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FIBRINGENO Y SU PLASMOLISIS
Eugene A Cherniavsky1, Igor S Strakha1, Igor E Adzerikho2 and Vladimir M
Shkumatov1*
ABSTRACTO
FONDO
La trombolisis farmacolgica con estreptoquinasa, uroquinasa o activador tisular del
plasmingeno (t-PA), y las intervenciones mecnicas son utilizadas con frecuencia en
el tratamiento tanto arterial y venoso de enfermedades trombticas. Se ha informado
anteriormente de que la aplicacin de ultrasonidos como un adjunto a la terapia
tromboltica ofrece un potencial nico para mejorar la eficacia. Sin embargo, se sabe
poco sobre los efectos de los ultrasonidos en las protenas de la coagulacin
sangunea y la fibrinolisis. A continuacin, se investigaron los efectos de los
ultrasonidos sobre el fibringeno en los procesos de coagulacin y fibrinogenolisis en
un sistema in vitro.
RESULTADOS
Nuestro estudio demostr que la baja frecuencia de ultrasonido de alta intensidad de
pulso (25,1 kHz, 48,4 W / cm2, de trabajo del 50%) induce a la desnaturalizacin de
plasmingeno y t-PA y fibringeno agregados formacin in vitro. Los agregados se
caracterizan por la prdida de la capacidad de coagulacin y una mayor tasa de
plasminolisis de fibringeno nativo. Investigamos el efecto de los ultrasonidos en las
protenas individuales. En caso de plasmingeno y t-PA, el ultrasonido condujo a una
disminucin de la tasa de fibrinogenolisis, mientras que aument la tasa de
fibrinogenolisis en caso de fibringeno. Se ha demostrado que el tratamiento en
ultrasonido de fibringeno o fibrina mezcla con el plasmingeno, t-PA, o ambos, la
velocidad de la digestin proteoltica de fibrina (fibringeno) aumenta tambin. Se ha
demostrado que el efecto global sobre la degradacin de la fibrina (fibringeno)
proteoltica en las condiciones para el tratamiento de ultrasonido combinado se
determina exclusivamente por el efecto sobre la fibrina (fibringeno).
CONCLUSIONES
Los datos presentados aqu sugieren que entre las protenas del sistema fibrinoltico,
el fibringeno es una de las protenas ms sensibles a la accin de los ultrasonidos.
Se ha demostrado in vitro que el ultrasonido induce la formacin de agregados de
fibringeno, caracterizado por la prdida de la capacidad de coagulacin y una mayor
tasa de plasminolisis de fibringeno nativo en diferentes sistemas modelo y bajo
diferentes modos de tratamiento de ultrasonido. Bajo tratamiento con ultrasonidos de
plasmingeno y / o t-PA en presencia de fibrina (fibringeno) el efecto estabilizante
de la fibrina (fibringeno) sobre las protenas que se dio fue mostrado. Por otra parte,
se observ un aumento en la tasa de lisis de fibrina (fibringeno), debido tanto a la
modificacin de la estructura del sustrato y la promocin de la formacin de
complejos de protena-protena.
FONDO
Trombosis en el sistema cardiovascular es una de las principales causas de
mortalidad y morbilidad en el mundo.Las trombolisis farmacolgicas usando
estreptoquinasa, uroquinasa o activador tisular del plasmingeno (t-PA) y las
intervenciones mecnicas se emplean con frecuencia para tratar tanto arterial y
FIBRINOGENOLISIS
Fibrinogenlisis se llev a cabo en tampn de fosfato de sodio 0,05 M, que contiene
0,15 M de NaCl a pH 7,4. La protelisis se inici por adicin de 150 l de plasmingeno
(2 m / ml) y t-PA (0,2 mg / ml) a 15 ml de la solucin de fibringeno (3 mg / ml). A
continuacin, la mezcla de digestin se incub a 37 C y se recogieron muestras
despus de ciertos intervalos de tiempo para SDS-PAGE y la determinacin del
anlisis de pptidos solubles en TCA.
FIBRINLISIS
PREPARACIN DE COGULOS
El cogulo de fibrina se prepar por adicin de 300 l de 1 M de CaCl2 y 1.5 ml de
solucin de trombina (25 unidades / ml en 0,05 M Tris-HCl, 0,5 M de NaCl a pH 7,4) a
15 ml de solucin de fibringeno (3 mg / ml en el mismo tampn). La mezcla final se
incub durante 2 horas a 37 C. El cogulo resultante se sec entre las dos hojas de
papel de filtro.
LA LISIS DEL COGULO
El cogulo se coloc en el tubo de polipropileno con tampn, que contiene 15 ml 0,05
M Tris-HCl 0,5 M y NaCl a pH 7,4. Para la iniciacin de la fibrinlisis 150 l de la
solucin de plasmingeno (1,5 mg / ml en 0.025 M Tris-HCl, 50% de glicerol, pH 7,4) y
150 l rt-PA (10 mg / ml en 0,05 M Tris-HCl , se aadieron 0,5 M NaCl (pH 7,4)) a la
mezcla. La mezcla se incub a 37 C y durante 4 horas de hidrlisis se recogieron las
muestras. Las alcuotas se utilizaron para SDS-PAGE (una mezcla de desnaturalizacin
de la protena con o sin 2-mercaptoetanol se aadi directamente a estas alcuotas) y
la determinacin de pptido solubles en TCA. La unin de AP en la superficie Cdominio. Al mismo tiempo, D-regin tambin contiene sitios de unin latentes t-PA y
el plasmingeno. La exposicin de estos sitios es un resultado de la unin no
covalente D-D: E [34].
ABREVIATURAS
NOS:
ultrasonido
rt-PA:
activador del plasmingeno tisular recombinante
t-PA:
activador del plasmingeno tisular
SDS:
dodecil sulfato de sodio
SDS-PAGE:
electroforesis en gel de poliacrilamida dodecil sulfato de sodio
HIFU:
-Ultrasonidos de gran intensidad
TCA:
cido tricloroactico
-ME:
-mercaptoetanol.
t-PA:
activador tisular del plasmingeno