia es idntica a la del RNA sintetizado ( Excepto en las
posicin de T que son cambiadas por U)

Doble
hebra de
DNA

(5')ATGCGCTATAGCTGTTT(3') Hebra de DNA no molde (+)

codante

(3')TACGCGATATCGACAAA(5') Hebra de DNA molde (-)

antisentido

(5')AUGCGCUAUAGCUGUUU(3') Transcrito de RNA

Transcripcin

El producto transcripto puede

ser :
RNA mensajero o
mRNA;
RNA ribosomal o rRNA;
RNA de transferencia o
tRNA; u
Otros RNA como
ribozimas (act.
Enzimatica),RNA de
interferencia o iRNA
(actividades de
regulacin de la
expresin gentica), o
participar en actividades
postranscripcionales de
edicin de mRNA
(gRNA).

RNA POLIMERASAS

Transcripcin etapas:
Iniciacin:
La misma hebra es siempre
transcrita de un promotor dado.
La polimerasa se une al promotor
en una orientacin definida,
formando un complejo cerrado,
paso seguido la hebra se abre a 13
bp alrededor del inicio de
transcripcin (complejo abierto).
Las primeras transcripciones son
ineficientes y a menudo se liberan
pequeos transcriptos y se inicia
nuevamente la transcripcin.
La sntesis no requiere de cebador
o primer, la polimerasa inicia los
transcriptos con una A,

Elongacin:
La sntesis se realiza en un
corto
espacio
aprox
10bases. El DNA se
desenrrolla en frente y se
rehibrida por detrs. La
cadena de RNA se elonga a
travs del molde y permite
las
funciones
de
proofreading.
Terminacin :
En algunas celulas existe
una secuencia seal que
desencadena
la
terminacion, en otras el
proceso no es claro

Transcripcin procariotes
Promotor
El promotor reconocido por la polimerasa conteniendo el factor sigma
tiene dos secuencias conservadas, cada una de seis nucleotidos,
separadas por 17-19 nucleotidos, en la posicion menos 10 y menos 35
Elementos adicionales UP element promotores de genes rRNA
aumentan la interaccion enzima DNA
Extended 10 element carece de la region -35 (genes gal)
Elemento discriminador hebra bajo del elemento -10

Inicio de la transcripcin en procariotes

Factor sigma mantiene estable la unin de la RNA polimerasa
al promotor en el DNA. Este factor de iniciacin es especifico para la transcripcion de
diferentes grupos de genes en E. coli. El factor 70 puede dividirse en 4 regiones. La
region 2 se une a una hebra del elemento -10.
La subunidad sigma es posicionada dentro de la estructura holoenzima para hacer
factible el reconocimiento de varios elementos promotor

Terminacin de la transcripcin
Una vez que el proceso de transcripcin ha comenzado
la burbuja de transcripcin avanza a medida que el RNA
es transcrito y se contina hasta que la polimerasa
encuentra una secuencia que induce la disociacin del
complejo DNA-RNA y la separacin de la enzima.
En eucariotes esta secuencia no ha sido bien estudiada,
mientras que para los procariotes como E. coli se han
reconocido dos tipos de seales de terminacin que se
diferencian por la ausencia o presencia de un factor
proteico que parece reconocer dicha seal.

Terminacin de la transcripcin procariote

Terminacin Rho dependiente

En la terminacin dependiente de r no se
presenta el tramo de poliA, aunque s se
forma una horquilla en la que la RNA
polimerasa hace una pausa y si se
encuentra la protena r presente se
detiene la transcripcin.
No se conoce a detalle el mecanismo de
disociacin, pero en este se produce la
hidrlisis de ATP por efecto de r.

Terminacin de la transcripcin Procariote

Rho independiente
Terminacin independiente de rho (r), contiene una secuencia que induce a
la formacin de una horquilla en el transcrito de RNA de 10 a 15 nucletidos
antes del final, seguida por un tramo de poliA en la cadena molde que facilita
la disociacin de los elementos de la transcripcin.

 Transcripcin en eucariotes
3 RNA Polimerasas en Eucariotes, en plantas pueden encontrarse
hasta 5.

RNA polimerasa I transcribe la mayoria de los genes de rRNA

RNA polimerasa II transcribe todos los genes que codifican
proteinas y algunos RNA pequeos nucleares
RNA polimerasa III transcribe los genes de tRNA y genes de 5S
rRNA y RNA pequeos nucleares

A diferencia de la polimerasa procariote que solo requiere un factor de

inicicacion , en eucariotes se requiere de varios factores llamados
factores generales de transcripcion

 Transcripcin eucariote:
Promotor 40-60 nucletidos:

El componente de TFIID que se une y distorsiona la caja TATA es TBP

Tata binding protein, las otras subunidades son llamadas TAFs factores
asociados a TBP.
TFIID es un factor critico en el reconocimiento del promotor y
establecimiento del complejo de preiniciacion

TFIIA, TFIIB, TFIIF junto con polimerasa y

TFIIE y TFIIH forman el complejo de
preiniciacin, formado este complejo se
produce la denaturacion del promotor. Esta
hidrolisis requiere de ATP y es mediada
por TFIIH
El carboxiterminal de la polimerasa debe
ser fosforilado: distino numero de
repeticiones heptapeptido de tyr-ser-prothe-ser-pro-ser
El inicio de la transcripcin requiere de
protenas adicionales, protenas
regulatorias, del complejo mediador,
enzimas modificadores del nucleosoma
El complejo mediador comprende mas de
20 subunidades

La terminacin de la transcripcin en eucariotes

Modelo Torpedo : esta ligada a una RNAsa Rat 1 y otros factores que
actuaran al igual que Rho iniciando la terminacin
Modelo alosterico: Cambio de procesividad de la enzima pasada la seal la
procesividad disminuye y el cambio conformacional iniciara la terminacin

EL TRANSCRIPTO DE mRNA EN EUCARIOTE SUFRE DIVERSOS

PROCESOS POSTRANSCRIPCIONALES:
Adicin de metil guanosina en 5 ( 5capping) o Adicin del capuchon 5
Corte y empalme ( RNA splicing)

Adicin de cola de poliA

Corte y empalme ( RNA splicing)

Mecanismo de splicing mediado por el splicesoma

 Splicing alternativo

Proceso de
Poliadenilacin

Compuestos que inhiben el proceso de transcripcin

Se une al surco
menor del DNA

Se intercala entre G y C

En eucariotes los RNA maduros son exportados del ncleo

Muchos RNA no codantes son

sintetizados en el ncleo