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PROPIEDADES FISICAS
Los flavonoides con hidroxilos fenlicos son solubles en soluciones alcalinas, pero
algunos altamente hidroxilados se descomponen por accin de las bases fuertes,
un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de otros, y que hace aos se
utiliz para su elucidacin estructural.
BIOGENESIS
EXTRACCION Y AISLAMIENTO
Los flavonoides en general se extraen de muestras secas y molidas. La muestra
se desengrasa inicialmente con ter de petrleo n-hexano, y el marco se extrae
con etanol puro o del 70%. Este ltimo es recomendado para garantizar la
extraccin de los ms polares. El extracto obtenido se evapora con calentamiento
no superior a los 50C y se le hacen particiones sucesivas con ter etlico, acetato
de etilo y n-butanol. Los flavonoides apolares quedan en la fase etrea, los
medianamente polares en la fase acetato de etilo y los
ms polares en el n-butanol. Cada una de estas tres fracciones se puede analizar
por cromatografa en capa fina (CCF) y HPLC en fase reversa. Para el anlisis por
CCF de las agliconas se pueden utilizar mezclas n-hexano/acetato de etilo y
cloroformo/acetato de etilo en diferentes proporciones, por ejemplo la mezcla
cloroformo/acetato de etilo 60:40 utilizada por Wagner y col. para el anlisis de
drogas vegetales. Para el anlisis de glicsidos flavonoides Wagner y col. utilizan
una mezcla acetato de etilo/cido frmico/cido
actico/agua 100:11:11:27.
Para el anlisis por HPLC de los glicsidos pueden utilizarse columnas RP-18,
detectando a 254 nm y eluyendo con mezclas cido actico al 2%
acuoso/acetonitrilo en diferentes proporciones. El cido actico previene la
formacin de picos asimtricos en el cromatograma. Para el anlisis cuantitativo
HPLC de las agliconas tambin se usan columnas RP-18, deteccin a 254 nm y
elucin con mezclas de acetonitrilo/agua con cido actico al 1%,.
Las antocianinas se pueden extraer de tejidos frescos (p. ej. ptalos) por
maceracin con un solvente cido como por ejemplo la mezcla metanol-cido
actico-agua (MAW) (11:1:5) la mezcla MFW, es decir metanol/cido
frmico/agua por ejemplo 10:1:9. El extracto obtenido se concentra y se somete a
cromatografa en papel unidimensional eluyendo con la mezcla t-
BuOH:AcOH:H2O (3:1:1). En estas condiciones las antocianinas presentan Rf bajo
y se pueden separar de otros tipos de flavonoides como los glicsidos de
flavonoles los cuales presentan un Rf alto. Una vez eludo del papel el extracto
con las antocianinas se puede purificar a travs de un cartucho RP-8 eluyendo con
AcOH al 7% acuoso y con AcOH al 7% metanlico. Tambin se pueden analizar
por cromatografa en capa fina con placas de celulosa y eluyendo con la mezcla
HCl conc./cido frmico/agua 19.0/39.6/41.4. Las antocianinas se pueden separar
a escala analtica por HPLC [(columna RP-18, 25 cm de long., 5 m); eluente: una
mezcla 1:1 de A (H3PO4 al 1.5% acuoso) y B (H2O:MeCN:AcOH:H3PO4
107:50:40:3) a un flujo de 0.8 ml/min; detectando a 352 y 530 nm]. A nivel
preparativo puede usarse una columna RP-18 de 25 cm de long., los mismos
solventes citados arriba pero en una proporcin 43:57 respectivamente, a un flujo
de 2 ml/min y detectando a 440 nm. A las fracciones
obtenidas luego de con centrarlas al vaco, se les puede eliminar el cido fosfrico
pasndolas a travs de un cartucho RP-8 lavando con AcOH al 8% acuoso.
Luego, las antocianinas se eluyen con AcOH al 8% metanlico, se concentran a
sequedad y se liofilizan para obtener los compuestos puros para su
caracterizacin qumica. Para la extraccin y aislamiento de flavonoides
sulfatados puede consultarse el artculo de Chulia et al.
Para la resolucin de mezclas enantiomricas de flavanonas se utiliza actualmente
la HPLC con fases estacionarias quirales.
METODOS DE IDENTIFICACION
a. ENSAYO DE SHINODA
Los flavonoides con el ncleo benzopirona (p. ej. flavonas, flavonoles, flavanonas,
etc.) producen coloraciones rojizas cuando a sus disoluciones acuosas o
alcohlicas se les adiciona magnesio seguido de HCl concentrado. Aunque no se
conoce el mecanismo de esta prueba, es muy utilizada para reconocer esta clase
de compuestos.
c. ENSAYO DE PACHECO
El slido flavonoide se calienta sobre una llama con unos pocos cristales de
AcONa y 0.1 ml de anhdrido actico. Luego con 0.1 ml de HCl conc. Los
dihidroflavonoles producen un color rojo caracterstico. Las flavonas, chalconas,
auronas, flavonoles y flavanonas dan una respuesta negativa.
d. RECONOCIMIENTO DE ANTOCIANINAS
Con esta prueba se pueden diferenciar entre las antocianinas y las betacianinas
(pigmentos nitrogenados de colores rojos y violeta de plantas del orden
Centrosperma, como p. ej. los pigmentos de la remolacha Beta vulgaris, Fam.
Chenopodiaceae y tambin presentes en otras plantas como la Phytolacca
americana, Fam. Phytolaccaceae)
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
El NaOMe es una base fuerte que ioniza los hidroxilos fenlicos presentes en la
molcula y particularmente permite reconocer la existencia de grupos hidroxilo en
3 y 4'. Las flavonas 4'-hidroxiladas presentan desplazamiento batocrmico de 45-
65 nm para la banda I al aadir NaOMe, y la intensidad de la banda no decrece.
Los flavonoles ( 3-hidroxiflavonas) sin hidroxilo en 4', tambin presentan el
mismo desplazamiento batocrmico de 45-65 nm, pero la intensidad de la banda
se ve disminuida. En los flavonoles 3,4'-dihidroxilados, orto-dihidroxilados y diorto-
trihidroxilados, el espectro se descompone en pocos minutos
luego de aadir el NaOMe. La aparicin de una banda alrededor de 330 nm
(banda III) es caracterstica de flavonas 7-hidroxiladas.
El NaOAc es una base ms dbil que el NaOMe, y ioniza solo los hidroxilos
fenlicos ms cidos: 3, 4' y 7. La ionizacin del hidroxilo en 7 afecta la banda II y
por lo tanto el NaOAc es un reactivo til para determinar la presencia de dicho
hidroxilo. Si al aadir el NaOAc se observa un desplazamiento batocrmico de 5-
20 nm en la banda II se trata de una flavona o flavonol 7-hidroxilado. Las
flavanonas 5-hidroxiladas presentan un desplazamiento batocrmico de 35 nm.
Los flavononoles (sin 5-OH) presentan un desplazamiento batocrmico de 60 nm.
Sin embargo, Heinz y col. han reportado que se debe tener precaucin en la
obtencin del espectro con NaOAc.
Img00151.gif
Las isoflavanonas se pueden reconocer por RMN-1H por las seales: 4.1 (H-2a,
dd, J=5 y 8 Hz), 4.5 (H-2b, dd, J=5 y 12 Hz) y 4.6 (H-3, dd, J=8 y 12 Hz).
ESPECTROMETRIA DE MASAS
Las flavanonas muestran A1+., [A1+H]+, [B1+2H]+. y los fragmentos [M-anillo B]+
y B3+.:
img00156.gif
Las chalconas tienden a producir fragmentos originados por ruptura a cada lado
del carbonilo:
En general las agliconas flavonoides con uno o varios grupos metoxilo presentan
el fragmento [M-Me]+ , el cual es especialmente intenso en flavonoides 6- y 8-
metoxilados.
OH H OMe OH H OMe
105 - - - 0 5 0
120 0 4 0 - - -
121 0 4 0 1 4 0
135 - - - 0 4 1
136 1 3 0 - - -
137 1 3 0 2 3 0
150 0 3 1 - - -
151 0 3 1 1 3 1
152 2 2 0 - - -
153 2 2 0 3 2 0
165 - - - 0 3 2
166 1 2 1 - - -
167 1 2 1 2 2 1
168 3 1 0 - - -
169 3 1 0 4 1 0
180 0 2 2 - - -
181 0 2 2 1 2 2
182 2 1 1 - - -
183 2 1 1 3 1 1
184 4 0 0 - - -
185 4 0 0 5 0 0
195 - - - 0 2 3
196 1 1 2 - - -
197 1 1 2 2 1 2
198 3 0 1 - - -
199 3 0 1 4 0 1
210 0 1 3 - - -
211 0 1 3 1 1 3
212 2 0 2 - - -
213 2 0 2 3 0 2
226 1 0 3 - - -
227 1 0 3 2 0 3
240 0 0 4 - - -
241 0 0 4 1 0 4
255 - - - 0 0 5
IMG00159.GIF
DIFRACTOMETRIA DE RAYOS-X
HIDROLISIS
INTERCONVERSION DE FLAVONOIDES
Los flavonoides se han aislado de muchas drogas vegetales debido a que son
productos naturales muy comunes. Su presencia en una droga vegetal no
necesariamente explica sus propiedades farmacolgicas. Se les ha atribuido una
cantidad de propiedades farmacolgicas, incluyendo actividades inhibidoras de
enzimas (hidrolasas, ciclooxigenasas, fosfatasa alcalina, cAMP fosfodiesterasas,
ATP-asas, liasas, hidroxilasas, transferasas, oxidoreductasas y kinasas),
antiinflamatoria, anticancergena, antibacterial y antiviral. La crisina se encuentra
en el lamo (Populus sp.) y en la cereza salvaje (Prunus sp.), la apigenina en el
perejil, el kaemferol en el sen, y la liquiritigenina en el regaliz. La rutina presente
en la cscara de los ctricos fue alguna vez considerada como la vitamina P, pero
actualmente no se le reconoce como tal. El uso de la rutina para el tratamiento de
la fragilidad capilar es motivo de controversia, pero sin embargo es utilizada para
el tratamiento de la hipertensin y en geriatra. Las flores de saco (Sambucus
niger), usadas para el tratamiento de resfriados, influenza y reumatismo, contiene
varios glicsidos flavonoides. Una cantidad de isoflavonas
(derivados de la 3-fenil--cromona) posee actividad estrognica y produce
esterilidad en las ovejas que consumen trbol. La silibina y la silimarina son
flavolignanos constituyentes del cardosanto (Silybum marianum) el cual se utiliza
ampliamente en Alemania para la proteccin del hgado. Algunos dmeros
flavonoides (biflavonoides) como el diinsininol tienen accin antiinflamatoria. La
quercetina y la rutina tienen efectos anticancergenos potenciales. Tambin existen
algunas evidencias que los consumidores de vinos rojos y vinotinto presentan baja
mortalidad por enfermedad coronaria, y que ello se debe a los compuestos
fenlicos presentes, entre los cuales estn los flavonoides catequina, epicatequina
y quercetina. Las procianidinas presentes en las uvas tienen uso potencial en
isquemias cardacas.
FUNCION BIOLOGICA
b) Sus variados colores y su presencia en tejidos como los de las flores, sugieren
que participan en procesos como la reproduccin favoreciendo la atraccin de
insectos polinizadores.
METABOLISMO
Flores de Arnica
Flores de Acacia
Las flores de Robinia pseudoacacia (Fabaceae) contienen robinina.
Flores de Cactus
Flores de Calndula
Espino
Tuslago
Las flores de Tussilago farfara (Asteraceae) contienen glicsidos de quercetina.
Manzanilla Chiquita
Primavera
Las flores de Primula sp. (Primulaceae) contienen glicsidos de quercetina,
gossipetina y kaemferol. En Colombia tiene uso ornamental.
Endrino
Saco
Tilo
Abedul
Nogal
Bodas de Plata
Cola de caballo
Las partes areas de Equisetum arvense (Equisetaceae) contienen glicsidos de
luteolina, isoquercitrina y equisetrina.
Herniaria
Infusin madre
La Leonorus cardiaca (Lamiaceae) contiene rutina.
Ruda
Retama
Vernica
Bastoncillo dorado
Pensamiento
Sofora
Las yemas de Sophora japonica (Fabaceae) contienen rutina (ca. 20%).
Naranja amarga
Cscara de limn
Cscara de cidra
El pericarpio del fruto de Citrus medica (Rutaceae) contiene eriocitrina, rutina, etc.
Yerbasanta
Ortosifonis
Cardo de Mara
Trigo sarraceno
Gingko
Lespedeza
Corresponde a la Lespedeza capitata (Leguminosae). El extracto alcohlico se usa
como estimulante de la eliminacin renal.
Fuentes de antocianinas
Dentro de la muy poco estudiada flora colombiana existen numerosas plantas que
tienen uso medicinal popular y que contienen flavonoides, especialmente de
plantas de las familias Ericaceae, Euphorbiaceae y Compositae (p. ej. el gnero
Eupatorium es uno de los ms estudiados a nivel mundial por su uso medicinal). A
continuacin se mencionan algunas de ellas.
Arnica
Cerraja
Botn de oro
Chaparro
ame
Angucho
Uva camarona
Uva de pramo
Maz de perro
Algayubo
Corresponde al Croton glabellus de la familia Euphorbiaceae. Las hojas contienen
los flavonoides ayanina y quercitrina. Se usa como digestiva e hipotensora.
Contra-rayo
Ceiba
Frailecillo
Chuchugas
PROBLEMAS
EMIE: 404.1110 (74%), 389 (100), 371 (8), 359 (10), 331 (12), 303 (8), 275 (9), 211
(14), 202 (8), 183 (13), 164 (10), 151 (17), 123 (5).
RMN-1H (CDCl3, 300 MHz): 3.88 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 4.00 (s, 3H),
4.11 (s, 3H), 7.00 (d, 1H, J=7.0 Hz), 7.77 (d, 1H, J=2.2 Hz), 7.78 (dd, 1H, J=2.2 y
7.0 Hz), 12.40 9s, 1H).
RMN-13C (CDCl3, 75 MHz): 56.1, 60.1, 61.2, 61.7, 62.1, 107.5, 110.5, 114.6,
121.6, 123.7, 132.9, 136.2, 138.9, 144.9, 145.6, 149.0, 149.1, 152.9, 155.8, 179.4
ppm.
P.F. 198-199C
RMN-1H (CDCl3, 360 MHz): 3.90 (s, 3H), 4.02 (s, 3H), 4.04 (s, 3H), 6.59 (s, 1H),
7.03 (2H, d, J=8.9 Hz), 7.89 (2H, d, J=8.9 Hz), 11.82 (s, 1H).
RMN-13C (CDCl3, 90 MHz): 55.6, 60.2, 61.2, 103.0, 103.1, 114.7, 123.0, 128.0,
128.2, 131.6, 145.4, 148.4, 150.9, 162.4, 163.1, 182.3 ppm.
m/z = 300 (100%), 299 (12), 272 (4), 257 (10), 155 (3), 121 (13), 93 (4).
Espectro de RMN-1H (60 MHz, CCl4):
3.83 (3H, s); 6.18 (d, 1H, J=2 Hz); 6.47 (d, 1H, J=2 Hz); 6.85 (d, 2H, J=8 Hz), 8.00
(d, 2H, J=8 Hz).
Espectros UV
m/z = 316 (100%), 301 (24), 288 (19), 285 (27), 273 (28), 271 (28), 166 (5), 137
(15), 109 (11).
3.90 (3H, s); 6.33 (d, 1H, J=2 Hz); 6.65 (d, 1H, J=2 Hz), 6.85 (d, 1H, J=8 Hz); 7.62
(dd, 1H, J=8 y 2 Hz); 7.58 (d, 1H, J=2 Hz); 12.45 (s, 1H).
Espectros UV
Compuesto A:
IR (KBr): 3270, 1650, 1600, 1580, 1485, 1441, 1350, 1290, 1196, 1112, 1065,
1045, 840, 800, 765, 680 cm-1.
EMIE: m/z 284 (100), 266 (41), 238 (44), 181 (15), 153 (35), 139 (32), 102 (48).
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.89 (s, 1H), 8.10 (2H, dd, J=7.6 y 1.6 Hz), 7.60
(3H, m), 6.98 (1H, s), 7.03 (1H, s), 5.05 (1H, d, J=7.6 Hz), 3.90 (s, 3H).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 56.56, 60.91, 69.95, 74.13, 76.54, 77.21, 91.77,
102.05, 104.93, 105.16, 126.35 (dos carbonos), 128.31, 129.05 (dos carbonos),
130.62, 132.01, 151.60, 152.75, 158.99, 163.39, 182.31 ppm.
Compuesto B:
IR (KBr): 3430-3240, 1650, 1610, 1560, 1500, 1442, 1350, 1280, 1240, 1162,
1075, 1040, 850, 830, 751, 740 cm-1.
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6): 12.88 (s, 1H), 7.87 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.53 (1H,
dd, J=8.4 y 7.4 Hz), 7.33 (1H, d, J=8.4 Hz), 7.20 (1H, dd, J=7.5 y 7.8 Hz), 7.00
(1H, s), 6.45 (1H, s), 6.20 (1H, s), 5.10 (1H, d, J=8 Hz).
RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6): 60.63, 69.62, 73.28, 76.73, 77.12, 93.69, 98.76,
100.26, 103.77, 110.19, 115.53, 120.32, 121.91, 129.00, 132.73, 155.35, 157.64,
160.76, 161.36, 164.30, 181.79 ppm.
6. Wesson, K. J.; Haman, M. T.; J. NAT. PROD. 59 (6) 629-631 (1996).
11. Jong, T. T.; Hwang, C. C.; PLANTA MED. 61 (6) 584-585 (1995).
Son consistentes los datos espectrales all publicados con esta estructura ?
Porqu ?
10 SCREEN 0,0,0
30 CLS
40 A=0:B=0:C=0:D=0:E=0:F=0:G=0:H=0
60 PRINT:PRINT:PRINT
80 PRINT
100 PRINT
120 PRINT
140 PRINT
160 PRINT
180 PRINT
200 PRINT
210 INPUT "Cul es la posicin de la Banda I en el Espectro con Tricloruro de
Aluminio y
HCl"; P
220 CLS
240 X=K-I
290 INPUT "La intensidad de la Banda I en el Espectro con NaOMe es mayor que
la del
Espectro metanlico (S/N)"; IM$
300 IF IM$="S" OR IM$="s" THEN B=2: PRINT "4'-OH (NaOMe)": GOTO 320
330 X=M-J
350 IF X>=3 THEN D=2:PRINT "7-OH 6- Y/O 8-OXIG. (NaOAc): GOTO 360
390 X=N-I
440 X=P-I
460 IF X>=17 THEN G=3: PRINT "5-OH 6-Oxig. (AlCl3/HCl)": GOTO 500
500 END