ENZIMAS

Las enzimas son biomolculas especializadas en la catlisis de las reacciones qumicas que tienen lugar en la
clula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces de aumentar la velocidad de las reacciones
qumicas mucho ms que cualquier catalizador artificial conocido, y adems son altamente especficos ya que cada
uno de ellos induce la transformacin de un slo tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el
medio de reaccin.

Enzimas en funcin de su accin cataltica especfica:

OXIDORREDUCTASAS. Catalizan las reacciones de oxidorreduccin, es decir, de transferencia de hidrgeno (H)

o de electrones (e-) de un sustrato a otro, segn la reaccin general:
AH2 + B A + BH2
Ared + Box Aox + Bred

TRANSFERASAS. Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del hidrgeno) de un sustrato a otro,
segn la reaccin:
A-B + C A + C-B

HIDROLASAS. Catalizan las reacciones de hidrlisis:

A-B + H2O AH + B-OH

LIASAS. Catalizan reacciones de ruptura o unin qumica de sustratos:

A-B A + B

ISOMERASAS. Catalizan la interconversin de ismeros:

A B

LIGASAS. Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP,
etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi

Estructura de las enzimas:

Son biocatalizadores ya que son molculas orgnicas producidas por los seres vivos capaces de funcionar fuera de
la clula u organismo que las produce; aceleran las reacciones qumicas; no se consumen en las reacciones; se
necesitan en muy poca cantidad; no modifican el sentido de la reaccin.
Son protenas globulares, excepto las ribozimas (ARN con actividad cataltica), solubles en agua. Segn su
composicin pueden ser de dos tipos:

 Enzimas: Formadas por una o varias cadenas protenicas

Holoenzimas: Poseen una parte proteica llamada apoenzima y otra no proteica denominada cofactor.
HOLOENZIMA = APOENZIMA + COFACTOR

El cofactor puede ser una molcula inorgnica, (iones metlicos como Fe, Cu, Zn, Mn, Mg,) o puede ser una
molcula orgnica. En este caso, si la unin al apoenzima es covalente se denomina grupo prosttico y si no es
covalente coenzima
Apoenzima Es una protena globular formada exclusivamente por secuencias de aminocidos. Determinan la
especificidad de la reaccin enzimtica. Se pueden distinguir 4 tipos de aminocidos segn la funcin que
desempeen en la actividad enzimtica.
a) No esenciales: No intervienen en el proceso cataltico. Si se eliminan de la cadena, la enzima no pierde la
actividad enzimtica.
b) Estructurales: Mantienen la estructura tridimensional de la protena. No intervienen directamente en la actividad
enzimtica, pero si se alteran pueden cambiar la posicin del grupo activo.
c) De unin o de fijacin: Establecen enlaces dbiles con el sustrato orientndolo para aproximar la parte del
mismo que ha de ser atacada por la enzima.
d) Catalticos: Se unen al sustrato mediante un enlace covalente debilitando su estructura y favoreciendo su
ruptura.

El centro activo es una cavidad existente en la superficie del enzima que est forrada interiormente por una serie
de restos de aminocidos. Por regla general los aminocidos que forman parte del centro activo no se encuentran
contiguos en la cadena polipeptdica, sino ocupando posiciones a veces muy alejadas en la misma. El hecho de que
estos aminocidos coincidan prximos entre s sobre el centro activo no es ms que una consecuencia del
plegamiento caracterstico de la cadena polipeptdica, es decir, de la conformacin tridimensional nativa de la
protena enzimtica

Coenzimas: Son cofactores enzimticos orgnicos que se unen al apoenzima mediante enlaces dbiles. La unin
apoenzima-coenzima no es especfica ya que un mismo coenzima puede unirse a diferentes apoenzimas y esta
unin suele ser temporal. Si la unin es covalente la coenzima se llama grupo prosttico.

Propiedades de las enzimas

Son protenas y por tanto cumplen sus propiedades. La ms importante es la especificad.
Especificidad: Existen dos tipos:
a) Especificidad de accin o de clase: La enzima acta sobre un determinado tipo de reaccin y depende del tipo de
enlace y no del tipo de molcula. Por ejemplo, las fosfatasas, que separan los grupos fosfato de cualquier tipo de
molcula, deshidrogenasas, oxidasas.
b) Especificidad de sustrato: Indica el sustrato sobre el que acta la enzima. Puede ser:

Absoluta: La enzima tan solo acta sobe un determinado sustrato. Ej. Maltasa.
De grupo: La enzima acta sobre un grupo de molculas que presentan un determinado enlace. Ej.
Peptidasas

 Reversibilidad: Una enzima acta igual sobre una reaccin qumica sea cual sea el sentido de la reaccin. No
modifican el sentido de la reaccin.
Sacarosa + H2O sacarosa glucosa + fructosa
Eficacia: Se necesitan en muy poca cantidad. Una sola molcula de enzima puede catalizar la reaccin de miles
de molculas de sustrato ya que la enzima no consume en el proceso sino que se recupera al final.
Gran poder cataltico: Multiplican la velocidad de las reacciones por un milln de veces o ms.
No se consumen en las reacciones.

ACTIVIDAD ENZIMTICA
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversin de 1 mol
de sustrato en un minuto. Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de
actividad enzimtica como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se
llama katal (kat). Como 1 mol son 106 moles y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106
U. Esta unidad es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submltiplos como el microkatal (kat,
10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).
La actividad especfica es el nmero de unidades de enzima por miligramo de protena (U/mg prot) o por mililitro
de disolucin (U/ml).

Factores que regulan la actividad enzimtica

a) Temperatura: Cada enzima tiene una temperatura ptima en la cual la velocidad
reaccin es mxima. Suele ser 40C. Si aumenta mucho, la enzima se
desnaturaliza. El calor aumenta la energa cintica con lo que aumenta la
movilidad de las molculas facilitando su encuentro.

de

b) p H : Cada enzima presenta unos valores de pH entre los que son efectivos. Entre
ambos existe un pH ptimo en el que la velocidad de la reaccin es mxima. Fuera
de los lmites la enzima se desnaturaliza.

c) Concentracin de sustrato: Al aumentar la concentracin del sustrato se aumenta

la velocidad de reaccin ya que, al haber ms molculas de sustrato, se facilita el
encuentro de estas con el enzima, hasta alcanzar la velocidad mxima (Vmx), a
partir de ese momento se mantiene constante ya que todas las enzimas se
encuentran en forma de complejo enzima-sustrato. La Vmx se alcanza cuando toa
la enzima est ocupada por el sustrato

INHIBIDORES
Son molculas que impiden el normal funcionamiento de las enzimas o las inutilizan, ya que disminuyen o anulan
la actividad enzimtica. Constituyen un mecanismo de control de las reacciones metablicas.
Tipos de Inhibidores
ISOSTRICO El inhibidor se une al mismo sitio que el sustrato (sitio activo).
ALOSTRICO El inhibidor se une a un sitio diferente al que se une el sustrato (sitio alostrico).
COMPETITIVO El inhibidor se une a la enzima libre interfiriendo con la unin del sustrato.
INCOMPETITIVO El inhibidor se une al complejo enzima-sustrato interfiriendo con la formacin de producto.
MIXTO El inhibidor se une tanto a la enzima libre como al complejo enzimas sustrato, interfiriendo la unin
del sustrato y la formacin del producto.
NO COMPETITIVO Es un tipo especial de inhibidor mixto que se une con igual afinidad a la enzima libre y al
complejo enzima-sustrato.

Alosterismo: consiste en la existencia de uno o ms centros reguladores, a los que se unen molculas efectoras o
moduladoras, distintas al centro activo. Alostrico: ALLO+STEREO; ALLO = otro; STEREO = sitio. Los enzimas
alostricos tienen otro sitio adems del centro activo.
Enzimas alostricos: Son aquellos cuyo comportamiento no se puede
explicar mediante el modelo de Michaellis-Menten ya que presentan curvas
sigmoideas cuando se representa la concentracin del sustrato en funcin de
la velocidad de reaccin. Las enzimas estn constitudas por varias
subunidades o protmeros. Cada protmero tiene un centro activo y un centro
regulador al que se unir el activador o modulador. Cuando se produce esta
unin vara la configuracin del protmero y hace funcionar el centro activo y
as la enzima pasa del estado T inhibido al estado R activo. Cuando vara la
conformacin de un protmero, esto se transmite a los otros protmeros
asociados hacindolos activos: Transmisin alostrica instantnea.

LAS PROTEASAS son enzimas que rompen los enlaces peptdicos de las protenas. Usan una molcula de agua
para hacerlo y por lo tanto se clasifican como hidrolasas
Propiedades
Es una enzima secretada por el pncreas que participa en la degradacin de las protenas o peptonas, resultantes de
la accin de la pepsina gstrica. La proteasa se secreta en forma de proenzima y es activada por el jugo intestinal.
Se administra junto con las otras proenzimas pancreticas (amilasa, lipasa) cuando existe disminucin de las
secreciones pancreticas.
Funciones
Las proteasas actan rompiendo los enlaces peptdicos de las protenas para liberar los aminocidos. Pueden
romper todas las protenas a menos que sean parte de una clula viva. Hay diferentes tipos de proteasas para el tipo
de enlace peptdico que necesita ser analizado. Por ejemplo, hay proteasas fngicas, pepsina y papana, las cuales
realizan diferentes funciones. Sin embargo, algunos organismos, como los virus, se cubren con un escudo de
protenas, lo que obliga al cuerpo a utilizar grandes cantidades de proteasas para atacar el escudo antes de que su
sistema inmunolgico pueda matar el virus.

LA PIA es una fuente excelente del compuesto de bromelina que contiene proteasa y se cree que ayuda en la
digestin, as como en la reduccin de la coagulacin sangunea y la inflamacin, informa World's Healthiest
Foods. Adems, la bromelina puede tener la capacidad de reducir el crecimiento de ciertos tipos de tumores. La
bromelina se extrae con frecuencia desde el ncleo o tallo de la pia para su uso en suplementos.

LA BROMELINA es una enzima perteneciente a las proteasas, se encuentra contenida en el cultivo de pia y
dentro de sus usos se ha encontrado que se utiliza para mejorar la digestin, como antitrombotico, antitumoral,
antisptico entre otros

PARAMETROS ENZIMATICOS
Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que V0 es Vmax. Es una medida de la afinidad de la
enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad de la enzima por S.
Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas de sustrato convertidas en
producto por molcula de enzima y unidad de tiempo, en condiciones saturantes del sustrato.
Vmax Velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato.

ECUACION DE MICHAELIS-MENTEN

Velocidad mxima (Vmax):

Es la velocidad lmite a la que tiende la reaccin catalizada por enzimas a concentraciones saturantes del sustrato,
es decir cuando toda la enzima est como ES.

Vmax = kcat.[E]total
Su valor cambia durante el proceso de purificacin porque cambia la [E]

CLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UNA ENZIMA

A partir de datos experimentales se representa la velocidad inicial de la reaccin frente a la concentracin de
sustrato (v vs. [S]). La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v frente a [S]) es una hiprbola.
El valor asinttico al que tiende la velocidad inicial es Vmax. A partir de Vmax se determina Vmax/2 y se interpola
en la grfica experimental para obtener el valor de KM). Sin embargo, para determinar grficamente los valores de
KM y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin doble recproca (1/v frente a 1/[S]), ya que es una lnea recta

Esta representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-Burk. Es una recta en la
cual:
- La pendiente es KM/Vmax
- La abscisa en el origen (1/v=0) es -1/KM
- La ordenada en el origen (1/[S]=0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los valores de KM y Vmax de
una enzima para diversos sustratos.