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CULTIVO DE MICROALGAS
Son llamadas microalgas a una gran cantidad de especies que constituyen el fitoplancton que abarca
desde organismos auttrofos hasta microflagelados y microciliados auxtrofos.
Su posicin taxonmica ha sido de gran polmica entre botnicos y zologos, como ejemplo podemos
mencionar el grupo de los dinoflagelados, conocidos por unos como microalgas y por otros como
protozoarios.
En este trabajo no pretendemos apoyar o rechazar ninguna de las lneas en relacin a la sistemtica
taxonmica pero mencionaremos los ejemplos ms representativos por su importancia en acuacultura de
acuerdo con la clasificacin que se muestra en la Tabla 1, seguida por Guillard, 1973, 1975; Hirata, 1974 y
Watanabe et al., 1978.
Estas especies aportan un alto contenido nutricional para peces, crustceos y moluscos, adems de
ofrecer facilidades de manejo en sistemas de cultivo tanto en laboratorio como en produccin a gran
escala con fines comerciales.
1. CONSIDERACIONES GENERALES DE LOS CULTIVOS DE MICROALGAS
Muchos factores contribuyen para el desarrollo ptimo de los cultivos de microalgas, algunos de stos
afectan las caractersticas del crecimiento.
Los recipientes de cultivo ms comnmente usados son de materiales no txicos como las cajas de Petri,
matraces Erlenmeyer, matraces Ferenback, carboys o garrafas, etc., adecuados para cultivos de
laboratorio. Para cultivos a gran escala los recipientes de plstico, madera y concreto son los ms
recomendables, incluyendo los estanques rsticos en reas rurales son los sistemas ms econmicos.
En cultivos masivos la aereacin es un factor muy importante para la homogenizacin de los nutrientes y
para evitar la sedimentacin de las microalgas. Las diatomeas suelen acumularse en lugares donde el
agua no se mezcla, sto tambin depende de la forma del recipiente de cultivo que cuando no es
adecuado retarda el crecimiento.
Otro factor importante es la penetracin de la luz en el cultivo; en los cultivos masivos la profundidad es
tan grande que la intensidad de la luz insidente no es suficiente para la fotosntesis, hasta el fondo del
tanque. En los cultivos masivos a la intemperie la penetracin de la luz es ms efectiva, pero se debe
reducir la intensidad de la luz fuerte, cubriendo estos estanques con una malla. En cultivos a gran escala
es recomendable la inyeccin de CO2 (0.5%) para contribuir al proceso fotosinttico.
Para muchas especies de Diatomeas la temperatura ptima oscila entre los 15 y 20C, pocas especies de
esta familia crecen a ms de 28C, las cloroficeas pueden soportar altas temperaturas; un ejemplo es el
cultivo masivo a la intemperie de Chlorella saccharophila, cuyas temperaturas oscilan entre 12.5 30C
(Hirata et al., 1974, 1975, 1977; Torrentera, 1983).
El crecimiento y la divisin celular son afectados por la intensidad de la luz y el fotoperodo (horas de
iluminacin y obscuridad) en relacin tambin a la temperatura, por ejemplo en Diatomees a 20C y 1,000
lux se obtiene un crecimiento favorable.
CICLO
TEMPERATURA DIAMETRO
OPTIMA
MEDIO
Phaeodactylum (diatomea)
10 h
25C
10.4
Skeletonema (diatomea)
13.1 h
18C
>20
Dunaliella (cloroficea)
24 h
16C
17.8
Chlorella (cloroficea)
7.7 h
25C
Tetraselmis (cloroficea)
18 h
18C
18.4
Monochrysis (crisoficea)
15.3 h
2025C
10
Isochrysis (crisoficea)
30.2 h
20C
10.2
Estas especies se han utilizado en acuicultura marina dados su valor nutritivo y digestibilidad, adems de
su capacidad para crecer en cultivos masivos. La duracin del ciclo celular como los requerimientos de
temperatura son suceptibles de variacin mediante seleccin de variedades.
COMPUESTOS
QUIMICOS
2,000 4,000
lux
15 22C
Luz
Temperatura
Salinidad
0.37
79
pH
Redox
Nutritivos C
VALORES
g/100 ml
O, H
N
CO2CO3
O2H2O
N2NH4+ NO3
PO4
g/100 ml
SO4
Na, K, Ca, Mg
Sales
Fe, Zn, Mn, B, Br, Si
Sales
Cu, Co, Cl, I, Sr, Rb, Al, et Sales
Vitaminas
B12, tiamina, biotina
S
g/100 ml
g/100 ml
g/100 ml
g/100 ml
mg/100 ml
g/100 ml
g/100 ml
En esta tabla se exponen los requerimientos principales de los cultivos de microalgas y sus valores
aproximados. En cada caso habr que estudiar los reqerimientos particulares de la especie y de la
variedad que se vaya a cultivar en las condiciones concretas de cultivo que se van a utilizar, por lo que
estos datos son slo orientacin (Kinne, 1979).
El fotoperodo es un factor que regula la divisin celular, en diatomeas la reproduccin asexual (divisin)
ocurre durante el perodo de luz y ste es acelerado bajo iluminacin continua. En contraste las especies
formadoras de auxosporas (sporas sexuales), dan lugar a clulas del mismo tamao y sto ocurre en el
perodo de obscuridad. Por lo tanto, el perodo de iluminacin puede ajustarse de acuerdo a los objetivos
del cultivo: el fotoperodo continuo (horas de iluminacin prolongada) produce crecimientos rpidos, un
fotoperodo con horas de luz y obscuridad semejante al fotoperodo solar mantiene un crecimiente normal
y saludable.
En la Table 7 se muestran las caractersticas de algunas de las especies de microalgas unicelulares
utilizadas en acuacultura para la nutricin de moluscos y crustceos.
Adems del control de los parmetros antes mencionados es necesario considerar que para el
establecimiento de un sistema de produccin de alimento vivo es importante el dominio de las tcnicas de
aislamiento, purificacin y mantenimiento de cepas, as como el conocimiento de la fisiologa, ciclo de vida,
bioqumica, etc. de las especies para determinar su factibilidad de cultivo y sobre todo su contenido
nutricional para poder llevarse a niveles masivos de produccin para fines acuaculturales. La Tabla 8
muestra algunos de los principales requerimientos de los cultivos de microalgas.
2. MEDIOS DE CULTIVO
Se han desarrollado diferentes medios para el cultivo de microalgas que van desde las frmulas para
enriquecer el agua de mar natural, hasta el uso de medios artificiales que permitan resultados constantes
en contraste con los resultados tan variables que brinda el uso del agua de mar natural que entre otros
factores depende del lugar donde se colecta sta, y el tiempo de almacenamiento de la misma.
Los medios artificiales se usan principalmente para fines experimentales, ya que como se ha mencionado,
brinda resultados constantes, aunque existen algunas especies que no crecen en medios artificiales por
factores desconocidos que afectan su crecimiento, las principales frmulas utilizadas van desde el agua de
Miguel, que data de 1910, desarrollada por Allen-Nelson; el medio de End-Schereiber de 1934, hasta
frmulas especficas para familias como la frmula del Laboratorio Haskins de Nueva York para
diatomeas, Provasoli et al., 1975; Matthiesen & Thorner, 1966; McIachlan, 1973; Guillard F., 1973; Droop,
1975, 1979; Schoene, 1982, etc. Las principales formulaciones de los medios de cultivo, tanto de
mantenimiento de cepas como de produccin masiva (minerales, enriquecidos y orgnicos), se describen
desde la Tabla 9 hasta la Tabla 16.
El fitoplancton se desarrolla y multiplica en relacin de las condiciones fisicoqumicas del medio. En
trminos generales son los macronutrientes o factores limitantes del crecimiento el carbono, Nitrgeno,
Fsforo, Silicio, Magnesio, Potasio y Calcio, que se requieren en cantidades relativamente grandes,
mientras que los llamados micronutrientes (Fierro, Manganeso, Cobre, Zinc, Sodio, Molibdeno, Cloro y
Cobalto) se necesitan en menores cantidades.
Existen otros medios que incluyen en su composicin sustancias orgnicas (vitaminas, aminocidos)
necesarios para aquellas especies de microalgas Auxtrofas, es decir que no sintetizan por medio de la
fotosntesis este tipo de compuestos y resultan factores que pueden limitar su crecimiento; tal es el caso
de Platimonas, Chrysophytas y algunas Bacillariophyceas.
0.04%
K2HPO4
0.01%
Na2CO3
0.02%
MgSO4.7H2O
0.025%
Na2SiO3
0.025%
0.005%
1.0%
Extracto de suelo
Agua de mar
MEDIO ERD-SCHREIBER
*Agua de mar
Extracto de suelo
NaNO3
Na2HPO4.12H2O
5 ml
100 ml
1 litro
50 ml
0.2 g
0.03 g
100 g/t
15 g/t
15 g/t
3050 g/t
18 mg
Metal Mix*
30 ml
600 mg
Fe (as Cl )
100 g
NaNO3
500 mg
Tris
1g
5g
Vit.B12
3g
Ca (as Cl )
100 mg
Na2 SiO3
80 mg
K2HPO4
30 mg
Vitamin Mix
1 ml
H2O
1l
KC
MgSO4 . 7H2O
-
* Mezcla de metales 100 ml, contanido: Na2 EDTA, 100 mg; Fe, 1 mg; Zn, 0.5 mg; Mn, 4 mg;Co, 0.01 mg; Cu, 0.004
mg; B, 20 mg.
Mezcla de vitaminas 50 ml, contenido: B12, 10 g; biotina, 50 g; B1, 5 mg
TABLA 13. MEDIO DE GUILLARD & RHYTER (PARSONS & STRICKLAND, 1961)
A. SOLUCIONES NUTRIENTES
1. Disolver 0.08 gr de clorhidrato de Cobalto CoCl2.6H2O y 0.8 gr de Sulfato de Cobre CuSO4.5H2O;
en 100 ml de H2O destilada.
Nutrientes Mayores
NaNo3
7.5
NaH2PO4.H2O
0.5
NH4Cl
2.65
Na2SIO3.9N2O
Solucin Primaria
% w/v
% w/v
% w/v
% w/v (calentar para
disolver)
Usar un mililitro de estas soluciones por litro de agua de mar, para preparar el medio F/2. Sugerencia:
Preparar el NaNO3 junto con NaH2PO . H2O en 100 mililitros.
Metales Traza
CuSO4.5H2O
ZnSO4.7H2O
ZnCl2
CoCl2.6H2O
MnCl2.4H2O
Solucin Primaria
0.98 % w/v
2.2 % w/v
1.05 % w/v
1.0 % w/v
18
% w/v
Na2MnO4.2H2O
0.63 % w/v
Tomar 1 m de la solucin primaria de Biotina y 0.1 ml de la solucin stock primaria de B12, aforar a
100 ml con agua destilada y aadir 20 mg de Tiamina HCl.
Se pueden preparar ampolletas de 2, 5 10 ml y almacenarlas estriles (acidificas) en el
congelador.
Use ml de esta solucin por cada litro de agua de mar para preparar el medio f/2.
K2HPO4
8.71 g/l
NaNO3
85.01 g/l
Na2SiO3.9H2O 28.42 g/l
De esta solucin rotulada como a se
obtiene 1 ml y se le adiciona a 1 litro de
agua esterilizada.
b. Micronutrientes:
Na2EDTA
4.36 g/l
FeCl3.6H2O
3.15 g/l
CuSO4.5H2O
0.01 g/l
ZnSO4.7H2O
0.022 g/l
CoCl2.6H2O
0.01 g/l
MnCl24H2O
0.18 g/l
Na2MoO4.2H2O
0.006 g/l
De esta solucin rotulada como b, se
obtiene 1 ml y se le adiciona a 1 litro de
agua esterilizada.
c. Vitaminas:
Thiamine. HCl
0.1 mg/l
Biotin
0.5 g/l
Cyanocobalamina
0.5 g/l
De esta solucin rotulada como c, se
obtiene 1 ml y se le adiciona a 1 litro de
agua esterilizada.
d. Tris:
Tris (Hydroxymethyl)50.g/200 ml
Aminomethano
H2O dest.
(Cuando el cultivo se encuentra axnico el tris
puede reemplazarse por Glycylaglycine). De
esta solucin rotulada como d, obtener 2 ml y
adicionar al litro de agua esterilizada que se
est preparando el cultivo. Una vez preparado
el medio de cultivo, se debe hacer ajuste de
pH a 7.2 con HCl cuidadsamente para no
obtener el pH cido.
NOTA: La solucin stock de Fierro y Silicato debe de acidificarse un poco con una gota de Acido Sulfrico
concentrado, y la solucin de EDTA debe acidificarse con Acido Clorhdrico.
El EDTA puede ser adicionado antes que el Fierro.
Para la produccin de microalgas a nivel comercial se usa el agua de mar enriquecida con fertilizantes
agrcolas (Urea, Fosfato triple, Nitrato de Amonio, etc.) (Chu, 1942, y Tamiya, 1957; SISFFAA, 1964a) y
tradicionalmente la fertilizacin de estanques con abonos orgnicos, en cultivos de especies herbvoras
como las carpas.
3. TECNICAS DE AISLAMIENTO Y PURIFICACION
Muchos mtodos se han desarrollado para obtener cultivos monoespecficos (de una sola especie) y
axnicos (libres de contaminantes). A continuacin se brinda una breve descripcin de algunos de los
principales mtodos que se utilizan para aislar y purificar microalgas (O. Umebayashi, 1975) (Fig. 1).
1) Aislamiento
Pipeteo capilar: Se utiliza para separar microalgas mayores de 10, mediante una pipeta
construda con un tubo capilar, a travs del microscopio ptico se pesca las clulas y se separan
en pequeas gotas de nutrientes colocados alrededor de una Caja de Petri o en portaobjetos
escabados.
Rayado de Placas de Agar: Se transfieren pequeas gotas de plancton con una asa de siembra,
extendiendo por estras (rompiendo un poco el agar). Este agar se prepara con una solucin
nutritiva para microalgas y con una relacin de 11.5% w/v de agar disuelto en el medio nutritivo,
se incuba la placa bajo iluminacin a 1820. De este primer crecimiento se transfiere a tubos con
agar inclinado sembrando por estras o bien, se transfiere a medios lquidos en subcultivos
sucesivos para su purificacin, de tal manera que en cada dilucin se reduzca el nmero de
organismos en una gota, es recomendable combinar la tcnica de diluciones con la de
transferencia en placa de agar o tubo inclinado para obtenr cultivos clonales (de una sola colonia o
clula) y poder establecer el cultivo monoespecfico. Despus de 10 das, pequeas colonias
aparecen sobre la superficie del agar, que se pueden transferir mediante el Mtodo de Hocking o
de la micropipeta a medios lquidos.
2) Purificacin
Como ya se mencion al describir las tnicas de aislamiento, estas mismas nos permiten purificar el ultivo
a travs de las resiembras clonales sucesivas, pero adems es recomendable entre otros mtodos el uso
de antibiticos para eliminar otros microorganismos, generalmente de tipo bacteriano que estn
contaminando el cultivo de microalgas de nuestro inters. En el inciso 5 de este mismo captulo
correspondiente a Mtodos de Esterilizacin se amplian las alternativas.
3) Control Bacteriolgico
Para determinar el desarrollo bacteriolgico realizamos lo siguiente:
1. Preparacin del Medio de Zobell:
Trypticase
Extracto de levadura
Fosfato Frrico
Agar
Agua envejecida (3 meses)
pH = 7.0 7.2
1.0 gr
1.0 gr
5 mg
15.0 gr
1 litro
Una vez preparado colocar en Cajas de Petri, una capa no muy gruesa. Someter a esterilizacin a 15 lbrs.
de presin y 125C. Con una asa de Platino picar el agar con la muestra que se desea analizar y colocar a
la luz y observando si hay crecimiento bacteriano.
2. Si el cultivo presentara bacterias es aconsejable someter a la accin combinada de diferentes tipos de
penicilina, por ejemplo:
Penicilina sdica
Estreptomicina
Agua destilada
400 mg
200 mg
10 c.c.
Filtrar en equipo estril, adicionar volmenes de 3.0, 2.0, 1.0, 0.5 y 0.25 que dan concentraciones de:
Ejemplo:
TUBO
ml
3.0
2.0
1.0
0.5
0.25
Penicilina ug/ml
12.000
8.000
4.000
2.000
500
Estreptomicina ug/ml
8.000
4.000
2.000
1.000
250
Mediante una pipeta Pasteur se toma una muestra de plancton y se desliza en la cmara que previamente
tiene adherido el cubreobjetos, se deja pasar 5~10 minutos para que la muestra se estabilice; se procede a
contar mediante un contador de mano, en algunos casos es necesario diluir la muestra cuando la densidad
es alta y tambin fijada cuando el plancton es mvil, siguiendo los siguientes pasos:
1.
2.
3.
4.
5.
Una vez que se tiene el promedio de clulas de las cmaras, el clculo total de clulas por mililitro se lleva
a cabo de la siguiente manera:
Autoclave
Se recomienda para la esterilizacin de medios de cultivo, vitaminas, material de cristal. Tiene la
desventaja del tiempo que se invierte y el volumen que se puede esterilizar.
Filtracin
Se utiliza para separar partculas orgnicas o microorganismos en los medios de cultivo o instalaciones del
sistema de aereacin. Existen diferentes tipos de los que podemos mencionar: filtros milipore (membranas,
vidrio, celulosa, etc), filtros de fibra (algodn, vidrio, materiales sintticos), filtros de tierra de diatomeas,
geles de acrilamida (esferas de diferentes tamaos en micras), empaques de algodn y carbn activado, y
finalmente existen unidades comerciales de esterilizacin con cartuchos sintticos (0.45, 3, 5, 20) etc.
Esterilizacin por U.V.
Los efectos de la irradiacin ultravioleta son bacteriostticos y fungiostticos en logitudes de onda
menores de 500 NM (Jerlov, 1970). Se recomienda para estos fines las longitudes de onda de 240 a 280
NM las mximas eficiencias se obtienen cerca de los 254 NM (Kinne, 1976). Los rayos ultravioleta
desinfectan el agua. El dato ms importante y preciso sobre un tratamiento con rayos U.V. es la dosis de
U.V. (normalmente expresada en W seg/cm2) requerida para matar a un determinado porcentaje de la
poblacin de organismos contaminantes. Un antecedente importante son las experiencias reportadas
sobre la utilizacin de unidades de U.V. para desinfectar criaderos de peces y ostiones, cultivos de
microalgas, agua de mar almecenada (Fig. 3 y Tabla 4) (Kinne, 1976; Wheaton, 1977; Aguirre, 1981;
Torrentera & Franco, 1988).
3) Criterios de Eficiencia para la Seleccin y Utilizacin de los Mtodos de Esterilizacin Mencionados
a. Mtodo Indirecto: Se analiza el estado de salud y las tasas de supervvencia de los organismos en
cultivo.
b. Mtodo Directo: Se calcula el porcentaje de reduccin de microorganismos, analizando el nmero
de stos presentes en muestras no tratadas y el nmero de los mismos presentes en muestras
obtenidas despus de la aplicacin del tratamiento de esterilizacin seleccionado. Esto se puede
determinar mediante anlisis bacteriolgicos (mtodo standard en placa de agar); cuantificando el
nmero de colonias presentes en la caja despus de haber inoculado 1 ml de cada muestra por un
perodo de revisin de 24 h, 48 h, 96 h. Para muestras de agua marina se recomienda el Medio de
Zobell que selecciona el crecimiento de bacterias marinas; para Coliformes totales se recomienda
el Medio McConkey, entre otros. En las Figs. 3 y 4 se muestran resultados de diferentes mtodos
de esterilizacin.
6. EQUIPO E INSTALACIONES
a. Sala o Laboratorio de Cultivo: Se recomienda para fines de mantenimiento de cepas, transferencias
sucesivas de cultivos, crecimiento de cultivos en pequeos y medianos volmenes. Generalmente
para fines de investigacin las siguientes caractersticas:
Laboratorio con temperatura controlada 1820C.
Paredes y pisos de azulejo en color blanco.
Instalaciones para el cepario y cultivo intermedios con lmparas de luz blanca fra
fluorescente (20W37W).
Instalaciones tipo invernadero (ventanas de cristal o plstico con temperatura controlada).
b. Cuarto de Siembra: Puede instalarse dentro del mismo laboratorio una cabina con campana de
flujo laminar o bien una simple mesa de laboratorio con instalacin de gas para dos mecheros para
la inoculacin en condiciones acpticas.
c. Sala de Produccin: Para volmenes de 200 l o ms, se requieren recipientes de materiales
plsticos no txicos y de preferencia transparentes para el desarrollo a nivel masivo de las
diferentes especies del plancton. En este tipo de instalacin es recomendable el uso de la luz solar,
pues el uso de la luz artificial es de muy alto costo y se require adems, de equipo para mantener
la temperatura a 1820C. En zonas de clima templado para cultivos masivos se pueden
desarrollar stos a la intemperie, cubriendo los recipientes en caso de lluvia. En la Figura 5 se
muestra un ejemplo de instalaciones para cultivo masivo, utilizando la luz solar.
FIGURA 3a Promedlo de las Bocterlas viables formadoras de Colonla (C.F.U.) por mllmetro despues de
diversos tratamientos. (Barroso, 1987).
<
FIGURA. 3b Rorcontajes do Reduccin (C.F.U.) obtenldos con dlversos tratamlentos. (Barroso, 1987)./p>
FLWO
?
?
150
1t/min
32
1t/min
32
1t/min
Kelly, 1961
Wood, 1961
Herald, et al., 1962
DENSIDAD DE
% DE
TIPO DE
OBJETO DE
U.V.
REDUOCION CONTAMINANTE INVESTIGACION
Tratamiento de agua de
90 W/cm2
90
Bacterias
mar.
?
ptimos
Bacterias
Cultivos de almejas.
2
90 W/cm
90
Bacterias
Tramiento de agua de mar.
Cultivos de Crasostrea
960 W/cm2
99.96
Bacterias
Viroinica.
Sistemas de cultivo
?
100.00
Bacterias
cerrado.
Sistemas de cultivo
?
100.00
Bacterias
cerrado.
significativa
Bacterias
ptimos
Bacterias
1000
1t/min
significativa
Bacterias
Esterilizacin de agua de
mar.
90 %
Bacterias
Cultivo de peces.
Murchelano, 1975
3 1t/min
ptimos
Bacterias
8.5
1t/min
99.0
Bacterias
99.99
Bacterias
Cultivo bivalvos.
50.0
Poblacin
microbiana
mezclada.
Tratamiento de aguas
negras.
?
215,500
W/seg/cm2
?
22,100 W
seg/cm2
13,100 W
2 1t/min
seg/cm2
?
20,000 W
seg/cm2
32
1t/min
30,000 W
seg/cm2
significativo
Bacterias
Aguirre, 1981
3.751
1t/min
60.95 W
seg/cm2
99.63
Bacterias
90 %
Virus
10,000 W
seg/cm2
91,900 W
?
seg/cm2
31
161,600 W
l/min
seg/cm2
32,300 W
15 l/min
seg/cm2
19,400 W
25 l/min
seg/cm2
3.75
140,059 W
l/min
seg/cm2
?
99.9
Bacterias
Hongos
Cultivo de Salmn.
Desinfeccin de acuarios
marinos.
Cultivo de
C. Crasostrea gigas.
Tratamiento de agua de
mar.
Cultivos de Crasostrea
virginica.
Esterilizacin de medios de
cultivos continuos de
microalgas.
Sistema de recirculacin
para peces.
Sistema de recirculacin
para peces.
Tratamiento de aguas
negras.
Virus
100
Bacterias
100 %
Bacterias
Tratamiento de agua de
mar almacenada.
7. TIPOS DE CULTIVO
1. Cultivo Esttico
Desarrollo del cultivo hasta fase de crecimiento exponencial y la utilizacin del volumen total del
mismo. Generalmente el uso de estos cultivos es para fines de bioensayo o bien para transferencia
a volmenes mayores (ver la Figura 6, que ilustra la secuencia del cultivo).
2. Cultivo Continuo
De acuerdo a Kubitschek (1970), un cultivo continuo es un sistema de flujo en el cual las clulas
individuales estn suspendidas en un volumen constante en un estado de equilibrio dinmico,
establecido por una remocin de cultivo y adicin de medio nutritivo por unidad de tiempo con
tendencia al infinito. Se habla de una diferencia entre un cultivo semicontinuo y un cultivo continuo.
Al parecer sto es incorrecto, ya que la diferencia estriba en el nmero de perodos de remocin
del cultivo y adicin del medio nutritivo y en los sistemas continuos este perodo de remocin y
adicin es generalmente automtico en aparatos llamados turbidostatos y Quimiostatos.
Cuando se requiere de grandes cantidades de clulas a intervalos frecuentes para alimentar
especies en cultivo (peces, crustceos, moluscos), los cultivos semicontinuos o continuos proveen
un gran nmero con mayor consistencia en forma uniforme y constante. En estos cultivos es
importante determinar la concentracin ptima de los nutrientes por unidad de tiempo en relacin a
la tasa de dilucin o cosecha del cultivo. Cuando se establece el estadio de equilibrio del sistema,
la produccin es mxima. En las Figuras 7 y 8 se muestran dos ejemplos de cultivo semicontinuo.
3. Cultivo Masivo
Se considera cultivo masivo a aquellos que se utilizan como alimento vivo de peces crustceos y
moluscos y cuya produccin es a gran escala en tanques u otros recipientes de volumen no
controlado.
Existen muchas alternativas para la produccin de microalgas en cultivo masivo, desde la
utilizacin de tanques de plstico, madera, concreto hasta los estanques rsticos, as como la
utilizacin de fertilizantes minerales de tipo agrcola hasta una gran variedad de escretas de
ganado como fuentes de nutrientes.
En relacin a la utilizacin de luz artificial o natural, sta depender del tipo de infraestructura con
que se cuente.
El control de la temperatura ser necesario en relacin del tipo de microalga en cultivo y de la
regin climtica en donde se establezca el mismo. En la Tabla 17 se muestran algunas alternativas
de produccin en cultivo masivo de microalgas.
Fig. 4a) Esquema del ivnernadero de Wachapreague (USA). Cultivo masivo con temperatura controlada en
invernadero con ventilador.
Fig. 4b) Cultivo masivo a la intemperie de algas unicelulares en tanques de fibra de vidrio (la temperatura
es controlada por enfriadores sumergibles. La Joya, San Diego, U.S.A).
Stock primario Obtenido de
laboratorio (Cepario)
(Agitar los
recipientes 2 3
veces al da)
Contenedor Cultivo
intermedio
Garrafn de 20 its.
Inoculacin ascptica de un stock de
cultivo de agua marina esterilizada
en outoclave, filtrada y enriquecida.
Crecimiento de 4 das. Flujo bajo de
aire.
Contenedor de 200
its.
Cosecha o
transferencia
Fig. 5) Secuencia de cultivo en sistema esttico. Cuando se ha alcanzado una densidad ptima de clulas,
se utiliza todo el cultivo como inculo de la siguiente fase.
Fig. 6) Cultivo semicontinuo (R. Ukeles, en Stein, 1979). Esquematizacin diagramtica de un cultivo
semicontinuo (1), cilindro de CO2, (2) botella colectora de cultivo, (3) cmara de llenado ascptico, (4)
flujmetro de gas, (5) filtro de aire, (6) regulador de presin, (7) compresor de aire, (8) salida de gas, (9)
campana de llenado ascptico sobre el inoculador, (10) sifn de cosecha, (11) vlvula de aguja para
regular la presin del gas, (12) entrada de gas con filtros de algodn y difusores de aire, (13) regulador de
voltaje, (14) unidad de crecimiento, (15) matraz Fernbach con inculo.
FIG. 7) Cultivo semicontinuo (Cceres, 1979; Aguirre, 1981). Sistama de cultivo semicontinuo
de Tetraselmis suecica usando medio de cultivo esterilizado con autoclave. A) Reserva de medio de cultivo
(20 1); B) Sifn para el medio de cultivo; C) Escape de aire; D) Recipiente de cultivo (bolsa de plstico); E)
Dosificador de aire; F) Filtro de aire; G) Sifn de cosecha; H) Recipiente de cosecha.
8. MODELOS DE PRODUCCION
Alrededor de 1960 se inici la modelacin de los cultivos continuos con bacterias (Fencl, 1966), basados
en la teora bsica desarrollada por Monod (1950). En relacin a estas teoras matemticas se han
desarrollado numerosos trabajos con microalgas bajo el sistema de cultivo continuo, con diferentes fines
de estudios: bioqumicos, fisiolgicos, nutricionales, etc., como es el explorar los mecanismos de limitacin
de nutrientes (Droop, 1966; Caperon, 1968).
Ahora se llevan a cabo numerosos trabajos con microalgas en sistemas de cultivo continuo con el objeto
de determinar la mayor produccin posible (Droop, 1975; Ukeles, 1973; Canzonier & Brunetti, 1975;
Cceres, 1979; Aguirre, 1981; Pares & Leyva, 1982; Torrentera, 1983). Estos trabajos tambin han
contribuido en la implementacin de sistemas de cultivo, algunos muy complejos usados para estudiar la
fisiologa y bioqumica de las microalgas en condiciones axnicas, otros menos sofisticados para producir
las microalgas y as utilizarlas como alimento de invertebrados marinos y larvas de peces.
Algunos de estos modelos se construyen con los datos de densidad (No. de cl/ml) u otros tipos de
medicin, como la densidad ptica (Nm), en relacin a las tasas de dilucin (volumen/da). En el caso del
Modelo de Monod (1950), la relacin entre la densidad y la dilucin describe una curva exponencial
negativa, mientras que el Modelo de Droop (1966) asume esta relacin como lineal. En ambos casos la
produccin se describe como una parbola simtrica (Droop, 1966) o asimtrica (Monod, 1950). En las
Figuras 9, 10 y ll se muestran tres ejemplos de modelos de produccin de tipo parablico en donde el
punto de inflexin de la curva describe la produccin mxima sostenible en la tasa de dilucin ptima para
tres diferentes especies de microalgas en sistemas de cultivo semicontinuo.
VENTAJAS
Control de las especies de algas A pequea
escala no es caro
INCONVENIENTES
Luz artificial
Luz artificial Generalmente
caro
Generalmente caro
Control limitado
Control limitado sobre las
especies de algas
FIG. 8a) Relacin entre la densidad y la dilucin para un cultivo semicontinuo de Tetraselmis suecica,
donde se muestran las medias de los valores obtenidos con los lmites de confianza al 95% de una
distribucin normal. La relacin se obtiene de acuerdo al Modelo de Monod (1950). Aguirre, 1981.
FIG. 8b) Relacin entre la produccin y la dilucin en el cultivo semicontinuo de Tetraselmis suecica. La
dilucin ptima se encuentra en el punto de inflexin de la curva.
FIG. 9a) Relacin entre la densidad y la dilucin para un cultivo semicontinuo de Isochrysis galbana, donde
se muestran las medias de los valores obtenidos con los lmites de confianza al 95% de una distribucin
normal. La relacin se obtiene de acuerdo al Modelo de Monod (1950) (Pares & Leyva, 1987).
FIG. 9b) Relacin entre la produccin y la dilucin en el cultivo semicontinuo de Isochrysis galbena. La
dilucin ptima se encuentra en el punto de inflexin de la curva (Pares & Leyva, 1982).
FIG. 10a) Modelo de Droop (1966) que asume la distribucin de los datos en forma lineal de la densidad
(X) de Chlorella saccharophila en funcin de la tasa de dilucin (D) (Torrentera, 1983).
FIG. 10b) Modelo de produccin de Droop, para Chlorella saccharophila basado en los datos de la
regresin lineal (Torrentera, 1983).