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MICROSCOPIA
INTRODUCCIN
Existen diversos mtodos de estudio de la clula y de los tejidos, el principal instrumento para
investigar estas estructuras es el microscopio; existen as diferentes tipos, dependiendo de la
estructura y tamao de las muestras.
Los microscopios ms importantes son el ptico y el electrnico, cada uno de estos tienen sus
extensiones correspondientes como por ejemplo:
Microscopia ptica - de contraste
- de fase
- de interferencia
- entre otros.
Microscopia electrnica - de transmisin
- de alta aceleracin
- de barrido
Ambos instrumentos tienen que utilizar diversas tcnicas preparatorias, cada una
dependiendo del microscopio, estas tcnicas son:
a) fijacin
b) inclusin
c) corte
d) tincin
cada tcnica la conoceremos en profundidad en el proceso de observacin de tejido de este
informe, donde veras gracias a estas tcnicas preparatorias cada estructura muy bien
definida, gracias al tipo de tincin.
Gracias a este tipo de instrumentos y sus diversas especialidades podremos ver y estudiar
con mayor facilidad las clulas y tejidos.
UNIDADES MICROSCOPICAS
Prefijo
Abreviatura
Valor
yotta
10
24
zetta
10
21
exa
10
18
peta
10
15
tera
10
12
giga
10
mega
10
kilo
10
hecto
10
deca
da
10
Sin prefijo
Sin abreviatura
deci
10
-1
centi
10
-2
mili
10
-3
micro
10
-6
nano
10
-9
pico
10
-12
femto
10
-15
atto
10
-18
zepto
10
-21
yocto
10
-24
Las unidades micromtricas utilizan los prefijos micro, nano, pico, femto, atto, zepto,
yocto.
La unidad Angstrom (A) equivale a una diezmillonsima parte del metro, es decir 10
10
metros
MEJOR RESPUESTA
El sistema internacional de medidas incluye muchas unidades posibles para medir enormes y
minsculas magnitudes. stas pueden expresar valores desde el la distancia o la masa hasta la
frecuencia o la luminancia.
Para las distancias:
- La unidades macroscpicas se utilizan para medir grandes distancias como las astronmicas y se
suelen emplear los kilmetros, aunque se expresen en millones, o hablar directamente de
"aos/luz", que es la distancia que recorrera la luz en un ao (9.460.800.000.000 Km)
- Para medir pequeas distancias se usan las medidas microscpicas, pueden servir los
micrometros (0.000001 metros), nanmetros (0.001 micrometros) o los picometros (0.001
nanmetros). Las medidas inferiores a esto son muy poco frecuentes en el mundo cientfico, ya que
con esos rdenes pueden tratarse los comportamientos de las partculas ms pequeas que
existen.
TIPOS DE MICROSCOPIA
2-
3-
Con ste mtodo, el material denso aparece brillante, mientras que las
partes de la clula que tienen una densidad parecida a la del agua (casi
nula) aparecen oscuras.
Se utiliza para visualizar microorganismos y estructuras celulares sin
necesidad de usar colorantes o matarlos.
de Nomarsky
Utiliza luz polarizada
La luz pasa por un prisma dividindolo en 2 rayos que pasan por la
muestra
5-
6-
Microscopio Confocal
Microscopa ultravioleta
1-
Microscopio de Fluorescencia
Microscopa electrnica
Usa chorros de electrones
Disminuye el poder de resolucin, por lo que aumenta la calidad
o nitidez de la muestra a observar.
La longitud de onda se rebaja a 0.04nm
1-
2-
no membransos, salvo los Plastidos propio de las vegetales y el centrosoma propio de las
animales, el sistemas de endomembranas y la divisin celular por Mitosis o Cariocinesis en clulas
Somticas o formadoras del cuerpo y por Meiosis las clulas germinales o gametas( vulo y
espermatozoide).
Toda montura, por complicada que sea posee los siguientes elementos:
pie o base, mecanismo de enfoque, la platina, el revlver y el tubo del
ocular.
4.3.2.-Mecanismo de enfoque
Se logra desplazando en sentido vertical ya sea la platina donde se
coloca el espcimen o ya sea el revlver donde estn colocados los
objetivos, de modo que se pueda centrar el punto focal del objetivo que
se est utilizando es ese momento. Se logra mediante dos mecanismos,
primero uno rpido del tornillo macromtrico y segundo, otro lento del
tornillo micromtrico.
La cremallera que permite el movimiento rpido del tornillo macromtrico
posee dientes que se engranan y producen un movimiento tosco para
4.3.3.-La platina
Es el soporte horizontal donde se colocan las preparaciones histolgicas.
Presenta en el centro un orificio circular por donde pasa el rayo de luz
producido por la fuente luminosa y proveniente del condensador.
Generalmente es de forma cuadrada y posee un sistema de fijacin e
inmovilizacin de la lmina porta-objeto compuesto por pinzas o una
pieza articulada que esta fija a otro dispositivo, el carro.
Este dispositivo permite el examen metdico y completo de la
preparacin al proporcionar un desplazamiento hacia adelante o hacia
atrs y de derecha a izquierda y viceversa.
Otra pieza, el vernier (denominado as gracias al nombre de su inventor
en 1631), tambin llamado nonius, consiste en dos pequeas reglas
graduadas en milmetros cuya finalidad es la de obtener coordenadas
aproximadas que sirven de referencia para localizar una estructura
determinada en la preparacin. En la prctica, el uso del vernier no es
frecuente, se hace un poco complicado anotar las cifras y ms difcil an
colocarlas en las reglas y localizar la estructura en cuestin. Adems,
4.3.4.-El revlver
Considerado como un accesorio del tubo. Es un implemento muy
importante que permite el intercambio rpido de objetivos mediante un
movimiento de rotacin. El revlver est constituido por una semi-esfera
que posee una serie de anillos en los cuales van atornillados los
objetivos. Esta pieza gira alrededor de un eje que est colocado en la
parte inferior del tubo. Puede ser de diversas formas y de igual manera,
alojar un nmero variable de objetivos (dos, tres, cuatro o ms).
4.3.5.-El tubo
Soporta la porcin ptica del microscopio. Es un cilindro hueco de
longitud variable, cuyo interior est pintado de negro mate y posee un
diafragma para impedir la formacin de reflejos y facilitar la observacin.
El tubo puede ser doble y alojar dos lentes oculares (microscopio
binocular). En los modelos de microscopios grandes destinados a la
microfotografa, hay un tercer tubo accesorio, generalmente ms largo y
vertical que sirve para conectar una cmara fotogrfica sin necesidad de
lente ocular.
4.4.-Sistema ptico del microscopio
Los microscopios modernos estn diseados para proporcionar
imgenes aumentadas y ntidas de los especmenes que se observan.
Los componentes pticos estn colocados en una base estable que
permite un intercambio rpido y un alineamiento preciso. El sistema
ptico est constituido por dos juegos de lentes: El objetivo y el ocular.
4.4.1.-Los objetivos
Representan el componente ptico ms importante del microscopio. Su
principal funcin consiste en colectar la luz proveniente del espcimen y
proyectar una imagen ntida, real, invertida y aumentada hacia el cuerpo
del microscopio.
Constituyen un sistema ptico formado por una o varias lentes, las cuales
deben estar centradas y los ejes pticos de cada una deben coincidir
exactamente para formar el eje ptico del sistema. Sus lentes estn
hechas a partir de cristales (espatos, fluorita, entre otros) con un alto
grado de calidad y funcionamiento; su precio depende del poder de
aumento, resolucin y de la correccin de las aberraciones. Muchos
fabricantes elaboran objetivos que pueden ser intercambiados y
empleados en microscopios de otras marcas comerciales.
Clasificacin:
Tomando en cuenta el grado de correccin de las aberraciones hay dos
categoras de objetivos para el microscopio, los objetivos acromticos y
los objetivos apocromticos. En cada categora se distinguen an dos
grupos, los objetivos secos y los objetivos de inmersin (64, 65, 66):
Objetivos acromticos: Presentan correccin cromtica para la luz azul
y roja. Correccin de esfericidad para el verde. Dan mejores resultados
con filtro de luz de color verde y son ideales para microfotografa blanco y
negro. Se asume que un objetivo es acromtico cuando no posee
ninguna denominacin.
Objetivos semi-apocromticos: Elaborados a partir de cristales de
fluorita. Corrigen para el azul, el rojo y en cierto grado para el verde. La
correccin de esfericidad es para dos colores, el verde y el azul. Dan
buenos resultados con luz blanca y estn mejor diseados para la
microfotografa en colores.
Objetivos apocromticos: Poseen el ms alto nivel de correccin de
aberraciones y por ello, son ms costosos. Presentan correccin
cromtica para cuatro colores (azul oscuro, azul, rojo y verde); correccin
de esfericidad para dos o tres colores. Son los mejores objetivos para
microfotografa y video a color. Debido a su alto grado de correccin,
estos objetivos poseen mayores aperturas numricas que los
acromticos y las fluoritas. Esto puede ser un inconveniente puesto que
el campo de observacin se presenta un poco curvo.
Los tres tipos de objetivos proyectan imgenes con cierta distorsin que
se manifiesta como curvaturas y al ser corregidos para este defecto se
denominan plan-acromticos, plan-fluoritas o plan-apocromticos.
Objetivos secos y objetivos de inmersin:
Estos objetivos difieren entre s por la naturaleza del medio interpuesto
entre el cubre-objeto de la lmina histolgica y la lente frontal del
objetivo. En los objetivos secos el medio interpuesto es el aire cuyo
ndice de refraccin (n=1) es muy diferente del ndice del vidrio porta y
cubre-objeto (n=1,5). Por el contrario, en los objetivos denominados de
inmersin el medio que separa al cubre-objeto de la lente frontal del
objetivo es un lquido cuyo ndice de refraccin es lo ms prximo al del
vidrio. Este lquido puede ser agua destilada (n=1,33) o mejor an aceite
de cedro, que posee un ndice de refraccin (n=1,515) casi idntico al del
vidrio.
La ventaja de los objetivos de inmersin consiste en la disminucin o
eliminacin de la refraccin de los rayos luminosos entre el aire y el
objetivo, en consecuencia la luminosidad de la imagen est aumentada,
mientras que en los objetivos secos, est disminuida. El empleo de la
inmersin aumenta el ngulo de apertura del objetivo y permite mayor
resolucin gracias a la captura de una mayor cantidad de rayos
luminosos refractados (11, 64) (ver fig. 3-5) y solo puede utilizarse con
objetivos de mayor aumento.
ptica finita y ptica infinita:
La microscopia de luz o fotnica ha experimentado cambios radicales en
sus sistemas pticos en los ltimos aos. El tubo que soporta tanto el
revlver por un extremo, como el ocular por el otro, se confeccionaba con
una determinada longitud y los fabricantes elaboraban objetivos que
funcionaban para esa longitud (longitud finita) que fue estandarizada a
160mm y en algunos casos (Leitz) a 170mm. En muchos modelos de
microscopios modernos el tubo no es rectilneo y los rayos de luz
transmitidos desde el objetivo hacia el ocular son desviados por prismas,
especialmente en los microscopios trinoculares para fotografa. Emplear
objetivos diseados para una determinada longitud de tubo en otro
microscopio que no corresponda produce incremento en las aberraciones
de esfericidad, ocasionado por una longitud de tubo diferente.
Los microscopios modernos poseen un ensamble complejo de lentes,
espejos y prismas que transmiten la luz desde el objetivo al ocular y
Cdigo de color
de inmersin
Medio de inmersin
Negro
Aceite
Naranja
Glicerol
Blanco
Agua
Rojo
Especial o multiuso
Cdigo de color
de aumento
Aumento
Negro
1x, 2.5x
Marrn
2x, 2.5x
Rojo
4x, 5x
Amarillo
10x
Verde
16x, 20x
Azul turquesa
25x, 32x
Azul celeste
40x, 50x
Azul cobalto
60x, 63x
Blanco, crema
ir arriba
4.4.2.-El ocular
El ocular (del latn oculus = el ojo) est formado por lentes que
generalmente son separadas por un diafragma, montadas en las
extremidades de un cilindro que va introducido en la parte superior del
tubo. El ocular sirve para observar la imagen real e invertida que produce
el objetivo, ejerciendo dos funciones:
Aumenta la imagen y la transforma en una imagen virtual, derecha con
respecto a la imagen del objetivo, pero aun invertida, con respecto al
objeto. Posteriormente el ojo endereza la imagen.
Aplana y aclara el campo ptico o plano circular en el que aparece el
objeto.
La lente superior se denomina lente ocular y es la que produce el
aumento de la imagen real del objetivo; la lente inferior tambin se
denomina colectora y es la que aplana y aclara el campo (fig. 4-7).
Clasificacin:
Oculares de Huygens: Empleados con los objetivos acromticos y
formados por dos lentes plano-convexas cuya convexidad est dirigida
hacia el objetivo y el diafragma se ubica entre ambas. Tambin
denominado ocular negativo porque la imagen se forma entre las dos
lentes. Muy comn en modelos de microscopios antiguos (11).
Oculares de Ramsden: Conocido como ocular positivo, formado por
Los modelos de microscopios ms simples poseen un solo ocular (monooculares), sin embargo hay microscopios binoculares y algunos modelos
ms modernos son trinoculares, especiales para la microfotografa. Los
binoculares tienen los objetivos dispuestos con una inclinacin de 45
para realizar la observacin cmodamente.
Campo del microscopio:
Se denomina campo del microscopio al crculo visible que se observa en
el ocular. Tambin podemos definirlo como la porcin del plano visible
observado a travs de las lentes. Si el aumento es mayor, el campo
disminuye, lo cual quiere decir que el campo es inversamente
proporcional al aumento del microscopio. La forma del campo est
determinada por el diafragma fijo del ocular, que generalmente es de
forma circular, no obstante el campo puede ser cuadrado y esta forma es
muy til al realizar estudios de coprologa o hematologa, en donde se
requiere reconstruir la totalidad del campo de observacin de la
preparacin, lo cual se dificulta con un campo circular clsico al quedar
zonas superpuestas (11).
Muchos oculares modernos poseen una copa de goma cuya finalidad es,
por una parte colocar los ojos a la distancia correcta de observacin y por
otra, impedir la formacin de reflejos luminosos que dificulten la
visualizacin. Algunos microscopios binoculares poseen un mecanismo
de enfoque del ocular que ajusta las dioptras en caso que el observador
posea una disminucin de su agudeza visual. El ajuste se realiza por
separado tanto para el ojo derecho como para el izquierdo; de igual
manera se ajustan a la distancia interpupilar del observador (usualmente
entre 55 y 75 mm).
4.8.-Tipos de microscopios
Existen diversas clases de microscopios, segn la conformacin, la
naturaleza de los sistemas de luz y otros elementos utilizados para
obtener las imgenes.