Titre du projet :

Acronyme :

Impact sur la sant des rayonnements millimtriques

HIMWR

Coordonnateur du projet : Professeur Denis MICHEL. Equipe Homostasie Intracellulaire

des Protines . UMR CNRS 6026 Universit de Rennes I
Responsable scientifique : Dr Yves LE DREAN. Equipe Homostasie Intracellulaire des
Protines . UMR CNRS 6026 Universit de Rennes I.
Principaux membres de lquipe 1, ayant particip au projet : Fabienne DESMOTS, Yves LE
DREAN, Catherine LE QUEMENT, Sylvain LECOMTE, Denis MICHEL, Christophe
NICOLAS NICOLAZ, Frdric PERCEVAULT.
Equipe partenaire : Groupe Antennes & hyperfrquences Institut dElectronique et de
Tlcommunications de Rennes (IETR), UMR CNRS 6164 Universit de Rennes I
Principaux membres de lquipe 2, ayant particip au projet : Laurent LE COQ, Christophe
NICOLAS NICOLAZ (doctorant partag entre les deux quipes), Ronan SAULEAU, Daniel
THOUROUDE, Maxim ZHADOBOV.

Les objectifs et la situation du projet :

Les systmes de communication sans fil se sont considrablement dvelopps durant
la dernire dcennie. En raison de la saturation de la partie basse du spectre micro-ondes et
des besoins croissants en transmission haut dbit, les nouvelles frquences de fonctionnement
sont dcales vers les frquences millimtriques (figure 1A). Celles situes au voisinage de 60
GHz sont dtermines par les leaders mondiaux en tlcommunications dveloppant les futurs
rseaux locaux sans fils (ex : rseaux multimdia WiHDTM - figure 1B), car elles prsentent
de nombreux avantages, notamment en termes de dbit trs levs et de confidentialit.
A

B
Frquences
57 - 64 GHz

300 GHz
Ondes
millimtriques
30 GHz
10 GHz

3,4 3,6 GHz

2,45 GHz
UMTS

1,9 2,1 GHz

GSM

0,9 - 1,8 GHz

0,9 GHz

Figure 1 : Systmes de tlcommunications sans fil, A) Pour faire face la saturation des systmes de
tlcommunication actuels qui utilisent des frquences allant de 0,8 5 GHz, les fabricants se
dcalent vers de nouvelles bandes de frquences, notamment celles situes dans le domaine des ondes
dites millimtriques, comprises entre 30 et 300 GHz. B) Les frquences autour de 60 GHz seront
utilises dans des communications intra-btiment pour relier sans fil diffrents appareils
lectroniques.

Lutilisation de rayonnements lectromagntiques aux alentours de 60 GHz soulve

cependant quelques inquitudes. Par exemple, ces radiations sont absentes du spectre naturel

et les organismes vivants ny ont encore jamais t exposs dans les conditions naturelles,
suggrant quaucun mcanisme dadaptation na jamais t slectionn au cours de
lvolution. De plus, ces ondes sont utilises en thrapie dans certains pays dEurope de lest,
ce qui laisse supposer que des interactions entre ces ondes et les organismes vivants sont
possibles. Lutilisation de nouveaux systmes de communication sans fil 60 GHz pourrait
donc avoir des consquences imprvues sur la population et la connaissance de limpact
potentiel des ondes millimtriques (OMM) de faible puissance sur la sant est de la plus haute
importance.
Les objectifs majeurs de notre projet consistaient dterminer in vitro les effets
potentiels des OMM de faible puissance sur les processus cellulaires lis aux stress.
Loriginalit de ce projet tient principalement son caractre anticipateur et prventif. En
effet, il est important de noter que notre tude sest place en amont et que son but tait de
vrifier linnocuit des OMM avant que ces dernires ne soient mises sur le march. A notre
connaissance, ce ft le premier projet en Europe se proposant dtudier grande chelle, les
effets biologiques potentiels des OMM.
Les matriels et mthodes :
Le systme dexposition que nous avons dvelopp est adapt pour des tudes in vitro,
sur des cellules en culture. Les OMM pntrent trs peu dans lorganisme. De ce fait, la peau
est lorgane principal soumis laction de ces ondes. Cest pourquoi nous avons privilgi les
kratinocytes dorigine humaine comme modle. Les conditions de culture dans ltuve
contenant le systme dexposition ont t optimises de faon ce quelles affectent le moins
possible la croissance et lhomostasie des cellules.
A

Figure 2 : Diagramme de rayonnement reprsentant la quantit de densit de puissance incidente et

du DAS (SAR en anglais) au niveau des cellules, dans nos systmes dexposition (A) en champ
lointain, (B) en champ proche.

Les expositions de culture de cellules aux OMM ont t ralises avec deux types de
gnrateurs diffrents, qui possdent chacun leurs caractristiques propres. Le premier

(Siemens RWON 14) fonctionne dans une bande de frquence comprise entre 50 et 75 GHz
mais il est limit en puissance (puissance maximale (Pmax = 50 mW). Le deuxime appareil
utilis (QuinStar Technology) ne permet de travailler qu une seule frquence prcise (60,4
GHz, ce qui correspond la frquence de rsonance maximale de loxygne molculaire),
mais avec une puissance 20 fois plus forte (jusqu 1 W). Ainsi, en champ lointain, nous
avons pu atteindre une densit de puissance de 1 mW/cm2 (ce qui correspond la limite
actuelle pour le grand public, tablis par lICNIRP International Commission on NonIonizing Radiation Protection). De plus, le passage en zone de champ proche nous a par la
suite permis de monter en puissance jusqu dpasser les valeurs limites autorises pour les
travailleurs, cest dire 5 mW/cm2.
Une tude dosimtrique a t ralise pour optimiser notre systme et les conditions
dexposition. Ceci nous a notamment permis dobtenir une rpartition du dbit dabsorption
spcifique (DAS) (ou specific absorption rate, SAR en anglais) la plus uniforme possible
dans la monocouche cellulaire (notamment lors dexposition en champ proche). Une partie de
ce travail a t fait en collaboration avec le Centre de Physique Biomdicale (Temple
University, Philadelphia, USA). La Figure. 2 montre un exemple de distribution de la densit
superficielle de puissance et du DAS en champ lointain (A), ou en champ proche (B).
Les principaux rsultats scientifiques :
Plusieurs types de stress cellulaires ont dabord t examins lors dexpriences
pilotes. Ces rsultats prliminaires nous ont incits concentrer nos efforts sur le stress du
rticulum. Le rticulum endoplasmique (RE) assure un certain nombre de fonctions cruciales
pour lhomostasie et la survie cellulaire. Ce compartiment cellulaire est vulnrable
plusieurs perturbations : flux ioniques, modifications de membrane ; autant de paramtres
potentiellement influenables, daprs la bibliographie, par des expositions aux OMM.
De faon avoir une approche la plus complte possible, plusieurs niveaux de rponse
(promoteur, ARN, protines) ont t analyss. Dabord, nous avons vrifi si lexposition aux
OMM nentrainait pas de dnaturation massive des protines au sein du rticulum. Pour cela,
la phosphatase alcaline SEAP (pour Secreted-Embryonic Alcalin Phosphatase) a t utilise
comme rapporteur (test 1 figure 3). En complment, nous avons galement vrifi si
lexposition aux ondes 60,4 GHz ninduisait pas lpissage du messager codant le facteur
XBP1 (test 2 figure 3). En utilisant un gne rapporteur contenant le gne lucifrase sous
contrle dun promoteur contenant des lments de rponse ERSE (ER-stress element), nous
avons ensuite regard si lexposition aux OMM nactivait pas le facteur de transcription ATF6
(test 3 figure 3). Enfin, nous avons vrifi si lexposition ninduisait pas lexpression des
gnes codant pour les chaperons du rticulum (BiP/Grp78, ORP150 test 4, figure 3). Nous
avons mesur les niveaux dexpression dans les cellules irradies et dans les cellules contrles
(sham), et compar ces niveaux ceux obtenus aprs traitement avec des drogues telles que la
thapsigargine et la brfeldine A, connues pour induire un stress rticulaire aig.
Pour complter notre tude, nous avons regard si les caractristiques physiques des
ondes pouvaient ou non avoir une influence sur linduction du stress rticulaire. Autrement
dit, nous avons tudi le rle des principaux paramtres de rayonnement : frquence, densit
de puissance et rgime dexposition (figure 3). Nous avons commenc par analyser le rle de
la frquence en nous plaant dans la bande de frquences 57-64 GHz (norme IEEE
802.15.3c). Le choix des longueurs dondes testes sest fait selon les donnes de
spectroscopie micro-ondes. En chimie analytique, linteraction ondes-matire est utilise pour
caractriser certaines molcules dilectriques. Au sein des donnes disponibles, nous avons
slectionn 8 frquences spcifiques de groupements molculaires contenant du carbone, de
loxygne ou de lazote, trois atomes fortement prsents dans les macromolcules

biologiques. De plus, nous avons analys leffet de la puissance des OMM sur la rponse au
stress rticulaire. Pour cela, le systme dexposition a t modifi afin de pouvoir exposer les
cellules en champs proche et ainsi monter en puissance, jusqu des niveaux dpassant les
normes requises pour le grand public ou les travailleurs et atteindre les niveaux utiliss en
thrapie dans les pays dEurope de lest.
- Dure de lexposition (20 min, 1h, 6h, 24h, 48h, 72h)
- Frquences (59.00; 59.16; 59.26; 59.41; 59.62; 59.84; 59.87; 60.14; 60.40; 60.53;

OMM

60.83; 60.86; 61.15 GHz)

- Densit superficielle de puissance (0.0; 0.3; 1.1, 2.5; 5.0; 10.0; 20.0
mW/cm2)

ATF6

XBP1

Test 3 : Gnes rapporteurs

dpendant dATF6

Test 2 : Analyse de
lpissage par RT-PCR

IRE1
Noyau

Surexpression des
chaperons du RE
Rticulum
endoplasmique Golgi

maturation
& scrtion
normale des
protines

Test 1 : Test
fonctionnel de la
phosphatase
alcaline scrte

(RE)
Test 4 : Analyse de
lexpression par RTPCR quantitative

Figure 3 : Effet des ondes millimtriques (OMM) sur le stress du rticulum Plusieurs paramtres
dexposition (surligns en bleu) ont t analyss. Le rticulum est impliqu dans la maturation des
protines devant emprunter le systme scrtoire. En cas de stress prototoxique dans ce
compartiment cellulaire, plusieurs voies de signalisation sont actives. Lune conduit la maturation
dATF6 et la seconde induit la synthse du facteur XBP1. Ces facteurs de transcription permettent la
surexpression de protines chaperons spcifiques au rticulum. Plusieurs tests (surligns en jaune)
ont t utiliss pour valuer ltat du stress du rticulum aprs exposition des cellules.

Ce travail a demand beaucoup de temps, car nous avons analys de faon

systmatique, de nombreux paramtres. De plus, afin de gnrer assez de donnes pour
raliser des tests statistiques robustes, des dizaines dexpositions et des centaines de PCR ont
t ralises et plusieurs gnes sentinelles spcifiques du stress du rticulum ont t tudis
puis compars plusieurs gnes rfrents. Nos rsultats montrent que les OMM de faibles
puissances (moins de 20 mW/cm2), quelles que soient les frquences utilises (entre 59 et 61
GHz) et le temps dexposition (de 20 min 3 jours), ninduisent pas lexpression des
protines chaperons spcialises dans la rponse au stress rticulaire.
Nous avons ensuite men une approche haut dbit sur des cultures primaires de
kratinocytes humains. En utilisant des puces ADN, nous avons recherch lchelle du
gnome entier, lexistence de gnes cibles. Les expositions ont t ralises la frquence de
60,4 GHz, une densit superficielle de puissance moyenne de 1.8 mW/cm. Les expositions
(n = 4) ont t ralises durant diffrents temps (1h, 6h, 24h), afin de dterminer si les effets
potentiels provoqus par les ondes pouvaient tre de nature prcoce (1h), intermdiaire (6h)

ou tardive (24h). Parmi les 41000 entits gniques prsentes sur les puces, 26301 spots
positifs, correspondant aux gnes exprims dans la cellule ont t obtenus. Plusieurs analyses
comparatives ont t effectues (0h vs 1h ; 0h vs 6h ou 0h vs 24h). De faon renforcer la
robustesse du test statistique utilis par le logiciel GeneSpring (test t), des corrections
statistiques supplmentaires peuvent tre appliques. Dans les conditions statistiques les plus
stringentes (test t avec les corrections de Bonferroni, Wetsfall-Young ou de BenjaminiHochberg), aucun gne nest trouv diffrentiellement exprim. Ce nest quen absence de
correction statistique supplmentaire que 130 gnes cibles potentiels ont pu tre slectionns
(Tableau 1). Curieusement, on peut remarquer que les expositions aux OMM semblent tre
marques majoritairement par des phnomnes de rpression de niveaux dexpression des
gnes (figure 4A et 4B)
1.

Figure 4 : Diagrammes deVenn montrant la rpartition des gnes potentiellement sur- (A) ou sousexprims (B) aprs 1h, 6h ou 24h dexposition 60,4 GHz. C) Validation des rsultats de microarray
par RT-PCR quantitative. Chaque valeur est la moyenne +/- lcart type de 4 expriences
indpendantes. * P < 0.05 compar au contrle (sham).

Labsence de correction statistique lors de la slection implique que sur les 130 gnes
trouvs, nombre dentre eux doivent correspondre des faux positifs. Cest pourquoi nous
avons effectu une validation par RT-PCR en temps rel. Nous avons slectionn les 24 gnes
qui prsentaient la meilleure combinaison par rapport : 1) leur niveau dexpression
diffrentielle enregistre par les puces ADN ; 2) leur valeur p lors des tests statistique sans
correction, 3) leur niveau dexpression (pas trop proche du bruit de fond, afin dviter toute
source de faux positif). Notre analyse par PCR (figure 4C) a mis en vidence 5 gnes qui sont
confirms comme tant rellement diffrentiellement exprims en cas dexposition. Ces gnes
sont :
- CRIP2 (CYSTEINE-RICH PROTEIN 2) Code une zinc ion binding protein, ayant
un rle dans la prolifration cellulaire et lhmopose

- PLXND1 (PLEXIN D1) Rcepteur membranaire ayant un rle dans le

dveloppement ; les plexines ont un rle dans la prolifration et ladhsion cellulaire
- PTX3 (PENTRAXIN-RELATED GENE, RAPIDLY INDUCED BY IL-1 BETA) Rle
dans la rponse inflammatoire.
- SERPINF1 (SERPIN PEPTIDASE INHIBITOR, CLADE F (ALPHA-2 ANTIPLASMIN,
PIGMENT EPITHELIUM DERIVED FACTOR, MEMBER 1) Cest un inhibiteur
dendopeptidase. Facteur scrt qui aurait un rle dans langiognse.
- TRPV2 (VANILLOID RECEPTOR-LIKE PROTEIN 1) Cest un canal calcium qui
aurait un rle dans la perception sensorielle
Les gnes PTX3 et TRPV2 prsentent un intrt particulier au regard de la littrature. En effet
lutilisation des OMM en thrapie suggre une interfrence possible avec la rponse
inflammatoire (rle de PTX3) ou un effet analgsique (implication potentielle de TRPV2).
Les principales publications obtenues :
Ces rsultats ont fait lobjet de 5 publications dans des journaux internationaux
comit de lecture, de 9 prsentations dans des congrs internationaux et de 12 prsentations
dans des congrs nationaux ou locaux. Le soutien de l'ANR a t systmatiquement indiqu
dans toutes ces prsentations. Ces travaux ont galement constitu lessentiel de la thse de
M. Nicolas Nicolaz (thse ralise luniversit de Rennes 1, en codirection entre lIETR et
lUMR CNRS 6026).
Publications dans des revues internationales comit de lecture :
1/
M. Zhadobov, R. Sauleau, Y. Le Dran, S. I. Alekseev, M. C. Ziskin. (2008) Numerical and
experimental millimeter-wave dosimetry for in vitro experiments. IEEE Microwave Theory and
Techniques, 56(12):2998-3007.
2/
C. Nicolas Nicolaz, M. Zhadobov, F. Desmots, R. Sauleau, D. Thouroude, D. Michel and Y.
Le Dran. (2009) Absence of direct effect of low-power millimeter-wave radiation at 60.4 GHz on
endoplasmic reticulum stress Cell Biology and Toxicology, 25(5):471-478.
3/
C. Nicolas Nicolaz, M. Zhadobov, F. Desmots, A. Ansart, R. Sauleau, D. Thouroude, D.
Michel and Y. Le Dran. (2009) Study of Narrow Band Millimeter-wave Potential Interactions with
Endoplasmic Reticulum Stress Sensor Genes Bioelectromagnetics, 30(5):365-373
4/
M. Zhadobov,, C. Nicolas Nicolaz, R. Sauleau, F. Desmots, D. Thouroude, D. Michel, and Y.
Le Dran. (2009) Evaluation of the Potential Biological Effects of the 60-GHz Millimeter Waves
upon Human Cells IEEE Antennas and propagation, 57(10):2949-56
5/
C. Le Qument, C. Nicolas Nicolaz, M. Zhadobov, F. Desmots, R. Sauleau, M. Aubry, D.
Michel and Y. Le Dran. (2011). Whole-genome expression analysis in primary human keratinocyte
cell culture exposed to 60 GHz radiations. Bioelectromagnetics. 2011 Aug 3. doi:
10.1002/bem.20693. [Epub ahead of print]

Communications des colloques internationaux :

1/
M Zhadobov, R Sauleau, Y Le Dran, S. I. Alekseev, M. C. Ziskin. Electromagnetic
dosimetry for in vitro studies at millimeter waves: importance of natural physiological variations in
cells. 30th Annual Meeting of BEMS, San Diego, USA, June 8-12, 2008.
2/
C Nicolas-Nicolaz, M Zhadobov, R Sauleau, D Thouroude, D Michel and Y Le Dran. Effect
of low-power millimeter waves on endoplasmic reticulum stress. 30th Annual Meeting of BEMS,
San Diego, USA, June 8-12, 2008.
3/
M Zhadobov, R Sauleau, Y Le Dran, S I. Alekseev, M C. Ziskin. Numerical and
Experimental Approaches to Millimeter-Wave Dosimetry for in vitro Experiments 33rd International
Conference on Infrared, Millimeter, and Terahertz Waves. California Institute of Technology.
Pasadena . California. USA September 15 19, 2008

4/
C Le Qument, C Nicolas Nicolaz, M Zhadobov, R Sauleau, D Thouroude, D Michel, and Y
Le Dran. Investigation of Potential Power-Dependent Effects of Millimeter-Wave Radiations on
Various Aspects of Human Cell Functioning BioEM 2009 - Davos, Switzerland, June 15-19, 2009.
5/
M Zhadobov, R Sauleau, C Nicolas Nicolaz, D Thouroude, D Michel, C Le Qument, and Y
Le Dran. Millimeter-wave exposure setup and dosimetry for in vitro studies BioEM 2009 - Davos,
Switzerland, June 15-19, 2009.
6/
M Zhadobov, R Sauleau, D Thouroude, C Nicolas Nicolaz, C Le Quement, and Y Le Dran.
Methodology for Local and Average SAR Evaluation at Millimeter Waves. Progress In
Electromagnetics Research Symposium - PIERS 2009 in Moscow, RUSSIA, 18-21 August, 2009.
7/
M Zhadobov, R Sauleau, D Thouroude, C Nicolas Nicolaz, C Le Qument and Y Le Dran.
NEAR-FIELD Electromagnetic dosimetry for in vitro studies at millimeter waves European
Conference on Antennas and Propagation, Barcelona, 12-16 April 2010
8/
M. Zhadobov, R. Sauleau, D. Thouroude, Ch. Nicolas Nicolaz, C. Le Qument, D. Michel,
and Y. Le Dran (2010). Numerical near-field dosimetry for in vitro experiments at millimeter waves.
32nd Annual Meeting of BEMS, Seoul, South Korea, June 14-18.
9/
C. Le Qument, C. Nicolas Nicolaz, M. Zhadobov, F. Desmots, R. Sauleau, D. Thouroude, D.
Michel, Y. Le Dran. Gene expression profiling of primary human keratinocyte cells exposed to 60GHz millimeter waves. 32nd Annual Meeting of BEMS. Seoul, Korea. June 14-18, 2010

Thse :
Thse d'universit, soutenue le 26 novembre 2009 Rennes, par Christophe NICOLASNICOLAZ Contribution ltude du stress cellulaire potentiellement induit par les ondes
millimtriques . 1er prix de thse de lUniversit Europenne de Bretagne 2010, sur le thme
de linterdisciplinarit.
Conclusions et retombes :
La principale conclusion de ce projet est que, dans la limite de faibles puissances ne
gnrant pas deffets thermiques, lexposition des OMM ninduit pas de stress cellulaire,
notamment de stress du rticulum. Cette hypothse peut donc tre carte, ce qui est rassurant
quant lutilisation future des OMM en tlcommunication sans fil.
Lanalyse par puces ADN montre qu court terme, limpact des OMM sur
lexpression gntique est trs limit. Seuls 5 gnes sur 26301 (0.02%) ont t trouvs comme
ayant une expression modifie aprs 6 h dexposition, avec un retour la normal aprs 24h.
Ce rsultat confirme que lexposition aux OMM de faibles puissances a peu dimpact sur
lhomostasie cellulaire. Nanmoins la mise en vidence de quelques gnes cibles nous a mis
sur de nouvelles pistes de travail et les perspectives lissu de ce projet sont multiples. Il faut
noter que sur les cinq gnes confirms par RT-PCR, deux sont impliqus dans la rponse
immunitaire ou dans la perception sensorielle, ce qui confirme des observations antrieures,
suggrant que les OMM, dans certaines conditions, pourrait avoir un impact potentiel sur les
cellules. Des expriences seront ncessaires pour savoir si cette rponse biologique peut avoir
des consquences sur lorganisme.
Il faut souligner que nous avons diffus nos travaux dans la socit civile. Certains
membres de notre consortium ont donn des sminaires grand public (confrences lEspace
des Sciences de Rennes, Festivals des Sciences, Matinales Rennes Atalantes, etc.), afin de
rpondre localement la forte demande socitale concernant les effets des ondes sur la sant.
De plus les rsultats de ces travaux ont t largement cits dans le rapport dexpertise
collective de lAFSSET sur lvaluation des risques sanitaires lis lutilisation du scanner
corporel ondes millimtriques (Fvrier 2010).