UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

CURSO:

MICROBIOLOGIA AGROINDUSTRIAL

DOCENTE:

ING. ESTACIO ALBORNOZ, Darwin Josu

ALUMNO:

GUERRERO PADILLA, Isabel de Jess

PRACTICA N 5

ESTERILIZACION, PREPARACION Y SIEMBRA DE MEDIOS DE CULTIVO

I.

INTRODUCCION
En esta practica se propuso realizar las muestras, teniendo en
cuenta su esterilizacin para asegurarnos de que no exista ningn
tipo de contaminacin, la preparacin y siembra del cultivo para la
muestra a realizar, teniendo en cuenta el tipo de muestra ya que en
cada agar se pueden sembrar diferentes muestras dependiendo de
su especificaciones del agar, y de esta manera nos aseguramos de
tener un crecimiento optimo.

II.

OBEJTIVOS
- Realizar la esterilizacin adecuada a los materiales
- Conocer los diferentes agares y los tipos de muestra a siembra en
cada medio de cultivo
- Observar e identificar los microorganismos presentes en los
medios de cultivo

III.

MARCO TEORICO
Los microorganismos como otros seres vivos, son susceptibles a los
cambios de condiciones ambientales y en la medida en que se han
podido adaptar a estos cambios, se han distribuido en una gran
diversidad de hbitats incluyendo los de condiciones extremas sobre
todo de tipo fsico y qumico.
Se han desarrollado y aplicado diversos procesos de desinfeccin y
esterilizacin para limitar su presencia o eliminarlos. La esterilizacin
es un mtodo de eliminacin total de todo tipo de organismo y que
asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente, mientras
que la desinfeccin es un proceso que solamente elimina formas
vegetativas de los microorganismos.
La esterilizacin con calor seco y hmedo son los procedimientos de
mayor utilizacin en microbiologa. El calor seco desnaturaliza las
enzimas y destruye a los microorganismos por oxidacin, por ejemplo
al ponerlos directamente a la flama de un mechero o en horno a 150-

180C durante 2 horas. Estos mtodos se aplican principalmente en

la esterilizacin de asa de inoculacin y todo tipo de material de
vidrio y quirrgico.
Los procesos con calor hmedo se aplican para esterilizar medios de
cultivo, soluciones, y cultivos bacterianos que se desechan, el ms
recomendable es el autoclave en el que se utiliza vapor de agua a
presin para alcanzar temperaturas de 121C. El material se deja a
esta temperatura durante 15 minutos para asegurarse de la
destruccin de endosporas, que son las estructuras bacterianas ms
resistentes al calor.
Cuando se requiere esterilizar diferentes materiales sensibles al calor
como las soluciones de vitaminas, aminocidos, etc. Se esterilizan
por filtracin en membranas estriles de 0,2 micras de dimetro y
para el caso de materiales plsticos es recomendable el uso de
gases como xido de etileno o con radiaciones gamma. Las
superficies generalmente se desinfectan con radiaciones U.V. o
compuestos qumicos en forma lquida como: los fenoles,
compuestos cuaternarios de amonio, formaldehido, alcoholes,
halgenos y detergentes
Cada uno de estos procedimientos tiene ventajas y desventajas de
uso, los sistemas de filtracin son muy eficientes y rpidos para la
esterilizacin pero solo se aplican en pequeos volmenes. Los
fenoles y compuestos cuaternarios de amonio son muy efectivos
para la desinfeccin de superficie pero son muy corrosivos. Los
detergentes y los alcoholes tiene actividad limitada contra esporas
bacterianas y algunos virus por lo que solo son desinfectantes
En Microbiologa todas las tinciones se realizan a partir de
suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos
(frotis), secadas y fijadas. La fijacin, procedimiento que permite
preservar estructuras celulares, se puede llevar a cabo con
Reduca (Biologa). Serie Microbiologa. 3 (5): 15-38, 2010
ISSN: 1989-3620
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Diferentes tratamientos: fijacin por calor o fijacin qumica. La
fijacin por calor es la ms utilizada para la observacin de bacterias.
Este procedimiento consiste en pasar el portaobjetos, con la
suspensin bacteriana extendida y seca, a travs de una llama de un
mechero. La fijacin por calor preserva la morfologa externa de los
microorganismos pero no las estructuras internas. La fijacin qumica
con agentes como etanol, folmaldehido y cido actico entre otros
muchos, se utiliza para preservar las estructuras celulares.
Se pueden utilizar dos tipos de procedimientos, la tincin positiva es
la ms frecuente, en ella un colorante se une a ciertas estructuras

microbianas. Todos los colorantes utilizados en microbiologa tienen

en comn la presencia de grupos cromforos, grupos con dobles
enlaces conjugados que son los responsables del color mediante la
unin a estructuras celulares por enlaces inicos, covalentes o
hidrfobos, los que establecen enlaces inicos son los ms
frecuentes. Entre los colorantes que se unen por enlaces covalentes
destaca el reactivo de Schiff, utilizado para la tincin de DNA, donde
el colorante se une a la desoxi-ribosa.
Por otra parte, en la tincin negativa se utilizan compuestos que no
penetran en las clulas sino que impregnan el medio circundante.
Los microorganismos aparecen refringentes sobre un fondo negro.
IV.

V.

MATERIALES
- Guardapolvo
- Agua destilada
- Matraz
- Tubos de ensayo
- Pipetas y micro pipeta
- Vaso precipitado
- Luna de reloj
- Probeta
- Agar Lisina-Hierro
- tomate huevo
- gradilla
- esptula
- autoclave

Mechero
Mascarilla
Guantes
Cofia
Libreta de apuntes
Marcador
Papel aluminio
Papel craft
Hilo pabilo
Algodn
Alcohol
estufa
cocina elctrica

PARTE EXPERIMENTAL
Procedimiento:
- Se lavaron perfectamente las cajas petris y pipetas.
Enjuagamos con abundante agua
- Una vez que se secaron, se procedi a envolver las cajas Petri
y pipeta con papel craft, para los tubos de ensayo pusimos
tampones de algodn, seguidamente envuelto en papel craft,
para los vasos precipitados, matraces y probeta se envolvieron
la parte inferior con papel aluminio.
- Los materiales envueltos en papel aluminio fueron llevados a la
autoclave a una temperatura de 121C durante 15 minutos, y
los que envolvimos con papel craft a la estufa a una
temperatura de 37 C durante 24 horas.
- Se prepar el agar Lisina-hierro, en un matraz de 500 ml el cual
agregamos 270 ml de agua para 8,64 de agar, una vez
homogenizada se llev a la cocina elctrica para calentar y
luego enviar a la autoclave.

VI.

Se prepar la peptona para los tubos de ensayo el cual se

utiliz 1ml para el tubo de ensayo, previamente autoclavada la
peptona
Cuando ya el agar este listo se vaca en las cajas petris,
previamente rotuladas, aprox. 25-30ml, dejamos que solidifique
para poder sembrar nuestra muestra

RESULTADOS
- En cuanto al crecimiento de medios en la caja Petri, se observo
un crecimiento abundante.

Al tomar las muestras se pudo observar la presencia de vibrios

VII.

CONCLUSION
- De acuerdo con lo realizado en la presente prctica se
concluye que es de gran importancia preparar adecuadamente
los medios de cultivo, aadir la cantidad de solucin exacta y
disolverla correctamente para obtener los resultados esperados

VIII.

DISCUSION
- Dentro del marco de discusin podemos enmarcar diversos
aspectos importantes y fundamentales de la prctica.
Destacamos el resultado positivo sobre los medios de cultivo, ya
que en l aplicamos toda la teora estudiada en la clase, es decir,
los diversos modos de cultivo fueron necesarios para hacer
comparaciones entre ellos, y de esta manera definir el que se
acomodara de mejor forma a la prctica que elaboraramos

IX.

BIBLIOGRAFIA
- Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual
de Mtodos Generales (2da edicin). Facultad de Farmacia.
Universidad Central de Venezuela.
- Madigan, M.T., Martinko, J. M., Dunlap, P.V., Clark, D.P. (2009).
Brock. Biologa de los Microorganismos. 12 ed. Pearson Prentice
Hall. Espaa.
- Pedro Garca Y Fernando Paredes 1994.Microbiologia Clnica
(Practica) 2 Edicin. UNIVERSIDAD DE CADIZ