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PRACTICA 3: Determinacin De Azucares Reductores Por
Espectrofotometra
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANA

FACULTAD DE INGENIERIA
E.A.P: INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
TEMA: DETERMINACIN DE AZUCARES REDUCTORES
POR EL MTODO DE DNS.
CURSO: ANLISIS INSTRUMENTAL DE PRODUCTOS
AGROINDUSTRIALES.
DOCENTES: GILBERT RODRGUEZ PAUCAR.
ALUMNOS:
Li Salazar Ashley Alyssa.

Yupanqui Bacilio Carla Ivon.
CICLO: Vl
NVO CHIMBOTE - PER
Ing. Agroindustrial Pgina 1

Espectrofotometra
INTRODUCCION:
El desarrollo de mtodos analticos es esencial en el seguimiento y

control del proceso de fabricacin de azcar y alcohol. En la Industria
sucro-alcoholera es comn el empleo del mtodo desarrollado por Eynon
y Lane para la determinacin de azcares reductores en mieles y caldos
de fermentacin de destileras (1,2), siendo ste el aceptado por las
normas cubanas y el recomendado por la Comisin Internacional para
los Mtodos Uniformes de Anlisis de Azcar
El mtodo de Eynon-Lane tiene como principal inconveniente el ser un
mtodo volumtrico donde el punto final de la valoracin se detecta por
cambio de color, adems es un mtodo poco productivo. Sin embargo,
ha demostrado ser exacto y preciso en la determinacin de azcares
reductores en mieles y baticiones de mieles (2,5).Sumner y
colaboradores desarrollaron otro mtodo utilizando el cido 3,5 dinitro.
Saliclico (DNS) para calcular la concentracin de azcares reductores en
distintos materiales. El procedimiento se basa en una reaccin Redox
que ocurre entre el DNS y los azcares reductores presentes en la
muestra. Este mtodo ha sufrido varias modificaciones a travs de los
aos para adecuarse al anlisis de diferentes materiales y su principal
ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un
mtodo espectrofotomtrico
El mtodo del DNS no es recomendable utilizarlo para la determinacin
de azcares reductores en muestras intensamente coloreadas como
mieles y caldos de fermentacin que la contengan. Estudios de Otero y
colaboradores muestran dispersin en la determinacin de azcares
reductores en mieles por el mtodo del DNS con la modificacin de
Miller.
En la actualidad, el programa alcoholero cubano y en especial la
produccin de alcohol a partir de jugos mezclados de caa de azcar
necesita del desarrollo de nuevos procedimientos analticos: precisos, de
elevada productividad y de poca manipulacin tcnica que permitan
llevar con exactitud la contabilidad y eficiencia global del proceso.
En el presente trabajo se desarrolla un procedimiento para la
determinacin de azcares reductores totales en jugos mezclados de
caa de azcar por el mtodo del cido 3,5 dinitro saliclico. Adems, se
hace un anlisis comparativo con el mtodo de Eynon y Lane.
OBJETIVOS:

Espectrofotometra
- Cuantificar los azucares reductores presentes en los alimentos.

- Conocer y aplicar los principios de la curva patrn aplicada a la
cuantificacin de azucares reductores con el reactivo 3.5
dinitrosalcilico (3,5- DNS).
MARCO TEORICO:
- El mtodo DNS es una tcnica colorimtrica que emplea 3,5-
cidodinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos
presentes en una muestra, seguido de la determinacin
espectrofotomtrica a 540nm de los azcares reductores. Esta
tcnica sirve para cuantificar los azucares reductores
producidos durante una fermentacin o para cuantificar
los productos de una reaccin enzimtica. Por lo tanto, se
aplicar esta tcnica para la construccin de una curva patrn
de glucosa que ser una referencia para prximos
experimentos.
La glucosa u otro azcar reductor reducen el reactivo cprico

alcalino, dando el xido cuproso. Este, en presencia del reactivo
arseno molibdico de Nelson, forma un complejo deoxido de
molibdeno de color azul estable cuya intensidad puede ser medida
en el fotocolormetro, una vez que sigue las leyes de Lambert y
Beer. La composicin de la preparacin del reactivo de DNS en g/L
para poder disolver el acido dini trosalicilico, el hidrxido de
sodio deber estar completamente disuelto, una vez preparado el
reactivo deber almacenarse en un recipiente color mbar, a
temperatura ambiente. Este reactivo dura aproximadamente un
mes antes de mostrar precipitacin de los reactivos o vestigios de
descomposicin. Debido a lo anterior se recomienda hacer los
clculos adecuados para preparar solo la cantidad de reactivos y
evitar la desperdicion.
ELABORACION DE LA CURVA PATRON:

Segn la ley de Lambert y Beer la absorbancia directamente
proporcional a la concentracin del material que absorbe la luz, al
que generalmente conocemos como analito. Siempre que se utiliza
un mtodo espectrofotomtrico para cuantificar la concentracin
de analito presente en una muestra problema es necesario
relacionar la concentracin de dicho analito con la cantidad de luz

Espectrofotometra
que absorbe del haz que le incide. Sabiendo que esta es una
relacin aproximadamente lineal, lo ms recomendable es
preparar una solucin estndar con una concentracin conocida de
analito y hacer diversas disoluciones de la misma, para poder
obtener dicha relacin y expresarla matemticamente Y = mX + b.
en este caso, m ser la pendiente de esta recta, b la ordenada al
origen X ser la concentracin de analito, y Y la absorbancia
observada para cada concentracin. La tcnica de DNS cuantifica,
como mximo, una concentracin de azcar de un mg/ml. Por lo
tanto la solucin estndar deber tener esa concentracin.
A partir de esta solucin se debern realizar las disoluciones
correspondientes para construir una curva patrn con la que se
determinara la concentracin del analito en la muestra problema,
a partir de la ecuacin de la recta antes mencionada. Las
disoluciones que servirn para la construccin de la curva debern
realizarse por duplicado a fin de construir la curva con los
promedios de las dos lecturas obtenidas por cada disolucin.
Mtodos para determinar los azucares reductores:
- Reaccin de Fehling Esta prueba se utiliza para el

reconocimiento de azcares reductores. El poder reductor que
pueden presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo,
que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes
oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra
combinado no puede presentar este poder reductor. Los
azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de
reducir el in Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello
el grupo carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En
medio fuertemente bsico como en nuestro caso el NaOH el
in Cu2+ formara Cu (OH)2 insoluble por eso aadimos
tartrato sdico potsico que acta como estabilizador al
formar un complejo con el Cu2+.
OH-
2++ RCHOCu 2 O+ RCOOH
2 Cu
- Reaccin de benedict Esta prueba sirve para el

reconocimiento de azcares reductores. Se basa en la

Espectrofotometra
reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es

similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil
(HNaCO3) y el estabilizante (citrato sdico) usados hacen que
este test sea ms sensible y estable.
- Reaccin de Braun Esta reaccin sirve para el

reconocimiento de azcares reductores. Los azcares
reductores en medio alcalinos pueden reducir el
picrato, de color amarillo, a picramato, de color rojo en
medio alcalino (Na2CO3).
- Reaccin de Molisch esta reaccin sirve para el

reconocimiento de todo tipo de azcares. Los
azcares, en medio cido fuerte se deshidratan
formando furfurales. Estos furfurales al reaccionar con
la -naftol originan complejos de intenso color.

Espectrofotometra
PROCEDIMIENTO:
Solucin 1:

Espectrofotometra
1g azcar En Matraz
DILUIR
100 ml agua De 500 ml
Solucin 2: Deber realizarse el modelo de solucione 2 en 8

soluciones diferentes agregando 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 y 1.4
de la solucin 0.1.Seguir la marcha analtica
0.1 ml de En Matraz
AGREGAR
solucin 1 50ml
Con agua Hasta 50ml

AFLORAR
MEZCLAR
Solucin 3:
1 ml de solucin Con pipeta

2 MEDIR
1ml de DNS
Espectrofotometra
A tubo de ensayo
AGREGAR
MEZCLAR
A bao maria Durante 10 min

En ebullicin CALENTAR
En ANALIZAR Absorbancia
espectrofotmetro
(540nm)
Curva de calibrado
REALIZAR
RESULTADOS Y DISCUSIONES:
CON GLUCOSA GRUPO 1 :
Concentraci IITA
John
n (Instituto
(Agro)
[ ] )

Espectrofotometra
0 0 0
0.1 0.0342 0.0184
0.2 0.0707 0.0661
0.4 0.156 0.2137
0.6 0.2313 0.3604
0.8 0.259 0.3747
1 0.4013 0.6309
1.2 0.492 0.7466
1.4 0.5405 0.9183
Azucares R. (1)
1
0.8 f(x) = 0.66x - 0.05

Lab. Agro.
R = 0.98
0.6 Linear (Lab. Agro.)
ABSORBANCIA f(x) = 0.4x - 0.01 IITA
0.4
R = 0.99
Linear (IITA)
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6
CONCENTRACION mg/ml
Podemos observar por las grficas que el equipo con mayor

sensibilidad es el que se encuentra en el instituto (IITA), por tener
una pendiente mayor (0.6603) a comparacin de la pendiente
obtenida en el equipo que se encuentra en agroindustria (0.3953).
Tambin podemos observar en los crculos realizados en la graficas

que existe una zona de sensibilidad (limite de deteccin) y
posiblemente una zona de linealidad, la zona de linealidad es la
zona la cual ya no nos permite obtener una ecuacin recta ya que
la pendiente baja y el equipo lee y nos da datos dispersos donde
ya no se cumple la ley de Lambert-Beer.

Espectrofotometra
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la

concentracin y a la longitud del paso de la luz.
A = bc
A: absorbancia. No tiene unidades.
: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente

de absorcin. Es constante para un compuesto dado siempre
que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de
temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud de paso de la luz, en cm.
c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L
Mientras que la zona de sensibilidad es aquella en la cual a bajas

concentraciones el equipo no puede medir la absorbancia por falta de
ms sensibilidad, es por eso que nos dan datos dispersos como se
observa en la grfica.
En el dato nmero cuatro es decir la concentracin de 0.4mg/ml

podemos ver que no est alineado ni siquiera un poco a
comparacin de los dems datos, y esto se observa en las dos
grficas, por lo cual podemos descarar que sea un error de la
sensibilidad del equipo, por lo contrario el error pudo ser debido a
la mano de obra por la falta de exactitud para hacer las
mediciones
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
---------------------------------------------
LA SIGUIENTE GRAFICA se realiz sin tomar en cuenta el blanco es

decir no se parti de una solucin a concentracin de cero.

Espectrofotometra
Concentra IITA
John
cin (Institut
(Agro)
[ ] o)
Datos sin
0.1 0.0342 0.0184
blanco
0.2 0.0707 0.0661
0.4 0.156 0.2137
0.6 0.2313 0.3604
0.8 0.259 0.3747
1 0.4013 0.6309
1.2 0.492 0.7466
1.4 0.5405 0.9183
Azucares R. (2)
1
0.8 f(x) = 0.68x - 0.07

R = 0.98 Lab. Agro.
0.4
R = 0.99
Linear (IITA)
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6
CONCENTRACION mg/ml
Sin colocar la muestra en blanco observamos que la pendiente

disminuye ya que no parte del cero sino que por regresin si
existira una absorbancia a una concentracin en blanco que sera
en ambos casos negativa, es por eso que es importante medir el
blanco para poder hacer una comparacin con las dems
concentracin
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
---------------------------------------------
EN LA SIGUIENTE GRAFICA se ha realizado una autocorreccin en

los datos sombreados para poder obtener una grfica ms recta y
un R ms cercano a uno, tericamente los datos deben formar una

Espectrofotometra
ecuacin totalmente recta, sin embargo no son los resultados

obtenidos posiblemente por falla de los equipos, la mala medicin
de las concentraciones al momento de pipetear, etc.
Mientras el R se aproxime ms a uno, ms confiable y exactos

habremos sido en la medicin no solo por parte del
espectrofotmetro sino tambin por parte de la mano de obra que
son los alumnos
Concentra IITA
John
cin (Institut
(Agro)
[ ] o)
0.1 0.0342 0.0184
0.2 0.0707 0.0661
0.4 0.156 0.2137
0.6 0.2313 0.3604
0.8 0.3 0.48
1 0.4013 0.6309
1.2 0.492 0.7466
1.4 0.5405 0.9183
Azucares R. (3)
1
0.8 f(x) = 0.67x - 0.04

R = 1 Lab. Agro.
0.4
R = 1
Linear (IITA)
0.2
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6
CONCENTRACION mg/ml

Espectrofotometra
El R cambia considerablemente a comparacin de la grfica 1, sin

embargo la pendiente disminuye ya que no hay picos en la modificacin
y podemos decir que la concentracion de glucosa es constante en cada
punto por mantener una lnea casi recta, estos deberan ser unos buenos
resultados en la realizacin de la prctica.
CON GLUCOSA GRUPO 2:
(mg/ml) Lab. Agro IITA

0.0 0.000000 0.000000
0.1 0.029100 0.007400
0.2 0.094200 0.105292
0.4 0.266400 0.392325
0.6 0.288800 0.435806
0.8 0.399700 0.617767
1.0 0.478700 0.711945
1.2 0.591800 0.937192
1.4 0.678900 1.114000
Azucares R. (1)
1.20
1.00 f(x) = 0.8x - 0.02
R = 0.99 Lab. Agro
0.80
Linear (Lab. Agro)
ABSORBANCIA 0.60 f(x) = 0.48x + 0.01
IITA
0.40 R = 0.99 Linear (IITA)
0.20
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
CONCENTRACION (mg/ml)

Espectrofotometra
Al igual que en la grfica del grupo1 podemos observar que por

mayor pendiente el equipo del instituto (IITA) por lo cual tiene ms
sensibilidad a comparacin del equipo que se encuentra en el lab
de agroindustria.
Observamos tambien que aparecen nuevamente los puntos en

conjunto al comienzo de las concentraciones por falta se
cesibilidad del equipo, esta zona denominada zona de sensibilidad,
y posiblemente exista una limite de linealidad donde fuera de ella
se cumplira la ley de Lambert-Beer mencionada anteriormente
con la cual podramos describir el comportamiento si es que la
recta comenzara a caer.
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
---------------------------------------------
En la grfica siguiente mostramos los datos del grupo 2 sin tomar

en cuenta la muestra en blanco, a diferencia del grupo uno
podemos observar que en este caso la pendiente aumenta ya que
se elimin el comienzo de cero y la recta se forma mejor y es ms
constante en su porcentaje de glucosa

0.1 0.029100 0.007400
0.2 0.094200 0.105292
0.4 0.266400 0.392325
0.6 0.288800 0.435806
0.8 0.399700 0.617767
1.0 0.478700 0.711945
1.2 0.591800 0.937192
1.4 0.678900 1.114000

Espectrofotometra
Azucares R. (2)
1.50
Lab. Agro
1.00 f(x) = 0.81x - 0.04 Linear (Lab. Agro)
ABSORBANCIA R = 0.98
IITA
0.50 f(x) = 0.48x + 0.01
R = 0.99 Linear (IITA)
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
-----------------------------------------------------------------------------------------------------
---------------------------------------------
En la siguiente grafica se realiz una correccin de los datos en la

parte sombreada para poder aproximarlos ms a los datos tericos
que debimos haber obtenido, como ya lo dijimos antes mientras
ms se aproxime a 1 el R ms confiables y exactos habremos sido
en la medicin de las soluciones y podremos saber la absorbancia
a diferentes concentraciones haciendo uso de la ecuacin y
siempre y cuando se encuentre en el rango de concentraciones
utilizados para la ecuacin.

0.0 0.000000 0.000000
0.1 0.029100 0.007400
0.2 0.094200 0.105292
0.4 0.166400 0.292325
0.6 0.288800 0.435806
0.8 0.399700 0.617767
1.0 0.478700 0.751945
1.2 0.591800 0.937192
1.4 0.678900 1.114000

Espectrofotometra
Azucar R. (3)
1.20
1.00 f(x) = 0.82x - 0.04
R = 1 Lab. Agro
0.80
Linear (Lab. Agro)
ABSORBANCIA 0.60 f(x) = 0.5x - 0.01
IITA
0.40 R = 1
Linear (IITA)
0.20
0.00
0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6
CUADRO RESUMEN DE RESULTADOS:
Pendient
R
e
IITA 0.6603 0.982
grupo 1
Lab.Agro. 0.3953 0.9892
IITA 0.7968 0.9861
grupo2
Lab.Agro. 0.4859 0.9885
En los dos grupos se obtuvieron que tuvo mayor pendiente la curva de

calibracin correspondiente al equipo IITA que se encuentra en el instituto, sin
embargo existe ms linealidad con el equipo que se encuentra en el laboratorio
de agroindustria ya que posee un R mayor y ms prximo a 1, es decir no hay
variacin de datos, con ese equipo se puede decir que se fue ms precisos,
pero con el IITA mas exactos.

Espectrofotometra
RESULTADOS DE LA NARANJA: muestra del primer grupo
Naranja
Zumo
0,5263 0,5253
=10,5 mg 1ml de
50
DNS
50m
l 1ml
10,5 mg
DATOS: PRIMER GRUPO

- Absorbancia para el zumo de naranja = 0,2147
- EN EL LABORATORIO DEL ING. JOHN

Hallo mi concentracin:

Espectrofotometra
Y= 0,3953X-0,0075
0,2147+0,0075
X= 0,3953
X= 0,56
Para hallar el % de azucares reductores por regla de tres simples:
10,5 0,56 X=5,3%

100 X
- En IITA
- Hallo mi concentracin: con absorbancia : 0,3379
Y= 0,6603X-0,0483
0,3379+ 0,0483
X= 0,6603
X= 0,58
Para hallar el % de azucares reductores por regla de tres

simples:
10,5 0,58X=5,52%
100 X
DATOS: SEGUNDO GRUPO

- Y= 0,4849X-0,0071
0,2147+0,0071
- X= 0,4849
- X= 0,45
simples:
10,5 0,45X=4,28%

Espectrofotometra
100 X
- En IITA
- Hallo mi concentracin: con absorbancia de 0,3379
Y= 0,7968X-0,0244
0,3379+ 0,0244
X= 0,7968
X= 0,45

simples:
10,5 0,45X=4,29%
100 X
RESULTADOS DE LA PIA: muestra del primer grupo
Pia
Zumo
0,527 0,527g
=10,54 mg 1ml de
50
DNS
50m
l 1ml
10,54 mg
DATOS: PRIMER GRUPO

- Absorbancia para el zumo de la pia = 0,1396


Espectrofotometra
Y= 0,3953X-0,0075
0,1396+0,0075
X= 0,3953
X= 0,37
10,54 0,37X=3,51%
100 X
- En IITA
Y= 0,6603X-0,0483
0,2269+ 0,0483
X= 0,6603
X= 0,41

simples:
10,54 0,41 X=3,94%

100 X

- Hallo mi concentracin:
- Y= 0,4849X-0,0071
0,1396+0,0071
- X= 0,4849
- X= 0,3
simples:
10,54 0,3X=2,84%
100 X

Espectrofotometra
- En IITA
Y= 0,7968X-0,0244
0,2269+ 0,0244
X= 0,7968
X= 0,3

simples:
10,54 0,3X=2,84%
100 X
RESULTADOS DE LA CARAMBOLA: muestra del primer grupo
Carambola
Zumo
1,020 1,020g
=20,4 mg 1ml de
50
DNS
50m
l 1ml
20,4 mg
DATOS: PRIMER GRUPO

- Absorbancia para el zumo de la pia = 0,2945

Espectrofotometra

Y= 0,3953X-0,0075
0,2945+ 0,0075
X= 0,3953
X= 0,76
20,4 0,76 X=3,72%

100 X
- En IITA
Y= 0,6603X-0,0483
0,4785+ 0,0483
X= 0,6603
X= 0,79

simples:
20,4 0,79X=3,87%
100 X

- Hallo mi concentracin:
- Y= 0,4849X-0,0071
0.2945+ 0,0071
- X= 0,4849
- X= 0,62

Espectrofotometra

simples:
20,4 0,62X=3,03%
100 X
- En IITA
Y= 0,7968X-0,0244
0,4785+ 0,0244
X= 0,7968
X= 0,63

simples:
20,4 0,63X=3,08%
100 X
En conclusin de mis resultados:
PRIMER GRUPO SEGUNDO GRUPO
%A. REDUCTOR ING. JOHN% IITA% ING. JOHN% IITA%
CARAMBOLA 3,72 % 3,87 % 3,03 % 3,08 %
NARANJA 5,33 % 5,52% 4,28 % 4,29 %

Espectrofotometra
PIA 3,51 % 3,94 % 2,84 % 2,84 %
- En lo que respecta a absorbancia :
naranj pia caramb

a ola
absorba JHON 0.2147 0.1396 0.2945
ncia IITA 0.3379 0.2269 0.2785
Notamos que al aplicar la tcnica de DNS se pudo determinar que la
mayor cantidad de azucares reductores se encuentra en el zumo de la
naranja pues su valor es el ms alto
CONCLUSIONES:
El espectrofotmetro mide la absorbancia de las solucin y por

medio de La curva de calibrado podemos determinar una ecuacin
que nos ayudara a determinar el porcentaje de un soluto en un
solvente siempre y cuando no salga del rango de concentraciones
realizado experimentalmente.
Para obtener una curva de calibrado debemos medir la

absorbancia a diferentes concentracin y mientras ms muestras
realicemos ms exacta ser la ecuacin que describa el porcentaje
de algn componentes en este caso de oriento la prctica a la

Espectrofotometra
determinacin de azucares reductores, sin embargo no solo hay

azucares en los zumos sino tambin otros compuestos como
protenas, vitaminas, colorantes, pigmentos, etc.)
En un laboratorio pueden haber diferentes tipos de

espectrofotmetros, de los cuales podemos determinar cul de
ellos es ms sensible por medio de la curva de calibracin, en ellas
encontramos una pendiente y mientras mayor sea una pendiente
en comparacin de otra el equipo ser ms sensible y por tanto
existir mayor precisin y exactitud en los datos ledos por el
espectrofotmetro; en la prctica pudimos determinar por todas
las lecturas y curvas realizadas que el equipo ms sensible y mejor
es el que se encuentra en el instituto de agroindustria (IITA) a
comparacin con el del laboratorio de agroindustria.
Podemos determinar cuan exactos hemos sido en nuestra

medicin a travs del R que nos indica que tan recta es la grfica
realizada, mientras ms recta la grfica ser ms confiable los
datos y ms exactos habremos sido en la medicin.
Dentro de la curva de calibrado encontramos dos zonas

importantes: la zona de sensibilidad en la cual el
espectrofotmetro no alcanza a leer a tan bajas concentraciones
es por eso que se observan los puntos dispersos, y la zona donde
ya no hay linealidad es decir que ya no cumple con la ecuacin
dada a partir de concentraciones ms altas, sobrepasa los lmites
de linealidad se deja de cumplir la Ley de Lambert-Beer
convirtindose la recta en una curva.
DISCUSIONES:
- Para nuestra prctica determinamos la curva de calibracin

con una longitud de onda de 540, y contrastando con la
bibliografa decimos que el rango de longitud de onda fue la
adecuada.
- Los azcares reductores poseen un grupo carbonilo libre

formando un grupo hemiacetal que le confiere la caracterstica

Espectrofotometra
de poder reaccionar con otros compuestos. En este caso,

reaccion con el reactivo DNS, quien hidroliza los polisacridos
presentes en la muestra de naranja.
- DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES POR LATCNICA

DE MILLER (DNS). Bibin L. M. E., Rojas R. M. A. El DNS (cido
dinitrosaliclico), es un reactivo que tiene la capacidad de
oxidar a los azcares reductores dando resultados
colorimtricos que se pueden medir con una longitud de onda
de 540nm.
- Segn Daniel C. Harris nos dice que mediante el clculo de

la cantidad de luz que una solucin es capaz de absorber y la
aplicacin de la ley de Beer, el espectrofotmetro puede
determinar la concentracin de una solucin con color.
- Segn Aldabe, Bonanzosa Qumica 2. Pgina 322 dicen que es

importancia calibrar un espectrofotmetro uv visible es de
suma importancia para sus procesos de produccin y
reduccin de riesgos, un instrumento como este
(ESPECTROFOTOMETRO) es un equipo de laboratorio utilizado
en la fsica ptica y sirve bsicamente para medir longitudes
de onda y la relacione entre valores de una misma magnitud
fotomtrica que son relativos a distintos haces de radiaciones,
los laboratorios de qumica los utilizan para la cuantificacin
de sustancias y microorganismos.
-
- En los dos grupos se obtuvieron que tuvo mayor pendiente la
curva de calibracin correspondiente al equipo IITA que se
encuentra en el instituto, sin embargo existe ms linealidad
con el equipo que se encuentra en el laboratorio de
agroindustria ya que posee un R mayor y ms prximo a 1, es
decir no hay variacin de datos, con ese equipo se puede decir
que se fue ms precisos, pero con el IITA mas exactos.
Cuestionario:
1. Cules son los mtodos que determinan cualitativamente

los azucares reductores? Descrbelos.

Espectrofotometra
- Reaccin de Fehling Esta prueba se utiliza para el

reconocimiento de azcares reductores. El poder reductor que
pueden presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo,
que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes
suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no puede
presentar este poder reductor. Los azcares reductores, en
medio alcalino, son capaces de reducir el in Cu2+ de color
azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azcar
se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente bsico como
en nuestro caso el NaOH el in Cu2+ formara Cu
(OH)2 insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que
acta como estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.
- Reaccin de benedict Esta prueba sirve para el
reconocimiento de azcares reductores. Se basa en la
reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es
similar a la reaccin de Fehling, el medio bsico dbil (HNaCO3)
y el estabilizante (citrato sdico) usados hacen que este test
sea ms sensible y estable.
- Reaccin de Braun Esta reaccin sirve para el
reconocimiento de azcares reductores. Los azcares
reductores en medio alcalinos pueden reducir el picrato, de
color amarillo, a picramato, de color rojo en medio alcalino
(Na2CO3).
- Reaccin de Molisch esta reaccin sirve para el
reconocimiento de todo tipo de azcares. Los azcares, en
medio cido fuerte se deshidratan formando furfurales. Estos
furfurales al reaccionar con la -naftol originan complejos de
intenso color.
2. Explique porque la sacarosa y el almidn son reductores
La sacarosa: es soluble en agua, pero sus molculas son

demasiado grandes para pasar a travs de la membrana celular
durante la difusin. Slo se puede analizar a travs de una
reaccin de hidrlisis, una reaccin de condensacin inversa.
Porque la sacarosa no es reductor?

Espectrofotometra
La razn por la que la sacarosa es un azcar no reductor es que

no tiene ningn aldehdo libre o un grupo ceto. Adems, su
carbono anomrico no est libre y no se puede abrir fcilmente
su estructura para reaccionar con otras molculas.
- El almidn: es un azcar no reductor porque no tiene el grupo

carbonilo libre ya que estn usndolo para formar los enlaces
entre las glucosas.
3. Qu funcin cumple el blanco en la medicin de la

absorbancia?
La funcin del blanco es establecer un parmetro con el cual
compara las dems mediciones que se hagan, esto es agua
destilada en un volumen conocido a la cual se le agrega los
mismos reactivos de la muestra que se est estudiando en caso
contrario no podremos comparar.
BIBLIOGRAFIA:

Espectrofotometra
- TOCCHINI, R.P., NISIDA, A.L.A.C. & MARTIN, Z.J.

Industrializao de polpas, sucos e nctares de frutas. Manual
do ITAL, Campinas, 1995, p. 44-63.
- KIMBALL, D.A. Citrus processing: quality control and
technology, New York: Van Nostrand Reinhold, 1991. 473 p.
- ALVES, R.M.V. & GARCIA, E.E.C. Embalagens para sucos de
frutas. Coletnia do ITAL, Campinas, v. 23, n. 2., p. 105-122,
1993.

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PRACTICA 3: Determinacin De Azucares Reductores Por

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANA

Li Salazar Ashley Alyssa.

Ing. Agroindustrial Pgina 1

El desarrollo de mtodos analticos es esencial en el seguimiento y

Ing. Agroindustrial Pgina 2

- Cuantificar los azucares reductores presentes en los alimentos.

La glucosa u otro azcar reductor reducen el reactivo cprico

ELABORACION DE LA CURVA PATRON:

Ing. Agroindustrial Pgina 3

Mtodos para determinar los azucares reductores:

- Reaccin de Fehling Esta prueba se utiliza para el

- Reaccin de benedict Esta prueba sirve para el

Ing. Agroindustrial Pgina 4

reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil. Aunque es

- Reaccin de Braun Esta reaccin sirve para el

- Reaccin de Molisch esta reaccin sirve para el

Ing. Agroindustrial Pgina 5

Ing. Agroindustrial Pgina 6

Solucin 2: Deber realizarse el modelo de solucione 2 en 8

Con agua Hasta 50ml

1 ml de solucin Con pipeta

A bao maria Durante 10 min

CON GLUCOSA GRUPO 1 :

Ing. Agroindustrial Pgina 8

0.8 f(x) = 0.66x - 0.05

Podemos observar por las grficas que el equipo con mayor

Tambin podemos observar en los crculos realizados en la graficas

Ing. Agroindustrial Pgina 9

La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la

A: absorbancia. No tiene unidades.

: el coeficiente de extincin molar, tambin llamado coeficiente

b: es la longitud de paso de la luz, en cm.

c: es la concentracin del absorbente. Se mide en mol/L

Mientras que la zona de sensibilidad es aquella en la cual a bajas

En el dato nmero cuatro es decir la concentracin de 0.4mg/ml

LA SIGUIENTE GRAFICA se realiz sin tomar en cuenta el blanco es

Ing. Agroindustrial Pgina 10

0.8 f(x) = 0.68x - 0.07

Sin colocar la muestra en blanco observamos que la pendiente

EN LA SIGUIENTE GRAFICA se ha realizado una autocorreccin en

Ing. Agroindustrial Pgina 11

ecuacin totalmente recta, sin embargo no son los resultados

Mientras el R se aproxime ms a uno, ms confiable y exactos

0.8 f(x) = 0.67x - 0.04

Ing. Agroindustrial Pgina 12

El R cambia considerablemente a comparacin de la grfica 1, sin

CON GLUCOSA GRUPO 2:

(mg/ml) Lab. Agro IITA

Ing. Agroindustrial Pgina 13

Al igual que en la grfica del grupo1 podemos observar que por

Observamos tambien que aparecen nuevamente los puntos en

En la grfica siguiente mostramos los datos del grupo 2 sin tomar

(mg/ml) Lab. Agro IITA

Ing. Agroindustrial Pgina 14

En la siguiente grafica se realiz una correccin de los datos en la

(mg/ml) Lab. Agro IITA

Ing. Agroindustrial Pgina 15

CUADRO RESUMEN DE RESULTADOS:

En los dos grupos se obtuvieron que tuvo mayor pendiente la curva de

Ing. Agroindustrial Pgina 16

RESULTADOS DE LA NARANJA: muestra del primer grupo

DATOS: PRIMER GRUPO