Yahya Karami

Cette technique a t imagine en 1892

par S.E. Linder et H. Picton qui se sont inspirs
des travaux dHermann Von Helmholtz sur
llectro-osmose.
En effet, ce dernier constata quil tait
possible de dplacer des particules charges
sous leffet dun champ lectrique.

Yahya Karami

1937 : Arne W. K. Tiselius met au point la

premire lectrophorse dite libre.
1952 : Pierre Grabar labore lanalyse
imuno-lectrophortique qui permet danalyser
de manire prcise des mlanges dantignes.
1955 : O. Smithies met au point une
technique dlectrophorse sur gel damidon.

Yahya Karami

Llectrophorse est une technique

permettant de sparer des ions (molcule charge
positivement ou ngativement) grce lutilisation
dun champ lectrique. Les anions (chargs
ngativement) migrent vers la cathode tandis que
les cations (chargs positivement) migrent vers
lanode.
La vitesse de migration dpend de la charge
et de la taille de la molcule ainsi que des
conditions de llectrophorse.
Yahya Karami

selon les lois de llectrostatique, la force

lectrique, , sur un ion :
=
la migration lectrophortique de lion travers la
solution est oppose par
une force de friction:
friction =
: la vitesse de migration
: coefficient de friction
Yahya Karami

Dans un champ lectrique constant, les forces

sur lion vont sgaliser et :
=
donc, chaque ion se dplace avec une vitesse
caractrise par une mobilit
lectrophortique, , dfinie par :

= =

Cette quation indique que les protines

leur point isolectrique (o q=0)
possdent une mobilit lectrophortique nulle
Yahya Karami

Deux Types Dlectrophorse

Electrophorse Libre

Electrophorse de Zone
Yahya Karami

Electrophorse de Libre
En veine liquide selon Tislius (1937), est
ralise dans un tube en U de section carre : la
sparation n'est pas totale, mais les frontires
qui se forment sont mises en vidence par des
mthodes optiques (absorption UV, indice de
rfraction, fluorescence...).
Cette mthode est utilise en recherche
pour mesurer la mobilit lectrophortique et
pour vrifier la puret des protines.
Yahya Karami

Yahya Karami

Electrophorse de Zone

Llectrophorse sur support ou lectrophorse

de zones permet de stabiliser la phase liquide
grce lutilisation dun support poreux imprgn
d'un solvant tamponn.

Yahya Karami

Appareillage:
Buffer : solvant tamponn.
Casing : Botier .
Gel (Papier) :
de l'actate de cellulose,
du gel de polyacrylamide,
du gel d'agarose,
du gel d'amidon,
du gel de silice, ...
Pipette ou Seringue.
Yahya Karami

 isolectrique (): le pH pour lequel

la particule ne migre pas dans un champ
lectrique (ceci est une dfinition
exprimentale).
est le de Solvant .
Si > Charge nette ngative (anion) , Migration
vers anode.
Si < Charge nette Positive (cation) ,Migration
vers Cathode.
Si = Pas de Migration.

Yahya Karami

Rsum

Yahya Karami

Etude des Protine par la mthode Gels SDS-PAGE:

Les protines sont des macromolcules
biologiques prsentes dans toutes les cellules
vivantes.
Elles sont formes d'une ou de plusieurs
chanes polypeptidiques.
Yahya Karami

Yahya Karami

Llectrophorse SDS-PAGE :
Electrophorse en gel de polyacrylamide
contenant du dodcysulfate de sodium.

SDS: [3 (2 )10 2 4 ]+
SDS se lie de faon importante aux protines.
En prsence de SDS, les protines adopte une
conformation tendue.
Yahya Karami

la forte charge ngative globale apporte par le SDS masque la charge

intrinsque des protines.
par consquence le rapport charge/masse sera le mme pour toutes les
protines de mme masse et la sparation lectrophortique du gel avec du SDS
dpendra uniquement du phnomne de gel-filtration par les pores du gel.
Cette mthode donne la meilleure rsolution et les bandes sont les plus
rsolues de toutes les mthodes danalyse.
Il a t dmontr quon peut obtenir une relation linaire entre la
mobilit lectrophortique et le logarithme du poids molculaire.

Yahya Karami

Relation entre les masses molculaires des protines et leur mobilit

lectrophortique.

Yahya Karami

Rsum de llectrophorse avec un gel

contenant du SDS

Yahya Karami

Visualisation des protines dans les

gels
une fois que la migration des protines dans le gel est termine, il
faut visualiser les bandes obtenues par les protines.

les diffrentes approches sont:

La coloration avec le bleu de Coomassie brillant .
La coloration au nitrate dargent .
Autoradiographie (si les protines sont marques avec un isotope
radioactif comme le S35 ou le C14).

Ces approches vont cependant dtecter toutes les protines sur le gel.
Yahya Karami

Coloration de gels de protines

Coloration au Bleu de Coomassie brillant

Yahya Karami

Coloration au nitrate dargent

Webographie
Universit Pierre et Marie CURIE
http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/lafont/electrophorese/
E1.html
Encyclopdie Universalis
http://www.universalis.fr/encyclopedie/electrophorese/3
-electrophorese-de-zone-sur-support/
Cours de biochimie
http://www.cours-de-biochimie.fr/western-blot.php
BioTech
http://biotech.spip.ac-rouen.fr/spip.php?article155
Dernire visite pour les site web cest le 14/12/2016
Yahya Karami

Mercie Pour votre Attention

Vos Question
sont les Bienvenues.
Yahya Karami