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NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLGICAS
TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENTICO POR
CONJUGACIN EN Escherichia coli
GRUPO: 5QV2
SECCIN: 1
EQUIPO: 3
INTEGRANTES:
CARDOSO HERRERA LESLYE HIRLEY
CELAYA BARRAGN ADRIN ISAI
CERN MARTNEZ EMILIA TERESA
FECHA DE ENTREGA: 18/10/2016
INTRODUCCIN:
conjugacin.
Estabilizacin de la agregacin.
Seala el punto de corte en la cadena.
Corta la cadena que ser transferida.
Exclusin de la superficie.
Limitan la capacidad de una F+ para actuar como receptora.
Cruza Hfr x F-: En las cepas Hfr (alta frecuencia de recombinacin) el factor F
est integrado al cromosoma bacteriano. Las clulas Hfr se comportan como
clulas F+, forman pili sexuales y se conjugan con las clulas F -. En la conjugacin
entre clulas Hfr y F-, el factor F integrado se rompe y el extremo de la cadena rota
se mueve hacia la bacteria F -. En las clulas Hfr, el factor F se une al cromosoma
bacteriano, de modo que el cromosoma lo sigue hasta la clula receptora. La
cantidad de cromosoma bacteriano que se transfiere depende del tiempo en el que
ambas clulas permanecen en la conjugacin. Una vez dentro de la clula
receptora la cadena del DNA donante puede producirse un entrecruzamiento entre
la cadena y el cromosoma original de la clula F -. La clula F- casi nunca se
convierte en F+ o Hfr porque el factor F se rompe en la mitad durante el comienzo
Receptora
Transconjugante
F+
F-
F+
Hfr
F-
F-
F-
F o F
Bacterifago M13:
OBJETIVOS:
RESULTADOS:
Tabla 3. Resultados de la cuenta viable de las diferentes cepas utilizadas.
Cepa
Equipo
Dilucin
No. De colonias
Titulo (UFC/ml)
-4
-5
3
10
10
I, I
470, 547
5.08108
JC4046
CSH62
RC712
KL323
4
5
6
1
2
3
4
1
2
5
6
3
4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-4
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
10-5
205, 213
464, 440
96, 97
203, 173
560, 487
I, I
I, I
26, 47
I, I
706, 692
240, 213
123, 119
132, 99
I= incontables.
ND= No determinado
mL
alcuota
dilucin
96+ 97+37+ 9
1
2.22
1
UFC
0.1
=
mL
104
UFC
=1.0710104 =1.07 x 107
mL
)(
42, 35
116, 127
37, 9
11, 9
391, 240
ND, 157
ND, 27
6, 13
751, 722
0, 0
107, 126
17, 18
16, 12
2.3107
5.21107
1.09107
1.8107
7.6107
1.57108
2.7107
4.18106
7.36108
6.99107
3.12107
1.25107
1.17107
Tabla 4. Ttulo de revertantes para cada cepa utilizada por los diferentes
equipos de la seccin.
Equipo
Cepa
Medio
# colonias
Ttulo de revertantes
1
CSH62
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
RC712
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
2
CSH62
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
RC712
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
3
JC4046
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
CSH62
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
KL23
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
4
JC4046
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
CSH62
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
KL23
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
5
JC4046
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
RC712
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
6
JC4046
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
RC712
G8
0
0
G9
0
0
G10
0
0
G10
G8
10-1
10-2
10-3
100
G9
0,0
I,I
I,I
140,138
1.4 x106
100
G10
Hfr x F Rec+
G8
G9
G10
2
G8
G9
G10
CSH62 X KL23
Hfr x F - Rec-
DILUCI
N
100
10-1
100
10-1
10-2
10-1
10-2
100
10-1
100
10-1
10-2
10-1
10-2
NMERO DE
COLONIAS
312,280
3,6
306,280
50,18
1,0
580,524
25,40
44,40
0,0
924,1280
58,46
1,1
TTULO
(UFC/mL)
2.73 x103
2.96 x103
5.31 x 104
4.2 x10 2
1.04 x104
6.53 x104
G8
100
549,770
56,63
0,0
G9
100
0,0
G10
0,0
0,0
0,0
G8
100
10-1
100
G9
100
0,0
G10
100
10-1
0,0
0,0
Hfr x FRec+
His
G8
2 .73 X 10
Trp
G9
2 .96 X 10
Pro
G10
5 .3 X 10
His
G8
9.65X105
5.08109
1.89X10-4
His
Trp
G8
G9
4.82 x105
1.68 x103
1.07 x108
1.07 x108
4.47 x10-3
1.56 x10-5
1 .51 X 10
7
1. 8 X 10
1. 6 X 10
2 .9 X 10
FM=
Ttulo de transconjugantes
9.65 x 10
Ttulo de donadoras enla mezcla de conjugacin 5.08 109
4
= 1.89 X 10
F x FJC4046
RC712 (Rec +)
F x F-
+
+
+
-
DISCUSIN
Para realizar la cuenta viable se diluyo cada cepa a 10 -4 y 10-5 para obtener cajas
con una buena proporcin de colonias aisladas que pudiramos cuantificar, estas
diluciones se sembraron por dispersin en cajas de agar luria por duplicado, un
medio rico para que las bacterias se desarrollasen, despus de la incubacin se
observ el crecimiento, se cont el nmero de colonias observado y se calcul el
ttulo de donadoras y receptoras, cada equipo desarrollo los clculos de las cepas
que sembraron. Los resultados obtenidos en la cuenta viable se muestran en la
tabla 3, esta nos ayuda a ver el crecimiento normal de cada cepa de E. coli y
calcular la frecuencia de recombinacin de cada una de las transconjugantes
obtenidas en el proceso de conjugacin que se llev a cabo. Como se trabaj en
las mismas condiciones y con las mismas cepas se esperaba que los resultados
fueran muy parecidos entre s, en el ttulo de donadoras y receptoras, lo cual no
sucedi. En la cepa donadora JC4046 F se observ que hay un aumento de 20
veces en el quipo 3 con respecto al equipo 4 y uno de 10 veces mayor con
respecto al 5; esto no muestra concordancia ya que la mala distribucin del
espatulado, o un error en las diluciones pudo haber provocado este ttulo mayor,
las diluciones de 10-4 presentan colonias incontables, que de una manera no
determinada provocan el aumento en las diluciones subsecuentes. Estos
aumentos de ttulos ocurren nuevamente en el equipo 3 en la cepa donadora Hfr y
en el quipo 2 con la receptora RC712 F - Rec+. Estos resultados de cuenta viable,
no se pueden considerar confiables, porque hay variaciones entre cada equipo en
las cepas donadoras y la receptora RC712, en el caso de la receptora KL323 los
ttulos tienen resultados muy similares y la variacin no es mayor a 10 veces, por
lo tanto se pueden considerar los ms confiables y que esta cepa fue cuantificada
de manera adecuada.
La seleccin de revertantes, fue realizada para comprobar que el genotipo de cada
cepa correspondiera al especificado. Cada medio utilizado era selectivos de
acuerdo al marcador a seguir para cada cepa receptora, el medio G8 sigue al
marcador Histidina, el G9 a la Prolina y el G10 al Triptfano y ya que adems
estos medios contienen Estreptomicina y nuestras cepas donadoras son sensibles
a esta, ninguna donadora ni receptora podra desarrollarse en esos medios, si
esto ocurre posiblemente la cepa habra sufrido una mutacin espontnea en
algunos de los marcadores cromosomales pudiendo sintetizar un aminocido que
antes no pudiera y con ello crecer en uno de nuestros medios selectivos,
dependiendo en que cepa y medio creciera dependera el nmero de revertantes
que se observaran, para detectar esta mutacin no se diluy la muestra y se
de Histidina; para la cruza F`x F - Rec+ fue Histidina el marcador que tuvo una
mayor frecuencia de recombinacin de 4.47x10 -3.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/09GeneticaBacteriana_23096.p
df
Visitado: 15/10/16 a las 17:52 hrs.
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/27_micro.htm
Visitado: 15/10/16 a las 18:15 hrs.