Laboratorio N1: Extraccin de pigmentos

carotenoides y Astaxantina de la levadura

pigmentada.

Biotecnologa
Cecilia Suarez
24/10/2016

Ingeniera en Alimentos

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Contenido
Introduccin................................................................................................... 2
Objetivos..................................................................................................... 3
Antecedentes Bibliogrficos...........................................................................3
Materiales y Mtodos..................................................................................... 3
Materia Prima y Aditivos.............................................................................. 3
Datos Experimentales................................................................................. 4
Resultados...................................................................................................... 4
Discusin........................................................................................................ 5
Conclusin...................................................................................................... 5
Bibliografa..................................................................................................... 5
Anexos............................................................................................................ 5

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Introduccin
La levadura Ph. rhodozyma fue aislada a principios de los aos 70 a partir
de exudados de rboles en Japn y Alaska (Phaff y et al. 1972) como una
levadura de color anaranjado, de pared celular tpicamente basidiomictica
y que era capaz de fermentar la glucosa siendo denominado el gnero como
Phaffia en honor al Prof. Herman Jen Phaff por Miller y colaboradores en
1976. En ese mismo ao Andrewes y colaboradores sugieren una posible
ruta biosinttica para la formacin de astaxantina en Ph. rhodozyma. Como
se ha indicado, en 1977 Johnson y colaboradores estudian la aplicacin de
esta levadura para la pigmentacin de salmnidos y crustceos. Los mismos
autores un ao ms tarde describen un mtodo para la extraccin de
astaxantina a partir de la levadura Ph. rhodozyma utilizando los enzimas
lticos de B. circularas WL-12. En 1979 se optimiza la produccin de
astaxantina a partir de la levadura, estudiando el pH ptimo, los nutrientes,
etc y por fin en 1980 se demuestra que esta levadura es una excelente
fuente de astaxantina para dietas de salmnidos, puesto que el pigmento es
rpidamente asimilado y depositado en la carne de la trucha arco iris
(Johnson et al., 1980b), y para pigmentacin de yema de huevo (Johnson et
al., 1980a). En 1984 se propone la auto lisis de la levadura en agua
destilada o en tampn citrato como un medio bastante bueno para facilitar
la extraccin del pigmento.

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Objetivos

Extraer carotenoides de phaffia rhodozyma.

Caracteriza e identificar los pigmentos carotenoides extrados.

Antecedentes Bibliogrficos
La calidad de los alimentos se basa principalmente en sus
caractersticas microbiolgicas, bioqumicas y tambin
organolpticas como el color, aroma textura, sabor y valor
nutritivo. Dependiendo del alimento en particular, estos
factores pesan en diferente grado al evaluar la calidad total
del alimento. Sin embargo, uno de los ms importantes
atributos de la calidad sensorial de un alimento, es el color.
Esto se debe, a que es poco probable que se consuma un
alimento a menos que tenga el color correcto. El color de
los alimentos se debe a la presencia de variados pigmentos
naturales, excepto que se hayan aadido. (Donoso, 2010)
Las materias colorantes naturales de las frutas y hortalizas
incluyen una alta gama de compuestos qumicos, estos se
subdividen en 4 grupos que son:
* Pigmentos tetrapirrlicos: clorofilas
* Pigmentos carotenoides
* Antocianinas
* Flavonoides
* Taninos y quinonas
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* Betalainas.
2.1.- Compuestos Carotenoides
Los Carotenoides son los responsables de la gran mayora
de los colores amarillos, anaranjados o rojos presentes en
los alimentos vegetales, y tambin de los colores
anaranjados de varios alimentos animales. Desde el punto
de vista qumico, pertenecen a la familia de los terpenos, es
decir estn formados por unidades de isopreno (ocho
unidades, es decir, cuarenta tomos de carbono), y su
biosntesis se produce a partir de isopentenil pirofosfato.
Esto produce sus rasgos estructurales ms evidentes, la
presencia de muchos dobles enlaces conjugados y de un
buen nmero de ramificaciones de grupos metilo, situados
en posiciones constantes. Se conocen alrededor de 600
compuestos de esta familia, que se dividen en dos tipos
bsicos: los carotenos, que son hidrocarburos, y las
xantofilas, sus derivados oxigenados. A estos hay
que unir los apocarotenoides, de tamao menor, formados
por ruptura de los carotenoides tpicos.
En los vegetales verdes se encuentran en los cloroplastos,
formando parte del sistema de biosntesis a partir de la
energa de la luz, pero son mucho ms abundantes, y
visibles, coloreando algunas races, frutas y flores. Dada su
ubicuidad en el reino vegetal, la biosntesis total anual de
Carotenoides se ha estimado en unos 100 millones de
toneladas. Los animales no pueden sintetizar sustancias de
este tipo, pero si pueden transformar una en otra, aunque
con bastantes limitaciones.
De los Carotenoides conocidos, solamente alrededor del
10% tienen valor como vitamina A. Adems del b caroteno,
los ms importantes entre ellos son el acaroteno y la b
criptoxantina. La condicin fundamental para que tengan
actividad vitamnica es que tengan cerrado y sin oxidar al
menos uno de los anillos de los extremos de la estructura.
Consecuentemente, varios de los Carotenoides ms
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comunes, como el licopeno, zeaxantina y lutena no tienen

valor como vitamina A, aunque son muy importantes como
pigmentos, y pueden tener tambin actividad como
antioxidantes.
En general, las xantofilas producen color amarillo, mientras
que los Carotenoides son anaranjados o rojizos. Los
Carotenoides pueden desempear un papel como
antioxidantes en la proteccin del organismo frente a los
radicales libres, aunque esta cuestin est todava en
discusin. S parece claro que la presencia en la dieta de
alimentos con contenidos elevados de Carotenoides tiene
efectos preventivos frente a ciertas enfermedades, aunque
los experimentos en los que se han utilizado suplementos
han dado resultados contradictorios, en algunos casos
incluso evidenciando efectos perjudiciales. La presencia de
gran nmero de dobles enlaces hace a los Carotenoides
muy sensibles a la oxidacin, especialmente en reacciones
de foto oxidacin con el oxgeno singlete. Tambin se
oxidan en presencia de lipooxigenasas, pero no de forma
directa, sino por reaccin con los hidroperxidos. Las
reacciones de oxidacin dan lugar en todos los casos a la
perdida de color. Generalmente, existe una gran
dependencia entre la velocidad de oxidacin y el ambiente
en el que se encuentran. Dentro de los
alimentos, los Carotenoides son mucho ms resistentes a la
oxidacin que en materiales pulverizados y secos, o en
extractos. Tambin pueden alterarse por isomerizacin.
Salvo excepciones, como en algunas algas, los
Carotenoides naturales se encuentran siempre con todos
los dobles enlaces en forma trans.
Aunque en principio la configuracin trans de los dobles
enlaces sera la ms estable, las repulsiones que inducen
los grupos metilos laterales hace que algunos de los dobles
enlaces puedan pasar a la configuracin cis. Esta
isomerizacin puede producirse por calentamiento,

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exposicin a la luz o de forma espontnea en ciertos

disolventes o en presencia de superfices activas.
2.2.- Astaxantina La astaxantina es un carotenoide,
perteneciente a la serie fitoqumica de los terpenos. Se
clasifica como una xantfila. Como muchos carotenoides, es
un pigmento liposoluble coloreado.
Esta xantfila se extrajo originalmente del cangrejo de ro
Astacus astacus. La astaxantina se puede encontrar en
microalgas (Haematococcus pluvialis), levaduras
(Xanthophyllomyces dendrorhous), salmn, trucha,
crustceos (Pandalus borealis, krill) y plumas de algunas
aves.
Se haba propuesto una unin en el anillo beta ionona con
la parte hidrofbica de actinomiosina de salmn, pero hay
otros factores incluyendo el metabolismo en el hgado
relacionados con el efecto de pigmentacin: todo la Eastaxantina se acumula selectivamente en la sangre y
msculo del salmn pero no en especies no pigmentadas.
Un receptor lipoproteico sera el factor limitante en el
metabolismo y transporte del pigmento.
La astaxantina, a diferencia de algunos carotenoides, no se
convierte a vitamina A (retinol) en el cuerpo humano. El
exceso de vitamina A es txica para los humanos, pero la
astaxantina no. Sin embargo, es un potente antioxidante;
unas 10 veces ms que otros carotenoides. La astaxantina
se utiliza como alimento de peces y crustceos (Penaeus
monodon). Se emplear a 72 g/ton como aditivo para
alimentacin de peces. El nmero E es 161j. (1)
La suplementacin con astanxantina en la dieta humana se
est convirtiendo cada vez en ms popular. Es un potente
antioxidante comparable con la vitamina E que combate el
estrs oxidativo y es muy beneficioso para la piel, vista, y la
salud celular. La astaxantina es el carotenoide que le da
color rojo al salmn, a los langostinos o a los flamencos. Es
producido por diversos tipos de microalgas que son la base
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de la alimentacin del zooplancton y el krill, a su vez el

alimento preferido de aquellos que almacenan el pigmento
en la piel y en el tejido graso, siendo sta la razn de su
color rojizo.
La astaxantina no sufre decoloramiento por lo que la
coloracin rojiza de los peces y crustceos que la ingieren
se conserva incluso al cocinarlos como es el caso de las
gambas o los langostinos. Al ser un pigmento liposoluble se
incorpora en las membranas celulares.
La astaxantina es el carotenoide antioxidante ms potente
cuando se trata de captacin de radicales libres: es 65
veces ms potente que la vitamina C, 54 veces ms
potente que el beta-caroteno y 14 veces ms potente que
la vitamina E. (2)

Materiales y Mtodos
-

Tubos de centrfuga

Mortero con pistilo

2 placas Petri

4 probetas de 50 ml

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Cmaras para TLC

Tijeras

Rotuladores

Celdas de espectrofotmetro de vidrio, rango UV

Placas para TLC

ter etlico

ter de petrleo

Hexano

50 ml sol. NaCl 20%

Sulfato de sodio anhidro

Materia Prima y Aditivos

-

ter etlico

ter de petrleo

Hexano

50 ml sol. NaCl 20%

Sulfato de sodio anhidro

Datos Experimentales
Muest
18
0,770
ra
Tabla de Datos N1
Tubo
Tubo
centrifuga

Masa (g)
13,779

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vaco con
tapa
Tubo
centrifuga
con
extracto
Extracto

15,310
1,531

Tabla de Datos N2
Distancia
recorrida por el
solvente (cm)
6,5
6,6
6,6

Carril
1 Carril
2 Carril
3 Carril

Distancia
recorrida del
pigmento (cm)
6,7
6,7
6,7

Resultados

Tabla de resultados Concentracin de astaxantina

Tubo

Concentracin
de astaxantina mg
carotenoide/ g biomasa

Muestra

56,58

Tabla de resultados Rf
Carriles

Rf

1 Carril
2 Carril
3 Carril

0,97
0,98
0,98

Discusin
Segn el valor RF caracterstico que se indica en la tabla de cartenoides
nuestro valor obtenido se acerca al Rf del Beta-caroteno (Rf:0.99).Se
obtuvieron 56,58 mg de carotenoide/ g de biomasa, este valor en la
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industria alimentaria esta limitado por una lenta fermentacion a baja

temperatura y especialmente por la falta de cepas estables altamente
productoras del pigmento. Las mejores cepas naturales disponible producen
solamente 500ug totales del carotenoide por gramo de levadura
aproximadamente, por lo que se requiere un mejoramiento de cepas para
incrementar el contenido de astaxantina, y posiblemente la tempe optima
de crecimiento
Las condiciones de cultivo, son parametros importantes en la produccion de
pigmentos carotenoides por la levadura phaffia rhodozyma. Se a observado
que la astaxantina se produce principalmente en la fase exponencial de
crecimiento . Por otro lado factores como la luz y compuestos como la
saponina y el acido acetico llegan a inhibir el crecimiento y produccion de
astaxantina.

Conclusin
Se logro extraer carotenoides de Phaffia Rohozima mediante la tecnicas
indicadas anteriormente para su posterior identificacion calculando su valor
Rf, basandonos en la tabla de pigmentos carotenoides y asi poder saber a
cual correspondia.

Bibliografa
- Referencias de Internet
1. http://es.wikipedia.org/wiki/Astaxantina
2. http://www.astaxantina.es/
3. http://ruc.udc.es/dspace/bitstream/handle/2183/10771/CC
%2048%20art
%201.pdf;jsessionid=5EF577533FEC173EED253BA5B18BF
284?sequence=1

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Anexos

Calculo de extracto

Tubo centrifuga con extracto - Tubo centrifuga vaco con tapa =

Extracto
15,310 g

13,779 g

= 1,531 g

Calculo de concentracin de astaxantina

C = ( 0,770 * 18 * 106 ) / ( 1.600 * 100 * 1,531 )

C = 56,58 mg carotenoide/ g biomasa

Calculo de RF

12 | P g i n a

Rf

1Carril

= (6,5 / 6,7) = 0,97

Rf

2Carril

= (6,6 / 6,7) = 0,98

Rf

3Carril

= (6,6 / 6,7) = 0,98

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