UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA DE POSTGRADO

INGENIERA BIOQUMICA
Crecimiento Microbiano
Clase 2

CRECIMIENTO MICROBIANO

Aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos

de un organismo.
Un aumento en el nmero de individuos en la poblacin
(organismos unicelulares)

Clulas

Energa
CELULA
informacin
Nutrientes

Productos
Calor

Mtodos de Cuantificacin Celular

Peso seco
Biomasa

Turbidimetra
Volumen de clulas empacada

DIRECTOS

Nmero

Recuento en microscopio
Recuento en placa

Mtodos de Cuantificacin Celular

Consumo de nutriente

INDIRECTOS
Estimacin de la masa celular

Acumulacin de producto

Compuesto celular
Calor de fermentacin
Viscosidad

Variacin de la composicin macromolecular de Kluyveromyces aerogenes

como una funcin de en un quimiostato limitado por nitrgeno.

Mtodos para la cuantificacin del crecimiento de poblaciones

microbianas

Consideraciones
LEYES DE VELOCIDAD

A B C D Re accin Elemental
v k[ A].[B]

DERIVADA DE UNA FUNCIN

dy
dx

x0

BALANCE DE MASA EN REACTORES

Compuesto Ci

AcumulacinC i entrada salida formacin descomposicin

d (Ci V )
entrada salida formacin descomposicin
dt
Velocidad neta de reaccin

Crecimiento por lotes

Crecimiento de un organismo aerbico

[clulas]

[Fuente
de carbono]

[CO2]

[Fuente
de nitrgeno]

[H2O]

[Fuente
de oxgeno]

[Productos]

[Ms
clulas]

[Fuente +
de fosfto]
Condiciones del
medio de cultivo
(pH, T, fuerza inica,
etc)

A(CaHbOc ) B(O2 ) D(NH3 ) clulas1

M(C H O N ) N(C H O N ) P(CO2 ) Q(H2O) clulas1
'

Biomasa

'

Producto

'

'

SUSTRATO LIMITANTE (estudio cintico)

Clulas sustrato
ms clulas productos
v f (x , S , I ,T , pH ,.....etc)
v s ,I ,T ,pH ,..... X

Cintica de primer orden

Reaccin auto cataltica

v = velocidad de crecimiento de la clula (g/L.tiempo)

X = concentracin de biomasa (g/L)
= velocidad especfica de crecimiento, (tiempo -1 )

Balance de Masa en un Reactor por Lotes

dX
X
dt

(1)

1 dX d (lnX )

X dt
dt

En la fase exponencial la
velocidad de crecimiento es
constante

Integrando la Ecuacin (1)

XX0

Constante

dX t
0 dt
X

Constante

X
ln t ln X ln X 0 t
X0
X X 0 e t
LnX

32

tD

64

128

tD

256

2 X0
ln
X0

const

512

ln2

const

1024...

Constante

0.693

const

Tiempos de Duplicacin Caractersticos

Tipo de clula

TD (h)

Bacterias

0.3 2.5

Levaduras

1.0 4.0

Hongos filamentosos

1.5 7.0

Microalgas

18 35

Clulas animales in vitro

20 - 40

Fuente: Acevedo et al. (2002)

Crecimiento Balanceado
Las clulas son capaces de modular los efectos de perturbaciones
externas y mantienen la composicin de la biomasa constante a pesar
de los cambios en las condiciones ambientales.

vz z
Z: constituyente celular (protena, ARN, polisacrido, etc)
vz: velocidad de reaccin
Z: concentracin de Z en el volumen del reactor.

o No puede ser alcanzado si los cambios ambientales afectan la

velocidad del crecimiento.

o Ocurre al mismo tiempo que el crecimiento exponencial.

Influencia de los factores ambientales sobre

es funcin del m.o y las condiciones ambientales
o Concentracin de sustrato
o Temperatura
o pH
o Actividad de Agua
o Inhibidores
o Potencial Redox
o Oxgeno disuelto
o Otros factores

Efecto de la Concentracin del Sustrato sobre

Efecto cuantitativo fuente carbono y energa Ec. MONOD (1949)

M S
KS S

M = velocidad especfica de crecimiento

mxima (tiempo -1)
S = concentracin de sustrato (g/L)
Ks = constante de Monod (g/L)

EFECTO DE KS EN LA EC. MONOD

dX
M S

X
dt K S S

Si S>> Ks

Representa la curva: Fase

exponencial, desaceleracin y
estacionaria

Sea el Rendimiento Yx/S

X x x0
Yx / s

S S0 S
X X0
S So (
)
Y

dX
M X
dt

Otras formas de Cinticas de Crecimiento

Ec. Blackman

m , if S 2K s

m S , if S 2K s
2K s

Ec. Tessier

Ec. Moser

Ec. Contois

m (1 e KS )

m S n

Ks S n

m S

m (1 K s S n )1

K sx X S

Inhibicin por sustrato

Inhibicin por producto

Fermentacin alcohlica

S
m
K s S S 2 / Ki

Kp
S
m

Ks S K p P

Limitacin por dos sustratos

S1
S2
m

K1 S1 K 2 S2

Limitacin por dos sustratos

Mankad y Bungay (1988)

S1
S2 2 K1 K 2
m
1

K1 S1 K 2 S2 K1S2 K 2 S1

J. Biotechnology 1988, 7: 161-166

Crecimiento diuxico
Fuente: Duan et al., 2003

S1
S2
m1
m 2
K1 S1
K 2 S2 S12 K i

Crecimiento diuxico
dX
( 1 2 ) X
dt

1
2

max1S1
K1 S1

max 2 S2
K 2 [1 ( S1 / K i )]] S 2

Fuente: Asenjo A. y Merchuk J.C. (1995)

Gahlawat and Srivastava, 2013. Bioresource Technology, 137: 98-105

Ec. Logstica
X
max (1
)
X max
dX
X
max X (1
)
dt
X max
Integrando :
X 0e t
X
X0
1
(1 e
X max
max

max

Desviaciones de la curva de crecimiento microbiano

Crecimiento Diuxico

Medio complejo

Efecto de la Temperatura sobre

Efecto de la Temperatura sobre

Ec. Del tipo Arrhenius

Ae E

a / RT

Ea 1
ln ln A
RT
Ea: Energa de activacin
R: constante gases R= 1.98 cal/mol.K
T: temperatura absoluta (K)

Efecto de la Temperatura sobre

dX
( kd' ) X
dt
dX
' ( Ed / RT )
( Ae( E / RT ) Ae
)X
dt
a

o Ea para el crecimiento 15-20 Kcal/mol

o Ea para la muerte 60-70 Kcal/mol

Efecto del pH sobre

Rango pH ptimo
o Bacterias

6-7.5
o Levaduras 3.5 5.5
o Mohos 3 - 7

Oxgeno Disuelto

Factor limitante de la
velocidad de
crecimiento

Concentracin
de oxgeno
crtica

La velocidad de transferencia de oxgeno del gas a la fase lquida es dada por:

VTO kL a(C CL )
*

kL: coeficiente de transferencia de oxgeno (cm/h)

a: rea interfacial gas-lquido (cm2/cm3)

kLa coeficiente de transferencia de oxgeno volumtrico (h-1)
C*: Concentracin de oxgeno disuelto saturado (mg/L)

CL: Concentracin de oxgeno disuelto en el caldo (mg/L)

VTO: Velocidad de transferencia de oxgeno (mg/L.h)

La velocidad de consumo de oxgeno es:

X
VCO qO X
2

YX / O

qo2: velocidad expecfica de consumo de oxgeno (mg O2/g clulas secas.h)

Yx/O2: coeficiente de rendimiento en oxgeno (g clulas peso seco/g O2)
X concentracin celular (clulas peso seco/L)

S la transferencia de oxgeno es la etapa limitante:

X k a(C* C )
L
L

YX /O

dX
*
YX /O kL a(C CL )
2
dt
Aire enriquecido de oxgeno o oxigeno puro y operaciones bajo alta presin
atmosfrica (2 a 3 atm)
Transferencia de oxgeno tiene un gran impacto en el diseo de reactores.

Potencial Redox del medio de cultivo

Indica su capacidad para aceptar o donar electrones (sus caractersticas oxidantes o
reductoras). Un potencial ms positivo, mayor afinidad de la especie para los electrones y

tendencia para ser reducido.

Cuando un microorganismo requiere un ambiente oxidante se dice que desarrolla un
metabolismo oxidativo (o respirativo) mientras que los microorganismos que requieren

ambientes reductores (o menos oxidantes) realizan un metabolismo fermentativo.

Para un medio de fermentacin:

PO2: presin del oxgeno en atm.
F: constante de Faraday

' 2.3RT
Eh E0

RT
log PO2 2.3 log( H )
4F
F

T: temperatura en K
-Se puede reducir mediante el paso de nitrgeno gaseoso o por la adicin de agentes

reductores: cisteina HCl o Na2S.

- Se puede incrementar pasando O2 gaseoso o adicionando agentes oxidantes

Fuerza Inica
Afecta el transporte de ciertos nutrientes in y out de las clulas, las
funciones metablicas de las clulas y la solubilidad de ciertos

nutrientes, tales como del oxgeno.

1
I Ci Zi2
2
Donde C es la concentracin de un in, Zi es su carga, y I es la fuerza
inica del medio.

Problema 1
Determinacin de los parmetros cinticos M y Ks , Yxs en un
reactor Batch

Tiempo (h) X (g/L) S (g/L)

0
1.5 48.5
8
2.9 45.2
15
5.5 38.8
23
11.4
24
27
16.3 11.8
30
19.2
4.5
34
20.9
0.3

m S
dx

x
dt K s S
ds
1 m S

.
.x
dt
Yxs K s S

Se utiliza el mtodo de Euler explcito (el ms simple)

dx xi1 xi f ( x , s )
i i
t
dt
dS si1 si f ( x , s )
i i
t
dt
1

xi1 xi t * f ( xi , si )
1

si1 si t * f ( xi , si )
2

Problema 2
En un cultivo por lotes de Saccharomyces cerevisiae se forma etanol de glucosa y los
siguientes datos se obtuvieron:
Tiempo (h)

Glucosa (S),
g/L

Biomasa (X),
g/L

Etanol (P), g/L

100

0.5

0.0

95

1.0

2.5

85

2.1

7.5

10

58

4.8

20.0

15

30

7.7

34.0

20

12

9.6

43.0

25

10.4

47.5

30

10.7

49.0

a) Mediante ajuste de los datos de biomasa a la ec. logstica, determine el

coeficiente max y Xmax
b) Determine el coeficiente de rendimiento Yp/s y Yx/s

Biomasa (g/L)

Glucosa (g/L)

Etanol (g/L)

120
100

g/L

80
60
40
20
0

10

15
20
Tiempo (h)

25

30

35

YP / S

YX / S

Problema 3

m S
dX

X
dt K s S

(1)

X X 0 Yx / s ( S0 S )

(2)

m (Yx/ s S0 X 0 X )
dX

X
dt K sYx/ s Yx / s S0 X 0 X
K sYx / s
K sYx / s
X
(
1) ln( )
ln{(Yx / s S0 X 0 X ) / Yx / s S0 } mt
Yx / s S0 X 0
X 0 Yx / s S0 X 0

Kato et al. 2015. Biochemical engineering: a textbook for engineers, chemists and
biologists

Problema 4
A continuacin se dan los datos experimentales de un cultivo continuo en estado
estacionario para la produccin de biomasa:
Encuentre los parmetros cinticos de este organismo suponiendo una cintica de
Monod.

S (g/L)
0.04
0.06
0.11
0.16
0.29
0.89
1.07

(h-1)
0.026
0.035
0.054
0.077
0.114
0.161
0.172

Problema 5
A continuacin se dan los datos experimentales de la velocidad especfica de
crecimiento de E. coli en diferentes condiciones de concentracin de sustrato.
Identifique qu tipo de cintica de crecimiento es y determine los parmetros
cinticos
S

(h-1)

0.05

0.21

0.1

0.26

0.2

0.25

0.4

0.24

0.6

0.22

0.8

0.16

0.172

1.2

0.14

Clasificacin de los m.o. segn sus requerimientos de

energa y nutricionales

Prototrofos
Auxotrofos

no requieren factores esenciales

requieren factores esenciales

Medios de cultivo

energa

calor

Fuente de
energa

Movimiento
Osmosis

ADP

Catabolismo

Anabolismo

ATP
Calor
Metabolitos
terminales

Precursores

Metabolismo anaerbico

GLUCOSA + 2Pi + 2ADP

2 LACTATO + 2ATP + 2H2O

Ggluc-lac= -47 kcal/mol gluc

GADP-ATP = 14,6 kcal/mol gluc

31% RECUPERACION

Metabolismo aerbico

GLUCOSA + 6O2 + 36Pi + 36ADP

6CO2 + 36ATP + 42H2O

Ggluc-CO2 = -686 kcal/mol gluc

GADP-ATP = 263 kcal/mol gluc

38% RECUPERACION

92%

Materia orgnica
C
H
O
N
P
S

Iones
Na+
K+
Mg2+
Ca2+
Cl-

Elementos trazas
Mn
Co
Zn
Al
Mo
Si
Ni
F

Fe
Cu
B
V
I
Sn
Cr
Se

MEDIO DEFINIDO

Medio
mnimo

Medio formado por una solo una fuente de

cada elemento. Tpicamente, est compuesto
por glucosa, sulfato de amonio y otras sales
minerales.

RENDIMIENTO DE UN NUTRIENTE EN BIOMASA

X masa celular producida

Yx s

S
sustrato consumido

Cmo se determina el coeficiente de rendimiento

experimental en cultivo por lote?

X Yx/ s S0

Varios experimentos con diferente

concentracin de sustrato inicial

2
So1

xf

xf

xo

xo

So3

So2

xf

So4

xf
xo

xo

.....

Yx/s
S0

ESTIMACIN RENDIMIENTO DE UN NUTRIENTE EN BIOMASA

% elemento en sustrato
Yx s
% elemento en biomasa
Cmo se obtiene este coeficiente?
Se obtiene por balances de masa

EJEMPLO:

(NH4)2SO4

28
% elemento en sustrato
*100 21%
132
% elemento en sustrato 21
gcelula peso sec o
Yx s
1.7
% elemento en biomasa 12
gsustrato

NH4Cl
14
% elemento en sustrato
*100 26.2%
53.5

% elemento en sustrato 26.2

gcelula peso sec o
Yx s

2.2
% elemento en biomasa 12
gsustrato

Fuente de Carbono y Energa

% elemento en sustrato
Yx s
.f
% elemento en biomasa
f=0.6 Caso Aerobio
f=0.1 Caso Anaerobio
Glucosa: C6H12O6

12*6
% elemento en nutriente
*100 40%
180
%Cc = 50

CASO AERBICO

% elemento en sustrato
40
Yx s
. f *0.6
% elemento en biomasa
50
gcelula peso sec o
Yx s 0.48
gsustrato
CASO ANAERBICO

% elemento en sustrato
40
Yx s
. f *0.1
% elemento en biomasa
50
gcelula peso sec o
Yx s 0.08
gsustrato

Qu sucede si un elemento qumico est en el

sustrato y en el producto?

S
E

C
E

P
E

No se puede usar el mtodo de balance de masa porque no se tiene una

relacin constante del elemento que va a sustrato y lo que va a
producto.

Optimizacin estadstica:
Superficie de Respuesta
En Erlenmeyer X = 2 g/L por limitacin de oxgeno
En fermentador de laboratorio X = 3-8 g/L por limitacin de oxgeno

Factor esencial

% factor esencial biomasa

Factoresencial X
100

Cmo se calcula el rendimiento de oxgeno YO2 ?

u=0 (ausencia de producto extracelular)

d, e, f, g: porcentaje de C, H, O y N en la biomasa

DISEO DE MEDIOS DE CULTIVO

( XF X0 )
S0 SF
YX S
Ejercicio

Disee un medio de cultivo si se desea obtener una biomasa de 7 g/l a

partir de un inculo de 200 ml cuya concentracin de biomasa es de 5
g/L. El volumen total del reactor es de 7 L. Los nutrientes usados son
glucosa, sulfato de amonio y NaH2PO4. Adems se sabe que estas clulas
contienen 53 % de C; 8,5% de N; 1.5% de P y 0.5 % de S.

Diseo de medio de cultivo

Condiciones:
Levadura creciendo aerbicamente
X = 6 g/L
N es el elemento limitante
No hay formacin de productos extracelulares

Clculo del rendimiento del nutriente limitante

(NH4)2SO4
N en nutriente : 21.2%
N en clula : 7.5%

YX S

%NS
gcelula peso sec o
2.8
%N C
gsustrato

Clculo de la concentracin de nutriente limitante

(NH4)2SO4
YX/S : 2.8
Sf : 0
X : 6 g/L

X
S0 Sf
YX S

S0 = 2.14 g/L

Elemento Ei

Ei en clula
%

Nutriente

Ei en nutr.
%

YX/S
g cel/g nutr

Concentr.
g/L x 1.5

48

C6H12O6

40.0

0.5

18

7.5

(NH4)2S04

21.2

2.8

2.14*

1.7

KH2PO4

22.8

13.4

0.67

2.5

KH2PO4

28.7

11.5

0.78

Mg

0.3

MgSO47H2O

9.7

32

0.28

0.13

(NH4)2S04

24.2

186

0.048

Fe

0.26

FeSO47H2O

20.0

77

0.12

Ca

0.20

CaCl2

36.2

181

0.05

Na

0.06

NaCl

39.3

655

0.014

Zn

0.02

ZnSO47H2O

22.8

1140

0.008

Mn

0.004

MnCl26H2O

27.7

6925

0.0013

Co

0.003

CoCl26H2O

24.8

8267

0.0011

Mo

0.0002

MoO3

66.6

333000

0.00003

Cintica de consumo del nutriente limitante

Yx/ s X
S
S 1 X
Yx/ s

Considerando solo crecimiento

exponencial, integrar la Ec. (1).

Dividiendo t , lim
t 0

dS 1 . dX
Yx/ s dt
dt
dS
1

X ....(1)
dt
Yx/ s

S S0

X 0 t
(e 1)
Yx / s

v qs X
qs

Yx/ s

1 dS

X dt

qs: Velocidad especfica de

consumo de nutriente (h-1)
=g sustrato/g biomasa.h)

, qs

max

qs, max

Anlisis de la fuente de carbono y energa (hetertrofos)

ST SC SM S P
Si el Producto es asociado al metabolismo energtico (etanol, cido
lctico), S 0
P

dS
dS

dt T dt
qs X

dS

dt
C

X
Yx0/ s

mX

qs

0
x/ s

m: coeficiente de mantencin (g sustrato/g biomasa. h )

Anlisis de la fuente de carbono y energa (hetertrofos)

Yx/ S

0
x/ s

m: coeficiente de mantencin (h-1)=g fuente C

y energa/g biomasa. h)
Yx/s=X/ ST

1
1 m
0
Yx/ S Yx/ s

Y0x/s=X/ SC

1/Yx/s
m

1/

Y0x/S > Yx/s

Cintica de Formacin de Productos

Tipo
I

Relaciones especficas de velocidad

Formacin del producto directamente

Ejemplo

Etanol

relacionado con la utilizacin del carbohidrato

II

Formacin del producto indirectamente

cido ctrico

relacionado con la utilizacin del carbohidrato

III

Formacin del producto aparentemente no

relacionado con la utilizacin del carbohidrato

Penicilina

Metabolito primario: son los productos finales e intermediarios de

las vas de estos productos finales utilizados para construir las
macromolculas o son convertidos en coenzimas.
Metabolito secundario: producto de fermentacin no necesario
para el crecimiento del m.o.

Producto asociado al nutriente limitante

P
Y p/ s
S

Pf P0

v Yp/s

S0 S f

P Y p/ s S
Dividiendo t , lim
t 0

Yx /s

v qP X

dP Y .( dS ) Y ( X )
p/s
p/s
YX / S
dt
dt
dP ( Yp/ s ) X
dt YX / S

dP q X
dt p

qp

1
X

dP
dt

qp: velocidad especfica de formacin de producto= g producto/g biomasa.h =h-1

En general para los tres tipos de producto: Tipo I, Tipo II y Tipo III

q p Y p / s qs

Cuando un producto es un catabolito de la fuente de carbono

dS
dS
dS

dt T dt C dt m
dS
X
0 mX
dt T
Yx / s
Yp / s (

Y
dS
) 0p / s X mYp / s X
dt T
Yx / s

Yp / s
dP
( 0 mYp / s ) X
dt
Yx / s

qp

Yp / s
0
x/s

Yp / s m

Formacin de producto parcialmente

asociado al crecimiento
El modelo de Luedeking-Piret

q p
Asociado al crecimiento

No asociado al crecimiento

Anlisis de la fuente de carbono y energa

Si el producto es un metabolito secundario

ST SC SM S P
dS
dS

dt T dt
qs X

X
Yx0/ s

dS

dt
C

mX

qs

dS

dt
m

qp X
Yp0/ s

Yx0/ s

Yp / s

qp
Yp0/ s

P
S

, Yp0/ s

P
S p

Yp / s Yp0/ s

Anlisis de la fuente de carbono y energa

Si el producto es un metabolito secundario

qp
1
1
1
0 (m 0 )
Yx / S Yx / s
Yp / s

qs

0
x/ s

m
Yp / s

Yp0/ s

Yp0/ s

1
1
m1

0
Yx / S Yx / s
Yx / S

qs
1
Yxo/ s

Yp / s

Yx0/ s

mYx0/ s

dS
dS

dt T dt

dS
dt

dS
dt

qp
dS
X
0 mX 0 X
dt T
Yx / s
Yp / s
Y
Y
dS
Yp / s (
) 0p / s X mYp / s X p0/ s q p X
dt T
Yx / s
Yp / s
Yp / s
Yp / s
dP
( 0 mYp / s 0 q p ) X
dt
Yx / s
Yp / s
dP
qp X
dt

Yp / s
Yp / s m
Yx0/ s
qp

Yp / s
Yp / s
(1 0 )
(1 0 )
Yp / s
Yp / s

1 Yp / s
1
qp
Yp / s m
0
Yx / s

q p

Ejemplo para determinar el rendimiento mximo

Producto no asociado al crecimiento

qp

es independiente de la velocidad de crecimiento

(formacin de penicilina)
qp vara con la velocidad especfica de crecimiento de una

manera compleja en algunos casos

Ejemplo :

q p q max
k
p
Formacin

de melanina por Aspergillus niger

La formacin de ciclodextrinas de almidn por Bacillus

macerans

Velocidad de Produccin

1 dP
qp
x dt

Velocidad especfica de formacin de producto g/g

clulas.h
Es independiente de la concentracin de masa celular y
describe la efectividad de las clulas en la sntesis de
productos o la utilizacin del material (qs). Es til para
comparar resultados entre fermentaciones a ensayar.

dP P P2 P1
Qp

dt t t2 t1
X
Qx
t

La velocidad volumtrica o productividad

volumtrica (g/L.h) es dependiente de la
concentracin de la masa celular, describe
la velocidad de sntesis de producto o
demanda de material (S) por unidad de
volumen del fermentador

El tiempo total de fermentacin puede ser calculado:

Qx

QP

ln

xf
x0

tT t L t D

1 ln x f t t t
m x0 T L D
P
1 ln x f t t t
m x0 T L D

Ejercicios
1) Un microorganismo produce un metabolito extracelular de acuerdo a qp=0.64 . El

microorganismo crece a una velocidad especfica de 0.35 h-1, sus rendimientos

mximos de sustratos en biomasa y producto son 0.51 y 0.65 g/g respectivamente y
m= 0.09 g/g*h. Las concentraciones de biomasa inicial y final son 0.4 y 11 g/L

respectivamente e inicialmente la concentracin de producto es 0.8 g/L .Cunto

producto se produce, que porcentaje de carbono se consume para crecimiento,
mantencin y produccin? Cules son los rendimientos globales de clula y

producto?

2) Para el cultivo aerobio de una bacteria metilotrfica, auxtrofa en cido pantotnico, se

utiliza un medio de cultivo que contiene 15 g/L de CH3OH (metanol); 1.8 g/L de
(NH2)2CO (urea); 0.57 g/L de KH2PO4 y 2.1 mg/L de cido pantotnico y dems
nutrientes en exceso en cantidades apropiadas.
Suponiendo ausencia de productos extracelulares, determine:
Cul de los cuatro nutrientes sealados es el limitante?
Cul de los cuatro nutrientes sealados es el tercer limitante y en qu porcentaje de
exceso se encuentra?
Si por error se cambia el nutriente y se utiliza 0.57 g/L de K2HPO4.2H2O Cules seran
sus respuestas a los puntos a y b? cambiaran?
Datos:

Elemento
C
N
K
P
Ac. Pantotnico

Peso
Molecular
12
14
39
31

Contenido
Celular % b.S.
52
12
3,1
2,8
3,6*10-4

3) En un experimento de laboratorio se cultiv E. coli en un medio mnimo, primero a 37

C hasta consumir la mitad de sustrato limitante y despus a 24C hasta alcanzar la fase
estacionaria. Se ha determinado que la cepa utilizada tiene un tD de 49 minutos a 37C
y su Ea es de 16200 cal/mol. Calcular el tiempo en el que se realiza el cambio de
temperatura y el tiempo total de cultivo si se inoculan matraces que contienen 80 ml
de medio estril con 1 ml de cultivo a una concentracin celular de 4 g/L . Datos: X= 7
g/l, Yx/s= 50; So= 0.14 g/L

4. Para realizar el proceso de fermentacin en una empresa cervecera, los

fermentadores de volumen til de 2.7 m3 se inocularon con 30 litros. El inculo

se propag segn el siguiente protocolo:
- Primero se inocul con un loop de levadura seleccionada a 700 mL de medio de
cultivo.
- Luego de 5 horas se obtuvo una concentracin celular de 2 g/L.
- Posteriormente, los 700 mL se inocularon en 29.3 litros de medio y despus de
10 horas de fermentacin, se obtuvo una concentracin celular de 4 g/L.
Calcule:
a) Velocidad especfica de crecimiento
b) Tiempo de duplicacin
c) Disee el medio de cultivo con glucosa, fosfato de potasio, cloruro de amonio,
sulfato de amonio, cloruro de calcio y cloruro de potasio. Considere al nitrgeno
como limitante para lograr una concentracin de 5 g/L en el reactor.
%C

%N

%P

%K

%S

% Mg

% Ca

52

10

0.1

0.1

0.01