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Pg.
ndice i
Normas de seguridad que deben seguirse en un laboratorio 1
Material bsico de laboratorio de bioqumica su reconocimiento y empleo ..
del efecto
enzimtica .. 16
Ejercicios de termodinmica .. 22
Reacciones generales de carbohidratos . 26
Determinacin cuantitativa de los azcares reductores por el metodo de Lane-Eynon
(Fehling modificado) ...........................................................
33
ii
4.
Infrmese de la ubicacin del extinguidor de incendios, de la ducha de seguridad y
del gabinete de primeros auxilios.
5.
Es imprescindible tener en el laboratorio manual o instructivo que indiquen que
debe hacerse en el caso de que algn reactivo qumico entre en contacto con los ojos, la piel,
la boca o las vas respiratorias.
6.
Est consciente de los peligros involucrados en el manejo de aparatos elctricos.
Todo aparato elctrico debe estar debidamente conectado a tierra.
7.
No fume en el laboratorio.
8.
Todos los cilindros de gases comprimidos deben ser sujetados por una cadena en
forma segura. Adems, deben transportarse utilizando un vehculo apropiado.
9.
vidrio.
10. En el laboratorio, mantenga protegido los ojos en todo momento (si es posible, con
lentes de seguridad). El uso de lentes de contacto, an que se mantengan debajo de los lentes
de seguridad, est completamente prohibido.
11. No pruebe el gusto de ningn reactivo qumico en el laboratorio. No use el laboratorio
como sitio para comer ni ingerir alimentos, bebidas; utilizando material de vidrio del
laboratorio.
12. Evite respirar humo o emanaciones gaseosas de cualquier tipo. Cuando se produzcan
gases, durante la realizacin de un experimento, este se debe llevar a cabo bajo la campana de
extraccin de gases.
1
13. No llene las pipetas con reactivos qumicos por succionamiento con la boca. Use
bulbos de succin.
14. No introduzca sin lubricacin, tubos de vidrio a travs de los tapones de goma. Al
insertar dichos tubos dentro del tapn debe proteger sus manos con un pao (preferiblemente
de tela). Durante esta operacin, mantenga sus manos lo ms cerca posible una de la otra.
15. El uso de una bata de laboratorio es esencial cuando se usa ropa fcilmente
combustible. Adems proporciona una proteccin adecuada cuando se trabaja con reactivos
qumicos. El calzado que se utiliza debe ser lo suficientemente protegido.
16. Aquellas personas que usen el cabello largo, deben mantenerlo recogido cuando
trabajen en el laboratorio (el cabello es un material fcilmente combustible).
17. Para preparar soluciones diluidas de cidos, a partir de soluciones muy concentradas
deben verterse cuidadosamente el cido sobre el agua, (nunca debe realizarse el proceso
inverso) manteniendo agitacin constante.
18. Si soluciones concentradas de cidos llegan a entrar en contacto con la piel, nunca lave
de inmediato la parte afectada con agua corriente. Lo primero que debe hacerse es eliminar
todo el cido posible utilizando toallas de papel absorbente o tela y luego lavar la parte
afectada con agua corriente por espacio de 10 15 minutos.
19. Todas las personas que trabajen en el laboratorio deben mantener la calma en caso de
ocurrir un accidente en el mismo. Sepa lo que usted hara especialmente en el caso de
desmayos, quemaduras o heridas producto de dichos accidentes.
esmerilada y cnica. Esta llave debe manipularse con la mano izquierda, con la otra mano se
sostiene la varilla de vidrio o recipiente para agitar el lquido que se vierte de la bureta. Se
utilizan para mediciones exactas de lquido (titulaciones).
6) PIPETAS: son tubos de vidrio. Pueden ser aforadas y graduadas.
exclusivamente para medir volmenes de lquidos que van a ser trasvasados.
Se utilizan
Las PIPETAS AFORADAS (VOLUMTRICAS), pueden tener uno o dos aforos, las que
presentan un aforo sirven para medir lquidos desde el aforo hasta la parte inferior y las que
tienen dos aforos, miden volumen de lquidos desde el aforo superior hasta el superior.
Las PIPETAS GRADUADAS, tienen divisiones menores entre los extremos, que puede
ser en dcimas, centsimas y milsimas. Existen dos clases de pipetas graduadas: las que
miden volumen desde el 0 (cero) hasta el extremo inferior de la pipeta y las que miden
volmenes desde el cero hasta la ltima graduacin antes del extremo inferior.
Al tomar una pipeta con la mano, nunca se debe tocar el extremo inferior de la misma, esto
es una medida de precaucin, sobre todo con aquellas pipetas con cidos lcalis, adems
para evitar contaminacin tanto en la solucin como en la reaccin. Otra precaucin que se
debe tener con las pipetas, es que estas deben ser colocadas de tal manera que el lquido
sobrante no se deslice hasta la parte superior.
Procedimiento para el enrasado de la pipeta: se introduce el extremo inferior de la pipeta
dentro del lquido y se aspira por la parte superior, teniendo la precaucin de que el extremo
inferior este dentro del lquido de lo contrario se corre el riesgo de aspirar aire y lquido, que
llegar a la boca del usuario, con el consiguiente peligro. Una vez que el lquido ha
sobrepasado el nivel deseado, se retira de la boca e inmediatamente se tapa el extremo (de la
pipeta) con la punta del dedo ndice, presionando de forma suave y dejando caer, en el mismo
recipiente donde se aspir el lquido la cantidad sobrante hasta llevar el menisco al cero de la
pipeta.
7) TUBOS DE ENSAYOS: son tubos de vidrio, de diferentes dimetros y largo, son uso
mltiples en un laboratorio de qumica.
8)
TUBOS PARA CENTRIFUGADORA: son de vidrio o plstico, cnicos cilndricos
y resisten altas velocidades en la centrifugadora. Se utiliza para decantar soluciones que
contienen slidos en suspensin.
9)
Para evitar error de paralaje en las lecturas de cualquier material de vidrio graduado, se debe
considerar la tendencia de los lquidos al adherirse a las paredes del recipiente y formar una
superficie lquida cncava convexa llamada menisco. Por lo tanto para leer el volumen del
lquido, se debe colocar la vista a la misma altura del menisco (ni por encima, ni por debajo
del menisco) y determinar la lnea de medida tangente a ste, cuando las soluciones son
oscuras se toma la lnea que coincida con el pico del menisco.
PROCEDIMIENTO
Dibuje e identifique los materiales y equipos que estn en el laboratorio
Solvente Gaseoso:
Solvente Slido:
Solvente Lquido:
Concentracin
C =
Cantidad de soluto
Cantidad de solucin
miligramo (mg)
1 mg = 10-3 g
microgramo (g)
1 g = 10 -6 g
nanogramo (ng)
1 ng = 10 -9 g
picogramo (pg)
1 pg =10 -12 pg
mililitro (ml)
1 ml = 10-3 l
microlitro (l)
1 l = 10 -6 l
nanolitro (nl)
1 nl = 10 -9 l
picolitro (pl)
1 pl =10 -12 pl
Centmetro cbico = cm 3 = cc
1 ml = 1, 00028 cc pero se consideran iguales (1 ml = 1 cc). En lenguaje cientfico se
utiliza el trmino mililitro (ml)
UNIDADES FSICAS DE CONCENTRACIN
Las ms comnmente utilizadas son:
a. Gramos de soluto por litro de solucin (g/l) y miligramos de soluto por mililitro
de solucin (mg/ml).
b. Partes por milln (ppm): expresa los miligramos de soluto presentes en un litro
de solucin (mg/l) o los microgramos por mililitro de solucin (l/ml) (g/1x106ml).
c. Tanto por ciento en peso (% p/p): se utiliza cuando el soluto y solvente vienen
dadas en unidades de peso y expresa los gramos de soluto contenidos en 100 g de solucin.
d. Tanto por ciento en volumen (% v/v): se utiliza cuando el soluto y solvente son
lquidos y expresa los mililitros de soluto contenidos en 100 ml de solucin.
e. Tanto por ciento de peso / volumen (% p/v): son los gramos de soluto presentes
en 100 ml de solucin.
Los objetivos de la prctica son:
- Utilizar las unidades fsicas para expresar la concentracin de las soluciones.
- Conocer y comprender los trminos de soluciones saturadas y sobresaturada,
solubilidad, concentracin, soluto y solvente.
- Conocer y comprender la forma de realizar los clculos y transformaciones entre
los varios tipos de unidades fsicas.
- Preparar soluciones a partir de solutos y solventes, expresando sus concentraciones
en las diferentes unidades fsicas.
- Preparar soluciones a partir de soluciones concentradas, expresando sus unidades
fsicas.
PROCEDIMIENTO
1.- Preparacin de una solucin por pesada.
a) Calcule el peso de ___________________________ necesario para preparar ______ ml
de solucin a la concentracin ________________.
b) Pese en un vidrio de reloj, previamente tasado, la cantidad de soluto calculada.
c) Lave con agua un beaker y escrralo. Transfiera al beaker la cantidad de soluto pesada,
luego empleando una piseta con agua destilada remueva cualquier soluto que haya
quedado adherido al vidrio de reloj dejando caer el lavado en el beaker.
Si no tiene Beaker, transfiera la cantidad pesada a un matraz aforado limpio de
_______ml usando un embudo de tallo corto, dejando caer agua destilada de una piseta al
vidrio de reloj, recibiendo el agua del lavado en el matraz.
d) Agregue agua destilada hasta aproximadamente la mitad de la capacidad del matraz y
agite para disolver totalmente el slido.
e) Agregue agua hasta el inicio del cuello del matraz y luego mediante una piseta agregue
ms agua hasta que el menisco de la solucin sea tangente a la lnea del aforo. Tape el
matraz y agtelo para homogeneizar la solucin.
f) Transvase la solucin a un frasco.
g) Colquele una etiqueta al frasco, indicando: nombre del soluto, concentracin de la
solucin y nombre de quien elabor la solucin.
2.- Preparacin de una solucin por dilucin.
a) Calcule el volumen de ______________________ al _____________________
necesario para preparar ______________ de solucin al ____________.
b) Lave una pipeta con agua destilada.
c) Mida con la pipeta el volumen de _____________ calculado y transfiralo a un matraz
aforado de _________ml previamente lavado con agua destilada.
d) Siga los pasos e, f, y g del experimento N 1.
BIBLIOGRAFA
Sienko, M. y R. Plane. 1974. Qumica. Ed. Aguilar S.A. Espaa. 641 pp.
Slabaugh, W. y T. Parsone 1974. Qumica General. Ed. Limusa, S.A. Mxico. 486 pp.
Lehninger, A. 1990. Bioqumica. Ed. Omega S.A. Espaa. 1117 pp.
10
masa de sustancia
Peso Equivalente
N = N de eq g = eq-g
1 litro solucin litro
N = Normalidad
Peso Equivalente =
P. M.
Nval
d- 0,0000000345 g en g
e- 475 dg en g
f- 10875 mg en kg
d- 800000000 pl
e- 0,250 ml
f- 14875 ml.
N 4) Cuantos gramos de soluto contienen 250 ml de cada una de las siguientes soluciones?
a- 37,5% P/V
b- 1,25 % P/V
c- 90% P/V
d- 0,25% P/V
e- 99% P/V
f- 44,75 %P/V
N 5) Cuantos gramos de soluto contiene 300 g de cada una de las soluciones siguientes?
a- 15,75 % P/P
b- 87,6 % P/P
c- 33,30 %P/P
d- 0,87 % p.p
e- 37,5 % en peso
f- 20 % en peso
N 6) Cul es el volumen que ocupan 150g de una solucin X de densidad 1,45 g/ml?
N 7) Cul es la masa de 375 ml de solucin T de densidad 1,08 g/ml?
13
50 g. de NaCl
15 g de HCl
25 g KCl
d- 60 g CaCl2
e- 35 g CH3COOH
f- 10 g CH3COONa
NaCl
CaCl2
NaOH
d- Ca (OH)2
e- H2SO4 (PA S=32,07)
f- HCl
15 g de NaCl
20 g CaCl2
35 g NaOH
d- 40 g Ca(OH)2
e- 55 g H2SO4
f- 19 g HCl
N 16) En el laboratorio hay una solucin concentrada de cido ntrico (HNO 3) al 45,18% P/P
y densidad 1,285 g/ml. Cul es la concentracin del HNO3 expresada en P/V.
N 17) Calcule el volumen (expresado en ml) de solucin de HCl al 39,11% en peso, densidad
1,20 g/ml necesarios para preparar 0,5 litros de solucin de HCl al 10% P/V.
14
N 18) Calcule al volumen de H2SO4 al 81,42 p/p y densidad 1,20 g/ml, necesario para
preparar 250 ml de solucin de H2SO4 al 5eq/l. Cmo debe escribirse la etiqueta del frasco
para guardar?
N 19) Diga paso a paso el procedimiento a seguir en el laboratorio, indicando: gramos a pesar
del soluto, el equipo y el material de vidrio y sus medidas, que son necesarios para preparar
las soluciones del ejercicio N 15. Qu deben decir las etiquetas de cada solucin?
N 20) Diga paso a paso el procedimiento a seguir en el laboratorio, indicando: el volumen a
medir del soluto y material de vidrio y sus medidas, que se necesitan para preparar las
soluciones de los ejercicios N 17) y N 18), y finalmente para guardar la solucin Qu debe
escribir en la etiqueta?
RESPUESTAS
1.- a) 5g ; b) 0,5g ; c) 10g ; 1) 1x10-5g ; 1) 47,5g ; f) 107,5g
2.- a) 0,045g ; b) 10454 x109ng ; c) 7,45dg ; d) 0,0345g ; e) 0,475g ; f) 0,011kg
3.- a) 0,3751 l ; b) 4,578 l ; c) 145,435 l ; d) 8x10-4 l ; e) 2,5x10-4 l ; f) 14,875 l
4.- a) 93,75g ; b) 3,125g ; c) 225g ; d) 0,625g ; e) 247,5g ; f) 111,875g
5.- a) 47,25g ; b) 262,8g ; c) 99,9 g ; d) 2,61g ; e) 112,5g ; f) 60g
6.- 103,45 ml
7.- 405g
8.- 33,93%p/v
9.- 37,5g
10.- 18,5g
11.- a) 58,44 g/mol ; b) 110,97 g/mol ; c) 39,99 g/mol ; d) 60 g/mol ; e) 81,99 g/mol ; f) 162,56 g/mol
12.- a) 0,8555 mol ; b) 0,4115 mol ; c) 0,3353 mol ; d) 0,5406 mol ; e) 0,5833 mol ; f) 0,1219 mol
15
2 H2O2 liq
catalasa
2 H2Oliq
O2 gas
La catalasa es una de las enzimas ms efectivas conocidas, ya que una molcula de ella
puede descomponer 5 millones de molculas de H2O2 por minuto a 0 C.
La actividad de las preparaciones de catalasa puede determinarse por dos mtodos:
a.
Midiendo el volumen de O2 producido por nanometra; o sea, midiendo el
incremento de uno de los productos formados.
b.
Midiendo la concentracin de H2O2 descompuesto; o sea, midiendo la
desaparicin del substrato.
En esta prctica se utilizar el mtodo (b). Para determinar la concentracin de H2O2
descompuesto por la catalasa, se incubar la enzima con una concentracin conocida y en
exceso de H2O2 por un determinado tiempo y a temperatura y pH adecuados. Transcurrido el
16
Esta reaccin, el in permanganato de color violeta es reducido por accin del H2O2 a
in manganaso que es incoloro. De all que el punto final de la titulacin con KMnO4 viene
dado por la aparicin de un color rosado proveniente de un exceso de KMnO4.
Los objetivos de la prctica son:
Determinar el efecto de la concentracin de H2O2 (substrato) sobre la actividad
de la enzima catalasa.
Calcular la velocidad mxima (Vmax) y la constante de Michalelis Menten
(Km), utilizando la grfica de Lineaweaver Burk.
MATERIALES, REACTIVOS Y PROCEDIMIENTO
MATERILAES POR BATERA
-
H2SO4 2N
KMnO4
H2O2 1%.
Buffer Fosfato pH7.
Solucin sangunea 0,1 %.
PROCEDIMIENTO:
b. A cada una de las 10 fiolas agregue 5 ml de buffer pH = 7. Ahora se tendr 10 filas que
contienen 5 concentraciones diferentes de H2O2. Un grupo de 5 filas servir como control
(fiolas impares) y el otro grupo ser incubado con la enzima (fiolas pares).
c. Aada a las 5 fiolas control 5 ml de H2SO4 de concentracin 2eq/L. Agite.
d. Aada a las 5 fiolas a incubar (fiolas pares) 10 ml de enzima.
(OJO): EL TIEMPO DE INCUBACIN DEBE SER CONTROLADO
RIGUROSAMENTE
e. Cinco (5) minutos despus de la adicin de enzima a las fiolas pares, aada 5 ml de H2SO4
2N y agite.
f. Aada 10 ml de la enzima a las fiolas control para complementar el volumen.
g. Titule las 10 fiolas con KMnO4 0,1N hasta obtener un color rosado plido.
h. Calcule los miligramos de H2O2 degradados.
i. Elabore el grfico de Lineaweaver Burk. Revise el fundamento terico y determine los
valore de Km y Vmax.
j. Elabore el valor de Km en mol/l.
Este experimento est resumido en el siguiente cuadro:
FIOLA
H2O2
H2O
BUFFER
H2SO4
ENZIMA
TIEMPO
H2SO4
ml
ml
Min.
ml
ml
ml
ml
1
2
8
5
5
10
2
2
8
5
10
5
5
3
4
6
5
5
10
4
4
6
5
10
5
5
5
6
4
5
5
10
6
6
4
5
10
5
5
7
8
2
5
5
10
8
8
2
5
10
5
5
9
10
5
5
10
10
10
5
10
5
5
OBSERVACIN: Las fiolas con mayor concentracin de H2O2 se mantienen rosadas al
principio de la titulacin, obtenindose un falso punto final. Por lo que al comenzar la
titulacin sta debe hacerse lentamente, gota a gota y agitando hasta que desaparezca este
primer color. Luego la reaccin se hace muy rgida, ya que es autocataltica y desaparece el
problema.
2) Debido a que los eq-g de KMnO 4 que se consumen es igual a los eq-g de H2O2 que hay
en cada fiola, por tanto se cumple la relacin
VKMnO4 x N KMnO4 = VH2O2 x NH2O2
Sabemos que:
VKMnO4 x N KMnO4 = meq-g. H2O2
Ejem:
Fiola 1
Fiola 2
PM de H2O2 = 34 g/mol
PE H2O2= PM = 34 = 17 g/eq
2
2
1 meq-g. H2O2 = 17 mg de H2O2
Se puede calcular los miligramos (mg) de H2O2 que haba en cada fiola.
g
eq-g = ------g = eq-g * PE
PE
Fiola N 1 : 1,185 meq x 17 mg/meq = 20,14 mg de H2O2
Fiola N 2 : 0,42 meq x 17 mg/meq = 7,14 mg de H2O2
Por tanto:
Fiolas 2; se degradaron 13 mg de H2O2 en 5 minutos
V= 13 mg /5 min = 2,6 mg/min.
El inverso de la velocidad = 1/V = 1/ 2,6 mg/min = 0,38 min/mg
6)
20
Realice los clculos y complete el cuadro con sus resultados. En papel milimetrado realice la
grfica
Fiola
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
ml de
KMnO4
consumido
PE de
H2O2
N de
KMnO4
mg de H2O2
remanente
mg de H2O2
degradado
C inicial
de H2O2
(mg/ml)
Velocidad
(V)
(mg/min)
1/C
ml/mg
-----------
----------------------------
--------
-------------------
--------
----------
---------------
-----------------
----------
--------
-------------------
----------
---------------
------------
----------
1/mg
inicial
---------------
-------------
----------
1/V
min/mg
---------------
--------
--------
21
23
24
25
Resorcinol
Orcinol
-Naftol
REACCION DE MOLISH
Esta reaccin se basa en al formacin de derivados sulfricos a partir de los
carbohidratos, por accin deshidratante del cido sulfrico y permite reconocer cualquier
carbohidrato libre o combinado.
En las pentosas, el derivado furfrico que se forma es el furfural y en las hexosas el
hidroximetil furfural.
H2SO4
(CONC.) + H2O
Pentosa
Furfural
26
Hexosa
Hidroximetil furfural
Azcar reductor
Azcar cido
27
El cobre se encuentra acoplado con citrato, este complejo suple de iones cpricos al
medio. El hidrxido cuproso Cu(OH), precipita en forma de xido cuproso rojo, segn la
siguiente reaccin:
2 Cu (OH)
H2O
+ Cu2O
Oxido cuproso
(rojo)
REACCION DE BARFOED
Esta reaccin al igual que la anterior permite reconocer azcares reductores, pero al
contrario de la reaccin de Benedict se realiza en medio cido; esto trae como
consecuencia que la reaccin sea ms lenta, porque no se forman enodiles. Pero el
precipitado final es de xido cuproso como en Benedict.
H
H C - COO
H
H
Cu + 2H2O
H C - COO
D - Glucosa
Acetato Cprico
cido Glucnico
Los monosacridos reaccionan ms rpidamente que los disacridos, por lo cual este
ensayo nos permite diferenciarlos.
REACCION DE YODO
Esta reaccin permite reconocer la presencia de polisacridos tales como: almidn y
glucgeno, dando el primero un color azul intenso y el segundo un color caoba.
El almidn se encuentra en dos formas, la amilosa y la amilopectina. La amilosa est
constituida por molculas de glucosa unidas de forma tal que se hacen solublen en agua, pero
se hidratan formando micela que dan un color azul con le yodo. En tales micelas la cadena
polisacrido est retorcida formando un arrollamiento helicoidal. La amilopectina es muy
ramificada y produce disoluciones coloidales micelares que dan una coloracin rojo-violcea
con yodo.
Es importante destacar que los productos de degradacin del glucgeno y almidn
tambin dan reacciones de coloracin caractersticas con el yodo.
28
Tubo 2
2 ml de agua
Tubo 3
2ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 4
Pedacito de
papel
(celulosa)
Tubo 5
2 ml de
solucin
problema
Luego a cada uno de los tubos de ensayo aada 5 gotas de naftol al 5%. Agite, incline el tubo
y deje deslizar cuidadosamente por las paredes del tubo 1 ml. de H 2SO4 concentrado de modo
que el cido se deposite en el fondo.
Observe: en caso de haber un carbohidrato libre o combinado, aparecer un anillo de color
violeta en la interface de los dos lquidos el cabo de pocos segundos.
2.- REACCION DE TOLLENS
Tome 4 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 4.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 2
2 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
2ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 4
2 ml de
solucin
problema
29
A cada tubo de ensayo aada 2 ml. de cido clorhdrico (HCl) concentrado, 5 gotas de
floroglucinol al 6% y agite cuidadosamente. Caliente en bao de mara por cinco minutos
(todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la aparicin de un color rojo indica la presencia de pentosas. Es importante advertir
que la galactosa y los cidos urnicos dan resultados parecidos.
3.- REACCION DE SELIWANOFF
Tome 4 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 4.
Coloque en cada tubo 2,5 ml de reactivo de Seliwanoff y luego aada a cada tubo de ensayo
la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
1 ml de
fructosa
(cetohexosa)
Tubo 2
1 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
1ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 4
1 ml de
solucin
problema
Coloque los tubos a bao de mara hirviendo por 2 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la aparicin de una colocacin roja indica la presencia de cetosas.
4.- REACCION DE BIAL
Tome 4 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 4.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
1 ml de
fructosa
(cetohexosa)
Tubo 2
1 ml de
glucosa
(aldohexosa)
Tubo 3
1ml de
arabinosa
(aldopentosa)
Tubo 4
1 ml de
solucin
problema
Aada a cada uno de los tubos de ensayo 2,5 ml del reactivo de Bial. Mezcle y ponga en bao
de mara hirviendo por 5 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: en presencia de pentosa se desarrollar un color verde.
5.- REACCION DE BENEDICT
Tome 4 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 4.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de lactosa
Tubo 2
2 ml de glucosa
Tubo 3
2ml de sacarosa
(disacrido
reductor)
(monosacridos
reductor)
(disacrido no
reductor)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo aada 3 ml de reactivo de Benedict cualitativo, agite y caliente en bao
mara por 10 min (todos los tubos al mismo tiempo).
Observe: la formacin de un precipitado rojo ladrillo, indica la presencia de un carbohidrato
reductor.
30
Tubo 2
2 ml de glucosa
Tubo 3
2ml de sacarosa
(disacrido
reductor)
(monosacridos
reductor)
(disacrido no
reductor)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
A cada tubo de ensayo, aada 2,5 ml. de reactivo de Barfoed. Coloque a bao mara por 10
min (todos los tubos al mismo tiempo).
Resultado: Se observar un precipitado rojo que aparecer ms rpido en presencia de
monosacridos que en presencia de disacridos. La reaccin de Barfoed es positiva en
presencia de carbohidratos reductores. Aqu al comparar los resultados se podr diferenciar
monosacridos de disacridos reductores.
7.- REACCION DE YODO (LUGOL 5-10-100)
Tome 5 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 5.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de glucosa
(monosacrido)
Tubo 2
2 ml de
sacarosa
(disacrido)
Tubo 3
2ml de
lactosa
(disacrido)
Tubo 4
2 ml de
almidn
(polisacrido)
Tubo 5
2 ml de
solucin
problema
31
6.- Si una solucin problema contiene ribosa, prediga resultados en el siguiente cuadro
(Indique positivo o negativo).
PRUEBA
Molish
Yodo
Benedict
Barfoed
RESULTADOS
Bial
Seliwanoff
Tollens
BIBLIOGRAFA
Harper, H.A. 1.989. Manual de Qumica Fisiolgicas. 11 Ed. Manual Moderno S.A. Mxico.
Lehinger, A. 1.967. Bioqumica. Ed. Omega S.A.
Litwack, G. 1.967. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Ed. Interamericana. Mxico.
HC=O
2+
R
Azcar
Reductor
Cu(OH)2
(Soluble
como
Tartrato)
33
2CuOH
Cu2O +
Precipitado
Rojo
H2O
PROCEDIMIENTO
1.- Valoracin del reactivo de Fehling.
En una fiola de 250 ml, que contiene algunas perlas de agitacin, coloque 5ml de la
solucin A (sulfato de cobre), 5ml de la solucin B (tartrato alcalino) y 10 ml de agua (para
compensar la evaporacin).
Enrace una bureta con solucin de glucosa estndar de concentracin conocida.
34
Coloque la fiola sobre el trpode y la rejilla a fin de que sea calentada usando el
mechero a llama suave.
Cuando la solucin en la fiola inicie la ebullicin deje caer gota a gota desde la bureta
la solucin de glucosa estndar.
Antes de que todo el cobre se reduzca (lo cual se evidencia por la desaparicin del
color azul del Cu+2) agregue 1ml de la solucin de azul de metileno al 0,2% sin extinguir la
llama. Complete la titulacin dentro del minuto siguiente, con pequeas adiciones de la
solucin estndar del azcar, hasta que el indicador, azul de metileno, sea decolorado. La
glucosa, una vez que ha reducido todo el Cu+2 comienza a reducir al azul de metileno y lo
decolora apareciendo un color rojo ladrillo. En ese momento se detiene la titulacin ya que el
cobre ha sido reducido. Registre el volumen de la solucin estndar de glucosa consumido.
Azul de metileno + Azcar
Oxidado
reductor
Cant. de soluto
Cant. de solucin
C = concentracin
= C x Cant. de solucin
= 4,5 mg/ml x 20 ml = 90 mg de glucosa
90 mg de glucosa
X
X =
1 ml x 90 mg de glucosa
30 ml de la solucin problema
30 ml de solucin problema
1 ml
= 3 mg
35
90 mg/ml = 3 mg/ml
30
BIBLIOGRAFA
Litwack, G. 1.967. Bioqumica Experimental. Ediciones Omega S.A.
347 pp.
36
Radiacin incidente
Intensidad I
Solucin Problema
En anlisis
Concentracin
Radiacin emergente
I
I, se conoce como tramitancia que representa por lo tanto la fraccin de luz que es
transmitida.
ESPECTROFOTOMETRO:
Los mtodos de absorcin son clasificados comnmente sobre la base de los
instrumentos y las tcnicas empleadas a las medidas. De este modo, un mtodo
espectrofotomtrico emplea un espectrofotmetro, instrumento que mide la absorcin de
radiacin electromagntica y consiste en esencia de una fuente de luz, un monocromador de
prisma o de red, un detector fotoelctrico de radiacin y otros accesorios adecuados. En el
trabajo analtico son empleados comnmente espectrofotmetros ultravioleta infrarrojos y
visibles.
FOTMETRO:
Es un instrumento sencillo constituido por un detector fotoelctrico, una fuente de luz
y filtros para registrar la radiacin. Estos instrumentos estn restringidos a la regin visible del
espectro.
Las partes principales de un espectrofotmetro son:
1
Fuente
de
luz lmpara
de mercurio
UV
Regulador
Selector de la
intensidad de longitud
de
la
luz onda
diagrama
monocromador
rendija
Cubeta
muestra
5
Detector
fotoclula
galvanmetro
potencimetro
Registrado
r
Spectronic 20
Descripcin
Este es un espectrofotmetro de lectura directa y de un solo haz, el sistema
monocromador consiste de una red de reflexin de lente y un par de rendijas fijas. Debido a
que la red produce una dispersin que es independiente de la longitud de onda, se obtiene una
anchura de banda constante de 20 nm (nanmetros) a lo largo de la regin en que opera. El
instrumento emplea solo fototubo. Su intervalo normal es de 350 nm, aunque est puede ser
extendido hasta los 900 nm, por el uso de un uso fototubo sensible al rojo y un filtro rojo.
d
g
Muestra
a)
Fuente de luz
b)
Lentes
c)
Rendija de entrada
d)
Red
e)
Control de luz
LONGITUD DE ONDA ()
(nm)
40
ACTIVIDAD PRCTICA N 8
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE TOTAL
Con relacin a la glucosa y su determinacin cuantitativa en sangre, es preciso
distinguir tres terminologas:
1.- Por glucosa sangunea se entiende la concentracin de la sustancia qumica
especfica, glucosa, en la sangre.
2.- El trmino azcar en sangre incluye, adems de la glucosa, otros azcares como:
galactosa, fructosa y las pentosas.
3.- La terminologa que se aplica a todos los componentes presentes en la sangre
susceptibles de reducir los iones cpricos en solucin alcalina caliente, es la de sustancia
reductoras en sangre; ellos incluyen no solamente los azcares, sino una serie de otros
compuestos de diferentes naturaleza qumica, tales como: glutatin, glucurnidos, cido
ascrbico y cido rico.
4.- Adems, se debe tener en cuenta que los carbohidratos son deshidratados por la
accin de los cidos concentrados no oxidantes y calor producindose furfural o 5
hidroximetil furfural y estos se condensan con los fenoles para producir compuestos
coloreados.
Con frecuencia se utiliza indistintamente la terminologa: azcares en sangre y
substancias reductoras en sangre, generalmente para designar lo que corresponde a la primera
aceptacin.
Existen varias tcnicas para determinar cuantitativamente azcar en sangre. La tcnica
ms antigua y quizs la ms utilizada para determinar azcar en sangre se basa en el poder
reductor de los carbohidratos.
El mtodo colorimtrico utilizando el cido dinitrosaliclico determina la presencia del
grupo carbonilo (aldehdo o cetona) libre, presente en los azucares reductores. Este mtodo se
lleva a cabo en condiciones alcalinas donde el grupo funcional aldehdo y cetona, presente
por ejemplo en la glucosa o fructosa respectivamente, son oxidados y simultneamente el
cido 3,5-dinitrosaliclico es reducido a 3-amino, 5-nitrosaliclico. Esta reaccin desarrolla
una coloracin roja lo cual permite determinar la concentracin del azcar presente por
espectrofotometra.
41
2. Reactivos
- Solucin del reactivo del cido Dinitrosaliclico 1%
o cido dinitrosaliclico 10g
o Sulfito de Sodio 0.5g
o Hidrxido de Sodio 10g
o Fenol 2g (opcional)
42
PROCEDIMIENTO
1. Si tiene como muestra problema sangre total centrifugue a alta velocidad por 5 min. Para
obtener el suero (parte lquida)
Tubos
Glucosa
ensayos 0.4%
(ml)
H2O
(ml)
Concentracin Suero
final en cada (ml)
tubo
Solucin
Dinitrosaliclico
(ml)
-----------
3,00
-------
3,00
1,50
1,5
-------
3,00
0,75
2,25
-------
3,00
0,60
2,40
-------
3,00
0,45
2,55
-------
3,00
0,30
2,75
-------
3,00
-----------
2,00
------------------
1,00
3,00
-----------
2,00
------------------
1,00
3,00
Ab
575nm
T
575 nm
Coloque las cantidades de glucosa, agua, suero y solucin de cido dinitrosaliclico que
se indica en el siguiente cuadro. (Determine la concentracin de los tubos del 1 al 6)
4. Agite cada tubo de ensayo y tpelos para evitar perdida por evaporacin.
5. Caliente cada tubo de ensayo en un bao de mara a 90C por 10 min. Se desarrollar un
color rojo
6. Aada 1 ml de tartrato de sodio potasio a cada tubo de ensayo, para estabilizar el color.
7. Deje enfriar a temperatura ambiente o en agua fra.
8. Calibre el espectrofotmetro con el contenido del tubo de ensayo N 1 (Blanco)
43
Reaccin de la Ninhidrina
Esta es una reaccin general para determinar la presencia del grupo amino. Se
considera una reaccin general para cualquier aminocido y es debido a la presencia del grupo
amino. (de manera que todos los aminocidos y por supuesto las protenas,
dan positiva esta reaccin. No obstante, cualquier sustancia no proteica que contenga el grupo
tambin da positiva la reaccin. La reaccin se efecta en tres etapas.
a.
H
R - C - COOH
NH2
aminocido
+ Ninhidrina Oxidada
NH
iminocido
b.
Hidrlisis del iminocido producido para formar un - cetocido, el cual se
descarboxila bajo las condiciones de una reaccin.
45
H
R - C - COOH +
NH
iminocido
R - C - COOH
R - C - COOH
O
cetocido
R-C-H
CO2
cetocido
Aldehdo con un Carbono
menos que el aminocido
c.
Finalmente, el 3 producido reacciona con cantidades equimolares de
ninhidrina oxidada y ninhidrina reducida para formar un compuesto de color azul violeta, el
cual es proporcional a la cantidad de aminocido presente.
Ninhidrina oxidada
Ninhidrina reducida
46
Compuesto violeta
Esta reaccin se desarrolla mejor a un pH neutro. Todos los aminocidos dan color
azul violeta con ninhidrina, con excepcin de la prolina e hidroxiprolina que dan color
amarillo.
2)
Esta reaccin es caracterstica para aquellos compuestos que poseen dos o ms enlaces
peptdicos. La denominacin Biuret, se debe a que el compuesto orgnico Biuret tambin da
positiva esta reaccin. La reaccin del Biuret se basa en la formacin, en medio alcalino, de
un compuesto de coordinacin de color violeta entre el in cprico (Cu +2 ) y 4 tomos de
nitrgenos, provenientes de las cadenas peptdicas.
Complejo de color violeta
O = C
H2O
HN
R - CH
NH
Cu + 2
O = C
HC - R
C = O
HN
R - CH
C = O
NH
H2O
HC - R
47
3)
Reaccin Xantoproteca:
Reaccin de Milln:
Esta reaccin es especfica para el grupo hidroxifenil. Por lo que el aminocido
tirosina da positiva esta reaccin. Se cree que el grupo hidroxifenil primero forma derivados
nitrados con el HNO3, que luego reaccionan con el mercurio y forman complejos de color
rojo.
5)
Reaccin de Sakaguchi:
Esta es una reaccin especfica para el grupo guanidina. Por lo tanto el aminocido
arginina da positiva esta reaccin.
H 2N
C
H
- N - R
Restos de Guanidina
HN
La guanidina en solucin alcalina da color rojo en presencia de - naftol e
hipobromito de sodio.
Los objetivos de la prctica son:
-
MATERIALES y REACTIVOS
Materiales:
Tubos de ensayo.
Beakers de 250 y 500 ml.
Buretas de 50 ml.
Mecheros.
48
%.
Frasco goteros.
Reactivos:
Solucin de ninhidrina al 1%.
Solucin de NaOH 2,5 N.
Solucin de sulfato de cobre 1 %.
cido ntrico concentrado.
Hidrxido de amonio concentrado.
Reactivo de Milln (Solucin de mercurio en cido ntrico concentrado)
Solucin alcohlica de - naftol al 1 %.
Solucin de NaOH 5 %.
Solucin de hipobromito de sodio (NaBro) al 10 % Hipoclorito de sodio.
Soluciones de Leucina, Metionina, Lisina, Triptfano, Tirosina y Arginina al 0,1
PROCEDIMIENTO:
1. REACCIN DE NINHIDRINA
Tome 4 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 4.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de Leucina
(aminocido)
Tubo 2
2 ml de Albumina
de huevo (protena)
Tubo 3
2ml de agua
destilada
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
Tubo 2
Tubo 3
2 ml de
2 ml de Albumina
Gelatina
de huevo (protena)
(polisacrido)
Tubo 4
2 ml de solucin
problema
3. REACCIN XANTOPROTECA:
Tome 5 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 5.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
A
Tubo1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 ml de
2 ml de
2 ml de
2 ml de
Albumina de 2 ml de Tirosina
Triptfano
metionina
solucin
huevo
(aminocido)
(aminocido)
(aminocido)
problema
(protena)
cada tubo de ensayo, agregue 1 ml de cido ntrico (HNO3) concentrado.
Caliente en bao Mara por 10 min.
Remueva el tubo y deje enfriar.
Agregue lentamente 15 a 20 gotas NH4OH concentrado.
Observe: el cambio de color amarillo hacia anaranjado en la interface indica la presencia de
aminocidos aromticos.
4. REACCIN DE MILLN:
Tome 5 tubos de ensayos limpios e identifquelos con los nmeros del 1 al 5.
Coloque en cada tubo la muestra que corresponde como se indica en el siguiente cuadro.
Tubo 1
2 ml de
Triptfano
(aminocido)
Tubo 2
2 ml de
Albumina de
huevo
(protena)
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 ml de Tirosina
(aminocido)
2 ml de lisina
(aminocido)
2 ml de
solucin
problema
Tubo 2
2 ml de
Albumina de
huevo
(protena)
Tubo 3
Tubo 4
2 ml de metionina
(aminocido)
2 ml de
solucin
problema
PREGUNTAS
1.- Que grupos se liberan en la reaccin de la Ninhidrina?
2.- Es adecuada la reaccin de la Ninhidrina para distinguir aminocidos de protenas?
3.- Qu es el Biuret?
4.- Con que reaccin distinguira usted un aminocido de una protena?
5.- Escriba la frmula estructural de la tirosina e identifique el grupo responsable de la
reaccin de Milln?
6.- Qu otros aminocidos dan positiva la reaccin de Milln?
7.- La Lisina podra dar positiva la reaccin Xantoproteca? Por qu?
8.- Escriba la frmula estructural de la Arginina y seale el grupo guanidina?
BIBLIOGRAFA
Conn, E. E. y P. K. Stumpf. 1972. Bioqumica Fundamental. Ed. Limusa Wiley S.A. Segunda Edicin. Mxico.
623 pp.
Daniel, L. J. y L. Neal. Laboratory Experimens in Biochesmestry V. de Cornell, New York.
Litmack, G. 1960. Bioqumica Experimental. Un Manual de Laboratorio. Ed. Omega S.A. Barcelona, Espaa .
51
Una vez medida la distancia recorrida por el solvente desde la lnea base y la recorrida
por cada compuesto, se calcula el Rf, que es el cociente entre la distancia recorrida por el
compuesto y la recorrida por el solvente.
Rf
=
Distancia recorrida por el solvente
Identificar cada aminocido por comparacin del valor del Rf, con las
sustancias patrones empleadas.
MATERIALES y RECTIVOS
-
Materiales
Papel de filtro Whatman cortado en tiras de (28 X 12cm)
Tubos capilares.
Cubetas de vidrio con tapas.
Estufa a 100 C.
Engrapadora.
Reactivos
Butanol: cido actico: agua. 4: 1: 1 (v / v)
Soluciones patrones de aminocidos 0,1 %
Muestra problema.
Revelador de ninhidrina ( 1 % )
PROCEDIMIENTO
a. Sobre un papel de filtro Whatman N 1 (28 X 12cm) trazar, con lpiz de grafito, una
lnea a 1 cm. del borde inferior del papel y paralelo al lado ms largo, teniendo cuidado de no
tocar el papel con los dedos. Sobre esa lnea marcar puntos, con lpiz, cada 1,5 cm. De
separacin entre ellos. Sobre estos puntos colocar con el capilar (palillo) una gota de solucin
de aminocido, dejar secar y repetir la aplicacin. Escribir el nombre del aminocido aplicado
y el nmero de la muestra problema, debajo de cada punto. Pueden aplicar mezclas de
aminocidos, gota sobre gota una vez seca la anterior.
b. Coloque en el extremo superior de la hoja de papel una varilla de vidrio, para lo cual
utilice tirro, con cuidado de no tocar con las manos el extremo inferior del papel.
c. Introduzca el papel en la cmara o cubeta de vidrio que contiene el solvente, tpela y
deje que el frente del solvente ascienda durante una media hora.
d. Retire el papel y marque inmediatamente con un lpiz en frente del solvente.
e. Seque el papel en la estufa a 100 C por 5 min.
f. Roci con la solucin reveladora de ninhidrina y seque en la estufa por 5 min.
g. Localice las manchas, delinee con lpiz de grafito, marque el punto central de cada
mancha y guarde el cromatograma para la identificacin de la muestra problema.
h. Anote el color de las manchas.
54
i. Determine el valor del Rf, de cada una de las manchas que aparecen.
j. Por comparacin de Rf, identifique los o el aminocido presente en la muestra problema.
k. Anexe el cromatograma al informe
PREGUNTAS
1.
Cundo la mezcla de aminocido es muy compleja? Explique porque se utiliza
la cromatografa bidimensional?
2.
Explique por qu ser puede emplear en algunos casos, varios solventes en la
resolucin de una mezcla de aminocidos
3.
Explique las ventajas y desventajas de este mtodo cromatogrfico.
4.
En qu sentido afecta la polaridad de las cadenas laterales de los aminocidos, su
migracin o movilidad a travs del papel?
5.
Haga una descripcin de las cromatografas de gases, intercambio inico y
separacin de geles.
BIBLIOGRAFA
Bohinski, R. C. 1978. Bioqumica. Ed. Revert. Caracas.
Conn, E. E. y P. K. Stumpf. 1972. Bioqumica Fundamental. Ed. Limusa Wiley S.A.
Segunda Edicin. Mxico. 623 pp.
Harper, H. A. 1978. Manual de Qumica Fisiolgica. Ed. El Manual Moderno. S. A. 13
Edicin. Mxico.
Litmack, G. 1960. Bioqumica Experimental. Un Manual de Laboratorio. Ed. Omega S.A.
Barcelona, Espaa.
55
56
Pepsina preformada
Complejo proteico Pepsina-inhibidor+5 pptidos (PM=5x1000 Dalton)
HCl
4 PPTIDO
Pasa al duodeno
57
MACROMOLCULA PROTEICA
(Protena natural)
Pepsina + HCl
METAPROTENA CIDAS
(Sintoninas)
Pepsina + HCl
Pasan al duodeno
Tripsina preformada
pH 7-9
TRIPSINA +
HEXAPEPTIDO
b. Tripsina: Es una protena que consta de 223 aminocidos. Tiene accin
proteoltica: cataliza la hidrlisis de los polipptidos provenientes de la digestin en el
estmago por la accin de la pepsina. Tambin, desintegra las protenas naturales no
hidrolizadas por la accin de la pepsina. Acta como una endopeptidasa, formando
polipptidos de menor tamao. La tripsina cataliza la reaccin de hidrlisis
preferentemente entre los aminocidos L-Lisina y L- Arginina. Tiene una dbil accin
coagulante sobre la leche.
c. Quimotripsingeno: Esta proenzima o Cimgeno es elaborada por el pncreas y
forma parte del jugo pancretico. Al llegar al duodeno se activa por accin de la tripsina,
originando quimitripsina activa que acta a un pH de 7,2 y 9,0. Tiene poder de
coagulacin sobre la leche mayor que el de la pepsina. Su accin proteoltica
endopeptidsica es equivalente a la de la tripsina, degradando protenas naturales en
polipptidos y pptido de peso molecular variable, catalizando la hidrlisis
preferentemente de los enlaces peptdicos entre los aminocidos L-tirosina y LFenilalanina.
d. Procarboxipeptidasa: Son elaboradas en el pncreas y forman parte del jugo
pancretico. Al llegar al duodeno se activa por accin de la tripsina hasta
carboxipeptidasa. Acta como exopeptidasa y cataliza la hidrlisis de los enlaces
peptdicos terminales de polipptidos y oligopptidos que contengan el grupo funcional
carboxilo libre. Son enzimas que contienen Zinc.
e. Aminopeptidasa, Leucinopeptidasa y Aminopeptidasa: Son protenas
enzimticas que contienen magnesio o manganeso. Catalizan la hidrlisis de una gran
59
Fibrina
El fibringeno y la fibrina son dos protenas muy semejantes, pues contienen los
mismos aminocidos. La fibrina es insoluble en agua, alcohol y ter. Se hincha y luego se
disuelve lentamente en cido clorhdrico al 3 por mil (hidrlisis qumica)
60
DUODENO
pH 8-9
PROTENA NATURAL
METAPROTEINA
ACIDA (sintoninas)
Pepsina + HCl +
H2O
PROTEOSA PRIMARIA
PROTENA NATURAL
(no hidrolizadas por la pepsina)
(albumosas)
Pepsina + HCl +
H2O
Tripsina y aminotripsina
+ H2O
PROTEOSA
SECUNDARIA
PROTEOSA
(albumosas)
Tripsina y aminotripsina
+ H2O
Pepsina + HCl +
H2O
PEPTONAS
(duodeno)
PEPTONAS
(estmago)
Tripsina y Quimotripsina
+ H2O
Pasan al duodeno
POLIPEPTIDOS
Tripsina y Quimotripsina
+ H2O
Tripsina y Quimotripsina
+ H2O
CARBOXIPOPIPEPTIDOS + AMINOPOLIPEPTIDOS
Carboxipeptidasa y
Tripsina + H2O
DIPEPTIDOS
Dipeptidasa + H2O
AMINOACIDOS
61 en
Se absorben a travs de las vellosidades de la mucosa duodenal y pasan al sistema circulatorio (vena porta). Luego,
los ribosomas de las clulas son utilizados para la sntesis de protenas intrnsecas.
62
64
CH2
65
K(SO4)2
CHOH
CH2OH
Glicerina
CH
CHO
Acrolena
2H2O
agua
(R COO)2 Ca
+2NaCl
(R COO)2 Pb + CH3COONa
El aceite neutro posee un pH en los lmites de la neutralidad, ya que los cidos grasos se
encuentran en l completamente esterificados. El aceite rancio, al contrario, es francamente
cido, lo cual se debe a la liberacin de los cidos grasos presentes en su molcula.
La fenolftalena, es un indicador, que es incolora en medio cido y roja en medio alcalino
(esto explica el resultado del experimento de acidez libre).
En un medio neutro (aceite neutro) es suficiente una gota de KOH para alcalinizar el
medio y hacer virar el indicador, obtenindose la coloracin caracterstica de la fenolftalena
en medio alcalino.
En un medio cido (aceite rancio) es necesario agregar mayor cantidad de lcali, para
neutralizar la acidez existente, por lo cual el color rojo se establecer mas tarde y nicamente
cuando da haya neutralizado todos los cidos presentes.
Los objetivos de la prctica son:
- Evidenciar propiedades ms relevantes de los glicridos, como son: solubilidad,
composicin, saponificacin y acidez libre.
PROCEDIMIENTO.
1) Experimento 1. Solubilidad de los lpidos.
Experimento 1-A
a) Coloque en un tubo de ensayo 15 gotas de aceite neutro.
b) Agregue 10 ml de agua, mezcle bien, deje reposar y anote lo que observa.
c) Despus que la capa de aceite se haya separado de nuevo en la superficie del agua, se
aade 3 o 4 gotas de solucin jabonosa, mezcle bien, deje reposar y anote lo
observado.
Observe como se forma una emulsin poco estable en el agua y con el agua jabonosa
la emulsin es ms estable pero no se disuelve.
Experimento 1-B
a) Coloque 10 gotas de aceite neutro en un tubo de ensayo que contiene 2 ml de solvente:
alcohol, cloroformo o tetracloruro de carbono. Anote las observaciones.
Observe como el aceite se solubiliza completamente en el solvente.
2) Experimento 2. Composicin de los acilgliceroles y Reconocimiento de la glicerina.
Tome dos tubos de ensayo e identifquelos con los nmeros 1 y 2. Prepare los tubos ya
identificados de la siguiente manera:
a) En el tubo marcado con el N 1 coloque 1 ml de aceite neutro y en el tubo N 2 vierta
10 gotas de glicerina.
b) Agregue a ambos tubos (aproximadamente) 1 g de bisulfato de potasio (KHSO4).
c) Introduzca en la boca de cada tubo una tira de papel humedecida en solucin de
nitrato de plata amoniacal (reactivo de Tollens).
d) Caliente ambos tubos a la llama directa usando el mechero.
e) Anote las observaciones. Compruebe si se producen vapores blancos que tienen un
olor muy irritante. Adems, si el papel toma una coloracin negruzca.
67
3) Experimento 3. Saponificacin
a) Vierta en un beaker 2 ml de aceite neutro.
b) Agregue 10 ml de alcohol absoluto. Mezcle bien.
c) Aada 10 ml de NaOH al 10%. Vuelva a mezclar bien.
d) Caliente lentamente y agite constantemente hasta la evaporacin del lquido.
e) Retire el beaker del fuego y aada 20 ml de agua. Mezcle bien.
f) Anote las observaciones. Determine como se form una pasta suave, poco consistente
y homognea.
g) Guarde la solucin en un tubo de ensayo para los experimentos siguientes.
68
69