Cambios de expresin a nivel de ARNm evidenciado por Real Time PCR

HO-1 en los 3 tejidos tras tratamiento

-

Corteza
Hipocampo
Estriado
Posiblemente por una retroalimentacin negativa (Shutt off)
Quercentina actu por vas alternativas y disminuyo Estrs oxidativo
asociado al dao hipoxico, presciendiendo de la induccin de HO-1

HIF 1 a en cerdos hipxicos (corteza)

-

Induccin prolongada del gen y su producto podra resultar daino

Regulacin negativa luego de la reoxigenacin
Modelos persistenes dicen HIF 1 se acumula aun despus de
reperfusion y/o reoxigenacion mediante la via PI3K/AKT-Mtor

Nrf2 en cerdos hipxicos tras tratamiento (estriado)

-

Efecto neuroprotector

Las reas tienen respuestas s a la Hipoxia y al tratamiento

nivel clnico de EHI, segn tipo y grado de hipoxia, aspectos
genticos, y aspectos ambientales
Cambios en la expresin a nivel protemico evidenciados por Western Blot
-

Fuerte regulacin postranscripcional de

Nrf2
HIF 1 a
-

Conocer la correspondencia entre ARNm y su expresin a nivel

protemico

HO-1
Hipotes
Nrf2
HIF 1 a
HO-1
-

Baja reproductibilidad en
obtencin de bandas
esperadas no fue posible
cuantificacin de los niveles
de protena mediante WB

Niveles
bajos
de
expresi

Falta de
anticuerpos
especficos
contra las
protenas de

Cualitativamente HIF 1 a : menor expresin en corteza, se reproduce

patrn de expresin del ARNm
til, especfico pero sesgado
Necesario un Abordaje protemico que ofrezca una riqueza en cuanto
a resultados, y menos restringida

Anlisis del perfil protemico por Electroforesis bidimensional

Identifica principales vas afectdas tras el dao inducido por hipoxia,

as como por el tratamiento con quercentina

Efecto neuroprotector de quercentina cambios en el perfil proteico celular

A)
Glutation S
transferasa
en protenas involucradas en la regulacin redox luego de hipoxia
Perxido
reducatasa dep.
tiorredoxina
Podran verse
aumentadas para
contrarrestas el
dao oxidativo

Tratamiento con quercentina

Glutation S
transferasa
Perxido
reducatasa dep.
tiorredoxina
SOD por
atenuacin del estrs

Con respecto a:

NADH dehydrogenasa ubiquinona flavoprotein 2 (subunidad del complejo I

de la cadena respiratoria de mem. Mitocondrial)
-

Transfiere e
Fuente de ROS durante hipoxia contribuye a injuria oxidativa
Hipoxia/reoxigenacion inhibe actividad de este complejo (difcil de
predecit que efecto puede tener un cambio en la expresin de esta
protena, depender si se encuentra inhibido o no)

B)
-

Efectos en va metablica-gluclisis
Protenas cambian su PI
Relacionadas a la gluclisis
Hipoxia y quercentina modificaciones postraduccionales en
protenas de la gluclisis

Enolas
a
Triosaf
osfato
isomer
asa

Hipo
xia
PI

Querce
ntina
PI

PI

PI

Disminucin a
valores similares
a cerdo control

Se cree que esta induccin es aumentar la produccin energtica

anaerbica

C)

Protenas relacionadas con la Apoptosis

Quercentina
Induce apoptosis dep. de p53
Regula negativamente las protenas antiapoptticas de la familia Bcl2
(Bcl-XL y Bcl-2)
Regula positivamente miembros proapottics Bax y Bad
Induccion de apoptosis por mecanismos dep. de casapasas 3 y 9 al
liberar citocromo C
APOPTOSIS no necesariamente un agravio (rescate de tejio
irreversiblemente daado, estrategia fisiolgica durante el desarrollo)
Tras hipoxia

CMO LO HACE?

Prohibitina

Inhibe la
apoptosis
inducida por
hipoxia

Inhibicin de
la
disminucin
del potencial
de
membrana
mitocondrial

Complemen
t
component
1Q
subcompon
ent binding
protein

Forma parte
del poro de
permeabilida
d transitoria
mitocondrial
(supresin
de la muerte
celular)

Inhibidor
endgeno
del poro

Disminucin
de los
niveles de
Bcl2 en
mitocondria
Inhibicin de
la liberacin
de citocromo
C

Se mantiene

Tras hipoxia

Protena 1 del
canal
dependiente de
voltaje

Protena Acidic
leucine-rich

Forma parte del

poro de
permeabilidad
transitoria
mitocondrial
(media la
apoptosis)
Control del ciclo
celular, protena

+
Quercentin
a
Se mantiene

Fosforilacin en
Tyr, protena
afectada,
supuestamente
permitira
supervivencia
celular
en cerdos
hipoxicos

Tras
quercentin
a

sus
valores

nuclear
phosphoprotein
32 family
member A

antiapopttica
(regula caspasa
3)