UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS NATURALES

ENZIMOLOGA
Integrantes: Andrade Johanna, Musua Alexis, Naula Michael, Sarango Carolina, Taco
Gustavo
INFORME DE LABORATORIO N 1
TEMA: Extraccin y precipitacin de Bromelina.
OBJETIVOS:
Objetivo General:
Extraer bromelina a partir de la corteza, corazn y pulpa de la Ananas comosus, pia.
Objetivos especficos:

Identificar de que parte de la pia se extrae mayor contenido de bromelina.

Precipitar las enzimas presentes en la corteza, pulpa y corazn de pia.
Observar los precipitados que se forman de cada tipo de fraccin de la pia

INTRODUCCIN:
Las proteasas son enzimas que catalizan el hidrolisis de los enlaces peptdicos en las
protenas, se agrupan, segn los residuos de aminocidos, del centro activo y los
mecanismos de accin, dentro de la cisteinopeptidasa (EC 3.4.22) se encuentra a la
papana y la bromelina (Hernandez , y otros, 2005).
La principal ventaja de esta proteasa frente a la papana o la ficina es que se extrae
fcilmente a partir de los residuos tanto de las plantaciones como de las fbricas de
enlatado de pia (Lpez Lago, Daz Varela, & Merino de Cceres, 1996). Su presencia
en la pia fue detectada por primera vez por el famacutico venezolano Marcano en
1891 (Vlez & Valery, 1984).
La pia es una fruta tropical de la familia de las bromeliceas, es rica en vitamina A, B,
C y tiene actividad proteoltica debida a la bromelina que se activa por la cistena,
tiosulfato y glutatin. Es inhibida o activada por iones metlicos y por agentes que
reaccionan con los tioles (cido ascrbico). La bromelina de los frutos es una proteasa
acida, su intensa actividad proteoltica no se modifica en zonas de pH entre 3 y 8. Es
una protena constituida por aminocidos que se encuentran enrollados en dos partes
separadas por un puente que tiene un lugar activo con un grupo tiol (SH) libre.
(Gallardo, Snches, & Montalvo, 2008).
Esta biomolcula se utiliza como ablandadora de carnes, complemento alimenticio y
se ha descrito que muestran varias acciones farmacolgicas, como por ejemplo
aumentan la absorcin de medicamentos, se ha utilizado en tratamientos de
desrdenes digestivos, en enfermedades virales y en formulacin de vacunas. Tiene
potenciales como antiedematosas, antinflamatorias, antitromboticas, y fibronolitcas,
recientemente se demostr la posible actividad antitumoral de cisteno-proteasas como
la bromelina contenida en la pia en 5 tumores tranplantables de raton: leucemia,
carcinoma pulmonar, sarcoma, as como la inhibicin en la proliferacin de tumores
cerebrales (Morris, Borges, Martinez, & Carrillo , 2002).

METODOLOGA:

Cortamos la
pia

Dividimos en
trozos
pequeos la
cscara

Licuamos la
cscara
agregando poca
agua

Aforaramos a
30 ml con agua
destilada y
homogenizar

Colocamos 25
ml de extracto
de pia en 3
tubos de
ensayo de 50
ml

Colocamos en
un caso de
precipitacin
(500ml)

Extramos 10 ml
de fase lquida
de un tubo de
ensayo

Colocamos en
un tubo de
ensayo de 25
ml

Tomamos una
muestra de 0,5
ml de cada fase

Observamos la
reaccin

Agregagamos
10 ml de
solucin
saturada de
sulfato de
amonio

Colocamos los
0,5 ml en un
tubo de ensayo

Aadimos 3 ml
de reactivo
Biuret

Medimos en el
espectofotmet
ro.

Centrifugar el
mezclado

PRECIPITACI
N POR SALES

RESULTADOS:
Los datos que corresponden a la absorbancia fueron obtenidos por medicin en el
espectrofotmetro.
La concentracin de la enzima se obtuvo mediante la siguiente ecuacin:
6

y=710 x610
Donde:

Y: absorbancia
X: concentracin; despejando x

y+ 6105
x=
7106
Los resultados de los clculos se reflejan en la siguiente tabla:
Parte
extrada

Pulpa

Corazn

Cscara

Absorbanci
a
0.4495
1.5098
0.9555
1.2615
0.8820
1.1888
1.1791
1.4048
1.3656
1.3536
1.3539

Concentraci
n
64222,86
215694,29
136508,57
180222,86
126008,57
169837,14
168451,43
200694,29
195094,29
193380,00
193422,86

Media

151563,674
184572,86

193965,716
7

Fuente: (Propia; 2016)

Como se puede apreciar existe mayor concentracin de bromelina en la cscara de la

pia.
Con estos datos se obtuvo la curva de calibracin donde claramente se observa que la
concentracin es directamente proporcional a la absorbancia.

Absorbancia vs Concentracin

Absorbancia

1.6
1.4
f(x) = 0x - 0
1.2
R = 1
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
50000
100000 150000

Linear ()

200000

250000

Concentracin (ppm)

Grfico 1: Curva de calibracin 540 nm, (Propia; 2016)

DISCUSIN:
El reporte de la concentracin de bromelina se dio mediante el precipitado de
diferentes partes de la pia, las cuales fueron cscara, pulpa y corazn. Segn los
datos obtenidos en la prctica se tuvo una concentracin de protenas en cscara de
193965,7167 ppm mayor a las encontradas en pulpa y corazn (151563,674 ppm y
184572,86 ppm respectivamente). As los resultados obtenidos en la tabla demuestran
que al realizar las extracciones de bromelina, la mayor concentracin est en la
cscara.
Para la cuantificacin de la bromelina el empleo del mtodo de Biuret resulta de vital
importancia para tener una certeza de la cantidad de protena presente en el extracto y
calcular nuestro rendimiento durante la extraccin teniendo en cuenta la cantidad de
precipitado final obtenido (Clavijo, Portilla Martinez, & Quijano Parra, 2012).En esta
reaccin, en condiciones alcalinas las sustancias que contienen dos o ms enlaces
peptdicos forman un complejo azul con las sales de cobre del reactivo (Salinas, 2015).
Tal como se observa en la figura 2 de Anexos.
Con los valores de absorbancia obtenidos para la cuantificacin. Con esta curva de
calibracin obtenemos la ecuacin de la recta que servir para calcular la
concentracin de cada muestra problema; vemos adems que el coeficiente de
regresin lineal (R2) est bastante cercano a 1, por lo que la linealidad de la curva de
calibracin es ms que aceptable. Segn la ecuacin de la recta obtenida: y = 7E-06x
- 6E-05; para cada valor de absorbancia se tendr una respectiva concentracin
(Fenneman, 2000).
Los resultados muestran que en pulpa y corazn se encuentra una mayor cantidad de
enzimas proteolticas a diferencia de las presentes en cscara, sin embargo, esta
ltima al ser un residuo agroindustrial puede ser potencialmente utilizado a un menor
costo en la extraccin y purificacin, mediante tcnicas bioqumicas como dilisis y
cromatografa de intercambio catinico y poder aplicarla en diversos procesos
(Montalvo & Alonso, 2008).
CONCLUSIONES:

La precipitacin mediante la adicin de sales es ms eficiente en

concentraciones bajas y en condiciones ptimas.
Las protenas se pueden precipitar mediante un agente de carga opuesta a la
protena, es decir que tenga un pH controlado de esta manera la protena
quede del lado acido o bsico del punto isoelctrico. Tomar en cuenta que a
mayor estabilidad y mayor estructura tenga la protena
La parte de la cual se obtuvo mayor cantidad de bromelina fue de la cscara.

ANEXOS:

Fig 1. Preparacin de la muestra (cscara)

Fig 2. Reaccin de Biuret

Fig 3. Observacin separacin de fases

BIBLIOGRAFA:
Caldern, A. I. (2008). Programa Acadmico en Ingeniera en Biotecnologa.
Mxico: Serrano S/N. Obtenido de
https://microindustrialproyecto.wikispaces.com/file/view/bromelina.pd
f
Clavijo, D., Portilla Martinez, M., & Quijano Parra, A. (2012). Cintica de la
bromelina obtenida a partir de la pia perolera (Ananas Comosus) de
Lebrija-Santander. Panplona, Colombia: Bistua: Revista de la Facultad
de Ciencias Bsicas.
Fenneman, O. (2000). Qumica de los Alimentos. Zaragoza; Espaa: Acribia.

Gallardo, L., Snches, A., & Montalvo, C. (2008). extraccin de bromelina a

patir de residuos de pia. Ciencia y tecnologa de alimentos, 18, 1-4.
Hernandez , M., Carvajal, C., Mrquez, M., Bez, R., Morris, H., Santos , R., &
Mara de los Angeles, C. (2005). Obtencin de Preparados
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Lpez Lago, I., Daz Varela, J., & Merino de Cceres, F. (1996). La Bromelina:
Una proteasa de inters comercial. La Corua: Dpto. Biologa Animal y
Biologa Vegetal.
Montalvo, C., & Alonso, A. (2008). BROMELINA A PARTIR DE RESIDUOS DE
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Vlez, F., & Valery, G. (1984). Monografa de la sociedad de Cien. Nat.
Caracas: La Salle.