Revista ALEIQ

Revista de la Asociación Latinoamericana de Estudiantes

de Ingeniería Química y Ramas Afines

Volumen 1, Número 1

2010
 UTILIZACIÓN DEL DERIVADO DE TANINO EN LA PURIFICACIÓN DE HIDROLIZADO DE
BAGAZO DE CAÑA

Leonardo de Lima Noronha

Luís Fernando Figueiredo Faria

Escuela de Ingeniería de Lorena – USP

Este trabajo tiene por objetivo evaluar la eficiencia de purificación de un agente coagulante
derivado del tanino durante el tratamiento del hidrolizado ácido de bagazo de caña no
concentrado, visando su purificación. El bagazo de caña, cuando hidrolizado en medio ácido
en condiciones adecuadas, es capaz de fornecer una solución rica en xilosa. Este importante
carbohidrato puede ser convertido en otras substancias de interés económico como el etanol,
el xilitol, entre otras, a través de fermentación por microorganismos específicos. Sin
embargo, este proceso de hidrolice también produce una serie de impurezas junto al
hidrolizado. En su mayoría, estas impurezas son compuestos fenólicos, ácido acético,
furfural y hidroximetilfurfural. En este trabajo es investigada la acción de purificación del
derivado de tanino, por la técnica de coagulación y precipitación. El agente coagulante
utilizado fue el Biosugar®, un producto comercial compuesto de un polímero catiónico
derivado del tanino presente en el extracto acuoso vegetal de la cáscara de la Acacia Negra
(Acacia mearnsii De Wild). Los experimentos propuestos fueron basados en una
planificación experimental del tipo factorial completa 23 con tres experimentos en el punto
central, teniendo como variables la concentración del coagulante (0 a 200 mg/L), el pH (5 a
9) y la temperatura (25 a 55°C). Como variable de respuesta fueron evaluadas las
reducciones de compuestos fenólicos y del área espectral. Al final, basado en las
informaciones obtenidas por el tratamiento estadístico propuesto, fue posible indicar que el
factor más influyente para las variables de respuesta fue el pH, y los mejores resultados
(remociones de 68,7% y 70,9% en compuestos fenólicos y área espectral, respectivamente)
fueron obtenidos en el medio alcalino. La concentración del derivado de tanino y la
temperatura también se mostraron influyentes.

Palabras Claves: hidrolizado de bagazo, coagulación, precipitación, tanino, xilosa.

1. INTRODUCCIÓN hidrolice ácida es posible extraer hasta un 80% de las

La gran vocación de Brasil para la agricultura
sucroalcoholera, aliada a sus dimensiones
continentales, hace de él el mayor productor de caña-
de-azúcar del mundo. Para la cosecha 2008/2009
siendo estimada una producción de 572,5 millones de
toneladas, superior en 15,5% a la cosecha de
2007/20088. A pesar de generar riquezas y desarrollo
para el país, tales cifras traen como consecuencia un
gran problema, que es la generación de 128 millones
de toneladas de bagazo al año. En su mayor parte este
subproducto es aprovechado por la propia industria,
sin embargo aún hay un excedente que preocupa a los
ambientalistas, principalmente debido al riesgo de
combustión espontánea14.
Esta gran parcela no utilizada del bagazo de caña-de-
azúcar presenta gran potencial de aprovechamiento
debido a su composición química (celulosa,
hemicelulosa y lignina) una vez que, a través de la
pentoses de la fracción hemicelulósica en forma de
xilosa1, un azúcar utilizado en procesos de
bioconversión. A través de la fermentación de la
xilose se obtienen productos de alto valor agregado
como el etanol y el xilitol 3. Diversos trabajos vienen
siendo desarrollados con el objetivo de evaluarse la
producción a partir del bagazo de la caña utilizando
proceso de bioconversión de la xilose, contenida en
diversos hidrolizados hemicelulósicos, a través de
levaduras, lo que podría aumentar en cerca de un
30% la cantidad de etanol producida, sin la expansión
del área plantada2.
Aunque con muy buen futuro, el proceso
fermentativo de producción de xilitol y etanol a partir
del hidrolizado hemicelulósico también presenta
limitaciones, principalmente cuanto a la
productividad, debido principalmente a la presencia
de compuestos inhibidores del metabolismo
microbiano. Entre estos contaminantes están el ácido
acético, los compuestos fenólicos, el furfural, el analizadas fueron: pH (ajustado con óxido de calcio),
hidroximetilfurfural y los metales pesados temperatura y concentraciones del polímero vegetal.
provenientes del suelo utilizado para cultivo y de los Después del ajuste del pH, el hidrolizado fue filtrado
equipos envueltos en el procesamiento de la caña y al vacío para posterior utilización del agente
del bagazo7. Con el objetivo de minimizar el efecto coagulante. Los niveles utilizados están presentados
de la toxicidad del hidrolizado de bagazo de caña en la Tablilla 1 y los experimentos realizados en la
sobre la fermentación, diversos tratamientos físico- Tablilla 2. El tiempo de agitación fue estipulado en 1
químicos están siendo empleados, tanto para la minuto de agitación rápida e 15 minutos de agitación
transformación de inhibidores en compuestos lenta 6.
inactivos como por la remoción de estos, con la
finalidad de dar a estos substratos condiciones de ser Tablilla 1. Niveles y parámetros utilizados.
utilizados13.
Niveles pH Temperatura (ºC) Coagulante (ppm)
Colaborando con el objetivo arriba, en el presente - 5 25 0
trabajo fue estudiado el tratamiento del hidrolizado + 9 55 200
de bagazo de caña-de-azúcar por el método de 0 7 40 100
coagulación y precipitación de impurezas coloidales
utilizando un polímero vegetal derivado de taninos, el
Tablilla 2. Ensayos evaluados en el tratamiento
Biosugar®.
estadístico.
2. MATERIALES Y MÉTODOS
Ensayos pH Temperatura Coagulante
1 - - -
2.1 Materiales
2 + - -
Bagazo de caña-de-azúcar in natura proveniente de la 3 - + -
Usina Azucarera Furlan S/A. 4 + + -
Óxido de calcio comercial. 5 - - +
Coagulante: Biosugar®, gentilmente cedido por la 6 + - +
Acquaquímica Ltda. 7 - + +
8 + + +
2.2 Obtenciones del Hidrolizado Hemicelulósico 9 0 0 0
(H0) 10 0 0 0
11 0 0 0
El hidrolizado fue obtenido por hidrolice ácida del
bagazo de caña en reactor de acero inoxidable AISI 2.4 Métodos Analíticos
316 con volumen útil de 250 L, equipado con camisa
de aceite térmico para calentamiento indirecto. El 2.4.1 Determinación del tenor de carbohidratos
reactor fue operado en régimen descontinúo
empleándose las siguientes condiciones de hidrolice: A determinación del tenor de carbohidratos en el
temperatura de 121ºC; tiempo de reacción de 10 hidrolizado fue hecha por HPLC. Una alícuota de 5
minutos; 100 mg de ácido sulfúrico (98%) para 1g de mL de la solución fue filtrada en [membranas de
bagazo (materia seca) y una proporción entre masa 0,45µm, cartucho] Sep Pak C18 y analizada en un
seca de bagazo y volumen de solución ácida de 1:10. cromatógrafo Shimadzu modelo CR 7A, empleando
El hidrolizado obtenido fue centrifugado en un detector de índice de refracción Shimadzu RID-
centrífuga industrial y almacenado en cámara fría. 6A y una columna Aminex HPX 87H (300x7,8mm,
BIO-RAD). Como fase móvil fue empleado H2SO4
2.3 Coagulación y Precipitación Selectiva de 0,005 mol.L-1 con flujo de 0,6 mL.min-1 a 45ºC.
Impurezas Coloidales.
2.4.2 Determinación del tenor de furfural y
El hidrolizado fue sometido a la coagulación y hidroximetilfurfural
precipitación de las impurezas coloidales para fines
de determinar la mejor condición experimental para Los productos de descomposición de los azúcares
mayor remoción de impurezas y obtener, así, el (furfural y hidroximetilfurfural) presentes en el
hidrolizado H1. En esta etapa fue utilizada una hidrolizado ácido fueron analizados por HPLC
planificación factorial completa 23 con tres utilizándose un cromatógrafo Shimadzu modelo CR-
repeticiones en el punto central. Las variables 7A con detector de UV visible marca Shimadzu
modelo SPD-10A empleando una columna RP-18 (C-
18) de 125x4 mm (Hawlett-Packard), y como fase
móvil, solución se acetonitrila/agua 1:8 (v/v) con 1%
de ácido acético, en un flujo de 0,8 mL.min-1 a 25ºC.
2.4.2 Determinación de compuestos fenólicos
Para determinación de compuestos fenólicos totales
(lignina soluble), una alícuota de 0,5 mL del
hidrolizado obtenido fue alcalinizada con NaOH 6,5
mol.L-1 hasta alcanzar pH 12,5 y diluida en balón
volumétrico de 100 mL. Esta solución fue analizada
por espectroscopia de UV, determinándose la
absorbancia de la solución en largo de onda 280 nm.
Fue usada agua destilada con pH=12,5 como
referencia. La concentración de compuestos fenólicos
fue determinada a partir de la ecuación 110.
Ccf = 4,187x10-2(Acf280-Apd280) – 3,279x10-4 (1)
Donde:
Ccf = concentración de compuestos fenólicos en g.L-1.
Acf280 = absorbancia de la solución de compuestos
fenólicos, en 280nm.
Apd280 = c1ε1 + c2ε2: absorbancia, en 280nm, de los
productos de descomposición de los azúcares
(furfural y hidroximetilfurfural), cuyas
concentraciones c1 y c2 fueron determinadas
previamente por HPLC y ε1 y ε2 fueron determinados
espectrometría de UV y valen, respectivamente,
146,85 y 114,00 L/(g.cm).
2.4.4 Determinación del área espectral
A través do espectrofotómetro Varian, modelo Cary
50, fue hecha una barredura en el espectro visible
(largo de onda de 400 a 700 nm), utilizando una
alícuota de 1 mL de las muestras del hidrolizado
después de su purificación, diluida en balón
volumétrico de 25 mL. El área abajo de la curva de
absorbancia fue calculado y analizado en función de
su reducción en relación al hidrolizado original.
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
3.1 Obtención del Hidrolizado Hemicelulósico.
Fueron realizadas tres series de hidrolice, en las
cuales fueron utilizados 18,36 kg de bagazo seco. En
las dos primeras series fueron extraídos 105 L de
hidrolizado hemicelulósico y en la última se obtuvo
100 L de esta solución.
El ácido sulfúrico utilizado en la hidrolice del bagazo
de caña es responsable por la quiebra de las
ligaciones entre los monómeros de azúcar de la
cadena polimérica de la hemicelulosa y celulosa y,
así, por la liberación de varios compuestos como
azúcares (xilose, glicose y arabinose), olí gomeros,
furfural, hidroximetilfurfural, ácido acético y aún,
íons de metales pesados provenientes de la corrosión
de los equipos y del suelo.
Los volúmenes de las tres series fueran almacenados
en cámara fría. Antes de su utilización, el hidrolizado
fue homogenizado y filtrado a vacío, retirando
algunas impurezas que fueron solubilizadas durante
el período de estoque. A partir de la caracterización
de este hidrolizado los tenores de los principales
compuestos fueron determinados (Tablilla 3).
Tablilla 3. Composición y características físicas del
hidrolizado hemicelulósico H0.
Parámetros Hidrolizado H0
pH 0,87
Glicose (g/L) 1,34
Xilose (g/L) 15,76
Arabinose (g/L ) 2,03
Acido Acético (g/L) 3,24
Furfural (g/L) 0,02
Hidroximetilfurfural (g/L) 0,06
Compuestos Fenólicos (g/L) 4,25
Área Espectral (u.a.) 12,94
Se observa a partir de la Tablilla 3 que la xilose es el
azúcar predominante, siendo esta una característica
deseable para las bioconversiones a partir de este
azúcar, una vez que la presencia de glicosa pode
inhibir el metabolismo de la xilose en las levaduras9,
siendo esta inhibición dependiente de la
concentración de esa hexose en el medio de
fermentación11.
También es posible notar que la presencia de
compuestos tóxicos inhibitorios a la actividad
fermentativa se presenta en valores significativos con
relación a masa seca, como los compuestos fenólicos
(15,9%), el ácido acético (12,1%), el furfural (0,1%)
y el hidroximetilfurfural (0,2%).
Ha sido presentado en la literatura que las
concentraciones de esos compuestos en los
hidrolizados hemicelulósicos varían en función del
tipo de material lignocelulósico y de las condiciones
hidrolíticas empleadas para la extracción de la
fracción hemicelulósica12. Las concentraciones de
furfural y hidroximetilfurfural confirman la
degradación parcial de las pentoses y hexoses
presentes en el hidrolizado hemicelulósico.
La obtención de un hidrolizado con 15,76 g/L de
xilose representa una hidrolice aceptable cuando
comparado con datos de la literatura5. Esta
concentración de xilose menor de lo que esperada
está directamente relacionada con problemas Tablilla 5. Determinación de los valores de t y del p-
operacionales durante el descargue del reactor que, valor de cada término para la respuesta tenor de
debido a limitaciones en la abertura de la válvula de compuestos fenólicos.
descarga, imposibilita la retirada de parte del
hidrolizado que queda impregnado (absorbido) en la Error
Factores Coeficientes t p-valor
celulignina residual y en las condiciones de Padrón
almacenamiento del hidrolizado. Media 1,9434 0,0086 225,94 0,001
pH -0,5880 0,0086 -68,36 0,001
3.2 Coagulación y Precipitación Selectiva de
Temp. 0,0112 0,0086 1,30 0,323
Impurezas Coloidales
Coagulante -0,0225 0,0086 -2,61 0,121
El hidrolizado fue sometido a la coagulación y pH x Temp. -0,0030 0,0086 -0,34 0,764
precipitación selectiva de impurezas coloidales. pH x
0,0056 0,0086 0,65 0,584
Muestras de los 11 experimentos realizados fueron Coagulante
analizadas a través de la reducción tanto de fenólicos Temp. x
totales cuanto del área espectral (Tablilla 4). -0,0409 0,0086 -4,76 0,041
Coagulante
pH x Temp. x
Tablilla 4. Condiciones experimentales de la 0,0291 0,0086 3,39 0,077
Coagulante
planificación factorial completa, tenor de compuestos
fenólicos y área espectral al final de cada tratamiento.
Tablilla 6. Determinación de los valores de t y del p-
Temp. Coagulante C. Fenólicos Área Espec. valor de cada término para la respuesta área espectral.
Ensayos pH
(ºC) (ppm) (g/L) (u. a.)
1 5 25 0 2,48 65,96 Error
2 9 25 0 1,35 5,14 Factores Coeficientes t p-valor
Padrón
3 5 55 0 2,64 51,65 Media 26,50 0,4356 60,84 0,001
4 9 55 0 1,39 5,36 pH -21,89 0,4356 -50,25 0,001
5 5 25 200 2,56 38,83
Temp. -2,03 0,4356 -4,66 0,043
6 9 25 200 1,34 4,19
7 5 55 200 2,45 37,12 Coagulante -5,52 0,4356 -12,68 0,006
8 9 55 200 1,33 3,76 pH x Temp. 1,98 0,4356 4,54 0,045
9 7 40 100 1,33 6,51 pH x
4,89 0,4356 11,22 0,008
10 7 40 100 1,32 8,93 Coagulante
11 7 40 100 1,37 8,11 Temp. x
1,49 0,4356 3,43 0,076
Coagulante
A través de los resultados de las concentraciones de pH x Temp. x
-1,66 0,4356 -3,80 0,063
compuestos fenólicos y área espectral y con el uso Coagulante
del software Minitab fueron calculados los
coeficientes y sus respectivos errores, con los cuales Colaborando con eso, el gráfico de Pareto para la
fue posible estimar el p-valor, responsable por la variable de respuesta área espectral indica que los tres
determinación de la significancía de cada variable en factores escogidos presentan aisladamente
análisis (Tablillas 5 y 6). significancia estadística. Sin embargo, para ambas
variables de respuesta podemos afirmar que el pH
En este tratamiento estadístico fue utilizado un nivel fue el factor más significativo y, por su vez, la
de confianza de 95% (p<0,05). Con auxilio de los temperatura presentó menor importancia bajo los
valores de t fueron establecidos los diagramas de resultados. Debido a esa baja significancia, en futuros
Pareto (Fig. 1 e 2). A través de los diagramas y trabajos la variación de la temperatura puede ser
abalizando la variable de respuesta compuestos desconsiderada.
fenólicos el factor pH presentó significancia junto
con el efecto combinado entre la temperatura y la Todavía, por medio de los resultados obtenidos, fue
concentración del derivado de tanino. señalada la probabilidad normal, donde los valores no
Frente a estos resultados y de acuerdo con la significantes para el modelo evaluado se encuentran
literatura, también se deben considerar significativos próximos a la recta (Fig. 3 y 4). Basado en el análisis
los valores individuales de cada factor que generaron de todos los datos fornecidos por el tratamiento
el efecto combinado4. estadístico es posible constatar que la región que
indica menores concentraciones de fenólicos totales
se encuentra en pH neutro a alcalino.
Fig. 1. Diagrama de Pareto en función de
los efectos de la concentración de los compuestos
fenólicos para la planificación factorial.
Fig. 2. Diagrama de Pareto en función del
Área Espectral para la planificación factorial.
El ensayo que presentó el mejor resultado fue el
décimo, mostrando una reducción de compuestos
fenólicos de 68,9%. Sin embargo, por ser este un
ensayo del punto central hecho en triplicata, la media
de reducción de compuestos fenólicos fue de 68,5%.
Esto hace con que el resultado del ensayo 8 (68,7%
de reducción) es más efectivo en la purificación. El
mismo, el mejor resultado de remoción de área
espectral fue también fornecido por este ensayo, que
fue de 70,9%.
Vale destacar que la variación del área espectral, en
algunas de las condiciones estudiadas presentan un
comportamiento distinto de la variación de
compuestos fenólicos, principalmente en pH ácido.
Partiendo del hidrolizado original con pH=0,82 y
aumentando el pH hasta 9 fue constatado que
inicialmente hay un aumento del área espectral, en
torno del pH=5 para, posteriormente, haber una
reducción. Ese hecho puede ser explicado por el
aumento de la intensidad de absorción de los
cromóforos presentes, aunque haya formación de
precipitado y disminución de la cantidad de
cromóforos en suspensión. Esa absorción por parte de
los cromóforos varia con la concentración de H+,
teniendo un máximo próximo do pH=5.
Fig. 3. Probabilidad normal en función de
los efectos de la concentración de los compuestos
fenólicos para la planificación factorial.
Fig. 4. Probabilidad normal en función del
Área Espectral para la planificación factorial
Para trabajos futuros, se sugiére una expansión de la
banda de concentración del agente coagulante
derivado del tanino, y también de la banda de pH.
 4. CONCLUSIONES
La planificación factorial fue de gran importancia
para delinear estadísticamente la mejor condición de
remoción de compuestos fenólicos y área espectral.
El ensayo más eficiente de coagulación y
precipitación fue el octavo (pH=9, temperatura de
55ºC y concentración de derivado de tanino de 200
mg/L) y ha reducido 68,7% de los compuestos
fenólicos en el hidrolizado. La reducción de la zona
espectral fue satisfactoria, considerando que en la
prueba 8 hay una mayor reducción, 70,9%.
El pH se ha mostrado bastante influyente cuando
alcalino, por tanto, esa banda debe ser mejor
estudiada. El derivado de tanino fue eficiente como
un agente coagulante y con respecto a su
concentración se recomienda que se trabaje con
niveles más elevados, con la intención de aumentar
su influencia en la purificación del hidrolizado.
5. GRACIAS
Escuela de Ingeniería de Lorena – Universidad de
São Paulo (EEL-USP).
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