UNIVERSIDAD TCNICA DE AMBATO

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

LABORATORIO CLNICO
MICROBIOLOGA APLICADA

Tema: Urocultivo en CLED Agar y en Agar MacConkey

ALUMNAS:
CANSECO MARITZA
GALLARDO GERMANIA
LATACUNGA SONIA
LISSETTE SOLS
DOCENTE:
MSc. LISSETTE TORO
SEMESTRE:
QUINTO B
PERODO:
ABRIL SEPTIEMBRE 2015

1. TEMA
Urocultivo en CLED Agar y en Agar MacConkey
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
Identificar bacterias fermentadoras y no fermentadoras en CLED
Agar y en Agar MacConkey.
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
Efectuar el protocolo de pruebas bioquimicas para la identificacin

de la bacteria presente en la muestra de orina.

Relacionar los resultados obtenidos es cada prueba para llegar al
reporte final.

3. INTRODUCCIN
CLED Agar
CLED Agar (Agar cistina-lactosa deficiente en electrolitos) es un
medio de cultivo diferencial para aislar y contar las bacterias
presentes en la orina. Favorece el crecimiento de los
patgenos

grmenes

Gram-positivos y Gram-negativos del tracto urinario.

Inhibe la difusin (swarming) de Proteus.

Frmula (en gramos por Instrucciones
litro)
Peptona
Extracto de carne
L-cistina

4.0
3.0
0.12

Triptena
Azul de bromotimol
Lactosa
Agar

8
4.0
0.02
10.0
15.0

Suspender 36,2 g del polvo

por litro de agua destilada.
Dejar reposar 5 minutos y
calentar

suavemente

agitando por rotacin. Hervir

1

minutos

hasta

su

disolucin total. Distribuir y

esterilizar

en

autoclave

durante 15 minutos a 118121C.

pH final: 7.3 0.2

Aplicacin Agar CLED

En este medio crecen la mayora de las bacterias que causan
infecciones en el tracto urinario. La presencia de contaminantes como
Difteroides, Lactobacilos y otros microbios indican el grado de
cuidado con el que se ha manipulado la muestra de orina. El Extracto
de Carne y la Peptona de Casena aportan nitrgeno, vitaminas y
amino cidos esenciales para el crecimiento; la Lactosa es el
carbohidrato fermentable fuente de carbono y energa, L-Cistina se
aade como suplemento para los coliformes dependientes de cistina.
La diferencia entre los fermentadores y no fermentadores de lactosa
viene dado por el azul de bromotimol, que es el indicador de pH. Los
fermentadores de lactosa bajan el pH y el color del medio cambia de
verde a amarillo. El Agar bacteriolgico es el agente solidificante.
Caractersticas de las colonias de las diferentes bacterias

Microorganismos
Escherichiacoli ATCC 25922

Color de las colonias

Grande elevada, amarilla y
opaca. Centro color amarillo

Escherichiacoli ATCC 35218

Klebsiellapneumoniae
700603
P. aeruginosa ATCC 27853
P. mirabilis ATCC 43071
S. aureus ATCC 25923
Proteus

ATCC

ms intenso. Agar amarillo

Amarillas
Amarillas
Azul-verdoso
Azul-verdoso
Amarillas
Translucidas azules.

Urocultivo
El urocultivo es el cultivo de orina para diagnosticar infeccin
sintomtica del tracto urinario o infeccin asintomtica (bacteriuria

asintomtica) en pacientes con riesgo de infeccin. Est basada en la

presencia de un nmero significativo de bacterias (generalmente
>100.000 bacterias/ml.)

Bacterias
Las bacterias son organismos unicelulares de diversas formas.
Pueden tener diversas caractersticas segn sean de animales o
vegetales.

Tienen

estructuras

poco

complejas

son

clulas

procariotas, es decir, slo tienen un cromosoma y no tienen

membrana celular. Las bacterias son los organismos ms abundantes
de la Tierra, encontrndose en todas partes, y son de vital
importancia para la naturaleza y el hombre.
Clasificacin:
La mayora de las bacterias pueden clasificarse en tres categoras de
acuerdo a su respuesta al oxgeno.
Aerobias: crecen en la presencia de oxgeno y lo requiere para su
continuo crecimiento y existencia.
Anaerobias: crecen sin la presencia de oxgeno
Facultativas: generalmente crecen en presencia de oxgeno,
aunque puede hacerlo sin l.

Cultivo y caractersticas del crecimiento

Las muestras se pueden sembrar en medios de agar nutriente simple
o en agar donde sus colonias tienden a formar spread. En el medio
diferencial de McConkey produce colonias blandas o incoloras, ya que
no ataca a la lactosa. En medios semislidos muestra movilidad. En

agar CLED Proteus presentan Colonias de color azul traslcido; medio

de color azul o verdoso.
Examen microscpico
En las extensiones coloreadas se observan bacilos gram-negativos.
Identificacin
No

fermenta

la

lactosa;

produce

ureasa;

grupo

de

reactivos

disponibles para su identificacin completa. Las especies pueden

distinguirse mediante la prueba del indol; Pr. Mirabilis, indol-negativo;
Pr. vulgaris, indol-positivo
Patogenia
Se encuentran en la flora normal intestinal. Son resistentes a los
antibiticos (excepto Proteus mirabilis que es sensible a la penicilina).
Causan infecciones urinarias, septicemias y lesiones purulentas en
diferentes rganos.
Habitad
Ampliamente distribuidos en la naturaleza (suelo, agua y materia
orgnica)
Pertenece a la flora intestinal de hombres y animales.
Prevencin y control
Verificar que el paciente a su ingreso no presente manifestaciones
clnicas por este agente etiolgico.
Disminuir los riesgos de contagios en pacientes:

Diabticos
Obesos
Cateterizados
Con introduccin de sondas uretrales
Pacientes con quimioterapias

Factores de virulencia

Flagelos
Fimbrias
Protenas de membrana
Ureasa
Hemolisinas
No producen toxinas solubles.
Identificacin
Productos patolgicos

Orina, sangre, pus y otros materiales dependiendo de la localizacin

de la infeccin.

4.PROCEDIMIENTO

SIEMBRA EN AGAR CLED Y AGAR MacConkey: MUESTRA DE

ORINA (27/07/2015)
1 Esterilizamos el asa de siembra mantenindola en la porcin ms
caliente de la llama de un mechero, hasta que se torna roja.
Luego la parte superior se pasa rpidamente por la flama. El asa
se mantiene en la mano, sin tocar superficies.
2 Tomamos con el asa de siembra calibrada de 2mm. una cantidad
de orina y comenzamos a estriar en el agar CLED y MacConkey,
realizando la siembra por agotamiento.
3 El agar ya inoculado se etiqueta (nombre del microorganismo,
nombre

del

medio,

nombre

del

responsable

fecha

de

aislamiento) y lleva a la estufa a una temperatura de 37C para

su incubacin durante 24 48 horas.
TINCIN GRAM: (28/07/2015)

Al

da

siguiente

observamos

el

crecimiento

bacteriano

al

cual

procedemos a observar al microscopio utilizando una tincin Gram.

Los pasos que se han de seguir para realizar la tincin son los
siguientes:
1. Se fija la muestra utilizando una gota de solucin salina y se
mezcla con un poco de carga bacteriana, y deja secar el frotis
realizado.
2. Violeta cristal (tie todas las bateras, Gram positivas y Gram
negativas) durante 1 minuto.
3. Se fija con Lugol, 1 minuto.
4. Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona de 15 30
segundos (los Gram negativos se decoloran).
5. Safranina (colorante de contraste, que tie a los Gram negativos),
1 minuto.
6. Dejamos secar la placa ya teida.
7. Colocamos una gota de aceite de inversin y observamos con el
microscopio.

PRUEBAS BIOQUIMICAS (28/07/2015)

PRUEBAS BIOQUIMICAS LIQUIDAS: Malonato y MR-VP
1. El

asa

bacteriolgica

la

aguja

inoculadora

deben

ser

esterilizadas mantenindolas en la porcin ms caliente de la

llama de un mechero (la parte azul interna), hasta que se torna

roja. Luego la parte superior se pasa rpidamente por la flama. El

asa se mantiene en la mano, sin tocar superficies, y se deja
enfriar por 10 a 20 segundos o se la enfra en el medio de donde
vamos a tomar la muestra de cultivo. En la palma de

la otra

mano se sostienen el tubo que ser inoculado, asegurado con el

pulgar.
2. Se remueven la tapa del tubo con los dedos meique y anular de
la mano que sostiene el asa. Se sostienen en la mano mientras
dure el procedimiento, sin colocarlos en la mesa, para no
comprometer el procedimiento estril. El cuello del tubo se pasan
suavemente por la llama del mechero y el inoculador se enfra
tocando la superficie interna del tubo de cultivo antes de remover
parte del inculo.
3. Se toma una colonia del cultivo ya sembrado anteriormente con el
asa ya fra.
4. El asa, con la colonia, se introduce en el medio de cultivo. En un
caldo de cultivo, el inoculador se sumerge y se agita, hasta
obtener una emulsin.
5. Luego de la inoculacin, se extrae el instrumento, se flamean de
nuevo la boca del tubo y se le coloca de nuevo la misma tapa.
6. El asa bacteriolgica o aguja son flameados de nuevo para
destruir organismos restantes.
7. El medio de cultivo lquido ya inoculado se etiqueta (nombre del
microorganismo, nombre del medio, nombre del responsable y
fecha de aislamiento) y lleva a la estufa a una temperatura de
37C para su incubacin.
PRUEBAS BIOQUIMICAS SEMISLIDO: TSI, Urea y Citrato
1. El

asa

bacteriolgica

la

aguja

inoculadora

deben

ser

esterilizadas mantenindolas en la porcin ms caliente de la

llama de un mechero, hasta que se torna roja.
2. Se remueven la tapa del tubo con los dedos meique y anular de
la mano que sostiene el asa. Se sostienen en la mano mientras

dure el procedimiento, sin colocarlos en la mesa, para no

comprometer el procedimiento estril. El cuello del tubo se pasan
suavemente por la llama del mechero y el inoculador se enfra
tocando la superficie interna del tubo de cultivo antes de remover
parte del inculo.
3. Se toma una colonia del cultivo ya sembrado anteriormente con el
asa ya fra.
4. En un medio semislido se introduce el asa ya con la carga
bacteriana hasta la mitad del tubo, en el caso de este agar, en
otros medios semislidos ser conveniente sembrar hasta el
fondo, para poder observar la movilidad del microorganismo y se
realiza un estriamento en la parte superior (siembra mixta)
5. Luego de la inoculacin, se extrae el instrumento, se flamean de
nuevo la boca del tubo y se le coloca de nuevo la misma tapa.
6. El asa bacteriolgica o aguja son flameados de nuevo para
destruir organismos restantes.
7. El medio de cultivo lquido ya inoculado se etiqueta (nombre del
microorganismo, nombre del medio, nombre del responsable y
fecha de aislamiento) y lleva a la estufa a una temperatura de
37C para su incubacin.

6. RESULTADOS

Medio de Cultivo

Crecimiento
Colonias transparentes, cremosas, de

Agar CLED

bordes regulares y redondeados. Medio

de color azul correspondiente a
bacterias no fermentadoras de lactosa.

Tincin Gram: Bacilos Gram negativos.

Pruebas Bioqumicas

RESULTADOS

MR-VP

MR (+)

Malonato

(-)
A/A

TSI

Gas (+)
H2S (-)

Urea

(-)

Citrato

(-)

7. CONCLUSIONES

Identificamos bacterias no fermentadoras en CLED Agar y en Agar

MacConkey, por su cambio de color que en el caso de CLED Agar
fue azul mientras que en Agar MacConkey fue de color naranja y
en los dos agares las colonias fueron grandes y transparentes.

Efectuamos el protocolo de pruebas bioqumicas como las de TSI,

MR-VP, Urea, Malonato, Citrato, para la identificacin
bacteria presente en la muestra de orina.

de la

Relacionamos los resultados obtenidos en cada prueba, la

morfologa de las colonias y en el viraje de color en los medios
para llegar a la conclusin que se trata de la bacteria Proteus

8. BIBLIOGRAFAS

G.Prats; Microbiologa Clnica; Editorial Mdica Panamericana;

Buenos-Aires; Edicin 2005.

Roger Y, Stanier; Microbiologa;Editorial Reverter; Impreso en

Espaa
Lucas; Bacterias Gram Positivas Fermentativas; Disponible en:
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia

%20general/20-bacterias%20lacticas.htm
Mossel; Bacterias ; disponible en :
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/2%20bacteria
s.pdf