UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE INGENIERA QUMICA
MICROBIOLOGIA
SEGUNDO SEMESTRE 2016
SECCION N
Ing. Carlos Wong

TINCION
DE GRAM Y TIPOS DE TINCIONES

CARNET
201314346

NOMBRE
Amelia Lisbeth Moscozo Vicente

INTRODUCCIN

Los microorganismos (bacterias ) se pueden teir

para

distinguir por

medio de la reaccin de determinados colorantes grupos bacterianos como es el

ecoli, bacilos y estos a la vez se pueden distinguir por su tamao y forma; a este
mtodo se le conoce como tincin y existen varios mtodos de tincin para
clasificacin de las bacterias.
Una de las tcnicas ms usadas es la tincin de Gram que clasifica a las
bacterias como Gram-positivas y Gram-negativas; se explicara la realizacin de
este mtodo y se mencionaran otros tipos de tincin.

OBJETIVOS

MICROBIOLOGA

OBJETIVO GENERAL
Identificar por medio de la tincin de gran las diferentes bacterias, conocer
la base qumica que interacta con estas y los diferentes mtodos de tinciones
para su clasificacin.

OBJETIVO ESPECIFICO
1. Comprender la base terica y qumica de los procedimientos de tincin

2. Aprender

los pasos necesarios para realizar la tincin de Gram

3. Observar y diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas.

TINCIN DE GRAM
En microbiologa, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias
que no se tien de azul oscuro o violeta por la tincin de Gram, y lo hacen de un
color rosado tenue: de ah el nombre de "Gram-negativas" o tambin "gram
negativas".

MICROBIOLOGA

Esta caracterstica est ntimamente ligada a la estructura didrmica dada por

la envoltura celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra
citoplasmtica), lo que refleja un tipo natural de organizacin bacteriana. Son uno
de los principales supergrupos de bacterias y cuando se tratan como taxn se
utiliza tambin el nombre de Negibacteria o Didermata. Las restantes son
las bacterias Gram positivas.

Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipdicas entre las que
se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias
Gram-positivas

presentan

slo

una

membrana

lipdica

la

pared

de

peptidoglicano es mucho ms gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante

durante la tincin de Gram. Muchas especies de bacterias Gram-negativas
causan enfermedades.
Los cocos Gram-negativos

causan

la gonorrea,

meningitis (Neisseria

meningitidis) y sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros.

Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran nmero de especies.

COLORACION GRAM
Dado que las bacterias no tienen color y por lo general es invisible para la
microscopa de luz, diferentes tcnicas de tincin se han desarrollado para
visualizarlas. La ms til es la tincin de Gram, que separa los organismos en 2
grandes grupos: gram-positivos y gram-negativas.

MICROBIOLOGA

Esta tincin tambin permite que el clnico pueda determinar si el organismo es

redondo o en forma de varilla.

Ambos organismos, gram-positivas y gram-negativas tienen ms que una capa de

proteccin de su citoplasma y ncleo desde el medio extracelular, a diferencia de
las clulas animales, que tienen una sola membrana citoplasmtica compone de
una bicapa de fosfolpidos. La capa externa de la membrana citoplasmtica
bacteriana es el peptidoglicano o pared celular. Est presente en ambos
organismos gram-positivos y gram-negativas.
MICROBIOLOGA

La capa de peptidoglicano o pared celular est compuesta de repetidos

disacridos con 4 aminocidos en una cadena lateral que se extiende desde cada
disacrido.
Las cadenas de amino-cidos del peptidoglicano se unen covalentemente a otros
aminocidos de las cadenas vecinas. Esto resulta en una estable estructura
reticulada. La enzima que cataliza la formacin de esta unin Se llama
transpeptidasa

est

situado

en

membrana. El antibitico se une a la penicilina

el

interior

citoplsmica

inhibe esta enzima. Por esta

razn, la enzima es tambin llamada protena de unin a la penicilina.

La tincin de gram es la tcnica principal utilizada para el examen microscpico
de las bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clnica pueden
detectarse con este mtodo. Las nicas excepciones son:
Los microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las
clulas husped (p. ej., clamidias).
Los que carecen de pared celular (p. ej., micoplasmas y ureoplasmas).
Los que tienen un tamao insuficiente para ser observados por el
microscopio ptico (p. ej., espiroquetas).
Los que tienen una diferente composicin en su pared y no captan los
colorantes (p. ej., mycobacterias).

OBSERVACION DE LA TINCION DE GRAM.

Una vez teido el frotis se observa con el objetivo de inmersin. Cuando el
material orgnico se tie con Gram el portaobjetos se evala en busca de la
presencia de clulas bacterianas as como de las reacciones Gram, en el anlisis
es el estudio fundamental por cumplir varias funciones:
Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin.
MICROBIOLOGA

 Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos

bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de corresponder
con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan
mayor nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que
reconsiderar los medios de cultivos empleados as como la atmsfera de
incubacin.

A PARTIR DE LA TINCIN DE GRAM PUEDEN DISTINGUIRSE VARIOS

MORFOTIPOS DISTINTOS:
Los cocos son de forma esfrica

Los bacilos poseen forma alargada

Los cocobacilos

Los vibriones que son bacilos en forma de coma o curvados.

MICROBIOLOGA

 Los espirilos, que se clasifican en espirilos si son de forma rgida o

espiroquetas si son blandas y onduladas

PUEDEN APARECER AGRUPADOS DE DIFERENTE FORMA:

Aparecer por pares Diplococos.

Formar cadenas Estreptococos.

Agruparse de manera irregular Estafilococos.

Los bacilos en general suelen agruparse en forma de cadena

(Estreptobacilos) o en empalizada.

MICROBIOLOGA

CON LA TINCIN DE GRAM PUEDEN DETECTARSE OTROS AGENTES

ADEMS DE LAS BACTERIAS:
Como clulas inflamatorias (PMN o mononucleares)
Elementos sanguneos (eritrocitos)
Restos celulares o mucosos (detritus celulares)
BACTERIAS RESISTENTES A LA TINCIN GRAM:
Mycobacterias (estn encapsuladas).
Mycoplasmas (no tienen pared).
Formas L (prdida ocasional de la pared).
Protoplastos

Esferoplastos

(eliminacin

total

parcial

de

la

pared,

respectivamente).

COMO SE VISUALIZAN LAS BACTERIAS POR LA TINCION

DE GRAM:
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
Las Bacterias Gram + aparecen con el citoplasma teido uniformemente de color
azul o violeta; poseen una capa gruesa de peptidoglicn y carecen de membrana
externa, pueden presentar respuestas variables en ciertas condiciones (son
gramlbiles).

MICROBIOLOGA

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Las Bacterias Gram - aparecen con el citoplasma teido uniformemente de color
rojo; tienen una capa ms delgada de peptidoglicn y presenta un contenido
lipdico diez veces mayor que el de las Gram+ (lo que dificulta la tincin y
retencin de colorante en el citoplasma) y poseen una membrana externa. Son
constantes en su reaccin

BACTERIAS GRAM VARIABLES

Algunas bacterias se clasifican como Gram

variables, pues simultneamente

presentan tincin Gram positiva y de Gram negativas, aun bajo condiciones

ptimas de cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias poseen una
pared de Gram positivas, aunque la capa de peptigoglicn es ms delgada que la
mayora de las bateras Gram positivas

MICROBIOLOGA

QU OCURRE QUMICAMENTE CON LAS BACTERIAS?

Tabla 4-2 Coloracin de Gram

REACCIN Y APARIENCIA DE LAS BACTERIAS

Soluciones aplicadas
por su orden
Cristal violeta

Solucin Yodo yoda

dura(I) Lugol

Alcohol
MICROBIOLOGA

Gram Positivas

Gram Negativas

Las bacterias se tien en Las bacterias se tien en

violeta
violeta

Complejo CV-I se forma

dentro de las bacterias,
las bacterias permanecen
violetas

Complejo CV-I se forma

dentro de las bacterias,
las bacterias permanecen
violetas

Las paredes celulares de

deshidratan,
hay
retraccin de los poros, la
permeabilidad disminuye
el complejo CV-I no
puede salir de la bacteria
y permanecen violetas

Safranina

Las
bacterias
no
afectadas
permanecen
violeta.

Extraccin de lpidos de
las paredes celulares,
aumento de porosidad,
CV-I sale de la bacteria.

Las bacterias toman este

colorante y se tien de
rojo

Fuente Michael J. Pelcazr., Roger D. Reid, E.C.S. Chan Cuarta edicin Pag. 58

REALIZACION DE LA TINCION DE GRAM EN EL

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
1. Previa fijacin de la muestra, cubrirla con la solucin fenicada de violeta.

Tiempo de exposicin: 60 segundos

2. Lavar con agua
MICROBIOLOGA

3. Cubrir con lugol y lavar rpidamente

4. Lavar

MICROBIOLOGA

5. Decolorar con alcohol, solo o con alcohol-acetona hasta que ya no se

desprenda ms colorante de la lmina, luego lavar

6. Contrastar con safranina.

MICROBIOLOGA

7. Lavar, secar y observar a inmersin.

OBSERVACION DE LAS BACTERIAS EN EL

LABORATORIO POR MEDIO DEL MICROSCOPIO

Bacilos

MICROBIOLOGA

Estafilococos

PRINCIPALES TIPOS DE TINCIONES

TINCIN CIDO ALCOHOL RESISTENCIA

Esta tincin sirve principalmente para clasificar micobacterias y actinomicetos,
que tienen un alto contenido en lpidos y en cidos miclicos y que no pueden ser
MICROBIOLOGA

calificadas por la tincin de Gram. Para empezar se hecha sobre el portaobjetos

una mezcla de fucsina fenol, en la que la fucsina hace de colorante rosa y el
fenol de mordiente. Las clulas se tien de rosa, tanto las cido alcohol
sensibles como las resistentes. Despus se usa un decolorante orgnico que
hace que las bacterias cido alcohol sensibles se decoloren mientras que las
cido alcohol resistentes se quedan rosa. Como en la tincin de Gram se utiliza
un colorante de contraste que en este caso es el azul de metileno que tie las
clulas cido alcohol sensibles de color azul quedando las clulas cido
alcohol resistentes de color rosa.

TINCIN DE ESPORAS
Se utiliza para teir las estructuras de resistencia llamadas endosporas
bacterianas. Sobre el portaobjetos con la preparacin se echa verde malaquita
que tie las clulas de verde. Luego se lava con agua destilada con lo que las
clulas se quedan incoloras y las endosporas permanecen verde. Finalmente se

MICROBIOLOGA

usa la safranina para obtener bacterias de color rosa mientras que las endosporas
continan con su color verde del verde malaquita.

TINCIN NEGATIVA
Es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir pero
se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil
de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco
que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las
clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono
coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa
es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en microscopia
ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor
de las clulas bacterianas.

HEMATOXILINA.
Se usa con frecuencia para tincin general junto con eosina, su ncleo es azul, no
contiene citoplasma, no contiene eritrocitos, no tiene fibras de colgeno, tie
especficamente los cidos nucleicos de azul y el RER de azul.

MICROBIOLOGA

EOSINA.
Se usa con frecuencia para tincin general junto con hematoxilina, no contiene
ncleo, contiene citoplasma rosa, los eritrocitos se presentan anaranjados o rojos,
fibras de colgeno rosas, tie especficamente las fibras elsticas y las fibras
reticulares de rosa.
AZUL DE TOLUIDINA
Se usa con frecuencia para tincin general, presenta un ncleo azul, contiene
citoplasma azul, presenta eritrocitos azul, fibras de colgeno las tie en azul, esta
tie especficamente los grnulos de los mastocitos de color purpura.

TRICRMICA DE GOMORI.

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Se usa con frecuencia para tejidos conjuntivo y muscular, esta tie el ncleo de
azul o gris, el citoplasma de rojo, los eritrocitos de rojo, fibras de colgeno de
verde, esta tie especficamente las fibras musculares de rojo.

TRICRMICO DE MASSON.
Se usa con frecuencia para tejido conectivo, este tie el ncleo de color negro, el
citoplasma de color rojo o rosa, los eritrocitos de color rojo, las fibras de colgeno
azul o verde, este tie especficamente el cartlago (azul/verde) y las fibras
musculares rojas.

TRICRMICO DE MALLORY.
Se usa con mayor frecuencia para tejido conectivo, este tie el ncleo de color
rojo, el citoplasma de color rojo plido, los eritrocitos con un color anaranjado, las
MICROBIOLOGA

fibras de colgeno con un azul intenso, este tipo de tincin tie especficamente la
queratina de color anaranjado, el cartlago de color azul, la matriz sea de un
color azul intenso, y las fibras musculares de color rojo.

WEIGERT PARA ELASTINA.

Se usa con mayor frecuencia en las fibras elsticas, este tie el ncleo de color
azul/negro, esta tie especficamente las fibras elsticas de un color azul /negro.
AZAN DE HEIDENHAIN.
Se usa con frecuencia para distincin entre las clulas y los componentes
extracelulares, este tie el ncleo de color rojo/prpura, el citoplasma de un color
rosado, los eritrocitos de color roja, las fibras de colgeno azul, esta tie
especficamente las fibras musculares de color rojo, el cartlago y la matriz sea
de un color azul intenso.

IMPREGNACIN ARGENTICO.
Se usa con frecuencia para fibras reticulares y fibras nerviosas, este tie
especficamente las fibras reticulares y las fibras nerviosas de color (pardo/negro).
MICROBIOLOGA

WRIGHT.
Se usa con frecuencia para las clulas de la sangre, este tie el ncleo de color
azulado/purpura, el citoplasma de color azulado/gris, loe eritrocitos de color
roja/rosa, este tie especficamente las grnulas de neutrfilos (prpura/rosa),
grnulos de eosinfilos (rojo brillante/anaranjado), grnulos de basfilos (prpura
intensa/violeta), grnulos de plaquetas (rojo/prpura).

ORCEINO.
Se usa con frecuencia para las fibras elsticas, este tie el ncleo de color azul
intenso, los eritrocitos rojo brillante, las fibras de colgeno rosa, este tie
MICROBIOLOGA

especficamente las fibras elsticas (pardo oscuro), grnulos de mastocitos

(prpura), msculo liso (azul/claro).

PAS
Se usa con frecuencia para membrana basal, deteccin de carbohidratos, este
tie el ncleo de color azul, las fibras de colgeno de color rojo, tie
especficamente el glucgeno y otros carbohidratos (magenta).

MICROBIOLOGA

CONCLUSIN

1. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa

capa de peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos.
2. En la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y
se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior
(de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas.
3. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente
debido a estas diferencias constitutivas de su pared.

MICROBIOLOGA

BIBLIOGRAFIA

1. ROSS. Histologa, 4 edicin, Ed. Panamericana, 2005.

2. Garrido Fara Germn Isauro, Miguel Angel Cornejo Cortes y Elsa Salinas
Jimnez , 2003 Manual de colorantes para laboratorios de Ciencias
biolgicas UNAM Mxico 95
3. http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php

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