Etapa

Protocolo

Protocolo II

Preparacin de la
muestra

Pesar 0.1 mg de
suelo en un tubo
de polipropileno de
1.5 mL.
Agregar 250 L de
agua desionizada
estril.

Se pesan 10
gramos de suelo, y
aadiendo esto a
50 ml de solucin
de Cronbach.

Lisis celular

Agregar 250 L de
fenol (equilibrado
con Tris 1M pH
8.0).

Desproteinizacion

Agregar 250 L de
cloroformo
Agregar 225 L de
cloroformo

Precipitacin ADN

Agregar 20 L de
Acetato de Sodio
(3M) a la fase
acuosa.
Agregar 440 L de
etanol Absoluto fro
a la fase acuosa.

Re suspender el
pellet obtenido en
8 ml de solucin de
Crombach y aadir
0,1 gramo de
Lisozima.
Aadir 750 L de
solucin de SDS 10
% e incubar a 65
C por 30-45
minutos.
Adicionar 1650 L
de acetato de
potssio 8M
(CH3COOK) e
incubar a
temperatura
ambiente por 10
minutos.
Aadir 4950 L de
solucin de PEG 50
% NaCl 1 M e
incubar en el hielo
por 1 hora.
Precipitar el ADN
con 0,6 volmenes
de isopropanol fro
y mantener en el
congelador
durante la noche

Lavado ADN

Agregar 500 L de
etanol al 70% al
tubo que ha sido
vaciado.

Lavar el pellet con

500 L de etanol
70 %, centrifugar a
12.000 rpm por 5
minutos.
Descartar el etanol
70 % y secar el
pellet por 1 hora a
35 C

Referencias
https://www.univates.br/editora-univates/media/publicacoes/74/pdf_74.pdf
mirar http://traductor.interbusca.com/espanol-portugues/