UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA

SELVA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS PECUARIAS

FACULTAD DE ZOOTECNIA

DETERMINACIN DE LA PROTENA POR MTOS CULITATIVOS Y

CUANTITATIVOS

CURSO

: Bioqumica Nutricional.

DOCENTE

: ing. PAREDES ORELLANA, Walter Albero

INTEGRANTES

: TITO CUELLAR, Jaime Ronal.

VALERIANO TAMARA, Miriam.
ROSALES PRIMO, Megan.
CONDORI MAIZ, Renzo J.
ENRIQUE GAMEZ, Dante
AGUIRRE TINCO Daniel

FECHA DE ENTREGA: 20/06/2014.

TINGO MARA PERU

2014

I.

INTRODUCCIN.

En este informe contiene los resultados de los trabajaos realizados en laboratorio

sobre las

reconocimiento de protenas usando dos mtodos diferentes para

resultar cualitativo y cuantitativa de las muestras biolgicas de origen proteico.

Estas macromolculas son el resultado de la polimerizacin, mediarte enlaces
peptdico; todas sus propiedades nutricionales y sus caractersticas fsicas y
qumicas depende completamente del tipo de la concentracin y de la secuencia
de unin de los monmeros constituyentes. Dos protenas podrn ser integradas
por aminocidos iguales y en concentraciones semejantes, pero s el orden en que
se encuentran estos es diferente los polmeros muestran propiedades muy
diferentes.
Desde el punto de vista de la nutricin, las protenas muestran un papel por dems
importante y esta es la razn por el cual se estudian. Las protena indispensables
para el bienestar de cualquier individuo resultan muy txicos en ciertas
microorganismos y en otros pueden provocar hipersensibilidad y alergia.
Cuando las protenas se solubilizan en agua adquieren dimensiones coloidales,
son anfteras, su hidrlisis completa produce una mezcla de aminocidos y en
algunos casos tambin he sustancias distintas de esta.

OBJETIVOS.

 Determinar cualitativa y cunticamente la presencia y cantidad de protena

en las diferentes muestras biolgicas.
Emplear el mtodo de reactivo de biuret para la determinacin de protena.
Emplear el mtodo de reactivo de xantoprotena para la determinacin de
aminocidos aromticos.

II.

RVISIN DE LITERATURA.

2.1. La protena:
Las protenas son biopolmeros por la unin de aminocidos mediante
enlace peptdico, siendo la concretizacin de la informacin contenida en el
ADN. A travs de ello esa informacin es transformada en trabajo
fisiolgico. Hay casi una variedad infinita de protenas compuestas de 50100 aa. Encontrndoselos en el organismo Animal unos 50 protenas y
ppticos diferentes.
2.2. Importancia de la protena:
El ncleo celular, uno de los componentes del protoplasma, contiene
protenas (nucleoprotenas) que estn ntimamente relacionadas con la
divisin celular y con la herencia. Otra parte del citoplasma celular contiene
n de 1 millar de protenas distintas llamadas enzimas que catalizan los
mltiples cambios qumicos que se requiere para el equilibrio de la vida
celular, adems los animales, plantas y microbios producen enzimas
extracelulares que descomponen la dieta compleja de protenas, lpidos y
carbohidratos para simplificar los nutricios, que son fcilmente absorbidas y
utilizadas por las clulas. Las protenas son tambin componentes
principales de la sangre de los tejidos epiteliales y conectivos, en los
animales y cuando se ingieren en excedo actan como una fuente de
energa y grasa. En las semillas de algunas plantas, las protenas

se

almacenan como reserva de aminocidos y energa, es poco probable que

se pueda realizarse alguna reaccin qumica en los tejidos vivos sin la
presencia de las protenas. (Badvis, 1994).
2.3. Valor biolgico:
Todas las necesidades biolgicas de la cavidad proteica se determinan en
funcin a la concentracin de aminocidos alfa limitantes y suministran otra
informacin vocera de los aa. Esenciales.
El valor biolgico de una protena es la fraccin de nitrgeno retenido en el
cuerpo para el crecimiento y mantenimiento de la sntesis celular que se
puede determinar. La concentracin de protena es de importancia para
saber determinar los mtodos de cuantificacin y cualificacin para su
determinacin en muestras biolgicas (Edwin T. Mertz. 1971).
2.4. Amino y protenas en la nutricin:
2.3.1. Necesidad cualitativa para el crecimiento.
Las plantas de algunos microorganismos pueden sintetizar todos los
aminocidos a partir de una fuente de nitrgeno (nitrgeno atmosfrico,
amoniacos, nitratos, ureas. etc. Otros microorganismos de animales pueden
sintetizar algunos aminocidos, aunque no todos las que se necesitan. Por
consiguiente necesita obtener de la dieta aquellos aa. Indispensables que
no pueden sintetizarse en absolutos (es decir, que no son completamente
indispensables) que pueden sintetizar pero no en proporcin adecuada para
el crecimiento mximo.
Las protenas varan en su grado de digestibilidad, se debe tambin
tomarse en cuenta al determinar su valor como suministradores de
aminocido esenciales. Las necesidades cualitativas para un aminocido
determinado, en un animal, si el aminocido no se puede sintetizar con los
materiales ordinariamente disponibles en la dieta con una rapidez que sea
suficiente para permitir el crecimiento optimo del animal joven en
crecimiento pero no es esencial en la ruta madura. Sobre la misma base, la

glicina es esencial en la dieta de crecimiento y la multiplicacin celular pero

no es probablemente esencial en la dieta de los machos maduros o en las
hembras no ponedoras (Havrowitz F. 1969).

2.5.

Desequilibrio de Aminocidos.

Durante el pasado decenio los nutrologos han demostrado que en exceso

de uno o ms aminocidos en la dieta reduce la rapidez de crecimiento y si
el nivel de protena en la dieta es de 18% menos, tambin produce hgados
grasos. En algunos casos se cree que es debido a la inversin competitiva
al aminocido que est en exceso. Por ejemplo: La zeina, la proteina
principal del maz, contiene 7.3 % de isoleusina y 22.3% de leusina es decir
una porcin de 0.3/1. La leusina en exceso (que es estructuralmente
semejante ala isoleusina) acta como un inhibidor competitivo de la
isoleusina cuando la seina (suplementada con lisina y triptfano) se
administre como nica fuente de protena en le dieta. En la cra de pollos y
de cerdos, el maz se administra siempre con le complemento protenico,
como harina de frjol de soya y leche descremada con el fin de aumentar y
equilibrar el contenido de protena.
2.6.

Necesidades Cualitativas Y Cuantitativas Para El Mantenimiento

El crecimiento presente en los animales, se da por la exigencia mucho

mayores que un simple estado de mantenimiento de equilibrio de nitrgeno.
Cuando el animal crece aumenta el nmero total de clulas, lo que significa
que los aminocidos deben quedar retenidos, en forma te protena de los
tejidos, en las clulas nuevas, b condiciones de crecimiento, las
necesidades dietticas para un aminocido esencial son aproximadamente

10 veces ms que las que se requiere para conservar un estado de

equilibrio de nitrgeno (Lynch, R. 1980).

III.

MATERIALES Y MTODOS.

3.1. MATERIALES Y EQUIPOS.

Leche en polvo al 1%.

Solucin ovoalbmina al 5%.
Yema de huevo al 2%.
Solucin patrn caseina
Glucosa gelatina.
Maicena.
Pipetas.
Pera succionador.
Tubo de ensayo.
Gradilla.
Guardapolvo.
Calculadora.

3.2. INSUMOS.

Sulfato de cobre al 1%.

Hidrxido de sodio al 10%.

3.3. PROCEDIMIENTOS.
3.3.1. Mtodo Cualitativo

 mtodo de biuret
En los diferentes tubos de ensayo con sus diferentes muestras
problemas (2.ml) se agreg 1 ml de hidroxilo de sodio (NaOH)
como base.
Luego se agreg de 6 a 10 gotas del reactivo de biuret (sulfato
de cobre (CuSO4)). Las muestras pueden tomar dos colores,
azul violceo (cuando existe presencia de protena) o celeste
(no hay presencia de protena).

Mtodo xantoprotica.
En los diferentes tubos de ensayo con sus diferentes muestras
se agreg 1 mililitro de cido ntrico, en la cual las muestras
debera presentar un color blanco lechoso.
Luego se llev a temperatura por un periodo de 1 minuto en la
cual las muestras deberan presentar un color amarillo.
Se retira del bao mara para bajar la temperatura
sometindolos en un vaso de precipitacin con 1000ml de
capacidad
Se coloc los tubos de ensayo en la gradilla
Se agreg 40 50 gotas de hidrxido de sodio ( NaOH ) como
base a cada tubo de ensayo debiendo presentar la solucin un
color anaranjado como indicador de presencia de protena y
sobre todo presencia de aminocidos aromticos.

3.4. METODOS.
3.4.1. MTODO DE BIURET

 Principio: El principio esta basado en la reaccin que se

produce sobre los enlaces peptdicos mediante una base.
Fundamento: Al formar complejos los iones cpricos con los
enlaces peptdicos de las protenas se produce un color
violeta-morado bajo condiciones alcalinas.
La intensidad del color es proporcional al contenido proteico
de la muestra.
Ventajas del mtodo de Biuret:

Es el mtodo ms simple de anlisis de protenas.

No es frecuente encontrar derivaciones de color.
Pocas sustancias no proticas interfieren con la reaccin de
biuret.

Desventajas del mtodo de biuret:

Las concentraciones altas de amoniaco interfieren con la

reaccin.
Puede ocurrir opalescencia en la solucin final si estn
presentes altas concentraciones de lpidos o carbohidratos.

3.4.1. REACCION DE XANTOPROTEICA.

Es debida a la formacin de un compuesto aromtico nitrado de color

amarillo, cuando las protenas son tratadas con cido ntrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos bencnicos, especialmente en
presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con
un lcali vira a un color anaranjado oscuro.

4.

RESULTADOS.
4.1. MTODO CUANTITATIVO

U
X

r = 0.9997

S0

0.0

0.01

A = -6.8571

S1

0.2

0.053

B = 0.2467

S2

0.6

0.154

S3

1.2

0.304

M1

o.231
5

0.064

0.272
0

0.074

0.389
5

0.103

0.421
9

0.111

M2
M3

SOLUCION:

xM1 y a bx xM1
0.2315

xM 2 y a bx xM 2
0.2720

xM 3 y a bx xM 3
0.3895

xM 3 y a bx xM 3
0.4219

Concentracin de casena:

1g 100ml
x 1ml
x = 0.01 g/ml

1g 100%
x 99.12%
x = 0.9912g

0.9912 g 100ml
x 1ml
x = 0.009912 g/ml

1g 1000mg
0.009912 g x
x = 9.912 mg/ml

Hallar stndares:

1ml 9.912mg
0.20ml x
S1

x = 1.9824mg

1ml 9.912mg
0.60ml x
S2

x = 5.9472mg

1ml 9.912mg
1.20ml x
S3

x = 11.8944mg

1g de casena = 0.9912 g de protena.

Hallar stndares:

1ml 9.912mg
0.369ml x
M1

x = 3.6575mg

1ml 9.912mg
0..043ml x
M2

x = 0.4262mg

1ml 9.912mg
1.1408ml x
M3

x = 11.3076mg

CAMERUN:

%nitrgeno = gasto t x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------PM

%nitrgeno = 3.4x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------0.300
=1.5866
PROTEINA TOTA L= % NT X6.25 =1.5866 X6.25 =9.91625

ERRITRINA:

%nitrgeno = gasto t x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------PM
%nitrgeno = 5.5x 0.1N x 0.014 x 100
-----------------------------0.300
%nitrgeno = 2.5666
PROTEINA TOTA L= % NT X 6.25 =2.5666 X 6.25 =16.0412

HARINA DE PESCADO:

%nitrgeno = gasto t x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------PM
%nitrgeno = 12.8x 0.1N x 0.014 x 100
-----------------------------0.300
%nitrgeno

= 5.9733

PROTEINA TOTA L = % NT X 6.25 = 5.9733 X 6.25 =37.33

TORTA DE SOYA:

%nitrgeno = gasto t x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------PM
%nitrgeno = 10.4x 0.1N x 0.014 x 100

-----------------------------0.300
%nitrgeno = 4.85333
PROTEINA TOTA L = % NT X 6.25 = 4.85333 X 6.25 =36.33

Y por espectrofotometria
1). Datos trabajados en la prctica

2). Datos que nos dejo para realizar como trabajo

Por Kjendhal:

%Ntotal =

gastoTx0.1xNx0.014
x100
M

1) Harina de pescado = 21 ml g , 0.3004 pm

2) Soya = 1.7 ml g , 0.3007 pm
3) pasto = 5 ml g , 0.3017 pm

21mlx 0.1x0.014
x100
0.3004 g
1) %Ntotal =
%Ntotal = 9.78

% Prot = 9.78x6.25 = 61.16

17 mlx 0.1x0.014
x100
0.3007 g
2) %Ntotal =
%Ntotal = 7.91

% Prot = 7.91x 6.25 = 49.46

5mlx0.1x0.014
x100
0.3017 g
3) %Ntotal =

%Ntotal = 2.32

% Prot = 2.32x 6.25 = 14.50

METODO CUALITATIVO.

IV.

DISCUSIN.

La leusina en exceso (que es estructuralmente semejante ala

isoleusina) acta como un inhibidor competitivo de la isoleusina
cuando la seina (suplementada con lisina y triptfano) se
administre como nica fuente de protena en le dieta. En la cra
de pollos y de cerdos, el maz se administra siempre con el
complemento protenico, como harina de frjol de soya y leche
descremada con el fin de aumentar y equilibrar el contenido de
protena.

La funcin del reactivo de biuret, La producen los pptidos y las

protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la
presencia del enlace peptdico (-CO-NH -) que se destruye al

liberarse los aminocidos. Cuando una protena se pone en

contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia
complejas.

V.

CONCLUCIN.

La aplicacin de los mtodos cualitativa y cunticamente excluvamente se

calcula la concentracin de la protena total de una muestra biolgica.
El reactivo de biuret es un mtodo muy aplicativo para la determinacin de
protena total en una muestra biolgica con la facultad de sus enlaces
peptdicos y resultar un color rojo violeta para la detrem8nacion cualitativa.
La aplicacin del mtodo reactivo de xantoprotena se determin la
presencia de aminocidos aromticos en muestras biolgicas.

VI.

RECOMENDACIONES.

En base a los resultados concluimos:

En la reaccin de biuret por mtodo cualitativo nos indica que si la protena

toma el color violeta es por que tiene presencia de protena y si tiene el
color natural es por que no hay concentracin de protena.

En la reaccin xantaproteica el color anaranjado en las muestras significa

que hay presencia de protena, especialmente los AA . aromticos.

Las diferentes formas para la determinacin de protenas son importantes

por que nos permite determinar el % y la cantidad de protena, segn el tipo
de mtodo que se emplea.

VII.

BIBLIOGRAFA.

- Plumer D 1981 Bioqumica practica 2 edicin, cdii. Mx. (Graw Hill al i IR )il
mcii ca na S A E Colombia.
Rad\Is l 994, 1)inamica de los alimentos, edit, Alambra Mexico 68 1
1 viich R 1 980, Metodo (le laboratorio. edit. Acrobia 1 9

VIII.

ANEXOS.