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NMERO
21,
ENERO-DICIEMBRE
2013,
PP.
48-60.
Investigaciones
Borrego Alonso, Sofa Flavia y Julio Csar Rodrguez Garca: Caracterizacin micolgica del ambiente areo del depsito de los fondos
bibliogrficos del Museo Nacional de la Msica. Boletn del Archivo Nacional, enero-diciembre 2013, pp. 48-60. La Habana, Cuba.
(Conservacin y Restauracin)
48
CARACTERIZACIN
INTRODUCCIN
Los objetos que forman parte de las
colecciones de museos, archivos y bibliotecas estn esencialmente constituidos por materiales de naturaleza
orgnica, por ello estn sujetos inevitablemente a la accin de los agentes
fsicos, qumicos y biolgicos. Una
caracterstica de estos materiales es
que son generalmente higroscpicos
y altamente susceptibles al deterioro. Vale destacar que los procesos
de degradacin fsico-qumica facilitan el biodeterioro al brindar un
sustrato ms asequible como fuente
nutricional. El biodeterioro se produce, sobre todo, a causa de microorganismos hetertrofos, capaces
de degradar enzimticamente las
sustancias orgnicas (Crespo, 1984;
Valentn, 2010).
Entre los microorganismos contaminantes que tienen relevancia en
la conservacin de las colecciones se
destacan dos grandes grupos: las
bacterias que tienen requerimientos
nutritivos definidos y especficos, y
los hongos que, por el contrario, admiten una gran diversidad; desde
compuestos muy simples a los ms
complejos (Caneva et al., 2000b; Arroyo, 1995).
Los altos valores de temperatura, humedad relativa, iluminacin,
contaminantes del aire como cloruros, azufre y polvo, as como una
escasa ventilacin, influyen negativamente en el estado de conservacin de los objetos de museo. Por lo
general estos factores actan de forma conjunta, acentuando el dao y
condicionando el desarrollo de los
microorganismos sobre los diferen-
MNM
49
CARACTERIZACIN
50
MNM
Materiales y mtodos
Se realizaron 14 muestreos en el local de los fondos bibliogrficos del
Museo Nacional de la Msica entre mayo y agosto del 2011, meses
correspondientes a la poca de lluvia de nuestro pas. Los muestreos
fueron realizados todos los viernes
durante 14 semanas consecutivas
alrededor de las 11:00 a.m., hora
reportada como la de mayor concentracin microbiana en el ambiente
areo. El local analizado tiene unas
dimensiones de 19.30 m de largo,
9.30 m de ancho y 4.70 m de altura.
En la Figura 1 se muestran los detalles estructurales ms relevantes de
dicho local. Se examinaron en total
8 puntos de acuerdo a las dimensiones del local, y las placas se colocaron a una altura de 1.5 m.
Los puntos 2, 5 y 7 se ubicaron
en reas prximas a las ventanas de
la parte posterior del inmueble, los
puntos 1 y 8 cerca de las ventanas
anteriores y puertas de acceso que
comunican con otros locales pertenecientes a los fondos bibliogrficos, y los puntos 3, 4 y 6 son zonas
aledaas a la puerta principal de
acceso al depsito, por donde transitan usualmente las personas que
laboran en el centro. Los puntos
1, 3 y 4 coinciden tambin con las
reas donde normalmente trabaja el
personal encargado de la coleccin.
Los muestreos se realizaron por
triplicado en cada punto seleccionado, empleando el mtodo de sedimentacin descrito por Omeliansky, exponiendo placas Petri de 90 mm de
dimetro con Agar Extracto de Malta suplementado con NaCl (7.5 %),
CARACTERIZACIN
durante 10 min. Se realizaron tambin muestreos directos por hisopado sobre ejemplares bibliogrficos de
la coleccin, superficies de estanteras y contenedores de documentos.
Una vez finalizada la recoleccin, las
muestras directas y las tres rplicas
del muestreo ambiental fueron incubadas a 28 C por un perodo de 7 a
10 das.
Finalizado el perodo de incubacin se contaron las colonias fngicas y bacterianas emergentes en
cada placa y luego se calcularon las
unidades formadoras de colonias por
metro cbico de aire (UFC/m3) en
cada punto, mediante el empleo de
la ecuacin propuesta por Omeliansky
(Bogomolova y Kirtsidile, 2009).
UFC/m3 = 5a x 104 x (b.t)-1
donde:
a: nmero de colonias.
b: rea de la placa en cm2.
t: tiempo en min.
MNM
Identificacin
de microorganismos aislados
Se observaron sus caractersticas
culturales y morfolgicas (micro y
macroscpicas) y la identificacin se
realiz con ayuda de manuales de
identificacin taxonmica (Barnett
HL y Hunter BB, 1987; The Aspergillus Website, 2006; Pitt JI, 2007).
Determinacin
de la distribucin relativa
de las colonias
Para determinar la frecuencia de aparicin y la densidad relativa de los gneros aislados se utilizaron las ecuaciones de frecuencia y de densidad
relativa (Esquivel et al., 2003; Smith,
1980).
donde:
No. muestreos en que
aparece un taxa x 100
Frecuencia
de aparicin = No. total de muestreos
51
CARACTERIZACIN
Densidad
relativa =
Determinacin cualitativa
de la actividad celuloltica
y de la produccin de pigmentos
de hongos
Para determinar cualitativamente la
actividad celuloltica de las cepas
fngicas aisladas, se procedi a su
siembra en un medio de cultivo cuya
composicin salina para 1L fue: 2 g
de nitrato de sodio; 1g de fosfato de
dipotasio; 0,5 g de sulfato de magnesio; 0,5 g de cloruro de potasio;
0,01 g de sulfato ferroso; 0.5g de extracto de levadura, 20 g de agar; pH
inicial se ajust a 5,5. Como fuente
de carbono se emple en un primer
caso, una tira de papel de filtro de
4,8 cm x 1 cm de ancho (equivalente a 50 mg de papel de filtro); en el
segundo, celulosa cristalina (1 %);
en el tercer caso, celobiosa (1 %) y
como control, se emple glucosa (1 %).
Los cultivos se incubaron a 28 C
durante 21 das. La produccin de
pigmentos se evalu sobre la tira de
papel de filtro (Smith, 1980).
Determinacin de la produccin
de cidos de hongos
52
MNM
Determinacin cualitativa
de actividad proteoltica
La actividad proteoltica fue determinada usando solamente el test
de hidrlisis de gelatina en tubos de
ensayo. Cada aislado fue inoculando por puncin dentro del medio con
gelatina cuya composicin fue idntica al de los ensayos anteriores con
120 g/L de gelatina como fuente de
carbono. Los tubos inoculados fueron incubados por 7 das a 28 2 C
e incubados a 4 C, evidenciado la
reaccin de hidrlisis de gelatina por
licuefaccin del medio al invertir los
tubos (Borrego et al., 2010; Abrusci
et al., 2005).
Determinacin cualitativa
de actividad amiloltica
Cada cepa fngica aislada fue inoculada en placa Petri con medio
salino de composicin similar a los
empleados previamente con 5 g/L
de almidn soluble utilizado como
fuente de carbono. Despus de 7 das
de incubacin a 28 2 C, se aadieron 5 ml del reactivo de Lugol a
cada placa de cultivo y una zona no
coloreada alrededor de la colonia
fue considerado como indicador de
una hidrlisis positiva (Borrego et
al., 2010).
CARACTERIZACIN
RESULTADOS
Y DISCUSIN
Niveles de contaminacin
microbiana ambiental
A partir de los resultados obtenidos
al analizar el comportamiento de los
contaminantes fngicos aislados del
ambiente entre los meses de mayo y
agosto del 2011, durante 14 semanas consecutivas correspondientes
a la denominada poca de lluvia,
se aprecia que los niveles mximos
alcanzados en el local fueron de
1127 ufc/m3 en la tercera semana
de muestreo, y 813 ufc/m3 en la
quinta semana. Al comparar estos
niveles con la escala propuesta por
Omeliansky para evaluar el grado de
contaminacin microbiana del aire,
y otros reportes ms recientes que
consideran que un ambiente est
contaminado cuando presenta un
MNM
53
CARACTERIZACIN
54
MNM
bientes interiores de depsitos y salas de exposicin en el Museo Biblioteca Servando Cabrera Moreno, los
fondos de la Oficina Cubana de la
Propiedad Industrial (OCPI) y las salas de exposicin del Museo Ernest
Hemingway. Sin embargo, estudios
previos realizados en depsitos del
Archivo Nacional de la Repblica de
Cuba utilizando el mtodo de sedimentacin y el aereoscopio, reportan
niveles de contaminacin microbiolgica significativamente menores a
los detectados en el presente estudio (Borrego et al., 2007), hecho que
demuestra la necesidad de realizar
muestreos sistemticos para conocer la variabilidad de la microbiota
del aire en ambientes interiores.
La HR y la T del local a lo largo
de todo el perodo de estudio mostraron un comportamiento estable,
como puede apreciarse en la figura 2,
la T oscil entre los 27 y 34 C con
variaciones semanales mximas de
3 unidades de T, mientras la HR oscil entre los 68 y 44 %, con una
variacin mxima intrasemanal de
12 unidades y mantenindose regularmente por debajo del 65 %. Este
Fig. 2. Comportamiento de la concentracin micolgica del aire y la humedad relativa (HR) y temperatura (T) en el momento del muestreo.
CARACTERIZACIN
Caracterizacin microbiana
Como se aprecia en las Tablas 1 y
2, durante el perodo de muestreo,
la densidad relativa de los gneros
fngicos aislados mostr que los
gneros Cladosporium y Aspergillus
resultaron los de mayor predominio
con una media de 34 % y 25.2 % respectivamente, seguidos por el gnero
Penicillium con una media de 4.4 %
y, una frecuencia relativa del 100 %
al ser aislados en todos los muestreos realizados, lo que concuerda
con otros resultados de muestreos
ambientales realizados por nuestro
laboratorio y otros grupos de trabajo, que hacen de estos gneros
fngicos los contaminantes por excelencia en ambientes interiores de
museos, archivos y bibliotecas as
como en muestreos directos realizados por hisopado sobre el sustrato
fsico de los bienes culturales (Borrego et al., 2007), siendo el gnero
Cladosporium el aislado con mayor
densidad en ambientes de archivos
y bibliotecas en numerosos estudios
MNM
55
56
6.6
2.2
2.2
-
6.0
2.0
4.0
4.0
-
3.2
4.9
-
6.5
-
3.6
3.7
2.4
1.2
-
3.5
3.5
1.8
-
4.7
4.8
-
5.0
2.5
1.7
0.8
0.8
2.0
2.0
2.0
-
3.8
2.2
0.6
0.5
0.5
-
3.2
3.2
-
7.0
1.2
7.0
-
5.7
3.8
5.7
7.0
2.0
2.0
2.0
Penicillium
Fusarium
Alternaria
Mucor
Rhizopus
Chrysonilia
Rhizopus
Mucor
M5
M4
M3
Fusarium
M2
Penicillium
Alternaria
Aspergillus
M1
Cladosporium
Gnero
Muestreo
M6
M7
M8
M9
M10
M11
M12
M13
M14
Tabla 2. Frecuencia relativa de los gneros fngicos identificados en el perodo de mayo a agosto del 2011
14.2
21.4
42.8
57.1
78.6
100
100
100
FR (%)
32.6
48.0
17.6
50.0
20.7
36.8
28.6
12.7
12.4
12.8
18.3
32.0
16.9
13.3
Aspergillus
Chrysonilia
21.7
M14
22.0
M13
39.2
M12
36.9
M11
34.1
M10
35.0
M9
42.9
M8
33.0
M7
45.4
M6
48.9
M5
49.5
M4
34.0
M3
9.4
M2
23.2
M1
Cladosporium
Gnero
Muestreo
Tabla 1. Densidad relativa (%) de los gneros fngicos aislados e identificados, del ambiente de los fondos
bibliogrficos del Museo Nacional de la Msica
CARACTERIZACIN
MICOLGICA DEL AMBIENTE AREO DEL DEPSITO DE FONDOS BLIOGRFICOS DEL
MNM
CARACTERIZACIN
MNM
Tabla 3. Potencial biodeterigeno de las cepas fngicas con mayor frecuencia y densidad relativa aislados en el depsito de Fondos de la Biblioteca del Museo Nacional de la Msica
Cepa fngica
Aspergillus Niger
Aspergillus flavus
Aspergillus sp 1
Aspergillus sp 2
Aspergillus sp 3
Aspergillus sp 4
Aspergillus sp 5
Aspergillus sp 6
Aspergillus sp 7
Cladosporium sp 1
Cladosporium sp 2
Penicillium sp 1
Penicillium sp 2
Actividad
celuloltica
++++
++++
+++
+++
++
+++
++
+++
++++
++++
+++
+++
++
Actividad
amiloltica
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Actividad
proteoltica
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
PH
5.58
5.60
3.00
3.50
5.53
5.55
5.58
5.78
3.20
5.50
5.65
5.50
4.65
57
CARACTERIZACIN
58
El anlisis del crecimiento a expensas de la celulosa microcristalina como nica fuente de carbono,
constat igualmente que las especies
de Aspergillus y Cladosporium eran
capaces de crecer moderadamente
en este medio lo cual demuestra que
tienen una elevada actividad celuloltica al ser capaz de degradar esta
molcula de estructura cristalina altamente organizada. Las diferentes
especies de Penicillium mostraron en
este medio un crecimiento relativamente bajo, lo cual demuestra que
no poseen una fuerte actividad celuloltica, requiriendo que la molcula de celulosa posea una estructura
amorfa que facilite su actividad qumica para degradarla como fuente
de energa.
El estudio de la produccin de
cidos, que representa otros de los
mecanismos de deterioro qumico
asociado a la actividad vital de los
hongos, demostr que todas las cepas estudiadas provocaron una disminucin del pH del medio de cultivo potencialmente peligrosa para
la conservacin del papel. Las especies que provocaron una mayor disminucin de pH correspondieron al
gnero Aspergillus y una especie de
Penicillium, causando una disminucin de pH de ms de 2 unidades,
lo que evidencia una fuerte produccin de cidos, resultados que concuerdan con lo reportado por otros
autores (Martnez, 2003; Borrego et
al., 2007).Otro factor importante del
potencial deteriorante de las cepas
aisladas del aire es el hecho de que
todas mostraron actividad proteoltica, lo que significa un riesgo potencial de deterioro para encuadernaciones en cuero.
MNM
CONCLUSIONES
1. Las concentraciones microbianas encontradas en el estudio
aeromicolgico realizado en el
depsito de Fondos de la Biblioteca del Museo Nacional de
la Msica durante el perodo
de mayo a agosto del 2011
reflejaron valores de concentracin propios de ambientes
desde poco contaminados hasta no contaminados.
2. Se aislaron un total de 1 071 ufc
en las 14 semanas de muestreo.
Los aislados fngicos fueron
identificados y pertenecieron
a los gneros: Cladosporium,
Aspergillus, Penicillium, Fu-
CARACTERIZACIN
3.
4.
5.
6.
BIBLIOGRAFA
ABRUSCI C., Martn-Gonzlez A.; Del
Amo A., Catalina F.; Collado J y Pla-
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CARACTERIZACIN
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MNM