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AMBIENTAL
Gua de Laboratorio
BIOQUMICA AMBIENTAL
Gua de Laboratorio
Autores:
- Blgo. ARMANDO VLEZ AZAERO
- Mg. Blgo. RAMSES SALAS ASENCIOS
Ilustraciones:
- NICK SOTO
2015
2
A.Vlez & R. Salas
INDICE
1.
Informe de laboratorio
2.
Normas de laboratorio
3.
Espectrofotometra
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
Bibliografa
3
A.Vlez & R. Salas
INFORME DE LABORATORIO
De forma prctica y concreta, un informe de laboratorio es una sntesis especfica de
las experiencias realizadas en cada sesin de laboratorio, y debe responder con
facilidad al qu, cmo y para qu se desarrollaron cada uno de los trabajos. Un
informe es de suma importancia, pues lejos de ser un documento formal, nos ayudar
afianzar nuestra capacidad analtica y a contrastar cada uno de los resultados con la
teora aprendida en clase, adems de modelar nuestro lenguaje tcnico y cientfico,
logrando cada vez una comunicacin ms fluida y eficaz.
La estructura principal de un informe de laboratorio es la siguiente:
Cartula
Su funcin es facilitar la identificacin del trabajo, por lo tanto el ttulo
deber ser el texto ms resaltante. Es importante colocar el logo de la
universidad, los autores, colaboradores y el ao en curso.
Introduccin
Esta seccin no debe abarcar ms de una pgina, y en ella debern estar
comprendidos: los objetivos, la problemtica y el marco terico referido
al tema, redactados de forma continua.
Materiales y mtodos
o Materiales
o Mtodos
Procedimientos
Resultados
Presentacin de grficas, tablas y datos obtenidos en cada experiencia,
con una explicacin (interpretacin) clara y precisa. Es necesario detallar
al mximo los productos de cada actividad realizada durante la prctica.
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A.Vlez & R. Salas
Conclusiones
Esta seccin sirve para reafirmar los conocimientos de cada prctica en
funcin a los resultados. Las conclusiones son generales y pueden incluir
comentarios acerca de las destrezas y actitudes aprendidas, sin
embargo, debern presentarse como afirmaciones categricas.
Recomendaciones
Reportar incidentes y accidentes ocurridos en cada prctica, a fin de
evitar problemas futuros. Tambin es importante colocar algunas
sugerencias en los procedimientos que permitan realizar los trabajos
con mayor eficiencia.
Bibliografa
Todo trabajo prctico experimental requiere de una serie de soportes
bibliogrficos como: libros, revistas, notas, manuales, etc., los cuales
deben citarse de manera adecuada.
Ejm:
Vlez-Azaero,
Armando
&
Lizrraga-Travaglin,
Alfonso.
2013.
5
A.Vlez & R. Salas
NORMAS DE LABORATORIO
INTRODUCCIN
El trabajo en el laboratorio debe respetar un conjunto de medidas preventivas, cuya
finalidad es proteger a los operadores, de los riesgos inminentes de cada experiencia.
Por tanto, la seguridad en el laboratorio es una labor colectiva entre los estudiantes,
los docentes y el personal tcnico de apoyo. Los agentes potencialmente dainos para
la salud presentes en el laboratorio son los siguientes:
OBJETIVOS
6
A.Vlez & R. Salas
El
7
A.Vlez & R. Salas
C. AL CONCLUIR LA SESION
Dejar limpio y seco el lugar de trabajo. Colocar los bancos junto a las mesas o
invertidos sobre stas.
8
A.Vlez & R. Salas
RECOMENDACIONES GENERALES:
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A.Vlez & R. Salas
Todo residuo que queda en un recipiente o tubo de prueba debe ser arrojado a
un tacho o al lavatorio haciendo fluir gran cantidad de agua. No se debe arrojar
al suelo ni sacudir el tubo.
10
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N1
ESPECTROFOTOMETRIA
Lo
Lt
La
OBJETIVOS
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A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Fotocolorimetra: _______________________________________________________
______________________________________________________________________________
Absorbancia: ____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Transmitancia: _________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Espectro de absorcin: ________________________________________________
______________________________________________________________________________
Curva de calibracin: __________________________________________________
______________________________________________________________________________
Coeficiente de extincin molar: ______________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
2 Balanzas de precisin
Azul de Metileno
Permanganato de Potasio
Agua destilada
24 tubos de ensayo
Frascos contenedores
2 Cucharilla-esptula
Papel platino
Guantes quirrgicos
3 Pipetas descartables
Papel toalla
4 Pisetas
Espectrofotmetro
2 Pipetas de 1ml
2 Pipetas de 5ml
12
A.Vlez & R. Salas
Al pasar la luz blanca a travs de una solucin de una sustancia coloreada, se absorben
selectivamente las radiaciones luminosas de ciertas longitudes de onda. El color
resultante que se observa es el producto de la luz transmitida por la solucin, la que
llega a nuestros ojos. Esta propiedad puede ser aprovechada en el laboratorio de
Bioqumica para determinaciones cuantitativas, generando reacciones qumicas que
generen un color estable, cuya intensidad estara directamente relacionada con la
concentracin del soluto que se quiera analizar.
Estas determinaciones cuantitativas se basan en la Ley de Lambert, que establece que
la proporcin de luz incidente (Io) absorbida por el medio es independiente de su
intensidad y que cada estrato adicional de solucin absorbe una fraccin igual de la luz
que pasa a travs de ella (la absorcin de luz es directamente proporcional a la
longitud de la celda o tubo). Por otro lado, la Ley de Beer nos dice que la intensidad de
un haz de luz que recorre una cierta distancia a travs de una solucin es proporcional
a la concentracin de la solucin. Al combinar ambas leyes, se obtiene:
Log
Lo
A B C
Lt
Donde:
Lo
Lt
Concentracin de la Solucin.
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A.Vlez & R. Salas
14
A.Vlez & R. Salas
PREPARACIN DE SOLUCIONES
Tubo B
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
4.8
4.6
4.2
0.2
0.4
0.8
Concentracin
Tubo B
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
4.5
4.6
4.8
4.9
0.5
0.4
0.2
0.1
Concentracin
15
A.Vlez & R. Salas
Absorbancia
Absorbancia
(nm)
Azul de Metileno
Permanganato de Potasio
400
420
440
460
480
500
520
540
560
580
600
620
640
660
680
700
720
740
760
780
800
16
A.Vlez & R. Salas
Absorbancia
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
380
430
480
530
580
630
680
730
0,13
0,11
0,09
0,07
0,05
0,03
0,01
-0,01
360
410
460
510
560
610
17
A.Vlez & R. Salas
660
CURVA DE CALIBRACIN
MP
St DO(MP)
DO (St)
Donde:
MP
Muestra problema
St
Estndar
DO
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A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu es necesario conocer la longitud de Onda de mxima Absorcin?
2. Si se tuviera un tubo con slo agua destilada, qu parte de la Curva de
Calibracin estara representando?
3. Si una sustancia es incolora, eso quiere decir que no posee Absorcin de luz?
Explique.
19
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N2
ANLISIS CUANTITATIVO DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
DE LA AMILASA SALIVAL
OBJETIVOS
20
A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Actividad Enzimtica: _________________________________________________
______________________________________________________________________________
Amilosa: __________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Enlace -1,6: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Almidn sintasa: ________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Amilopectina: ___________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Isozima: __________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Espectrofotmetro
Bao Mara
8 Matraces Erlenmeyer
2 Pizetas
200ml Agua destilada
36 tubos de ensayo
4 Gradillas
100ml Almidn 1%
Beaker 100ml
21
A.Vlez & R. Salas
Glucosa + Galactosa
22
A.Vlez & R. Salas
23
A.Vlez & R. Salas
PREPARACION DE LA MUESTRA
BLANCO
MUESTRA
NaCl 0.025 M
10 ml
10 ml
Sustrato de almidn 1 %
15 mI
15 ml
10 ml
10 ml
Agua destilada
15 ml
13.5 ml
1.5ml
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A.Vlez & R. Salas
CALCULOS
25
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Cmo se clasifican las enzimas? Por qu?
2. Por qu el modelo de llave - cerradura entre una enzima y el sustrato se ha
dejado de considerar actualmente?
3. Solo existen enzimas de naturaleza proteica? Explique.
26
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N3
FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD
ENZIMTICA
10
12
14
pH
OBJETIVO
Conocer
los
factores
ambientales
que
podran
alterar
el correcto
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A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Inhibidor enzimtico: __________________________________________________
______________________________________________________________________________
Suero Fisiolgico: _______________________________________________________
______________________________________________________________________________
pH: _________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Buffer: ____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Sustrato: __________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
Desnaturalizacin proteica: __________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
4 Gradillas
Parafilm
40 Tubos de ensayo
Espectrofotmetro
4 Goteros plasticos
Alcohol yodado
100mL Almidn 1%
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A.Vlez & R. Salas
liberan energa
lentamente en cada proceso, de manera que esta energa sea utilizada sin perjudicar la
integridad celular. Los pasos consecutivos que ocurren en nuestro organismo y que
pueden reemplazar una sola reaccin qumica se denominan rutas metablicas.
La actividad enzimtica puede ser regulada, siendo activada o inactivada segn los
requerimientos celulares en un momento dado. Esta actividad tambin est
estrechamente controlada por factores ambientales dentro de la clula, tales como la
temperatura y el pH. Las enzimas siempre exhiben una temperatura y un pH ptimo,
caractersticas apropiadas para su funcionamiento. Por ejemplo, las enzimas en los
tejidos de mamferos siempre muestran temperaturas ptimas alrededor de los 37C,
mientras que las de los peces del rtico estarn cercanas a los 0C. Muchas enzimas se
desnaturalizan a 45C o ms, pero en otros organismos (termoflicos), la actividad
ptima se encuentra por encima de este lmite.
29
A.Vlez & R. Salas
Tubo 1
Blanco1
Tubo 2
Blanco2
Tubo 3
Blanco3
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
Almidn 1%
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
NaCl 2.3M
1mL
1mL
NaCl 5.0M
1mL
1mL
12.5mL
13mL
11.5mL
12.mL
11.5mL
12mL
0.5mL
Buffer fosfato
0.1 M
pH 6.9
Agua
destilada
0.5mL
0.5mL
30
A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N2:
EFECTO DE LA TEMPERATURA
Blanco
Tubo
Blanco
Tubo
Blanco
Tubo
Blanco
0C
0C
20C
20C
37C
37C
100C
100C
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
NaCI 0.025 M
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
1.5 mL
1.5mL
Almidn1%
0.5 mL
0.5mL
0.5 mL
0.5mL
0.5 mL
0.5mL
0.5 mL
0.5mL
10 mL
10mL
10 mL
10mL
10 mL
10mL
10 mL
10mL
Buffer fosfato
0.1M pH 6.9
Agua
destilada
31
A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N3:
EFECTO DEL PH
Blanco 1
Tubo 2
Blanco 2
Tubo 3
Blanco 3
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
NaCl 0.025 M
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
Almidn 1 %
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
Agua destilada
10mL
10.5mL
10mL
10.5mL
10mL
10.5mL
Buffer
Acetato
0.1M
pH 4.0
Buffer
fosfato
0.1
fosfato
0.1
pH 6.9
Buffer
pH 10.0
32
A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N4:
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
1.5 Ml
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
NaCI 0.025 M
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
1.5mL
Almidn 1%
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
0.5mL
Agua destilada
10.5mL
10.4mL
10.2mL
10mL
9.5mL
8mL
0.5mL
1mL
2mL
0.1mL
0.2mL
33
A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N5:
B-1
T-2
B-2
T-3
B-3
T-4
B-4
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
Almidn 1 % (mL)
0.2
0.2
0.5
0.5
1.0
1.0
2.0
2.0
Agua destilada
(mL)
10.8
11.3
10.5
11.0
10
10.5
9.5
Buffer fosfato
0.1M pH 6,9 (mL)
2. Pre-incubar por cinco minutos a 37C y luego agregar 0.5mL del preparado
enzimtico a cada tubo a excepcin de los blancos.
3. Incubar por cinco minutos
4. Agregar tres gotas de Solucin de Yodo y dejar reposar por cinco minutos
5. Medir la Absorbancia a 660nm en el espectrofotmetro. Graficar actividad
enzimtica versus la Concentracin de Sustrato.
6. Calcular grficamente el Km y la Vmax del preparado de amilasa salival.
34
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu las enzimas reducen
qumica?
2. Explique la grfica de los dobles recprocos en funcin a la ecuacin de
Michaelis - Menten?
3. El 50% del azcar libre del maz, se convierte en almidn de 24 a 48hrs despus
de la cosecha, perdiendo su sabor dulce y caracterstico. Sin embargo el sabor
se podra mantener, si las mazorcas se sumergen en agua hirviendo, para luego
enfriarse en agua fra. Explique el mecanismo bioqumico de este proceso.
35
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N4
ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA CATALASA EN SUELOS
CONTAMINADOS
OBJETIVOS
36
A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Coenzima: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Apoenzima: ______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Catalizador: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Grupo Hemo: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Peroxisomas: ____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Titulacin: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
2 Balanzas de precisin
Permanganato de Potasio
( KMnO4 )
Agua destilada
cido Sulfrico ( H 2 SO4 )
Perxido de Hidrgeno
( H 2O2 )
Muestras de suelo
tamizado
Papel filtro
6 Soporte universal
6 Agitador magntico
6 Magnetos
4 Pizetas
6 Embudo
12 Matraz Erlenmeyer
Parafilm
6 Pipetas 50mL
12 Pipetas 5mL
6 Buretas
37
A.Vlez & R. Salas
Las enzimas son protenas con actividad cataltica, favoreciendo las reacciones
qumicas de los procesos biolgicos. La actividad de la enzima ocurre sobre una
molcula en particular denominada sustrato, la cual finalmente queda transformada
en uno o varios productos. Para que ocurra la reaccin enzimtica, es necesario que el
sustrato se asocie de manera especfica con el sitio activo, regin que presenta una
forma totalmente complementaria con parte o todo el sustrato. Por tanto, la reaccin
queda descrita en la siguiente frmula para resaltar la necesidad de la formacin de un
complejo Enzima Sustrato, luego del cual se podr generar la reaccin qumica:
E+S [E-S] E+P
En realidad, se considera que esta actividad tiene que ver con dos tipos de enzimas
diferentes, las peroxidasas y las catalasas, aunque el ltimo trmino es mucho ms
genrico y describe mejor a las enzimas presentes en los microorganismos aerobios y
en la mayora de los anaerobios facultativos. En el suelo, la actividad catalasa depende
de muchos factores como la estacin, la vegetacin presente, el contenido de materia
39
A.Vlez & R. Salas
herbicidas, insecticidas y
nematicidas.
La determinacin de la actividad catalasa en suelo se medir utilizando el mtodo de
Johnson y Temple (1964), cuya base es la reduccin en medio cido del permanganato
de potasio debido al perxido de hidrgeno que queda en el suelo por accin de las
enzimas microbianas.
40
A.Vlez & R. Salas
PREPARACIN DE MATERIALES
1. Muestra:
o Colectar una muestra de suelo. Tamizar (2mm) y colocarla en dos bolsas
de papel (0,5g en cada una)
o Conservar una bolsa, y someter la otra a la estufa, a una temperatura de
65C al menos dos horas previas a la prctica para obtener el Peso Seco
(SS)
2. Preparar cido sulfrico 1.5M:
o Medir 8mL de cido sulfrico concentrado y colocarlo en una fiola de
100mL
o Agregar agua destilada hasta la marca de aforo
3. Permanganato de Potasio 1%.
o Medir un gramo de Permanganato de Potasio y colocarlo en un matraz
Erlenmeyer de 250mL
o Agregar 80mL de agua, y llevar a una plancha de calentamiento con
agitador magntico.
o Someter la mezcla a una temperatura de 60C y agitar mediante un
magneto durante cinco minutos
o Filtrar el contenido en una fiola de 100mL y enrasar con agua destilada.
4. Perxido de Hidrgeno 1/100
o Agregar 1mL de una solucin de Perxido de Hidrgeno al 30% en una
fiola de 100mL y enrasar con agua destilada hasta la marca de aforo
o Preparar esta solucin inmediatamente antes de su uso
41
A.Vlez & R. Salas
ANLISIS DE LA MUESTRA
42
A.Vlez & R. Salas
CLCULOS
Actividad de la Catalasa =
(CS-(M-CP)) N 12
SS
Donde:
CS
SS
CP
43
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu los organismos menos evolucionados como las bacterias, presentan la
enzima catalasa en el citoplasma?
2. Por qu se genera el perxido de hidrogeno en nuestro organismo?
3. Cul es la importancia del perxido de hidrgeno en el rea de Remediacin
Ambiental?
44
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N5
CUANTIFICACIN DE AZUCARES REDUCTORES EN
PLANTAS SOMETIDAS A ESTRS SALINO
CH 2OH
CH 2OH
H
OH
OH
CH 2OH
OH
OH
OH
OBJETIVOS
45
A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Azcar reductor: ________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Enlace glucosdico: _____________________________________________________
______________________________________________________________________________
Oligosacrido: ___________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Cetona: ____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Maltosa: __________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Pentosa: __________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Espectrofotmetro
Micromipeta 100l
Micromipeta 1000l
Centrifuga
4 Pizetas
Agua destilada
Estndar de carbohidratos
40 Tubos de ensayo 10mL
Papel filtro
4 Pipetas 1mL
Soporte universal
Embudo
Muestras: plantas de
tomate sometidas a estrs
salino
4 Gradillas
Mortero
Fehling A y B
46
A.Vlez & R. Salas
polihidroxilados,
estructuralmente:
aldehdos
cetonas
simples
48
A.Vlez & R. Salas
MUESTRAS
49
A.Vlez & R. Salas
PROCESAMIENTO
50
A.Vlez & R. Salas
51
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu algunas plantas elevan considerablemente la concentracin de
monosacridos y disacridos dentro de cada clula en respuesta a la salinidad
del medio ambiente?
2. Los factores ambientales afectan el metabolismo de los carbohidratos?
Especificar.
3. Cul es la relacin entra las lectinas y los carbohidratos?
4. Por qu son importantes los glucosaminglucanos?
5. Describa cuatro polisacridos que tengan importancia relevante en los
ecosistemas peruanos.
52
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N6
CUANTIFICACIN DE PROTENAS TOTALES EN PLANTAS
SOMETIDAS A ESTRS ABITICO
NH2
CH3
COOH
N
OBJETIVOS
53
A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Enlace peptdico: _______________________________________________________
______________________________________________________________________________
Aminocido: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Pptido: ___________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Osmotina: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Protena: _________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Proteasas: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Centrifuga
Reactivo de Biuret
Estndar de protenas
totales
Agua destilada
12 Pipetas 1mL
4 Gradillas
40 Tubos de ensayo 10mL
Papel filtro
Mortero
Soporte universal
Espectrofotmetro
4 Pizetas
Embudo
Plantas de tomate
Cloruro de sodio (ClNa)
Arena fina
Leja
54
A.Vlez & R. Salas
carbono posee sus cuatro enlaces unidos a grupos diferentes. La asimetra del carbono
genera isomera ptica, por lo que los aminocidos pueden ser de tipo d o l. La
isomera ptica es definida fsicamente como la capacidad que tienen las molculas en
solucin acuosa de desviar la luz polarizada hacia la derecha o hacia la izquierda. Esta
capacidad est directamente relacionada con la disposicin espacial de los grupos
asociados al carbono . Todos los sistemas biolgicos utilizan l-aminocidos para la
sntesis de protenas.
Los aminocidos se unen entre s a travs de un enlace covalente denominado ENLACE
PEPTDICO, el cual se genera entre el grupo -carboxilo del primer aminocido con el
grupo -amino del segundo.
PPTIDO, si la cadena posee hasta cien aminocidos. Cuando la cadena es mayor que
cien unidades, el nombre cambia a PROTENA.
Entre los aminocidos, existen algunos que poseen en su regin variable grupos amino
o carboxilo adicionales, los cuales les confieren cargas positivas o negativas, segn el
caso. Estas cargas permiten que la cadena de aminocidos se pliegue al generar
enlaces o atracciones entre s. Este tipo de atracciones generarn diferentes niveles
estructurales en las protenas. La ESTRUCTURA PRIMARIA est constituida por la
secuencia lineal de aminocidos, la cual est determinada segn la informacin
contenida en el gen respectivo.
Todas las
protenas tienen estructura terciaria, pero slo algunas llegan a tener estructura
cuaternaria, cuando para cumplir su funcin deben estar conformadas por dos o ms
monmeros.
Se define al estrs como cualquier alteracin de las condiciones ambientales que
pueda reducir o influir de manera adversa en el crecimiento o desarrollo de una
planta. Las respuestas al estrs son tpicamente complejas, afectando diversas partes
de la planta e involucrando incluso a hormonas de estrs como el cido abscsico y
etileno. Existen diferentes factores que pueden ser considerados como estresantes;
entre ellos podemos mencionar como los ms importantes, al estrs ambiental y al
estrs por minerales.
Un de las estrategias de algunas plantas en respuesta al estrs hdrico o salino en el
medio externo, es la movilizacin de carbohidratos a las vacuolas con las finalidad de
56
A.Vlez & R. Salas
57
A.Vlez & R. Salas
MUESTRAS
58
A.Vlez & R. Salas
PROCESAMIENTO
59
A.Vlez & R. Salas
CUANTIFICACIN DE PROTENAS
A (MP CB)
Donde:
A:
Absorbancia real
60
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Cmo se clasifican los aminocidos por el grupo R?
2. Cmo podran los aminocidos darnos evidencia de la historia de nuestro
planeta?
3. Cul es la importancia fundamental de las protenas en el medio ambiente?
4. Todas las protenas tienen estructura cuaternaria? Explique.
61
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N7
PIGMENTOS FOTOSINTTICO ASOCIADOS A CAMBIOS
AMBIENTALES
OBJETIVOS
62
A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Pigmentos: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Clorofila B: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Carotenoides: ____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Porfiniras: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Pirrol: _____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Fotosintesis: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Acetona 80%
Agua destilada
Papel filtro
Soporte universal
Aro metlico
12 tubos de ensayo
4 gradillas
8 Pipeta 10mL
4 Pizetas
4 Embudos
4 Mortero
Plantas de tomate
estresadas con Pb
Plantas de tomate control
63
A.Vlez & R. Salas
97
b
87
77
a
Absorbancia
67
57
47
37
27
17
7
-3
390
440
490
540
590
640
690
740
Longitud de Onda
65
A.Vlez & R. Salas
PREPARACIN DE LA MUESTRA
66
A.Vlez & R. Salas
EXTRACCIN DE PIGMENTOS
CONTROL TRATAMIENTO
663nm
645nm
Tabla9. Absorbancias de las muestras Control y Tratamiento
a dos longitudes de onda
67
A.Vlez & R. Salas
CLCULOS
68
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
DISCUSIONES
El trabajo deber ser contrastado con otros experimentos similares citando las
referencias de forma correcta
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
69
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N8
RESPIRACIN CELULAR. ALTERACIN POR METALES
PESADOS
Acetil-CoA
Citrato
Iso-citrato
Fumarato
Succinil-CoA
OBJETIVOS
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A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Inhibidor: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Piruvato DH: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Acetil CoA: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Mitocondria: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
NADH: _____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Succinato DH: ____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Balanza de precisin
Agua destilada
Acetato de plomo
12 tubos de ensayo
Hgado de pollo
Mortero
4 Pipetas 1mL
Licuadora
4 Pizetas
4 Pipetas 10mL
Pipetas descartables
Succinato sdico 0,4M
Aceite vegetal
Buffer fosfato pH7
Azul de metileno 0.1%
71
A.Vlez & R. Salas
---------------> RCH2OH
Succinato
Deshidrogenasa (SDH) una enzima que permite que se reduzca el FAD en FADH2 el
cual libera electrones que son capturados por el oxgeno molecular. La contaminacin
por metales pesados como el plomo inhibe en gran medida las enzimas del ciclo de
Krebs, reduciendo el poder reductor que esta ruta metaboliza ofrece para el
funcionamiento de la cadena de transporte de electrones y la produccin de energa
en los organismos superiores.
73
A.Vlez & R. Salas
RESPIRACIN CELULAR
Succinato 0.4 M
Buffer fosfato pH 7.4
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
0.5 mL
0.5 mL
0,5mL
0.5 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1mL
1 mL
0.5 mL
0.5 mL
0.5 mL
0,5mL
0.5 mL
Agua destilada
8 mL
8 mL
7.5 mL
7mL
7.5 mL
Homogenizado de hgado
0.5 mL
0.5 mL
0,5mL
0.5 mL
0,5mL
Azul de metileno
74
A.Vlez & R. Salas
75
A.Vlez & R. Salas
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
76
A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N9
DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS EN
MICROORGANISMOS DE ORIGEN LAGUNAR
O
CH 2
O
CH
O
CH 2
OBJETIVOS
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A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Triglicrido: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
cido graso insaturado: _______________________________________________
______________________________________________________________________________
Molcula apolar: ________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Enlace ster: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Configuracin CIS: ______________________________________________________
______________________________________________________________________________
Anfiptico: _______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Soporte universal
Pipetas descartables
Aro metlico
Metanol
Micropipeta 100m
Micropipeta 1000 m
Estufa
Tubos de centrifuga 15mL
78
A.Vlez & R. Salas
79
A.Vlez & R. Salas
80
A.Vlez & R. Salas
PREPARACIN DE LA MUESTRA
81
A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N2:
CUANTIFICACIN
BLANCO
ESTNDAR
MUESTRA PROBLEMA
ESTNDAR
0.1mL
MUESTRA PROBLEMA
0.1mL
1.0mL
1.0mL
1.0mL
REACTIVO ENZIMTICO
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A.Vlez & R. Salas
RESULTADOS
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Cules son las ventajas energticas de los lpidos frente a molculas como los
carbohidratos y protenas?
2. Cul es la importancia de los Sulfolpidos y Galactolpidos en las plantas?
3. Por qu los esfingolpidos pueden comportarse como fosfolpidos y
glucolpidos?
4. Dnde se encuentran principalmente los triglicridos en plantas y animales?
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A.Vlez & R. Salas
PRACTICA N10
INFLUENCIA DE LOS XENOBITICOS EN LA INTEGRIDAD
DEL ADN
OBJETIVOS
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A.Vlez & R. Salas
CONCEPTOS PREVIOS
Xenobitico: _____________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Epigentico: ______________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Mutacin: ________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Electroforesis: ___________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Microncleos: ___________________________________________________________
______________________________________________________________________________
Ribosa: ____________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
MATERIAL DE LABORATORIO
Raicillas de cebolla
Agua destilada
Acetato de plomo
Tubos de micro-centrifuga
Cuchara-esptula
Pinzas de reloj
Cmara electrofortica
horizontal
Bistures
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A.Vlez & R. Salas
compuestos txicos a fin de continuar con su desarrollo. Por otro lado, se evala el
dao que genera el contaminante sobre el material gentico.
86
A.Vlez & R. Salas
PREPARACIN DE LA MUESTRA
1. Colocar una cebolla sobre un beaker de 250mL con agua de grifo, 4 das previos
al desarrollo de la prctica (Figura 1). Seguir las mismas indicaciones para la
preparacin de una muestra control.
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A.Vlez & R. Salas
EXPERIENCIA N2:
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A.Vlez & R. Salas
RESULTADOS
CONCLUSIONES
RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
1. Por qu los xenobiticos afectan la integridad del ADN?
89
A.Vlez & R. Salas
BIBLIOGRAFA
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A.Vlez & R. Salas