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Reporte N: 08
I.
INFORMACION DE LA PRCTICA
a) Nombre: Bombeo de protones en Levaduras
Fig. 1.
Objetivos:
a) Estudiar el Bombeo de Protones, parte del proceso de Fosforilacin Oxidativa en
Levaduras a travs del cambio del pH del medio.
b) Estudiar el desacoplamiento de la Bomba de Protones utilizando 2,4 Dinitrofenol.
Materiales y reactivos:
Suspensin de levaduras 4%
2,4 dinitrofenol
Potencimetro
Glucosa al 12 %
Tubos de ensayo
Procedimiento:
1. Preparacin del Control
Preparar dos diluciones de 5 ml de la levadura con 10 ml de agua
destilada en tubos de ensayo A y B.
Al tubo B adicionar 4 mL de glucosa al 10% agitando y midiendo el pH
Determinar el pH de la solucin en intervalos de 3 minutos.
Resultados
En un intervalo de cada 5 minutos anotamos los cambios obtenidos en el
pH con ayuda del papel tornasol, siendo los resultados siguientes:
Tiempo
pH - A
pH - B
pH - C
T0
T1
5.8
5.5
5.5
T2
5.5
5.2
5.3
5 min.
pH - A
pH - B
10 min.
pH - C
Discusiones
Los cambios de pH que se presentaron son debido a la ATPasa tipo P
bombea K+ y protones en la membrana plasmtica, bombea estos ltimos
del citosol hacia afuera de la clula estableciendo una diferencia
electroqumica hasta 2 unidades de pH. Los protones fueron transportados
y eso logro el cambio de pH en la levadura.
Los cambios de pH en lo solucin de levadura-glucosa en el tubo pH - B se
debe a la protonacin de la glucosa, efecto sucedido por la reaccin de
levadura, la cual a nivel celular es encargada de los acoplamientos de
hidrolisis del ATP, el cual funciona como motor de bombeo de protones H+
hacia a fuera de la clula.
La liberacin de H+ por la accin de la formacin de ATP, acto conseguido
por la ATP sintasa ubicado en la mitocondria de la levadura, al obtener los
H+ de la glucosa para la formacin de ATP, as como el bombeo se genera
un gradiente electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el
transporte de nutrientes al interior de la clula. Se observ entonces que el
pH se reduce al pasar de los minutos.
Por otra parte, en el tubo pH C al cual se le agrego 0.2 ml de dinitrofenol
40mM el cual es un agente desacoplante, siendo aquel que no detiene el
proceso, sin embargo, impide la comunicacin entre procesos que ocurren
por sinergia mutua, como lo son la sntesis de ATP y la creacin del
gradiente qumico y electroqumico segn el cual se impulsa la ATPasa en
la teora quimiosmtica. El DNP afecta la integridad de la membrana
mitocondrial permitiendo que los protones pasen a travs de sta y no
obligatoriamente por la ATPasa, tal y como se esperara la concentracin de
hidrogeniones aumenta, de mano de la disminucin en el pH, ya que stos
escapan indefinidamente al medio, lo que sustenta la tesis de que el DNP
es un agente desacoplante.
Conclusiones
Referencias Bibliogrficas
Introduccion
la
microbiologia.
Buenos Aires:
oholica&hl=es&sa=X&ved=0CCQQ6AEwAmoVChMIl8Hp1O27xwIVC0q
SCh3xog8W#v=onep age&q=fermentacion%20alcoholica&f=false
Cebedo, M. (28 de Mayo de 2010). Caracterizacin de la regulacin del
protn ATPasa PMA1 por parte de la ruta TOR en levadura S. Valencia:
UPV.
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Agosto
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2015,
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Gonzalez, A. y. (s.f.). Saccharomyces cerevisiae. Recuperado el 23 de
Agosto de 2015, de Departamento De Genetica Molecular, Instituto De
Fisiologia Celular. Universidad Nacional Autonoma De Mexico:
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Gonzlez, C. e. (s.f.). RAPIDEZ DE FERMENTACIN POR
Saccharomyces cerevisiae DE ALGUNOS TIPOS DE GLUCIDOS.
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Agosto
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2015,
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http://www.acmor.org.mx/sites/default/files/1103.pdf
Cuestionario
1. Explique el acoplamiento fosforilacin oxidativa y transporte de
electrones.
La hiptesis del acoplamiento quimiosmtico, lo que le vali el Premio Nobel de
Qumica a Peter D. Mitchell, explica que la cadena de transporte de electrones
y la fosforilacin oxidativa estn acopladas por el gradiente de protones. El flujo
de protones crea un gradiente de pH y un gradiente electroqumico. Este
gradiente de protones es usado por la ATP sintasa para formar ATP va la
fosforilacin oxidativa. La ATP sintasa acta como un canal de iones que
"devuelve" los protones a la matriz mitocondrial. Durante esta vuelta, la energa
libre de Gibbs producida durante la generacin de las formas oxidadas de los
transportadores de electrones es liberada. Esta energa es utilizada por la
sntesis de ATP, catalizada por el componente F1 del complejo FOF1 ATP
sintasa.
Complejo I
El complejo I o NADH deshidrogenasa o NADH: ubiquinona oxidoreductasa
(EC 1.6.5.3) capta dos electrones del NADH y los transfiere a un transportador
liposoluble denominado ubiquinona (Q). El producto reducido, que se conoce
con el nombre de ubiquinol (QH2) puede difundir libremente por la membrana.
Al mismo tiempo, el Complejo I transloca cuatro protones a travs de
membrana y produce un gradiente de protones.
El flujo de electrones ocurre de la siguiente forma:
El NADH es oxidado a NAD+, y reduce al FMN a FMNH2 en un nico paso que
implica a dos electrones. El siguiente transportador de electrones es un centro
Fe-S que slo puede aceptar un electrn y transferirlo a la ubiquinona