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TEMA: Determinacin de protena por el mtodo de Kjeldahl
2. OBJETIVOS:
* General:
Determinacin de protena por el mtodo de Kjeldahl
* Especfico:
Aprender y desarrollar el protocolo de obtencin de protena en procesos qumicos
Determinar la concentracin de nitrgeno presente en la muestra para luego ser
transformado a travs de un factor en protena.
3. INTRODUCCIN
4. MATERIALES Y MTODOS:
*
* Frascos Kjeldahl,
* Pipeta graduada de 5ml,
* Erlenmeyer de 150 y 500 ml,
* Balanza,
* bureta de 50ml.
REACTIVOS:
* Acido Sulfrica concentrado y disolucin 0,1N
* Hidrxido de sodio disolucin al 40% y 0,1 N
* Perxido de hidrogeno
* Indicador rojo de metilo.
Procedimiento:
PRIMERA ETAPA;
En el Frascos Kjeldahl poner 300 mg de tejido, hacer bajar al fondo y aadir 3ml. De acido
sulfrico y poner a calentar, cuando la mezcla adquiera una coloracin parda y
desaparezcan los trocitos de tejidos, dejar enfriar y aadir 12 gotas de perhidrol, agitar y
poner nuevamente a calentar, aadir el perhidrol hasta obtener un lquido mineralizado
transparente
SEGUNDA ETAPA:
El liquido del frasco de frasco de digestin se diluye con agua destilada hasta mitad matraz
echar ncleos de ebullicin, aadir 4 gotas de indicador rojo de metilo: aadir solucin de
Hidrxido de sodio concentrado
hasta que el liquido adquiera una coloracin amarilla y empezar la destilacin, el
amoniaco se recoge en un matraz que contiene 25 mi de acido sulfrico 0,1 N con 3 gotas
de indicador rojo de metilo.
TERCERA ETAPA:
En la bureta se vierte disolucin de hidrxido de sodio 0,1 N y se valora
5. RESULTADOS:
DIGESTIN
NEUTRALIZACIN Y DESTILACIN
TITULACIN
Clculos
Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra
% N = 14*N*V*100/ m*1000
% Protena = 14*N*V*100*fator/m*1000
en donde:
Conclusiones:
Recomendaciones:
* Durante el proceso de digestin ocurre una perdida de nitrgeno en la cual es causado
por exceso de sulfato de sodio que se aade al cido para elevar el punto de ebullicin, en
la cual puede producir una descomposicin por calor y por lo tanto prdida de nitrgeno.
* Durante la destilacin puede haber prdida de amonaco por fugas en el circuito de
destilacin. o por perdida de amoniaco por refrigeracin insuficiente en el condensador
8. BIBLIOGRAFA:
Internet:
Angulo Oscar Andrs (0843819); Cifuentes Leidy Diana (0839166); Dvalos Magaly
(0842610).
RESUMEN.
|ESTANDARIZACION HCl |
|PESO Na2CO3 |0,0104 g |
|VOLUMEN HCl |7,9 mL |
|VALORACION H2BO3
|
|PESO MUESTRA |0,0346 g |
|VOLUMEN HCl |6,3 mL |
Porcentaje de Nitrgeno:
Porcentaje de Protena:
% Protena = % N x Factor
6,4 x 5,7 = 36%
Valores Reales:
Tamao de porcin: 22 g.
Cantidad de protena por porcin: 3 g.
13,6% = 2,4%
5,7
Pruebas Estadsticas
Tabla 4. Media y desviacin estndar de los datos obtenidos experimentalmente por todos
los grupos.
| |% NITROGENO |% PROTEINA |
|MEDIA |5,2 |29 |
|DESVIACION ESTANDAR |2,5 |14 |
Intervalo de confianza:
29 [2,57 x 14 / 6] = 29 15
Prueba de significancia:
Prueba estadstica t.
1.50g muestra
x 8.5g N x 1 mol N
100g muestra 14.007g
91 mL HCl
3. Como se utiliza el destilador Kjeldahl?
El matraz de digestin kjeldahl el cual contiene la muestra, acido sulfrico, catalizadores y
una sal neutra, es conectado a la trampa de absorcin que contiene aproximadamente 250
mL de hidrxido de sodio al 15%, el disco poroso de la trampa convierte los humos en finas
burbujas para facilitar la absorcin, el SO2 formado durante la digestin es convertido a
sulfito sdico.
El matraz es conectado al equipo de destilacin y se le agrega lentamente NaOH (50%) por
el embudo y se cierra la llave. Iniciar la destilacin atrapando el amoniaco formado en: a.
Una solucin de acido sulfrico 0,1M en exceso para que se pueda realizar la titulacin por
retroceso neutralizando con NaOH 0,1M el exceso de acido.
b. Una solucin de acido brico aproximadamente al 4% y titulando con HCl 0,1M el ion
dihidrogenoborato formado en la reaccin del amoniaco con el acido dbil. [7]
CONCLUSIONES.
1. El mtodo de Kjeldahl se basa en el rompimiento de la materia orgnica utilizando cido
sulfrico concentrado, el cual forma sulfato de amonio que en exceso de hidrxido de sodio
libera amoniaco que es destilado y recibido en cido brico.
2. Para mejorar la cintica del proceso de oxidacin, se aade una sal neutra para aumentar
el punto de ebullicin del acido sulfrico y con ello la temperatura en
la que se desarrolla la oxidacin.
3. Es necesario dar la basicidad necesaria para la liberacin del amoniaco cuando la
digestin se ha completado.
4. El mtodo kjeldahl es una aplicacin bsica de las titulaciones de neutralizacin, donde
el nitrgeno es transformado mediante un tratamiento adecuado en una base y
posteriormente titulado con un patrn acido o bsico fuerte.
5. El contenido de nitrgeno kjeldahl es la suma del nitrgeno amoniacal y el nitrgeno
orgnico, tambin llamado nitrgeno bruto.
BIBLIOGRAFIA.
[2] http://es.answers.yahoo.com/question/index?qid=20070821132254AAF0CmG
Consultado el 5 de octubre de 2009.
[6] http://books.google.com/books?
id=YdtzV12beGMC&pg=PA69&lpg=PA69&dq=metodo+kjeldahl+nitrogeno&source=bl&
ots=v02ErDduql&sig=TxUlY8pQ3DFpR4rLGcKwFW-
m8vE&hl=es&ei=i5jSStMjjbKUB5vx2KgK&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=5
&ved=0CBEQ6AEwBDgK#v=onepage&q=&f=false Consultado el 11 de octubre de 2009.
[7] http://www.inboxsa.com/Comparaci%F3n%20entre%20los%20m%E9todos
%20Kjeldahl%20y%20Dumas%20para%20el%20an%E1lisis%20de%20Prote%EDna.pdf