Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 1 de

Gua No.01

INTRODUCCIN
Un aspecto fundamental en la fisiologa de todos los organismos es la homeostasis o capacidad
para mantener una situacin de equilibrio dinmico favorable. En este fenmeno tiene gran
importancia los sistemas amortiguadores que equilibran la presencia de sustancias cidas y
bsicas para mantener el pH dentro de los lmites fisiolgicos.
La molcula de agua tiene capacidad limitada para disociarse en ion hidrgeno (H+), llamado
protn, y en ion hidroxilo (OH-).
H2O

H+ + OH

Un protn en solucin acuosa se combina inmediatamente con una molcula de agua para
formar el ion hidronio o hidrogenin
H+ + H2O

H3O+

Sin embargo, por convencin se utiliza la representacin del protn en lugar del hidrogenin en
las reacciones de ionizacin del agua. Las concentraciones de protones y de iones hidroxilo, en
el agua pura, son de 1 x 10-7 M para cada uno de ellos, como se muestra en la siguiente
expresin:
[H+] = [OH] = 1 x 10-7 M
Las concentraciones de ambos iones exponen una relacin recproca: cuando la concentracin
de iones hidrgeno aumenta, la concentracin de hidroxilos disminuye y viceversa. El producto
de sus concentraciones es una constante conocida como producto inico del agua (K w) cuyo
valor es de 1 x 10-14 M.
(Kw) = [H+] + [OH] = 1 x 10-14 M
Con el fin de facilitar los clculos para determinar la concentracin de H+, as como su
interpretacin, se defini el potencial de hidrgeno (pH) como el logaritmo negativo de la
actividad de iones hidrgeno.
pH= -log 10 [H+]
En la prctica, las disoluciones acuosas se clasifican en cidas si presentan un pH menor a 7.0,
bsicas si el pH es mayor a 7.0 y neutras si el pH es igual a 7.0
SOLUCIONES BUFFER
Un buffer es una o varias sustancias qumicas que afectan la concentracin de los iones de
hidrgeno (o hidrogeniones) en el agua. Siendo que el pH no significa otra cosa que potencial
de hidrogeniones (o peso de hidrgeno), un buffer (o amortiguador) regula el pH. Cuando un
buffer es adicionado al agua, se observa un pH relativamente constante en el agua. De esta

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 2 de

Gua No.01

manera, cidos o bases adicionales no podrn tener efecto alguno sobre el agua, ya que esta
siempre se estabilizar de inmediato.
La funcin de una solucin amortiguadora es la de resistir los cambios de pH cuando se le
agregan ligeras cantidades de cido o de base. Esta propiedad es muy importante en los
sistemas qumicos y biolgicos y los procesos que requieran un valor de pH especfico que no
sea modificable con facilidad. Ya sea para el funcionamiento adecuado de las enzimas en el
sistema digestivo o los glbulos blancos en el torrente sanguneo. El funcionamiento de una
solucin buffer se fundamenta en el principio de Le Chtelier, en el equilibrio qumico. El cido o
base utilizada, siendo dbil, se disocia parcialmente en la solucin, por lo que hay una
proporcin segn su constante de equilibrio tanto de producto como de reactivo. Es decir,
poniendo como ejemplo una solucin amortiguadora hecha con un cido dbil, al momento de
agregarle ms cido, este se disociar y aumentar la concentracin de iones H + , pero el in
comn (en este caso la base conjugada de la solucin creada) que se encuentre en la solucin
por contrarrestar el efecto de desbalance en la reaccin, se asociar con los iones liberados y
reducir su concentracin, de esta forma reduciendo su pH, que no aumentar tan notablemente
a como lo hara en una solucin que no es amortiguadora.
OBJETIVOS

Entender mediante la prctica los conocimientos tericos adquiridos sobre soluciones de

sistemas amortiguadores.
Determinar los valores de pKa de un cido poliprtico.
Determinar la capacidad anticida de un producto comercial.
Determinar la capacidad amortiguadora de soluciones y/o sustancias cidas o bsicas

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1. Curva de titulacin del cido fosfrico (H3PO4)
El cido fosfrico, H3PO4, es un cido poliprtico, es decir, tiene tres protones que
potencialmente pueden disociarse. Mediante una titulacin se pueden determinar los tres
valores de pKa de este compuesto.
La titulacin de un cido dbil consiste en agregar cantidades pequeas de una base fuerte que
permita desplazar el equilibrio hacia la formacin de una base conjugada. Despus de cada
adicin de la base se determina el pH mediante potenciometra, cuyo valor se registra en una
grfica para determinar el comportamiento del cido dbil. De la misma forma se puede titular
una base dbil empleando un cido fuerte.
A lo largo de la titulacin se presenta una modificacin del pH. Esto se puede hacer evidente
mediante cambios de color si se agrega a la reaccin una mezcla de indicadores de pH,
conocida como reactivo de Yamada.

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 3 de

Gua No.01

Materiales y equipo

Bureta de 25 mL
Vaso de precipitados de 50 mL.
Erlenmeyer de 250 mL
Soporte unviersal
Pinzas para bureta
Potencimetro
Probeta de 50 mL
H3PO4 0.1M
NaOH 0.1 M

Procedimiento
a. A un vaso de precipitado de 250 mL deposite 25 mL de una solucin de H 3PO4 0.1M.
b. Agregue cuatro gotas del reactivo de Yamada.
c. Mida el pH con un potencimetro. El potencimetro debe ser previamente calibrado con
amortiguadores de referencia pH 4.0 y 7.0.
d. Prepare una bureta con 50 mL de una solucin de NaOH 0.1 M.
e. Agregue al H3PO4 alcuotas de 3.0 mL de NaOH 0.1 M. Mezcle agitando y mida el pH
despus de cada adicin hasta completar 75 mL de la base.
f. Grafique en papel milimetrado el volumen de NaOH gastado contra el pH.
g. Determine los valores de pKa1, pKa2 y pKa3 para el H3PO4.
h. Escriba el par cido-base capaz de amortiguar a pH fisiolgico de acuerdo a los
resultados obtenidos en la titulacin del H 3PO4.
2. Titulacin de un anticido
Cuando los alimentos son ingeridos y llegan al estmago se combinan con el jugo gstrico
segregado por las glndulas parietales. El jugo gstrico contiene cido clorhdrico (HCl) y una
enzima llamada pepsina. Es un jugo extremadamente cido, con pH cercano a 0.8. Al
mezclarse con los alimentos, el pH se eleva hasta un valor de 2.0 y junto con la pepsina
comienza a romper las protenas contenidas en los alimentos, liberando aminocidos. Si el
esfnter entre el esfago y el estmago no se cierra durante la digestin, el jugo gstrico puede
entrar al esfago y causar acidez. El jugo gstrico tambin puede quemar las paredes del
estmago. Adems, las glndulas parietales pueden generar un exceso de jugo gstrico debido
a la ingestin de ciertos alimentos como salsa de tomate, productos ctricos, cafena y alcohol.
Adicionalmente, el estrs y ciertas enfermedades pueden originar una produccin excesiva de
jugo gstrico. Si la acidez no se trata rpidamente evoluciona, al cabo de cierto tiempo, en
lcera duodenal.
Los anticidos se utilizan frecuentemente en el tratamiento de la acidez. El ingrediente activo en
tales medicamentos es una base la cual neutraliza el exceso de cido. Las tabletas de
diferentes tipos de anticidos que se venden en los supermercados contienen diferentes

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 4 de

Gua No.01

principios activos: el Alka-Seltzer contiene bicarbonato de sodio NaHCO 3; la Mylanta y el Malox

contienen hidrxido de magnesio, Mg(OH) 2.
Se utilizar una tcnica denominada valoracin por retroceso que consiste en aadir un
exceso de cido para titular el anticido, y luego al cido sobrante se valora con una solucin
patrn de NaOH. La cantidad qumica de base presente en la muestra de anticido se calcula
as:
nOH-= nHCl (que reaccionan)= VHCl x CHCl VNaOH x CNaOH
La eficiencia se calcula como la masa (g) de HCl neutralizado dividida por la masa de la tableta
de anticido:
E=

m HCl
m Tableta

Donde:
mHCl = nHCl x MHCl = (VHCl x CHCl VNaOH x CNaOH) x MHCl

Materiales y equipo

Alka-Seltzer y Mylanta (en tabletas)

NaOH 0.50 M
HCl 0.5 M
Naranja de metilo
Bureta
Erlenmeyer
Mortero
Probeta
Vidrio de reloj
Embudo
Soporte universal

Procedimiento

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 5 de

Gua No.01

En este procedimiento se analizar la eficiencia de dos tabletas de diferentes anticidos

determinando la cantidad de HCl que es neutralizada por cada tableta. Mientras ms cantidad
de cido sea neutralizado, mayor es la eficiencia del anticido.
Obtener una bureta y enjuagarla con agua desionizada. A continuacin se purga con un
pequeo volumen de solucin de NaOH 0.5 M. Finalmente utilizando un embudo, se llena con la
solucin de NaOH 0.5 M y se dispone para para la valoracin.
Se toma cada una de las tabletas, se pesa y enseguida se macera en un mortero.
Luego se selecciona una porcin determinada de anticido (0.50g) y se deposita
en un Erlenmeyer de 250 mL previamente lavado con agua desionizada. Utilizar un
segundo Erlenmeyer para la otra muestra. Se aaden 25 mL de HCl 0.50 M a cada
Erlenmeyer y se agita durante tres minutos. Tenga en cuenta que algunos
componentes inertes, presentes en las tabletas no se disolvern. Se aaden 2
gotas de naranja de metilo a la solucin en cada frasco obtenindose un color rojo,
lo cual indica que todo el anticido ha sido neutralizado.
Puede usarse fenolftalena en lugar de anaranjado de metilo?
Colocar el Erlenmeyer debajo de la bureta y aadir lentamente la solucin de
NaOH agitando la mezcla (la solucin se va tornado temporalmente amarilla).
Disponer un fondo blanco debajo del Erlenmeyer para apreciar mejor el cambio de
color. Continuar adicionando la base hasta obtener un color amarillo que persista
por ms de 30 segundos, momento en que se ha llegado al punto final. Anotar el
volumen de NaOH aadido y repetir el procedimiento para la muestra en otro
Erlenmeyer.
Datos y resultados
Volumen inicial aadido de HCl 0.50 M.__________ mL
Datos de valoracin de anticidos (I)
Anticido
A
B

Masa tableta (g)

Masa muestra (g)

V NaOH (mL)

Datos de valoracin de los anticidos (II)

Anticido

n HCl neutralizados
Ec.1

A
B
3. Sistemas Amortiguadores

n HCl/tableta
Ec.

E=m HCl/ m tableta

Ec. 2

Prcticas de Laboratorio de Bioqumica

pH y amortiguadores

Pgina 6 de

Gua No.01

-Preparar una serie de tubos, numerados segn se especifica en la siguiente tabla

-Medir el pH de cada solucin empleando tiras reactivas de pH y regstralo donde corresponde
Tubo
1
2
3
4
5
6
7

Muestra 2,5 mL
Agua destilada
Agua destila
Agua del grifo
Agua del grifo
NaHCO3 0,1N
NaHCO3 0,1N
Zumo de fruta
(Naranja, Mora,
uva)
Zumo de fruta
(Naranja, Mora,
uva)

pH Inicial

NaOH 0,01N
0, 5 mL
-------0, 5 mL
-------0, 5 mL
-------0, 5 mL

HCl 0,01N
-------0, 5 mL

--------

0, 5 mL

pH final

0, 5 mL
-------0, 5 mL
--------

Discusin y anlisis de resultados

Cul de los anticidos es ms eficiente para controlar la acidez? Incluya los clculos
estequiomtricos segn sea la composicin qumica del anticido usado
La eficiencia de un anticido depende de la naturaleza del principio activo, de su
cantidad o de ambos?
Qu es punto de equivalencia de una titulacin? En qu se diferencia del denominado
punto final?
Escriba la ecuacin de la neutralizacin entre los anticidos y el HCl presente en el jugo gstrico.
Cul de las soluciones empleadas en el punto 3 presento la mayor capacidad
amortiguadora? Explique los resultados observados
Bibliografa

Brown, Theodore. Anticidos. En: Qumica. La Ciencia Central. Prentice Hall. Mxico.
1997. Pp. 128
Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas. 4 ed. Barcelona;
Editorial revert; 2004.
Lehninger AL, Nelson DL. Principios de bioqumica. 4 ed. Barcelona: Ediciones
Omega; 2005.
Mathews-Van Holde-Ahern (2002) Bioqumica 3 ed. Editorial Pearson.

Murray Robert K. (2010) Bioqumica Ilustrada 28 ed. Editorial Mc Graw-Hill.