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GOBIERNO REGIONAL DE LAMBAYEQUE

GERENCIA REGIONAL DE SALUD

HOSPITAL REGIONAL LAMBAYEQUE


Plan de capacitacin Laboratorio Biologa Molecular
Nombre de Practicante: Delgado Tenorio, Christian Diego
Universidad de Procedencia: UNPRG
Carrera/Especialidad: Biologa Microbiologa
1) Conocimiento del ambiente, equipos y reactivos del laboratorio de Biologa Molecular:
Objetivo: Que el Practicante conozca la forma de trabajo en el laboratorio de Biologa
Molecular.
Tarea: Describa brevemente como debe de estar distribuido, que equipos y reactivos son los
esenciales en un Laboratorio de biologa Molecular.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Teniendo en cuenta que la Biologa Molecular tiene como


dogma principal la repliclacin, transcripcin y Traduccin del
ADN y ARN respectivamente , se tiene que tener en cuenta
que el laboratorio se trabaja bajos estrictas normas de
bioseguridad. En el caso del Hospital Regional de Lambayeque
cuenta con la implementacin de 2 reas destinadas para el
Laboratorio de Biologa Molecular.
En el Primer Laboratorio cuenta: Est acondicionado para realizar PCR, tambin para
realizar exmenes de Protenas Totales.
- pHmetro digital
- Bao de Mara
- Balanza Analtica
- Centrfuga
- Cabina de Flujo Laminar
- Espectofotrometro
- Termociclador
En el Segundo Laboratorio: Est acondicionado para realizar extraccin de ADN como
electroforesis,
- Soporte y Fuente de Alimentacin para Electroforesis
- Cabina de Flujo Laminar
- Vortex
- Shaker
- Bao de Mara
En cunto a el uso de reactivos depender que protocolo se desea seguir ejemplo:
1. Extraccin de AND Salting Out:
- NaoH
- BGB
- Mercaptoetanol
- Acetato de Sodio
- Isopropanol

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-H2O PCR
2. Reactivos utilizados durante PCR:
- MgCl2
-H2O PCR
3. Reactivos utilizados durante Electroforesis:
- Agarosa: Proporciona el medio
- azul de coomassie
- bromuro de etidio,

- Buffer TAE

2) Preparacin de soluciones:
Objetivo: Que el practicante formule mediante clculos estequiometricos la preparacin de
soluciones y buffers para las necesidades en un laboratorio de Biologa Molecular:
Tarea: Desarrollar la practica en el anexo N 1
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

3) Preparacin de Buffers para la extraccin de ADN por el mtodo de salting out.


Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de preparacin de Buffers de Lisis
empleando los reactivos en Stock.
Tarea: Cuales son los cuidados para no contaminar los reactivos Stock.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Preparacin de Buffers para la extraccin de ADN por el mtodo de salting out.


Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de preparacin de Buffers de
Lisis empleando los reactivos en Stock.
Tarea: Cuales son los cuidados para no contaminar los reactivos Stock.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo
b) Regular c) Bueno
d) Muy bueno
e)
ExcelentePreparacin de Buffers para la extraccin de ADN por el mtodo de
salting out.
Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de preparacin de Buffers de Lisis

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empleando los reactivos en Stock.
Tarea: Cuales son los cuidados para no contaminar los reactivos Stock.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Desarrollo del protocolo de extraccin de ADN por el mtodo de salting out.


Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de extraccin de ADN por el mtodo
salting out.
Tarea: Cuales son las etapas de una extraccin de ADN y para qu sirve cada
reactivo.

Desarrollo del protocolo de Electroforesis en agarosa a distintas concentraciones


Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de electroforesis en geles de agarosa a
distintas concentraciones empleando los equipos respectivos.
Tarea: En que consiste la electroforesis y para qu sirve cada reactivo.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Desarrollo de ejercicios de disolucin de Primer y Preparacin de Master Mix


a diferentes concentraciones.
Objetivo: Que el practicante formule la disoluciones de primers liofilizados y preparacin
de Master Mix a diversas concentraciones.
Tarea: Describa el proceso de liofilizacin y los clculos para diluir primers y
preparacin de master mix a la concentracin deseada.

Desarrollo de disolucin de Primers y preparacin de master mix a diferentes


concentraciones.
Objetivo: Que el practicante desarrolle el protocolo de disoluciones de primers liofilizados
y preparacin de master mix a diversas concentraciones empleando los equipos y reactivos
respectivos.
Tarea: Describa el proceso de preparacin del Master Mix y en que afecta el cambio de
concentraciones de cada uno de los reactivos.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Programacin del protocolo de Temperaturas del PCR en el termociclador.

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Objetivo: Que el Practicante programe los protocolos de temperaturas en el termociclador.
Tarea: Describa el proceso de programacin de temperaturas y en que afecta cada una de
ellas en la reaccin en cadena de la polimerasa PCR.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo b) Regular
c) Bueno
d) Muy bueno e) Excelente

Desarrollo de ejercicios y protocolo de preparacin de geles de poliacrilamida a


diferentes concentraciones.
Objetivo: Que el Practicante formule y desarrolle protocolos para la preparacin de geles
de poliacrilamida mediante electroforesis vertical.
Tarea: Tarea: Describa el proceso de preparacin de geles de poliacrilamida y en que
afecta el cambio de concentraciones de cada uno de los reactivos.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Desarrollo del protocolo de Anlisis Bioinformaticos de geles de Agarosa y


Poliacrilamida asi como el reporte de resultados.
Objetivo: Que el Practicante desarrolle el protocolo para la visualizacin, foto
documentacin y anlisis bioinformticos de geles de Agarosa y Poliacrilamida as como el
reporte de resultados.
Tarea: Describa el proceso de Anlisis Bioinformaticos de geles de Agarosa y
Poliacrilamida as como el reporte de resultados.
Qu opina del aprendizaje de esta prctica:
a) Malo

b) Regular

c) Bueno

d) Muy bueno

e) Excelente

Anexo N1
1. Disolucin de Primers:
Cuanto de Agua PCR debo aadir a Primers liofilizados con 74.4 nMoles para obtener una
concentracin final de 200 uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a este? Para obtener una solucin al 20uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a Primers liofilizados con 58.6 nMoles para obtener una
concentracin final de 200 uM?
Cuanto de Agua PCR debo aadir a este? Para obtener una solucin al 10uM?
2. Clculos de Master Mix PCR

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Completar la siguiente Tabla:
Componente

Concentra
cin final

H2O PCR

Concen
tracin
inicial
--

Buffer 10X

10X

1X

MgCl2

25mM

2.5mM

dNTPs

2.5mM

0.2mM c/u

Primer
Forward
Primer
Reverse
Taq
polimerasa

10uM

1uM

10uM

1uM

5U/ul

1U/ul

Volumen
por
reaccin

Volumen
(ul) para
tubos

--

25 ul
Componente

Concentra
cin final

H2O PCR

Concentr
acin
inicial
--

Buffer 5X

5X

1X

MgCl2

50mM

2.5mM

dNTPs

2.5mM

0.2mM c/u

Primer
Forward
Primer
Reverse
Taq
polimerasa

20uM

1uM

20uM

1uM

5U/ul

1U/ul

Volumen Volumen
por
(ul) para
reaccin tubos

--

12.5 ul
Cuanto de cada reactivo debo aadir si mi artculo de referencia me indica que el protocolo es el
siguiente?:
10 mM tris HCl (pH 8.3), 50mM Kcl, 1.5mM MgCl2, 200 uM de cada desoxinucleosido trifosfato,
1.25 taq DNA polimerasa y 0.5uM de cada Primer. Cada muestra tendr 10ng de ADN. En volumen
final de 12.5 ul
NOTA: Dejar los primers a una concentracin en la que solo baste 1ul de Primers para obtener la
concentracin final deseada.
Se tiene en Stock los siguientes reactivos:
Mix 2X: Taq DNA polimerasa 50U/ml, 400uM de cada desoxinucleosido trifosfato, 3mMMgCl2

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KCl:0.5M
Taq DNA Polimerasa 5U/ul
Primers 20uM
Cuanto de cada reactivo debo aadir si mi artculo de referencia me indica que el protocolo es el
siguiente?:
10 mM tris HCl (pH 8.3), 20mM Kcl, 1mM MgCl2, 100 uM de cada desoxinucleosido trifosfato,
1.25 taq DNA polimerasa y 1uM de cada Primer. Cada muestra tendr 10ng de ADN. En volumen
final de 12.5 ul
NOTA: Dejar los primers a una concentracin en la que solo baste 1ul de Primers para obtener la
concentracin final deseada.
Se tiene en Stock los siguientes reactivos:
Mix 2X: Taq DNA polimerasa 50U/ml, 400uM de cada desoxinucleosido trifosfato, 3mMMgCl2
KCl:0.5M
Taq DNA Polimerasa 5U/ul
Primers 20uM
La ecuacin ms comnmente utilizada para preparar soluciones es:
V1 XC1 =V2 XC2
donde V 1 es el volumen de la solucin concentrada que se debe aadir para
preparar la solucin diluida,
C 1 es la concentracin de la solucin concentrada
V 2 es el volumen de la solucin diluida
C 2 es la concentracin de la solucin diluida.
3. Preparacin de Buffers y soluciones en Biologa Molecular:
Calcule las siguientes concentraciones:
10 M NaOH, diluido 0.05X = _____ M
2 M HCl, diluido 1:5 = _____ M
1000 mg/L glucosa, diluido 1:10 y luego 1:2 = _____ mg/L
250 ml de 5% NaCl contienen ____ g de NaCl
Cunto CuSO 4 5 H 2 O debe ser pesado para preparar 100 ml de CuSO 4 al
5%? PM del CuSO 4 5 H 2 O: 250 g/mol, PM del CuSO 4 : 160 g/mol
Qu porcentaje de CuSO 4 5 H 2 O es agua?
2. Cuntos gramos de MgCl 2 hay en 1 g de MgCl 2 3 H 2 O? PM del MgCl 2 3 H 2 O: 149
g/mol, PM del MgCl 2 : 95 g/mol
3. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar 20 ml de una
solucin 2M?
4. Qu porcentaje de Mg contiene el MgCl 2 3 H 2 O?
5. Cunto CuSO 4 5 H 2 O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga 80 mg de CuSO 4 ?
6. El peso molecular de CaCO 3 es 100 g/mol , cuntos gramos son necesarios para
preparar:
1 L de 0.1 M CaCO3?

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50 mg/L de CaCO3?
7. Una solucin estndar de hemoglina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:

200 g/L
150 g/L
100 g/L
50 g/L

8. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su


molaridad? (PM NaCl : 58.5 g/mol)
9. Cuntos gramos de Na 2 HPO 4 deben ser pesados para preparar 1 L de una
solucin cuya concentracin es de 50 mg/ml?
10. Cul es la dilucin final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 l de
suero, 500 l de solucin salina y 300 l de reactivo?
11. Cul es la concentracin en mol/l de una solucin que tiene 100 g de NaOH
disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol

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