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Fundamentacin:
La espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones
biolgicas. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto,
y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
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Todas las sustancias pueden absorber energa radiante, aun el vidrio que parece ser
completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible;
el agua absorbe fuertemente en la regin del infrarrojo.
El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz
blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda
no absorbida.
NATURALEZA DE LA RADIACIN
ELECTROMAGNTICA
La Radiacin Electromagntica es una forma de Energa radiante que se propaga en forma
de ondas. En este fenmeno ondulatorio se define:
Longitud de onda (): es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo del
movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias
son: 1nm = 1m =10 A0 = 10-9 m.
Frecuencia (): es el nmero de ciclos por segundo. Es inversa a la longitud de onda. Su
frmula es: = c/, y se mide en ciclos por segundo o hertzios.
Fotones: la luz est formada por fotones, y estos son paquetes discontinuos de E. La E de un
fotn depende de la frecuencia y de la longitud de onda, segn la siguiente expresin: E = h
x = h x c/ (h = Cte. de Planck = 6,62.10-27erg/seg.). La Energa Electromagntica se
mide el Ergios. La relacin entre la longitud de onda y la Energa es inversa, por lo tanto a
menor longitud de onda mayor Energa y viceversa.
Espectro Electromagntico: cubre un amplio intervalo de E radiante, desde los rayos de
longitud de onda corta hasta las ondas de radio, de longitud de onda larga. Se divide en
varias regiones, las ms interesantes para nosotros son:
Regin Ultravioleta: = 10-380 nm
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Espectro electromagntico
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El espectro electromagntico est constituido por todos los posibles niveles de energa que
la luz puede tomar. Hablar de energa es equivalente a hablar de longitud de onda; luego, el
espectro electromagntico abarca, tambin, todas las longitudes de onda que la luz pueda
tener, desde miles de kilmetros hasta femtmetros. Es por eso que la mayor parte de las
representaciones esquemticas del espectro suelen tener escala logartmica.
Espectro visible
De todo el espectro, la porcin que el ser humano es capaz de ver es muy pequea en
comparacin con las otras regiones espectrales. Esta regin, denominada espectro visible,
comprende longitudes de onda desde los 380 nm hasta los 780 nm. La luz de cada una de
estas longitudes de onda es percibida por el ojo humano como un color diferente, por eso,
en la descomposicin de la luz blanca en todas sus longitudes de onda, por prismas o por la
lluvia en el arco iris, el ojo ve todos los colores.
1) Una fuente de radiacin que emita una lnea especfica correspondiente a la necesaria
para efectuar una transicin en los tomos del elemento analizado.
2) Un nebulizador, que por aspiracin de la muestra lquida, forme pequeas gotas para una
atomizacin ms eficiente.
3) Un Quemador, en el cual por efecto de la temperatura alcanzada en la combustin y por
la reaccin de combustin misma, se favorezca la formacin de tomos a partir de los
componentes en solucin.
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4) Un sistema ptico que separe la radiacin de longitud de onda de inters, de todas las
dems radiaciones que entran a dicho sistema.
VARIABLES DE DISEO
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FUENTES DE RADIACIN
Una vez que han sido formados los tomos, la flama tiene la misma funcin que una celda
en espectroscopia visible o Ultravioleta. Los tomos de la flama absorben radiacin de
acuerdo a la Ley de Beer si esta corresponde a la diferencia en energa entre los niveles
energticos de algunos de los tomos presentes, de lo contrario, la radiacin pasa por la
flama sin disminuir la potencia de haz como efecto de los tomos contenidos en ella.
El desarrollo de un equipo comercial de absorcin atmica fue hasta principio de los
cincuentas, ya que aunque su potencial se vislumbra desde fines del siglo pasado, no se
saba an como tener una fuente de radiacin para este tipo de espectroscopia.
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Este tipo de fuente de radiacin es de las ampliamente difundidas en la EAA. Las lmpara
de ctodo hueco (LCH o HCL Hollow Cathode Lamp) consisten de un cilindro de
vidrio sellado al vaco y con un gas inerte en su interior. Dentro de este mismo cilindro se
encuentran dos filamentos; uno de ellos es el ctodo y el otro el nodo. El nodo
generalmente es un alambre grueso hecho de nquel o tungsteno, el ctodo es en forma de
un cilindro hueco, en el interior del cual se encuentra depositado en forma de una capa el
elemento metlico que se va a excitar.
Tambin regularmente y cuando esto es posible el ctodo est enteramente hecho del metal
a analizar.
(Figura 2).
Figura 2: Lmpara de ctodo hueco.
El ctodo es la terminal negativa y el nodo es la positiva, cuando se aplica una diferencia de
potencial entre las dos terminales ocurre una serie de eventos que se muestra en la Figura 3 y que
son descritos a continuacin:
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Las fuentes de radiacin de este tipo tienen la misma finalidad que las lmparas de ctodo
hueco, solo que la forma de excitacin de los tomos emisores de radiacin es diferente.
La lmpara de descarga sin electrodos se construye colocando una pequea cantidad de una
sal del elemento metlico (generalmente un yoduro), o el elemento metlico mismo si as es
ms conveniente, en un recipiente de cuarzo, el cual previamente se ha sometido al vaco
antes de sellarse. Posteriormente, esta ampolleta de cuarzo se coloca dentro de un cilindro
de cermica el cual est acoplado a un generador de radiofrecuencia. Cuando la lmpara se
enciende se forma un campo de microondas el cual causa la volatilizacin y la excitacin
de algunos tomos del elemento depositado en la cpsula de cuarzo de la lmpara y as se
forma el haz de radiacin del elemento especfico a determinar. La Figura 4 es esquemtica
de una lmpara de este tipo.
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Aunque tambin hay disponibles lmparas de ctodo hueco para estos elementos, las de
descarga sin electrodos son muy superiores en todos los aspectos espectroscpicos.
QUEMADOR
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Con las gotas de solucin que alcanzan a llegar al quemador ocurren los siguientes eventos:
1. El solvente es vaporizado y se forman los cristales de las sales metlicas que originalmente se
encontraban en solucin como iones positivos y negativos. La naturaleza de las sales formadas
depende principalmente de la constante de producto de solubilidad del compuesto que cristaliza.
2. Una vez formadas las sales, estas son descompuestas por efecto de la temperatura.
Y el elemento es reducido al estado metlico slido.
3. Posteriormente el metal pasa del estado lquido al estado gaseoso y finalmente se tiene en un
vapor atmico que es capaz de absorber radiacin de longitudes de onda bien definidas.
4. Si la temperatura es los suficientemente alta y/o el elemento metlico es de bajo potencial de
ionizacin, parte de los tomos del elemento pierden uno o ms de sus electrones y se ioniza
parcialmente. Esto no es conveniente ya que la ionizacin es una interferencia en EEA.
Este proceso que se lleva a cabo en la flama est representado en la Figura 6.
TIPOS DE QUEMADORES
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orden indicado; muy importante es evitar que la ranura de la cabeza del quemador se tape
por la acumulacin de sales de las soluciones aspiradas.