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Preparo
do
Inculo
Fase de
Laboratrio
Fase
Industrial
Ar/Esterilizao
Preparo do meio
de cultura/
Esterilizao
Fermentao
Controle
Processos de
Separao,
Purificao e
Tratamento
Resduos
Produtos
Sub-produtos
Substratos
(Si)
Clula
Produtos
(Pi)
Clulas
Substratos
Clulas
Crescimento Celular
Liberao de Produtos e Metablitos
Consumo de Substrato
Modo de Operao
Tipos de
processos
fermentativos
descontnuos
contnuos
PREPARO DO INCULO
Inculo: suspenso celular com concentrao
adequada para garantir a fermentao de um
dado volume de mosto, em condies
econmicas
Volume do inculo:
til do fermentador
Incubao
Cultura
pura
Volume de
meio = V1
Incubao
Volume de
meio = V2> V1
Volume de
meio = V3> V2
Fase de Laboratrio
Fase Industrial
Dornas
Incubao
Volume de
meio = V4> V3
Volume de
meio = V5> V4
A taxa de crescimento
varia de acordo com a
fase do crescimento
Curvas de X, S e P em funo de t
Consumo de substrato:
S = (1/X)(dS/dt)
Formao de produto:
P = (1/X)(dP/dt)
Razo do uso das velocidades especficas:
A concentrao de clulas pode sofrer variao considervel em um pequeno
intervalo de tempo. Aumento da concentrao do complexo enzimtico
responsvel pela transformao do substrato S no produto P
E
=0
= MAX
=0
F
< MAX
< MAX
< MAX
Tempo de Cultivo
- taxa especfica de crescimento celular:
A: fase de latncia ou lag
B: fase de acelerao
C: fase log ou exponencial
D: fase de desacelerao
= (1/X) dX/dt
E: fase estacionria
F: fase de declnio ou morte celular
log (no de
clulas)
utilizao
da fonte C2
utilizao
da fonte C1
tempo
Crescimento exponencial :
dX/dt = X
X: concentrao celular
t: tempo de cultivo
= max
td = (ln 2)/max
Metablitos Primrios
Metablitos Secundrios:
Produtos gerados
na fase de crescimento
exponencial
No associados ao crescimento;
Muitos metablitos apresentam
maior produo na fase
estacionria
ln X
tempo
aumentar
dN/dt = -k N
Forma integrada:
N = Ns e-kt
onde: N: concentrao de clulas viveis
Ns: concentrao de clulas viveis no final da
fase estacionria
YX/S = - X/S
YP/X = P/X
YP/S = - P/S
Os coeficientes de
rendimento aparentes no
so constantes verdadeiras
Substrato
Biomassa
Produto extracelular
Clula
Energia para crescimento
Energia manuteno
ST =
X
=
TERICO
X
=
( + )
OBSERVADO
X : Variao de Biomassa
material de interesse
(manuteno)
EXERCCIO:
Rendimento Terico (Y) X Aparente (Y)
A reao para a produo aerbica do cido actico a partir
do etanol :
C2H5OH + O2 CH3CO2H + H2O
(etanol)
(cido actico)
A bactria Acetobacter aceti adicionada em um meio
vigorosamente aerado contendo etanol a uma concetrao
inicial de 10 g/l. Aps algum tempo, a concentrao de etanol 2
g/l e a Concentrao de cido actico produzido 7,5 g/l.
Compare o rendimento aparente com o terico.
Explique a razo das diferenas ou semelhanas dos valores
encontrados.
qP = (1/X)(dP/dt) = Yp/x
X
ou
P
tempo
ou
P
qP = X +
Exemplo:
cido ltico
tempo
qP = = constante
X
ou
P
tempo
Mtodo de plaqueamento;
Medida da massa seca
DETERMINAO DA
CONCENTRAO DE CLULAS
MTODOS
Diretos: determinao da populao total e/ou do
nmero de clulas viveis (sujeitos a interferentes)
Indiretos : baseados na medida de consumo de
substrato e/ou na formao de produtos
MTODOS DIRETOS
1. Mtodo do Hemocitmetro de Fluxo
O mecanismo envolve a passagem de clulas
individuais transversalmente ao feixe de luz laser.
Aplicvel a meios de
cultura sem outras
partculas suspensas
Pode-se usar corantes
para se distinguir entre
clulas vivas e mortas
(clulas totais e clulas
viveis)
MTODOS DIRETOS
2. Mtodo de Plaqueamento
Placas de Petri com meio de cultura gelificado so usadas para
a contagem de clulas viveis (capazes de se reproduzir)
MTODOS DIRETOS
3. Medida da Massa Seca
Aplicvel a meios de cultura sem outras partculas
suspensas.
Centrifugao
Determinao
rpida:
volume empacotado
Filtrao
Secagem
80oC, 24 h
Massa
seca
celular
MTODOS INDIRETOS
Mtodos Indiretos:
Baseados na medida de consumo de
substrato e/ou na formao de
produtos
Monitoramento de componentes intracelulares:
DNA, protenas, RNA, ATP, NADH E outros
Quantificao de substratos:
Oxignio, fontes de carbono, fontes de nitrognio
Quantificao de produtos:
Etanol e cido ltico (processos anaerbios);
CO2 (processos aerbicos);
H+ (queda no pH resultante do uso de amnio)
Monitoramento da viscosidade:
Aumento: Crescimento de miclios
Formao de polissacardeo extracelular
Reduo: substrato = polmero biodegradvel
Bibliografia recomendada
- DORAN, P. M. - Bioprocess Engineering Principles, 2a edio,
Editora Academic Press Ltd., London, 1997. cap. 11
- SHULER, M. L.; KARGI, F. - Bioprocess Engineering Basic
Concepts, Editora Prentice- Hall International Inc., Englewood Cliffs,
1992. 2a. Edio cap. 6