Identificacin y propagacin de hongos micorrzicos

arbusculares en Valle de Bravo, Edo. de Mx.

RESUMEN
En los ecosistemas actuales las plantas han evolucionado junto con los hongos
micorrzicos arbusculares (HMA) durante millones de aos. La micorriza
arbuscular es una simbiosis mutualista en la cual las plantas proporcionan
hidratos de carbono a los hongos y estos a su vez los nutrientes minerales
disponibles para la planta como el fosforo y el nitrgeno. En Mxico la diversidad
de HMA ha sido poco estudiada, la mayora son inventarios de riqueza de especies
en ecosistemas o agroecosistemas. El objetivo de este trabajo fue aislar,
identificar y propagar los hongos micorrzicos arbusculares presentes en la
rizsfera de diferentes plantas en el rancho Valle la Paz, ubicado en el Municipio
de Valle de Bravo. Los gneros que predominan son Scutellospora, Acaulospora,
Gigaspora y Entrophospora.

INTRODUCCIN
Los ecosistemas terrestres dependen, en
buena medida de la actividad microbiana del
suelo. Los microorganismos benficos
intervienen en diversas funciones benficas
para las plantas con las que se asocian.
Alrededor del 80% de las plantas terrestres
conocidas forman la simbiosis micorrzica
arbuscular (Dickson, 2004). El vocablo
micorriza que significa literalmente raz
fungosa, describe la relacin simbitica con
los sistemas radiculares (Bucher, 2006). Los
hongos endomicorrzicos o arbusculares
penetran, sin matar, a las clulas de la raz
estableciendo una membrana para el
intercambio de nutrientes.
Los HMA detentan un gran potencial como
bioprotectores y biofertilizantes (Deepika et
al, 2008). Existen numerosos reportes en

donde se mencionan los beneficios que esta

simbiosis aporta a la planta hospedera, dentro
de los cuales destacan:
a) El HMA tiene prolongaciones conocidas
como hifas que penetran al interior de las
races del husped. Lo anterior conforma una
interface entre el suelo y la planta que
favorece la absorcin de nutrientes desde la
solucin del suelo, hasta el interior de las
races (Sekhara et al, 2007; Toljander et al,
2007; Toussaint et al, 2007; Jurkiewics et al,
2010). El HMA absorbe P, N, K, Zn, Cu, S, Fe,
Mg, Ca y Mn para cederlos posteriormente a
la raz de la planta hospedera (Sundar et al,
2009).
b) Los hongos micorrzicos incrementan el
rea de contacto de la raz con el suelo,
asegurando la continuidad entre la superficie

OBJETIVO
absorbente radicular y la solucin del suelo.
De esta manera se optimiza la interaccin del
suelo con las races (Jurkiewics et al, 2009;
Sundar et al, 2009).
c) Ante un escenario de estrs hdrico, la
micorriza es capaz de tomar los lquidos an
bajo este estado de carencia, en contraste con
la incapacidad que se manifestara por la
planta sin esta simbiosis. Es as que la
simbiosis micorrzica tiene el potencial para
disminuir los efectos nocivos de la sequa y la
salinidad (Giri et al, 2005; Giri et al, 2007)
d) Cuando la planta sufre una lesin en los
foliolos dejando comprometido el sistema
fotosinttico y por tanto los fotosintatos, las
vesculas cumplen una funcin de almacn
cubriendo la carencia de sustancias nutritivas
(Jurkiewics et al, 2010; Deepika et al, 2008).
e) La colonizacin de hongos micorrzicos
induce un cambio en el microambiente de las
races, de tal forma que se modifica el nicho
ecolgico de los patgenos que pueden atacar
a la planta hospedera. Adems, la
colonizacin favorece la lignificacin de las
races incrementando su resistencia, as como
la activacin de mecanismos de defensa del
husped (Pozo y Azcn, 2008).
f) Se reporta la tolerancia a contaminantes a
travs
de
la
simbiosis
micorrzica,
disminuyendo la captacin de metaloides y la
translocacin de los mismos al husped
(Kapoor et al, 2007).
g) Existen diversos reportes que mencionan
un efecto positivo en el incremento de
metabolitos secundarios en las plantas.
Mismo que representa un alto potencial para
la implementacin de esta simbiosis en la
produccin de plantas medicinales (Kapoor et
al, 2007; Guerra, 2008).

Identificar, evaluar y propagar hongos

micorrizzicos arbusculares a partir de la
recoleccin suelo rizosfrico de las plantas
medicinales en Valle la Paz, Estado de
Mxico, con miras a implementar un
desarrollo biotecnolgico que impacte
significativamente en la calidad y produccin
de las plantas medicinales.

METODOLOGIA
Identificacin taxonmica
Se tomaron 21 muestras de suelo de las
distintas parcelas productivas, que consisti
en la recoleccin de 200g de suelo prximo a
las races de la planta con una profundidad de
20cm.
Se pesan 100 g de suelo y se agregan a 1 litro
de agua; se mezcla hasta formar una
suspensin y se hace pasar por los tamices de
acuerdo con el mtodo de tamizado hmedo
y decantacin (Gerdemann y Nicolson, 1963).
Posteriormente, las esporas se lavaron con
abundante agua para evitar su plasmlisis
(ruptura). La suspensin obtenida se coloc
en una caja de Petri mantenindose hmeda
para impedir su desecacin y mejorar la
observacin microscpica.
La identificacin de los distintos gneros se
bas en la caracterizacin morfolgica de las
esporas, considerando que algunas de estas
estructuras que son determinantes en su
clasificacin. Para dicho fin se realiz el
siguiente
procedimiento
descrito
por
Gonzlez-Chvez en 1993. Las esporas del
suelo sin aparente dao mecnico, fueron
examinadas al microscopio y mediante agujas
de diseccin fueron aisladas y seleccionadas
por tamao, ornamentacin, hifa sustentora y

contenido
citoplasmtico.
Una
vez
clasificadas las esporas, se fijaron en
preparaciones permanentes. Se colocaron de
20 a 25 esporas intactas en un portaobjetos y
se montan con polivinil-alcohol-cido lctico
(PVLG).
Una vez terminadas las preparaciones fueron
observadas al microscopio de campo claro,
para realizar mediciones de las esporas. Para
corroborar los hallazgos taxonmicos, se
emple el mtodo de reacciones qumicas de
la pared celular de las esporas, a travs del
reactivo de Melzer`s. Finalmente, la
identificacin se bas en las claves de
Schenck y Prez (1990), as como en los
especmenes incluidos en la pgina web del
INVAM (2008). A partir de las preparaciones,
se tomaron fotografas en campo claro o
Nomarski con el microscopio ptico
(Olympus, Modelo BX5) para observar las
estructuras.

Evaluacin
del
porcentaje
colonizacin de races.

de

Dentro de las 21 muestras de suelo que se

realizaron en Valle la Paz, se recolectaron
races secundarias a fin de determinar el
porcentaje de colonizacin. Este es un
indicador del grado de virulencia de las
esporas nativas, as como su afinidad con las
plantas medicinales.
Las races son procesadas conforme a la
tcnica de Phillips y Hayman, (1970)
mediante el clareo con KOH al 10 %,
acidificacin con HCl al 10% y tincin de
races con una solucin colorante de Azul de
tripano al 0.05 %. Posteriormente eliminar el
colorante y dejar las races en una solucin de
lactoglicerol. Una vez teidas, se proceder a
cortar las races en segmentos y se montarn
en laminillas utilizando lactoglicerol como

liquido de montaje Se observarn las races al

microscopio ptico a 40X de aumento y se
registrar por separado la frecuencia
de las estructuras fngicas micorrzicas en las
clulas corticales (arbsculos, vesculas o
hifas) y segmentos de races no colonizadas.
Considerando que solo el 80% de las plantas
forma simbiosis con los HMA, es muy
importante determinar cul de las plantas
medicinales en Valle la Paz, establece esta
relacin simbitica con el hongo. Es entonces
que el porcentaje de colonizacin ayuda a
determinar las plantas que son susceptibles
de ser estudiadas bajo la influencia de los
HMA.

Propagacin
Una vez identificadas las especies, se
estableci un sistema de propagacin a travs
del mtodo estandarizado con plantas
trampa.
Las muestras de suelo rizosfrico se utilizan
para establecer cultivos trampa con el fin de
propagar los HMA. Los cultivos trampa
utilizando Zea Maiz como hospedante, se
realizaron al colocar una capa de
aproximadamente 150 g del suelo rizosfrico
sobre arena estril contenida en macetas con
capacidad de 1 kg. Esta capa se cubri con
arena estril y posteriormente, se procedi a
la siembra de semillas de maz. Las macetas
fueron irrigadas cada 15 das con 150 mL de
lixiviados. La propagacin de los HMA se
realiz durante tres meses, en condiciones de
invernadero cuya temperatura promedio
mnima y mxima fue de 16 y 32 C,
respectivamente.
Transcurridos los tres meses se retir el maz
de las macetas, colectando races secundarias
y una muestra del sustrato a fin de

determinar la esporulacin y el porcentaje de

colonizacin en las races.
Una vez extrado el maz, se procedi a la
siembra de trbol en las macetas,
considerando que esta especie, tiene una
germinacin acelerada y que cubre una gran
superficie del subsuelo con races tiernas.

DISCUSIN
Con los ltimos estudios se estn develando
patrones de interaccin complejos entre las
comunidades de HMA y de plantas, por lo que
es necesario realizar ms muestreos en zonas
estratgicas y desarrollar metodologas ms
sensibles para la deteccin de todas las
especies de HMA. Se ha observado que los
patrones poblacionales y la diversidad de los
HMA son fuertemente afectados por varios
factores como: las propiedades del suelo, las
condiciones ambientales, la planta hospedera
y las prcticas agrcolas, en el caso de los
cultivos (Lugo y Cabello, 2002). Aun cuando
la diversidad de los HMA tiene un papel
importante, la abundancia de cada especie
que conforma a un consorcio puede ser
determinante
en
la
promocin
del
crecimiento vegetal (Lovelock et al. 2003).
Sin embargo, no se descarta la posibilidad de
que las especies identificadas de HMA en los
consorcios puedan estar subestimadas debido
a la dificultad de caracterizar aquellas
especies de HMA no esporulantes (Douds &
Millner 1999).
CONCLUSIONES
Se identificaron cuatro grupos taxonmicos
de
hongos
micorrzicos
arbusculares
obtenidos de la rizsfera de plantas
(Scutellospora, Acaulospora, Gigaspora y
Entrophospora).

Este trabajo resalta la necesidad de estudiar la

diversidad autctona de HMA para usarlos
como inoculantes en la produccin comercial
de plantas.
Las esporas muestreadas en suelo presentan
altos ndices de latencia, as como baja
viabilidad y parasitismo que dificultan su
propagacin.
En las plantas muestreadas en las parcelas de
Valle la Paz, se observa una simbiosis mayor
al 60%.

RESULTADOS
Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas p re se nte s e n la p arce la
A5

Escudo

Escudo

Hifa

Hifa

Hifa

Pared de la espora

Escudo

e
Fi gur a I: a) Espora de Scutellospora cerradensis, b) Amplificacin del escudo de germinacin; c ) Espora
de Scutellospora sp; d) Amplificacin de la hifa y de la pared de la espora; e) Espora rota de Scutellospora
sp; f) Ampliacin del escudo de germinacin

Ide ntificacin m orf olg ica de e sp oras nativ as p re se nte s en la Mil pa

Fi gu ra II : a) Acaulospora laevis (objetivo10x); b) Acaulospora laevis (objetivo 40x); c) Scutellospora sp (objetivo 10x); d)

Scutellospora pellucida (objetivo10x); e) Scutellospora pellucida (objetivo 40x); f) Gigaspora sp (objetivo 10x); g)
Entrophospora infrecuens (objetivo 10x); h) Entrophospora infrecuens (objetivo 40x); i) Acaulospora sp (objetivo 10x).

Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas p re se nte s e n la m ilp a

(rizs fe ra de frijol )

Fi gu ra I II : a) Scutellospora sp (objetivo 20x); b) Scutellospora aff. calospora (objetivo 10x);

c)

Entrophospora infrecuens (objetivo 10x); d) Entrophospora infrecuens (objetivo 40x); e) Scutellospora sp

(objetivo 10x); f) Scutellospora sp (objetivo 40x).

Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas p re se nte s e n la tabl a J4

Fi gu ra IV: a) Acaulospora sp (PVLG); b) Acaulospora sp (PVLG+MELZER); c) Acaulospora sp (PVLG); d)

Acaulospora sp (PVLG+MELZER)

Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas p re se nte s e n la tabl a J4

c
Fi gu ra V: a) Acaulospora sp (PVLG); b) Acaulospora sp (PVLG+MELZER); c) Acaulospora sp (PVLG); d)

Acaulospora sp (PVLG+MELZER).

Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas p re se nte s e n la tabl a J4

Fi gu ra VI: a) Scutellospora aff. cerradensis Acaulospora sp (PVLG); b) Acaulospora sp (PVLG +

MELZER); c) Gigaspora sp (10X); d) Gigaspora sp

Ide ntificacin m orf olg ica de es p oras nativas pr es en tes e n l a tabla J 4

b
Fi gu ra VII : a) Gigaspora sp (10X); b) Gigaspora sp (40X)

BIBILIOGRAFA
Deepika, S; Kapoor, R; Ashok K. (2008)
Arbuscular mycorrhizal (AM) technology
for the conservation of Curculigo orchioides
Gaertn: an endangered medicinal herb.
World J Microbiol Biotechnol 24: 395-400.
Dickson, S. (2004) The Arum-Paris
continuum of mycorrhizal symbioses. New
Phytologist. 163: 187-200.
Douds DDJR & P Millner (1999) Biodiversity of
arbuscular
mycorrhizal
fungi
in
agroecosystems. Agriculture Ecosystems
and Environment 74: 77-93.
Lovelock CE, K Andersen & JB Morton (2003)
Arbuscular mycorrhizal communities in
tropical forests are affected by host tree
species and environment. Oecologia 135:
268-279.
Lugo, A. M. y Cabello, N. M. 2002. Native
arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) from
mountain grassland (Crdoba, Argentina) I.
Seasonal variation of fungal spore diversity.
Mycologia. 94: 579-586.
Read,
D.J.,
1991.
Mycorrhizas
ecosystems.Experienta47:376-391.

in

Redecker, D. & Raab, P. (2006) Phylogeny of

the
Glomeromycota
(arbuscular
mycorrhizal fungi): recent developments
and new gene markers. Mycologia 98(6),
885 895.
Varela, F.L. y D. Trejo. (2001) Los hongos
micorrizogenos
arbusculares
como
componentes de la biodiversidad del suelo
en Mxico. Acta Zool. Mex. (No. Especial)
1:39-51.

Velzquez, S y Cabello M. (2011) Occurrence

and diversity of arbuscular mycorrhizal
fungi in trap cultures from El Palmar
National Park soils. European Journal of Soil
Biology. 47: 230-235.