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Orientadora:
Profa. Assoca. Maria Valria Robles Velasco
So Paulo
2011
UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS
Programa de Ps-Graduao em Frmaco e Medicamentos
rea de Produo e Controle Farmacuticos
Orientadora:
Profa. Assoca. Maria Valria Robles Velasco
So Paulo
2011
Tatiana Santana Balogh
Comisso Julgadora
da
Dissertao para obteno do grau de Mestre
_________________________________
Profa. Assoca. Maria Valria Robles Velasco
orientadora/presidente
____________________________
Profa. Dr a. Gislaine Ricci Leonardi
1a. examinadora
____________________________
Profa. Dr a. Patrcia Santos Lopes
2a. examinadora
A Deus
Aos meus avs maternos Jos Loureno Santana (in memoriam) e Essy Ferraz Santana
Aos meus avs paternos Adalberto Balogh e Terezia Wiborny Balogh (in memoriam)
Aos meus irmos Rodrigo Wiborny Balogh, Vanessa Wiborny Balogh Basseto, Priscila
Santana Balogh e Denise Balogh
Aos meus sobrinhos Lucas Wiborny Balogh Basseto, Mateus Wiborny Balogh Basseto,
Giovanna Azevedo Pedreira e Mrcio Azevedo Pedreira
AGRADECIMENTOS
Agradecer reconhecer que o homem jamais poder lograr para si o dom de ser auto-
suficiente (autor desconhecido)
A Deus por estar ao meu lado em todos os momentos e por me ajudar nos mais difceis (E
eis que estou contigo, e te guardarei por onde quer que fores Gn 28:15)
minha querida famlia, pais, avs, irmos, sobrinhos, tios, primos e cunhados por todo o
apoio, suporte, incentivo e carinho.
minha orientadora Prof a. Assoc a. Maria Valria Robles Velasco pela orientao ao longo
de quatro anos desde a iniciao cientfica, pelos ensinamentos e pela amizade.
Aos meus amigos da Ps-Graduao Carla Aparecida Pedriali Moraes, Paula Souza
Prestes, Robson Miranda da Gama e Roxana Lili Roque Flores pelas contribuies
acadmicas, pelos momentos de descontrao, pelas conversas, pelo apoio, carinho e amizade.
Ao Prof. Dr. Antnio Salatino, Prof a. Dr a. Maria Luiza Faria Salatino, Prof a. Titular
Elfriede Marianne Bacchi, Mourisa Maria de Souza Ferreira, Alberto Vetore Neto e
Roberto de Jesus Honrio pelas contribuies nos ensaios de determinao do teor de
polifenis e flavonoides totais e nos ensaios de cromatografia em camada delgada.
Prof a. Assoca. Maric Nogueira de Oliveira, Prof. Titular Luiz Antonio Gioielli e
Alexandre Mariami Rodrigues pelo uso do espectrofotmetro durante os dois anos de
mestrado e pelo uso do viscosmetro de Ostwald.
Prof a. Dr a. Inar Alves de Castro e Dr. Daniel Granato pela realizao do ensaio de
ORAC e pelo uso do espectrofotmetro.
Ao Prof. Dr. Andr Rolim Baby pelo incentivo realizao desse trabalho, pelo uso do
equipamento Labsphere UV-2000 S e por suas contribuies acadmicas.
Ao Prof. Dr. Marlus Chorilli e Prof a. Dr a. Edna Tomiko Myiake Kato por terem
participado da banca de qualificao desse trabalho e por suas contribuies.
Prof a. Dr a. Gislaine Ricci Leonardi e Prof a. Dr a. Patrcia Santos Lopes por terem
participado da banca de defesa desse trabalho e por suas contribuies.
s estagirias Natlia Mencacci Esteves Pedro, Katyucia Sulamy de Souza Raia e Elaine
Cabral Serro pela ajuda na execuo desse trabalho e pela amizade.
s estagirias Fernanda Akemi Konishi e Erica Junko Waki Kagiyama por me
permitirem aprender atravs da orientao de seus trabalhos e pela amizade.
estagiria Mayara Munhz de Assis Ramos pela ajuda nos ensaios de atividade
antioxidante, pela reviso do abstract desse trabalho e pela amizade.
Doralice Rita de Jesus Santos pelos cafezinhos dirios, pelo carinho e por suas oraes.
Claudinia Aparecida Sales de Oliveira Pinto e Edgar Jnior pelo apoio na execuo
desse trabalho e pela amizade.
s amigas farmacuticas Ana Luisa Salvador Alvarez, Danielly de Mello Tavares, Maria
Cristina Ferreira da Cunha, Priscila Caldeira de Oliveira Andrade, e Vivian Cristina
Borges Zanholo pelos encontros semestrais, incentivo, apoio e amizade.
Ao Dr. Luiz Gustavo Martins Matheus pela gentileza de me mostrar o processo de obteno
de extratos gliclicos em sua empresa (Mapric) e Hamilton dos Santos pelas placas de
PMMA.
Sem que haja uma palavra na minha lngua, eis que, Senhor, tudo conheces.
Para onde me irei do teu Esprito, ou para onde fugirei da tua presena?
Se subir ao cu, tu a ests, se fizer no Seol a minha cama, eis que tu ali ests tambm.
Se tomar as asas da alva, se habitar nas extremidades do mar, ainda ali a tua mo me guiar
e a tua destra me suster.
Nem ainda as trevas so escuras para ti, mas a noite resplandece como o dia; as trevas e a
luz so para ti a mesma coisa.
Os teus olhos viram a minha substncia ainda informe, e no teu livro foram escritos os dias,
sim, todos os dias que foram ordenados para mim, quando ainda no havia nenhum deles.
E quo precioso me so, Deus, os teus pensamentos! Quo grande a soma deles!
Glycolic botanical extracts have been widely used in cosmetic formulas due to their clinical
activities. The objective of this study was to select six glycolic commercial extracts with
higher polyphenol and flavonoid content and antioxidant activity in a group with twelve
extracts [aa (Euterpe oleracea), acerola (Malpighia glabra L.), horse chesnut (Aesculus
hippocastanum L.), green tea (Camellia sinensis), mate tea (Ilex paraguariensis A. St. Hil),
raspberry (Rubus idaeus L.), ginkgo (Ginkgo biloba L.), mint (Mentha piperita L.),
strawberry (Fragaria vesca L.), propolis, pomegranate (Punica granatum L.) and grape (Vitis
vinifera L.)] to do their stability study and their in vitro evaluation of photoprotection
efficacy. The dissertation was divided in three chapters. In the first chapter, it was developed
the polyphenolic and flavonoid content assays and the DPPH and ORAC antioxidant activity
assays involving all the twelve extracts. The higher values of polyphenolic and flavonoid
content were obtained in the extracts of pomegranate, mate tea, mint, propolis, ginkgo and
green tea. Thus, they were selected to undergo the other studies. In chapter 2, it was presented
the stability study of this six extracts during 90 days. Organoleptic characteristics, pH value,
dynamic viscosity and absolute density values, polyphenolic and flavonoid content and the
antioxidant activity in the conditions refrigerator, stove and room temperature with and
without sun light exposition were evaluated. Variations higher than a range of 10,0 % were
observed in all extracts in at least one studied parameter. The green tea extract presented
significant variations in the pH value, polyphenolic and flavonoid content and in the
antioxidant activity. The ginkgo extract presented variations in the same parameters, except
for the pH value. Polyphenolic content and antioxidant activity were altered parameters in the
mint extract. The extracts of ginkgo, green tea and mint must be stored in refrigerator (5 C),
protected from the sun light. The flavonoid content and antioxidant activity values were
altered parameters in the mate tea extract. The propolis extract presented variations in the
polyphenolic and flavonoids content. It was observed that this two extracts can be stored at
room temperature or in the refrigerator. The pomegranate extract demonstrated alteration in
the antioxidant activity, however the high temperature (45 C) did not affect its stability. In
chapter 3, it was evaluated the in vitro photoprotection efficacy (SPF estimated), by diffuse
reflectance spectrophotometry and spectrophotometric analyses of diluted solutions (Mansur
methods), of these six extracts, incorporated in formulas containing or not the broad spectrum
filter bis-ethylhexyloxyphenol methoxyphenyl triazine (Escalol S). It was observed that the
SPF value was proportional to the amount of filter used in the Mansur method. Formulas with
and without the glycolic extracts and with 2,5% w/w of the sun filter presented SPF ranging
from 3,57 to 4,07; the formulas with 5,0% w/w of sun filter containing or not extracts
presented SPF values in the interval between 6,13 and 7,57. The results of diffuse reflectance
spectrophotometry indicated SPF values in the interval of 6,0 to 7,0 for formulas with 5,0%
w/w of sun filter with or without extracts and values in the interval of 3,0 to 4,5 for formulas
with 2,5 w/w of sun filter containing or not extracts. Both methodologies used indicated lack
of synergism between the glycolic extracts and sun filter in the proportions used.
Keyword: botanical extract, antioxidant activity, stability, in vitro Sun Protection Factor
(SPF) and Mansur method
LISTA DE ILUSTRAES
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Figura 1 Smbolo exigido para cosmticos com durabilidade maior que 30 meses
(COSMETIC PRODUCTS (SAFETY) REGULATIONS, 2008) 96
Figura 2 Especificao de liberao e checagem como determinantes da vida de
prateleira (BUTLER, 2000) 97
Figura 3 Viscosmetro de Ostwald modificado (Cannon-Fenske n 300) utilizado
no ensaio 112
Figura 4 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de ch
verde durante o Estudo de Estabilidade Normal 123
Figura 5 Comportamento estatstico da densidade absoluta do extrato gliclico de
ch verde durante o Estudo de Estabilidade Normal 123
Figura 6 Comportamento estatstico da viscosidade dinmica do extrato gliclico
de ch verde durante o Estudo de Estabilidade Normal 123
Figura 7 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de ch verde durante o Estudo de
Estabilidade Normal 124
Figura 8 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de ch verde durante o Estudo de
Estabilidade Normal 124
Figura 9 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de ch verde durante o Estudo
de Estabilidade Normal 124
Figura 10 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de erva-
mate durante o Estudo de Estabilidade Normal 133
Figura 11 Comportamento estatstico da densidade absoluta do extrato gliclico de
erva-mate durante o Estudo de Estabilidade Normal 133
Figura 12 Comportamento estatstico da viscosidade dinmica do extrato gliclico
de erva-mate durante o Estudo de Estabilidade Normal 133
Figura 13 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de erva-mate durante o Estudo de
Estabilidade Normal 134
Figura 14 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de erva-mate durante o Estudo de
Estabilidade Normal 134
Figura 15 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de erva-mate durante o Estudo
de Estabilidade Normal 134
Figura 16 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de ginco
durante o Estudo de Estabilidade Normal 141
Figura 17 Comportamento estatstico da densidade absoluta do extrato gliclico de
ginco durante o Estudo de Estabilidade Normal 141
Figura 18 Comportamento estatstico da viscosidade dinmica do extrato gliclico
de ginco durante o Estudo de Estabilidade Normal 141
Figura 19 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de ginco durante o Estudo de
Estabilidade Normal 142
Figura 20 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de ginco durante o Estudo de
Estabilidade Normal 142
Figura 21 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de ginco durante o Estudo de
Estabilidade Normal 142
Figura 22 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de menta
durante o Estudo de Estabilidade Normal 150
Figura 23 Comportamento estatstico da densidade absolutado extrato gliclico de
menta durante o Estudo de Estabilidade Normal 150
Figura 24 Comportamento estatstico da viscosidade do extrato gliclico de menta
durante o Estudo de Estabilidade Normal 150
Figura 25 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de menta durante o Estudo de
Estabilidade Normal 151
Figura 26 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de menta durante o Estudo de
Estabilidade Normal 151
Figura 27 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de menta durante o Estudo de
Estabilidade Normal 151
Figura 28 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de
prpolis durante o Estudo de Estabilidade Normal 158
Figura 29 Comportamento estatstico da densidade absoluta do extrato gliclico de
prpolis durante o Estudo de Estabilidade Normal 158
Figura 30 Comportamento estatstico da viscosidade dinmica do extrato gliclico
de prpolis durante o Estudo de Estabilidade Normal 158
Figura 31 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de prpolis durante o Estudo de
Estabilidade Normal 159
Figura 32 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de prpolis durante o Estudo de
Estabilidade Normal 159
Figura 33 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de prpolis durante o Estudo de
Estabilidade Normal 159
Figura 34 Comportamento estatstico do valor de pH do extrato gliclico de rom
durante o Estudo de Estabilidade Normal 167
Figura 35 Comportamento estatstico da densidade absoluta do extrato gliclico de
rom durante o Estudo de Estabilidade Normal 167
Figura 36 Comportamento estatstico da viscosidade dinmica do extrato gliclico
de rom durante o Estudo de Estabilidade Normal 167
Figura 37 Comportamento estatstico do teor de flavonoides totais, equivalentes em
quercetina, do extrato gliclico de rom durante o Estudo de Estabilidade
Normal 168
Figura 38 Comportamento estatstico do teor de polifenis totais, equivalentes em
cido glico, do extrato gliclico de rom durante o Estudo de
Estabilidade Normal 168
Figura 39 Comportamento estatstico do valor da atividade antioxidante, em
Trolox equivalente, do extrato gliclico de rom durante o Estudo de
Estabilidade Normal 168
Quadro 1 Lista de filtros solares aprovados pela FDA (BARON et al., 2008) 191
Quadro 2 Matrias-primas empregadas no desenvolvimento das emulses (CIBA,
2002; CRODA, 2010) 211
Quadro 3 Estudo crtico das matrias-primas empregadas no desenvolvimento das
emulses (CIBA, 2002; CRODA, 2010) 212
Quadro 4 Composio quali e quantitativa (% p/p) das emulses desenvolvidas 213
Quadro 5 Ponderao adotada no clculo do FPS por espectrofotometria (SAYRE
et al., 1979). 215
LISTA DE TABELAS
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Tabela 1 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio
de extratos e das aditivadas com extrato de ch verde 221
Tabela 2 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem
adio de extratos e das aditivadas com extrato de erva-mate 222
Tabela 3 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio
de extratos e das aditivadas com extrato de gliclico de ginco 223
Tabela 4 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem
adio de extratos e das aditivadas com extrato de menta 224
Tabela 5 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem
adio de extratos e das aditivadas com extrato de prpolis 225
Tabela 6 Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem
adio de extratos e das aditivadas com extrato de rom 226
Tabela 7 Fator de Proteo Solar (FPS) estimado das formulaes desenvolvidas
determinado por anlise espectrofotomtrica de solues diludas 229
Tabela 8 Fator de Proteo Solar (FPS) estimado das formulaes (emulses)
desenvolvidas determinado por anlise espectrofotometria de refletncia
difusa 231
Tabela 9 Anlise comparativa dos valores de FPS determinados por Mansur e por
Labsphere UV-2000S 235
LISTA DE ABREVIATURAS, SMBOLOS E SIGLAS
Resumo ...................................................................................................................................... 2
1. Introduo ............................................................................................................................ 3
2. Reviso da Literatura...........................................................................................................4
2.1 Histrico ........................................................................................................................ 4
2.2 Plantas e extratos vegetais ............................................................................................. 6
2.3 Extratos ......................................................................................................................... 8
2.3.1 Mtodos de preparo de extratos cosmticos......................................................... 8
2.3.2 Classificao de extratos .................................................................................... 12
2.4 Fenlicos ...................................................................................................................... 14
2.4.1 Fenis simples e cidos fenlicos. ..................................................................... 16
2.4.2 Flavonoides ........................................................................................................ 17
2.4.2.1 Atividade antioxidante e antirradicais livres ........................................... 20
2.4.2.2 Atividade anti-inflamatria ..................................................................... 21
2.4.2.3 Resistncia capilar ................................................................................... 21
2.4.3 Taninos ............................................................................................................... 22
2.5 Aa (Euterpe oleracea) ............................................................................................ 25
2.6 Acerola (Malpighia glabra L.) .................................................................................. 26
2.7 Castanha da ndia (Aesculus hippocastanum L.) ....................................................... 27
2.8 Ch verde (Camellia sinensis) ................................................................................... 28
2.9 Erva-mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil) ............................................................... 29
2.10 Framboesa (Rubus idaeus L.) .................................................................................. 30
2.11 Ginco (Ginkgo biloba L.) ........................................................................................ 31
2.12 Menta (Mentha piperita L.) ..................................................................................... 32
2.13 Morango (Fragaria vesca L.) .................................................................................. 33
2.14 Prpolis .................................................................................................................... 34
2.15 Rom (Punica granatum L.) .................................................................................... 35
2.16 Uva (Vitis vinifera L.).............................................................................................. 36
3. Objetivos ............................................................................................................................. 37
4. Material e Mtodos ........................................................................................................... 37
4.1 Material ..................................................................................................................... 37
4.1.1 Equipamentos/Acessrios ................................................................................ 37
4.1.2 Reagentes e solventes ..................................................................................... 38
4.1.3 Substncias qumicas de referncia ................................................................. 39
4.1.4 Matrias-primas ............................................................................................... 39
4.2 Mtodos ..................................................................................................................... 40
4.2.1 Avaliao da presena de flavonoides por ensaios cromticos e cromatogrficos 40
4.2.2 Teor de polifenis totais ........................................................................................ 41
4.2.2.1 Linearidade e curva analtica .................................................................. 42
4.2.3 Teor de flavonoides totais .................................................................................... 43
4.2.3.1 Linearidade e curva analtica .................................................................. 43
4.2.4 Atividade antioxidante pela ao sequestradora do radical DPPH......................44
4.2.4.1 Linearidade e curva analtica .................................................................. 45
4.2.5 Atividade antioxidante por ORAC .................................................................. 46
4.2.6 Anlise estatstica dos ensaios realizados ....................................................... 47
Pgina
Resumo .................................................................................................................................... 93
1. Introduo .......................................................................................................................... 94
2. Reviso da Literatura.........................................................................................................94
2.1 Estabilidade de produtos cosmticos ........................................................................... 94
2.1.1 Vida de prateleira (Shelf-life) ............................................................................. 95
2.1.2 Fatores que influenciam a estabilidade .............................................................. 98
2.1.3 Testes de estabilidade ......................................................................................... 99
2.1.4 Estudos de estabilidade..................................................................................... 102
2.1.4.1 Estabilidade Acelerada ..... ........................................................................ 102
2.1.4.2 Estabilidade Normal .................................................................................. 103
2.1.4.3 Estabilidade de Longa Durao ou Teste de Prateleira ............................. 105
3. Objetivos ........................................................................................................................... 105
4. Material e Mtodos ......................................................................................................... 106
4.1 Material ................................................................................................................... 106
4.1.1 Equipamentos/Acessrios .............................................................................. 106
4.1.2 Reagentes e solventes ................................................................................... 106
4.1.3 Substncias qumicas de referncia ............................................................... 107
4.1.4 Matrias-primas ............................................................................................. 107
4.2 Mtodos .................................................................................................................. 107
4.2.1 Estudo da estabilidade dos extratos gliclicos .............................................. 107
4.2.2 Avaliao das caractersticas organolpticas ................................................. 108
4.2.3 Determinao do potencial hidrogeninico (pH) .......................................... 111
4.2.4 Determinao da viscosidade dinmica ......................................................... 111
4.2.5 Determinao da densidade absoluta ............................................................. 113
4.2.6 Determinao do teor de flavonoides totais ................................................. 113
4.2.7 Determinao do teor de polifenis totais .................................................... 114
4.2.8 Determinao da atividade antioxidante pelo mtodo do DPPH .................. 115
4.2.9 Anlise estatstica dos ensaios realizados ..................................................... 115
5. Resultados e Discusso ................................................................................................... 116
5.1 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de ch verde ........................................ 116
5.2 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de erva-mate ........................................ 125
5.3 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de ginco ............................................... 135
5.4 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de menta .............................................. 143
5.5 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de prpolis........................................... 152
5.6 Estudo de Estabilidade do extrato gliclico de rom ............................................... 160
6. Concluses ....................................................................................................................... 169
7. Referncias ....................................................................................................................... 170
Pgina
RESUMO
Atualmente, os produtos formulados com componentes naturais ganham cada vez mais
espao no mercado de cosmticos. O conceito de produto natural amplamente valorizado
pelo mercado externo e as grandes companhias. Assim, cada vez mais, incorporam-se extratos
vegetais, insumos, matrias-primas e ativos naturais em diversas formulaes cosmticas. A
adio de extratos vegetais ocorre devido s atividades clnicas atribudas aos mesmos como
atividades antioxidante, anti-inflamatria e antienvelhecimento; ao despigmentante cutnea,
estimulante do crescimento capilar e coadjuvante na fotoproteo, entretanto, necessria a
comprovao cientfica desses efeitos para cada extrato vegetal, em funo das composies
diversificadas que possuem, tanto quali como quantitativamente. O presente trabalho
quantificou os polifenis totais, equivalentes em cido glico, e os flavonoides totais,
equivalentes em quercetina, de doze extratos gliclicos [aa (Euterpe oleracea), acerola
(Malpighia glabra L.), castanha da ndia (Aesculus hippocastanum L.), ch verde (Camellia
sinensis), erva-mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil), framboesa (Rubus idaeus L.), ginco
(Ginkgo biloba L.), menta (Mentha piperita L.), morango (Fragaria vesca L.), prpolis, rom
(Punica granatum L.) e uva (Vitis vinifera L.)] de uso cosmtico, no padronizados e
disponveis no mercado brasileiro, empregando mtodos espectrofotomtricos e determinou a
atividade antioxidante dos mesmos por duas metodologias distintas: atividade sequestradora
do radical DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazila) e ORAC (Capacidade de Absoro de
Radicais de Oxignio). O teor de polifenis totais dos extratos analisados variou no intervalo
de 0,16 a 16,2 mgEAG/mL enquanto que o teor de flavonoides totais variou na faixa de 0,004
a 0,492 mgEQ/ml. Os extratos de rom, erva-mate, menta, prpolis, ginco e ch verde
apresentaram os maiores teores de polifenis e flavonoides, expressos, respectivamente, em
equivalentes de cido glico e quercetina, sendo selecionados para os ensaios seguintes de
estabilidade e eficcia fotoprotetota in vitro. As duas metodologias empregadas para
determinao da atividade antioxidante indicaram os extratos de rom, erva-mate e menta
como os de maior potencial antioxidante.
1. INTRODUO
2. REVISO DA LITERATURA
2.1 HISTRICO
Nos ltimos anos, a preocupao do ser humano com a esttica e a aparncia fsica tem
aumentado, os corpos feminino e masculino idealizados so exaltados como padro de beleza,
sade e bem-estar. Essa preocupao no se originou na sociedade contempornea, porm,
neste momento histrico que a busca pela beleza e a vaidade tornam-se praticamente requisitos
de aceitao social (FONTES, 2006; MATA, 1998).
Culturas antigas tambm apresentavam preocupaes em relao esttica e higiene
pessoal. Esse fato foi evidenciado na prtica, originada na Pr-Histria, de tingir o corpo e nas
casas de banho da Roma Antiga. No Egito Antigo, a pintura no exercia apenas funo
esttica, era comum realiz-la na regio dos olhos para proteger a viso da claridade
(ABIHPEC, 2010; BLANCO-DVILA, 2000).
Recentemente, uma pesquisa realizada na Espanha demonstrou o uso de bijuterias e o
hbito de pintura de corpos pelo homem de Neandertal (Homo neanderthalensis) ibrico h
50.000 anos. Os pesquisadores encontraram conchas marinhas perfuradas que serviam tanto
para a mistura e armazenamento de corantes como para ornamentar o corpo. Resduos
preservados de tinturas vermelhas e amarelas (Figura 1) foram encontrados no interior de
algumas conchas. Esses resduos eram compostos de lepidocrocita misturada com hematita e
pirita e serviam para adornar o corpo (ZILHO et al., 2010).
especficas. Tais relatos encontram-se no livro de Levtico (17: 15-16) e no livro de Nmeros
(19: 6-7). O livro de Provrbios (7: 17) relata o uso de mirra, alos e canela como perfumes
para leitos. A preocupao com a aparncia fsica, principalmente por parte das mulheres,
tambm descrita na Bblia Sagrada, como se observa no seguinte trecho do livro de 1 Pedro
(3: 3): O enfeite delas no seja o exterior, no frisado dos cabelos, no uso de jias de ouro, na
compostura de vestes (BBLIA SAGRADA, 1995; BLANCO-DVILA, 2000).
Essas preocupaes estticas foram comuns em diferentes perodos histricos e em
diversas regies do mundo. Na ndia, por volta dos sculos IV e V, utilizava-se a henna,
corante obtido da planta Lawsonia inermis L., para tingir os cabelos e para a pintura de mos e
ps, principalmente, antes de cerimnias matrimoniais hindus. Algumas culturas da frica do
Norte tambm faziam uso da henna. No Japo, utilizavam-se ptalas de crtamo (Carthamus
tinctorius L.) modas para pintura de sobrancelhas e do contorno dos olhos e lbios e p de
arroz para colorir a face (CHAUDHRI; JAIN, 2009).
Na Idade Mdia, as classes altas europias mantinham a pele clara com o uso de ps
brancos. A aparncia plida diferenciava a nobreza e o clero dos trabalhadores das classes
baixas que apresentavam a pele bronzeada por exposio ao sol em atividades agrcolas.
Ignorando os efeitos txicos, utilizavam chumbo branco que, algumas vezes, tambm, continha
arsnico para obter a aparncia desejada. Da mesma forma, os povos nativos da Amrica
apresentavam costumes prprios relacionados com a aparncia. Os Maias tatuavam o rosto
inteiro e os rgos sexuais externos com finalidade esttica e os Astecas cuidavam da pele com
preparaes que continham leos e sementes e tingiam os cabelos com pigmentos (BLANCO-
DVILA, 2000; CHAUDHRI; JAIN, 2009).
No sculo XVII era comum o uso de perucas cacheadas e perfumes em Paris. Neste
perodo, surgiram as primeiras lojas parisienses de preparo de perfumes e a venda de pomadas,
azeites, guas aromticas, sabonetes e depilatrios tornou-se frequente (BLANCO-DVILA,
2000; CRF, 2010).
Embora a utilizao de substncias ou misturas de substncias com finalidade higinica
e cosmtica remonte, pelo menos, h 30.000 anos, foi somente no final do sculo XIX e incio
do sculo XX que se iniciou o mercado de cosmticos e produtos de higiene com o surgimento
das primeiras indstrias de cosmticos. Em 1888, foi criado o desodorante nos Estados Unidos
e, em 1907, Eugne Schueller, fundador do grupo L`Oral, desenvolveu a primeira tintura
capilar sinttica. Em 1915, surgiram embalagens metlicas cilndricas para batons e, em 1932,
uma ampla variedade de esmaltes para unhas tornou-se disponvel aos consumidores com a
fundao da Revlon por Charles e Joseph Revson e Charles Lackman. Em 1941, o aerossol foi
6
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
2.3 EXTRATOS
Segundo definio da Farmacopeia Brasileira, extratos so preparaes de consistncia
lquida, slida ou intermediria, obtidas a partir de material vegetal ou animal. Esse material
pode sofrer tratamento preliminar, como inativao de enzimas, moagem ou
desengorduramento (FARMACOPEIA BRASILEIRA, 2010 a).
Os extratos podem ser padronizados ou no. Nos extratos padronizados o teor de um ou
mais constituintes ajustado a valores previamente definidos e assim, perfis de eficcia clnica
e efeitos farmacolgicos podem ser desenhados. Em oposio, os no padronizados so
carentes de informaes sobre a qualidade dos mesmos, tornando sua eficcia clnica e seus
efeitos farmacolgicos questionveis (FARMACOPEIA BRASILEIRA, 2010 a; HEINRICH et
al., 2004).
fechado. Esse sistema deve permanecer em repouso por um tempo de macerao que definido
em funo da parte da planta a ser utilizada, do tamanho de seus fragmentos e do estado
apresentado (material fresco ou seco). Segundo Martini e Seiller, a ttulo de exemplo
comparativo, so necessrias 8 horas de macerao para extraes realizadas em folhas, 16
horas para caules e 36 horas para razes e frutos. Ao final do processo, o resduo separado do
extrato e prensado, e o lquido resultante da prensagem adicionado ao extrato
(FARMACOPEIA BRASILEIRA 2010 a, MARTINI; SEILLER, 1999).
O processo de percolao, tambm conhecido por lixiviao, realizado em
percoladores. O material a ser extrado deve permanecer em contato com o solvente
preconizado, em repouso, por no mnimo 1 hora. No percolador, o solvente escoado atravs
do material previamente umedecido de maneira lenta e regular. importante que o material
no percolador esteja sempre coberto por solvente e, dessa forma, a reposio contnua de
solvente se faz necessria. O tempo de percolao e a quantidade de solvente utilizada no
processo dependem da parte da planta a ser utilizada, do tamanho de seus fragmentos e do
estado apresentado (material fresco ou seco). A velocidade e temperatura de percolao
devem ser determinadas, previamente, para cada tipo de material vegetal e o solvente deve ser
escolhido em funo dos princpios ativos da planta objetivando a extrao mxima dos
mesmos. Ao trmino do processo, o resduo de extrao pode ser prensado e o lquido
resultante da prensagem adicionado ao percolador (FARMACOPEIA BRASILEIRA, 2010 a;
MARTINI; SEILLER, 1999; SALVADOR; CHISVERT, 2007).
A qualidade do extrato obtido depende do grau de reduo do material a ser extrado, da
taxa de difuso das substncias ativas do material para o solvente e da velocidade de
escoamento do solvente. A Figura 3 representa o processo industrial de extrao por
percolao utilizando uma mistura de gua, lcool e propilenoglicol como solvente de um
material vegetal. No esquema, o material vegetal pesado previamente umedecido com o
solvente e transferido para o percolador. A percolao utilizando quantidade de solvente pr-
definida ocorre por no mnimo 8 horas com gotejamento do extrator (5 gotas por minuto). A
proporo de material vegetal e solvente utilizada de 1:5. Ao final da percolao, o extrato
filtrado de 3 a 4 vezes e os conservantes so adicionados, em seguida, o extrato transferido
para tanques de espera aguardando o envase que deve ser realizado com controle de umidade e
temperatura (informao pessoal1; SALVADOR; CHISVERT, 2007).
1
Informao fornecida por MATHEUS, L.G.M em visita Mapric Produtos Farmacosmticos
Ltda, em 2009.
10
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
1
Imagens fornecidas por MATHEUS, L.G.M em visita Mapric Produtos Farmacosmticos Ltda, em 2009.
11
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
acordo com a Figura 4, podem ser classificados como extratos lquidos. Segundo Martini e
Seiller, 1999, os extratos aquosos apresentam excelente compatibilidade com diversas formas
cosmticas, porm so susceptveis contaminao microbiana sendo necessrio o uso de
conservantes apropriados. Os extratos alcolicos e hidroalcolicos apresentam quantidade de
gua e/ou lcool varivel de acordo com a natureza dos princpios ativos a serem extrados. A
incorporao dos mesmos em preparaes cosmticas limitada, uma vez que, determinadas
emulses apresentam incompatibilidade com lcool (FARMACOPEIA BRASILEIRA, 2010
a; MARTINI; SEILLER, 1999).
Os extratos gliclicos e hidrogliclicos so preparados com glicis. Propilenoglicol
(propano-1,2-diol), lquido viscoso, lmpido, incolor, praticamente inodoro, higroscpico e
com fraco sabor caracterstico adocicado, um dos solventes mais utilizados na obteno
desses extratos. miscvel com gua, etanol 96%, acetona, clorofrmio e ter. Os extratos
obtidos apresentam compatibilidade com diversas bases cosmticas e, frequentemente,
modificam as caractersticas reolgicas das formulaes. Os extratos oleosos so amplamente
utilizados em cosmticos, principalmente em emulses, e como so preparados com solventes
graxos necessitam da adio de antioxidantes no final do processo. A incorporao de
qualquer tipo de extrato vegetal em formulaes cosmticas deve ocorrer em temperaturas
baixas, normalmente inferiores a 45 C, para evitar alteraes nos mesmos. Os extratos
aquosos e hidrogliclicos so os mais susceptveis a alteraes em temperaturas elevadas com
possvel reao dos componentes ativos (FARMACOPEIA BRASILEIRA, 2010 a;
MARTINI; SEILLER, 1999).
Variveis atividades clnicas, como ao antioxidante, anti-inflamatria,
antienvelhecimento, despigmentante cutnea, estimulante do crescimento capilar e
coadjuvante na fotoproteo, tm sido atribudas aos extratos vegetais de uso cosmtico
justificando a incorporao dos mesmos nas formulaes. A comprovao cientfica desses
efeitos se faz necessria para cada extrato, em funo de suas composies diversificadas,
quali e quantitativamente. Adicionalmente, deve-se comprovar a segurana in vitro e in vivo
desses extratos incorporados s formulaes (ABURJAI; NATSHEH, 2003; DAL`BELO,
2008; MARTINI; SEILLER, 1999).
Alm da comprovao cientfica das atividades clnicas associadas aos extratos
vegetais, a manuteno de um padro de qualidade entre os lotes produzidos fundamental
para assegurar a ao de tais efeitos e a segurana dos extratos. Assim, tornam-se necessrios
cuidados elementares em todo o processo de obteno do extrato vegetal e anlises de rotina
aps o preparo dos mesmos. Os testes organolpticos que avaliam o aspecto, a cor e o odor so
14
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
alguns dos itens utilizados para garantir a qualidade e a regularidade das matrias-primas. O
controle fsico do extrato obtido exercido por meio da avaliao do pH, da densidade, do
ndice de refrao e da viscosidade. A identificao e quantificao de componentes vegetais
especficos so realizadas por tcnicas analticas como a espectrofotometria e a cromatografia
(HEINRICH et al, 2004; MARTINI; SEILLER, 1999).
2.4 FENLICOS
As plantas apresentam diversos constituintes qumicos, alguns so especficos e,
normalmente, esto presentes em pequenas quantidades como os resultantes do metabolismo
secundrio, e outros so comuns em todas as plantas. A constituio qumica dos produtos
oriundos das plantas pode variar de acordo com o perodo vegetativo das mesmas e sob a
influncia do clima, da composio do solo e de outros fatores (CUNHA, 2009).
O metabolismo vegetal, conjunto de reaes qumicas que ocorrem continuamente em
cada clula, gera metablitos, ou seja, compostos qumicos formados, degradados ou
simplesmente transformados. As reaes qumicas podem ser direcionadas por enzimas
especficas estabelecendo-se as rotas metablicas que geram as principais classes de
substncias vegetais. Tradicionalmente, o metabolismo vegetal dividido em primrio e
secundrio. O primeiro engloba os processos essenciais vida que so comuns aos seres vivos
e o segundo envolve a produo, a transformao e o acmulo de outras substncias no,
necessariamente, relacionadas de forma direta manuteno da vida do organismo produtor,
porm com vantagens para a sobrevivncia e a perpetuao da espcie em seu ecossistema
(SIMES et al., 2007).
Os metablitos secundrios apresentam atividades biolgicas interessantes com
importncia comercial na rea alimentar, farmacutica, cosmtica, agronmica e da
perfumaria. Existe um interesse contnuo e crescente nesses compostos devido possibilidade
dos mesmos atuarem como novas drogas ou auxiliarem a sntese de novas estruturas
relacionadas com propriedades curativas. Diversas funes so atribudas aos metablitos
secundrios, como: defesa da planta contra herbvoros e micro-organismos, proteo contra a
radiao ultravioleta e atrao de polinizadores. Alguns desses compostos so responsveis
pelos odores, pungncias e coloraes caractersticas das plantas e, outros, proporcionam
aes medicinais, culinrias e venenosas das mesmas. A biossntese dos metablitos
secundrios ocorre em tecidos e clulas especiais devido ao grau de diferenciao e
desenvolvimento dos mesmos. Possuem duas formas de apresentao: livre (agliconas) e
15
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
ligada a uma ou mais unidades de acar (heterosdeos) (EVANS, 2009; HARBORNE 2000;
SIMES et al., 2007).
Os compostos fenlicos constituem o maior grupo de metablitos secundrios das
plantas e seus representantes apresentam diferentes estruturas, desde as mais simples com
apenas um anel aromtico at as mais complexas, como ligninas e taninos. So importantes
constituintes de algumas plantas medicinais e so usados como corantes, flavorizantes,
aromatizantes e antioxidantes pela indstria de alimentos. Fenis simples, taninos, cumarinas,
naftoquinonas, flavonoides e ligninas so algumas das classes representantes dos compostos
fenlicos. De maneira geral, todas as estruturas que possuem pelo menos um anel aromtico
sendo pelo menos um hidrognio substitudo por um grupamento hidroxila, podendo se
apresentar livre ou fazendo parte de steres, teres ou heterosdeos so consideradas compostos
fenlicos (CUNHA, 2009; EVANS, 2009; SIMES et al., 2007).
Esta categoria est amplamente distribuda no reino vegetal e nos micro-organismos e
participa do metabolismo animal. Seus constituintes possuem reatividade elevada devido
presena do grupamento hidroxila sendo capazes de formar novas molculas por meio da unio
oxidativa entre radicais fenoxi e pela oxidao do ncleo aromtico. Podem ser classificados
de acordo com o tipo do esqueleto principal ou de acordo com a ocorrncia dos mesmos no
reino vegetal. O Quadro 1 representa a classificao de acordo com o esqueleto principal
(CUNHA, 2009; SIMES et al., 2007).
tambm com seus steres. Existem relatos do efeito antioxidante do extrato de Ilex
paraguariensis sobre a oxidao de lipoprotenas de baixa densidade e da ao antioxidante e
pr-oxidante de Camellia. sinensis. Alm da atividade antioxidante, dados da literatura
cientfica revelam a atividade antibacteriana e antiviral de steres do cido cafico (SIMES
et al., 2007).
Diferentes fenis simples e cidos fenlicos so usados na rea cosmtica, como a
arbutina, a vanilina e a saligenina (lcool saliclico) que so frequentemente encontrados em
produtos cosmticos. A arbutina (hidroquinona--D-glucopiranosdio) gera hidroquinona,
aps passar por processo de degradao pela ao da enzima -glucosidase, que atua inibindo
a enzima tirosinase envolvida na sntese bioqumica da melanina. Atualmente, seu uso vem
diminuindo devido aos efeitos irritantes que a mesma provoca na pele humana. Extratos
obtidos das folhas e das cascas de diferentes espcies de Salix sp. so utilizados em
cosmticos devido presena de derivados saliclicos, cidos fenlicos (saliclico, vanlico,
sirngico, cafico) e flavonoides que conferem propriedade hidratante e queratoltica s
formulaes. Tambm, podem ser utilizados como agentes anti-inflamatrios, analgsicos e
adstringentes (SALVADOR; CHISVERT, 2007).
2.4.2 FLAVONOIDES
Os flavonoides constituem uma importante e diversificada classe de polifenis, esses
componentes apresentam funes essenciais no crescimento e no desenvolvimento das
plantas. Esto relacionados com a atrao de vetores animais para a polinizao e disperso de
sementes, com a promoo do crescimento do tubo polnico e com a reabsoro de nutrientes
minerais de folhas envelhecidas. Os flavonoides podem ser encontrados na forma livre
(aglicona, sem acares) ou como heterosdeo (conjugado com acares). Na ltima forma,
podem apresentar-se como O-heterosdeos quando a ligao d-se por intermdio de uma
hidroxila e de C-heterosdeos quando a mesma ocorre com um tomo de carbono. Localizam-
se em diferentes partes do vegetal, como nos frutos, folhas, flores e cascas da rvore. Sabe-se
que os mesmos podem estar presentes em vacolos, nas ceras das folhas, no exsudatos e
ligados parede celular nos tecidos das gimnospermas. Existem relatos da presena de
flavonoides tambm no plen. Trata-se de molculas de baixo peso molecular que,
normalmente, so responsveis pela colorao das estruturas vegetais nas quais esto
localizados (ANDERSEN; MARKHAM, 2006; CUNHA, 2009; EVANS, 2009;
SALVADOR; CHISVERT, 2007; SIMES et al., 2007).
18
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Figura 6 Ncleo fundamental dos flavonoides com a respectiva numerao (SIMES et al.,
2007).
Quadro 2 Principais classes de flavonoides com suas caractersticas (SIMES et al., 2007).
Nmero
aproximado de
Classes Caractersticas
estruturas
conhecidas
Flavonas, flavonis e seus O- 1660 Co-pigmentao em flores e protetores
heterosdeos contra raios UV nas folhas
C-heterosdeos 303
Antocianos 256 Pigmentao do vermelho at o azul
Chalconas 197 Pigmentao amarela
Auronas 29 Pigmentao amarela
Di-hidro-flavonis 110 Esto presentes, frequentemente, em
tecidos de madeiras
Flavanonas 319 Podem apresentar sabor amargo
Di-hidro-chalconas 71 Podem apresentar sabor amargo
Flavanas, leucoantocianidinas 309 Substncias adstringentes com
e proantocianidinas propriedades tanantes
Isoflavonoides 630 Propriedades estrognicas e/ou
antifngicas
Neoflavonoides 70
Biflavonoides 134 Propriedades antifngicas
Outras estruturas 100
atravs da pele de rato (ARCT; PYTKOWSKA, 2008; BABY et al., 2008; SALVADOR;
CHISVERT, 2007; VALENTA et al., 1999).
2.4.3 TANINOS
O termo tanino foi, inicialmente, empregado por Seguin, em 1796, para identificar
as substncias presentes em extratos vegetais capazes de se combinar com protenas da pele
de animais, impedindo a putrefao das mesmas e convertendo-as em couro. Por vrios
milnios, o curtimento de peles foi realizado exclusivamente com o uso de plantas tanferas.
Atualmente, tambm se obtm o couro por processos industriais que envolvem compostos
minerais. Posteriormente, os taninos foram definidos por Bate-Smith e Swain, em 1962, como
substncias fenlicas solveis em gua com massa molar entre 500 e 3000 daltons, que
apresentam a habilidade de formar complexos insolveis em gua com alcaloides, gelatina e
outras protenas (CUNHA, 2009; EVANS, 2009; HASLAM , 1996; SIMES et al., 2007).
Tanto a adstringncia caracterstica dessas substncias quanto a sua capacidade de
formar complexos com as fibras de colgeno da pele so explicadas pelas interaes
hidrofbicas e pelas ligaes de hidrognio entre os grupos fenlicos dos taninos e algumas
macromolculas. A estabilidade dos complexos formados com a pele assegurada por
ligaes covalentes resultantes da oxidao dos fenis a quinonas (CUNHA, 2009;
SALVADOR; CHISVERT, 2007).
Os taninos so classificados em dois grupos segundo sua estrutura: hidrolisveis e
condensados. O primeiro grupo subdivido em dois grupos, os galotaninos e os elagitaninos.
Ambos so metablitos de um poliol aliftico central, geralmente a -D- glicose, esterificado
por molculas de um cido fenlico. Se esse cido fenlico for o cido glico, o tanino
denominado galotanino e se for o cido hexahidroxidifnico (HHDF) denomina-se
elagitaninos. O cido glico, o cido hexahidroxidifnico (HHDF) e exemplos de galotaninos
e elagitaninos esto representados na Figura 7 (CUNHA, 2009; QUEIROZ et al., 2002;
SIMES et al., 2007).
Os taninos condensados so oligmeros e polmeros formados pela policondensao
de duas ou mais unidades flavan-3-ol (catequina) e flavan-3,4-diol (leucoantocianina).
Tambm, so denominados proantocianidinas porque esses compostos originam pigmentos
23
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
avermelhados da classe das antocianidinas, tais como cianidina e delfinidina, aps degradao
com cido mineral diludo a quente (SIMES et al., 2007). A Figura 8 representa a estrutura
de um tanino condensado, a procianidina (QUEIROZ et al., 2002).
Com a introduo de novos mtodos de anlises e isolamento de componentes, as
pesquisas envolvendo os taninos puderam relacionar a estrutura qumica dos mesmos com
suas atividades biolgicas e farmacolgicas. Os taninos apresentam diversas atividades
biolgicas, tais como: ao bactericida, fungicida, antiviral, antitumoral, anti-inflamatria,
antioxidante e inibidora da peroxidao de lipdeos. Seu uso na Medicina ocorre h sculos
sendo indispensvel, atualmente, na Dermatologia. Esses compostos so utilizados nos
tratamentos de doenas cutneas inflamatrias. Eles so capazes de impermeabilizar as
camadas mais externas da pele e das mucosas por meio da complexao tanino-protena e/ou
polissacardeo. Assim, limitam a perda de fluidos e impedem as agresses externas
favorecendo a regenerao tecidular, o que colabora com o processo de cura de feridas,
queimaduras e inflamaes. Observa-se, tambm, que os taninos apresentam potencial para
uso em indivduos com perda parcial ou total dos cabelos, j que avaliaes in vitro e in vivo
da atividade das procianidinas B-1, B-2, B-3 e C-1 e de flavan-3-is indicaram que algumas
destas substncias, isoladamente, so capazes de induzir a fase de crescimento dos pelos (fase
angena) (CUNHA, 2009; FLSTER- HOLST; LATUSSEK, 2007; HASLAM, 1996;
SIMES et al., 2007).
Trabalhos atuais demonstraram que diversos taninos atuam como sequestradores de
radicais livres colaborando com o bloqueio da peroxidao de lipdeos em mitocndrias
hepticas, com o bloqueio da lipoxigenase, em leuccitos, e da xantinoxidase. Tambm,
demonstraram a ao desses compostos na represso da formao de radicais nion
superxido e dos radicais DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazila). Esse conjunto de aes
atribudas aos taninos despertou o interesse cientfico tanto para o desenvolvimento de novos
produtos farmacuticos e cosmticos base de extratos vegetais contendo, principalmente,
proantocianidinas quanto para a verificao da eficcia dos mesmos (CUNHA, 2009;
SALVADOR; CHISVERT, 2007; SIMES et al., 2007).
24
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
para a rea cosmtica a atividade inibidora da enzima colagenase, essa propriedade justifica
o uso do extrato em formulaes antienvelhecimento. Folhas frescas de Camellia sinensis
esto representadas na Figura 12 (CHUARIENTHONG et al., 2010; DAL`BELO, 2008;
GRUENWALD, 2000; SALVADOR; CHISVERT, 2007).
A B
Figura 15 Ginkgo biloba L. Detalhe de ramo vegetativo (A) e rvore (B) (HENRIETTE`S
HERBAL HOMEPAGE - Ginkgo biloba L., 2010)
2.14 Prpolis
A prpolis, conhecida tambm como cola de abelha e prpolis de abelha, uma
substncia resinosa, adesiva, de odor caracterstico e de colorao amarronzada, coletada
pelas abelhas a partir de fissuras de cascas de rvores, botes foliares e em exudatos. As
abelhas a utilizam para selar suas colmias e mant-las livres de micro-organismos, uma vez
que a prpolis possui propriedades antimicrobianas (GRUENWALD, 2000; PAGLIARONE,
2009).
A composio qumica da prpolis complexa e depende do local e da variedade de
rvores usados na sua coleta. Constituintes exclusivos foram identificados na prpolis
procedente de Cuba e do Brasil. Em geral, a prpolis possui 50% de resinas e blsamos, 30%
de ceras, 10% de leos vegetais, 5% de plen e 5% de impurezas. Apresenta flavonoides
(quercetina, apigenina, galangina, canferol, luteolina, pinocembrina, pinostrobina e
pinobansina), terpenos, cidos fenlicos e steres, aminocidos, hidrocarbonetos, vitaminas,
minerais, entre outros. Diversas propriedades so atribudas ela, tais como: atividade
antibacteriana, cicatrizante, antioxidante, antipirtica, antifngica, anticarcinognica, anti-
inflamatria, antitrombtica e imunomoduladora (GRUENWALD, 2000; PAGLIARONE,
2009).
possvel preparar diferentes extratos com a prpolis, sendo os alcolicos os mais
comumente utilizados. Os aquosos apresentam boa atividade antioxidante e esto associados
com altas quantidades de compostos fenlicos. Diversos produtos cosmticos apresentam
prpolis ou extratos de prpolis em suas composies e observa-se a presena dos mesmos
em cremes, xampus, batons, pastas de dente, enxaguantes bucais, entre outros. A Figura 18
representa as quatro coloraes possveis de prpolis (amarela, vermelha, verde e marrom),
35
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
angena. Outros estudos demonstraram que esse extrato eleva o Fator de Proteo Solar (FPS)
de formulaes tpicas apresentando intensa atividade antioxidante. Pelas propriedades que
possui, incorporado, em diversas formulaes de ao antienvelhecimento (BAUMANN,
2007; GRUENWALD, 2000).
3. OBJETIVOS
O presente trabalho teve por objetivo geral selecionar os seis extratos comerciais
gliclicos com maiores teores de polifenis e flavonoides totais e com maior atividade
antioxidante dentre doze extratos (aa, acerola, castanha da ndia, ch verde, erva-mate,
framboesa, ginco, menta, morango, prpolis, rom e uva) para realizao de Estudo da
Estabilidade e avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora dos mesmos.
Os objetivos especficos envolveram a quantificao dos polifenis totais equivalentes
em cido glico e dos flavonoides totais equivalentes em quercetina dos doze extratos
gliclicos de uso cosmtico, no padronizados e disponveis no mercado brasileiro,
empregando mtodos espectrofotomtricos; e a determinao da atividade antioxidante dos
mesmos por duas metodologias distintas: atividade sequestradora do radical DPPH (2,2-
difenil-1-picril-hidrazila) e ORAC (Capacidade de Absoro de Radicais de Oxignio).
4. MATERIAL E MTODOS
4. 1 Material
4.1.1 Equipamentos/Acessrios
- Balana analtica Sartorius (BL - 210S) Sartorius;
- Balanas semi-analticas Mettler (P - 120) Mettler e Scientech (SA210) Quimis;
- Banho ultrassnico Ultrasonic Cleaner - Unique Modelo 1600a;
38
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
4.1.4 Matrias-primas
- Extratos comerciais gliclicos no padronizados, fornecidos pela indstria brasileira A.
Optou-se por no revelar o nome da empresa visando evitar marketing da mesma nesse estudo
acadmico:
- Aa (Euterpe oleracea), INCI: Euterpe oleracea fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto;
- Acerola (Malpighia glabra L.), INCI: Malpighia glabra fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto;
- Castanha da ndia (Aesculus hippocastanum L.), INCI: Aesculus hippocastanum
seed extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Semente;
- Ch verde (Camellia sinensis), INCI: Camellia sinensis leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
-Erva-mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil), INCI: Ilex paraguariensis leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha
- Framboesa (Rubus idaeus L.), INCI: Rubus idaeus fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto;
- Ginco (Ginkgo biloba L.), INCI: Ginkgo biloba leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
- Menta (Mentha piperita L.), INCI: Mentha piperita leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
- Morango (Fragaria vesca L.), INCI: Fragaria vesca fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto;
- Prpolis, INCI: Propolis extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Substncia resinosa;
- Rom (Punica granatum L.), INCI: Punica granatum fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto;
40
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
4. 2 Mtodos
4.2.1 Avaliao da presena de flavonoides por ensaios cromticos e cromatogrficos
Antes de se proceder quantificao de polifenis e flavonoides totais nas doze
amostras comercias dos extratos gliclicos, realizou-se a anlise preliminar da presena de
flavonoides nos mesmos. Utilizaram-se ensaios cromtico e cromatogrfico como ferramentas
para verificao da presena desses compostos. A reao de Shinoda (ensaio cromtico) foi
realizada adicionando 2 ou 3 fragmentos de magnsio metlico e 1 mL de cido clordrico
concentrado em alquota de 1 mL de cada uma das doze amostras de extratos gliclicos, em
tubos de ensaio. Procedeu-se com a agitao manual dos tubos de ensaio e com a deteco
visual da presena de flavonoides, confirmada com a colorao variando do rseo a vermelho.
A cromatografia em camada delgada (CCD) foi realizada de acordo com Wagner e
Bladt, 1996. Dois padres de referncia (rutina e quercetina) foram escolhidos e preparados
para o ensaio. Os padres foram dissolvidos em metanol obtendo-se solues metanlicas a
0,05% p/v. As placas de vidro (20 x 20 cm) de 4 mm de espessura, devidamente limpas e
secas, foram preparadas utilizando slica-gel como adsorvente. Procedeu-se com o preparo de
uma suspenso da Slica Gel 60 G em gua destilada na proporo de 32 g para 100 ml e
aplicou-se a mesma com o auxlio de um espalhador manual, de maneira uniforme, sobre as
placas de vidro com 1 mm de espessura. Aps a deposio, as placas permaneceram em
repouso em temperatura ambiente sendo, posteriormente, transferidas e mantidas em estufa
com faixa de temperatura de 105 a 110 C, por 1 hora. Os solventes constituintes da fase
mvel foram selecionados aps anlises preliminares de polaridade e considerando a natureza
qumica das substncias empregadas. Sistemas direcionados para a deteco de flavonoides
foram testados resultando na escolha de dois sistemas distintos. O sistema destinado
deteco de flavonoides utilizando o padro de referncia rutina consistia em acetato de etila,
cido frmico, cido actico glacial e gua destilada (100:11:11:26), enquanto que o sistema
envolvendo o padro de referncia quercetina era composto de acetato de etila, cido actico
glacial e gua destilada (100:20:6) (WAGNER & BLADT, 1996).
As amostras dos extratos gliclicos foram aplicadas em 4 placas distintas, duas para o
estudo de deteco do flavonoide rutina e as outras duas para a quercetina. A aplicao das
amostras foi realizada a aproximadamente 1 cm da base inferior das placas com o auxlio de
capilares de vidro. Foi necessrio 1 mL de cada amostra para a formao dos halos nas placas,
41
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
LD = DPa x 3
IC
Equao 1 Limite de deteco estimado (LD). Onde: DPa o desvio padro mdio obtido
por meio da curva analtica e IC a inclinao da curva analtica.
LQ = DPa x 10
IC
Equao 2 Limite de quantificao estimado (LQ). Onde: DPa o desvio padro mdio
obtido por meio da curva analtica e IC a inclinao da curva analtica.
43
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Figura 21 Reao entre o radical livre DPPH e um antioxidante (WANG et al., 2008).
O branco utilizado no sistema foi lcool etlico P.A. As anlises foram realizadas em
triplicata e, em cada ensaio, foram feitas 6 leituras espectrofotomtricas. A porcentagem de
inibio do radical DPPH para cada amostra de extrato vegetal foi calculada de acordo com a
Equao 3.
amostras das concentraes de Trolox para elaborao da curva padro ou amostras das
diluies dos extratos. Em seguida, exatos 150,0 L de fluorescena 40 nM foram
adicionados. Aps 30 minutos de incubao a 37,0 C adicionaram-se exatamente 25 L de
AAPH 153 mM. O branco foi preparado com exatos 200 L de tampo fosfato pH= 7,1. A
intensidade da fluorescncia das amostras (485 nmex/ 525 nmem) foi determinada a cada 5
minutos, durante 1 hora, em leitor multi-modal de microplacas Synergy HT Biotek. As reas
sob a curva de decrscimo (AUC) da perda de fluorescncia da fluorescena de cada
concentrao do padro trolox foram utilizadas para a construo da curva analtica (AUC
versus concentrao). A equao da reta dessa curva foi calculada pela regresso linear por
meio do mtodo dos mnimos quadrados e utilizada na determinao da atividade antioxidante
dos extratos gliclicos expressa em micromolar de Trolox equivalente.
5. RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Avaliao da presena de flavonoides por ensaios cromticos e cromatogrficos
O teste cromtico utilizando a reao de cianidina, de Shinoda ou hidrogenao
apresentou importncia como estgio preliminar de anlise. Os ensaios cromticos apresentam
importncia como etapa prvia na anlise de flavonoides e, em alguns casos, possvel
diferenciar as diversas classes desse grupo por meio desta metodologia. A reao da cianidina,
de Shinoda ou hidrogenao uma tcnica cromtica amplamente empregada na deteco de
flavonoides. Os derivados flavnicos de colorao amarela reduzem-se adquirindo colorao
avermelhada e os antocinicos adquirem colorao azulada (SIMES et al., 2007).
No ensaio realizado, foi possvel verificar a presena de flavonoides em quatro
extratos gliclicos que adquiriram colorao variando do rseo ao vermelho indicando a
reduo de derivados flavnicos de colorao amarela. A Tabela 1 sintetiza os resultados
obtidos, os extratos de aa (E. oleracea), rom (P. granatum), uva (V. vinifera) e framboesa
(R. idaeus) apresentaram resposta positiva ao teste.
48
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Extratos gliclicos
Ensaio Aa Acerola Castanha Ch Erva Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia verde mate
Colorao
Anterior
Marrom Amarelo Amarelo Laranja Laranja Amarelo Laranja Marrom Amarelo Amarelo Marrom Laranja
claro claro claro claro claro escuro claro claro claro claro
Colorao
Posterior
Vermelho Laranja Amarelo Laranja Laranja Rosa Laranja Marrom Laranja Amarelo Vermelho Vermelho
escuro escuro escuro claro escuro claro escuro claro
Resultado Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Positivo
final
49
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Figura 22 Placa cromatogrfica dos extratos gliclicos para o sistema com padro de
flavonoide rutina
Figura 23 Placa cromatogrfica dos extratos gliclicos para o sistema com padro de
flavonoide quercetina
51
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
O clculo do teor de polifenis totais das amostras dos extratos gliclicos foi realizado
com o auxlio da curva analtica do cido glico padro de referncia secundrio (pureza de
97%). A curva analtica (Figura 24) foi construda de acordo com os valores de absorbncia
das diferentes concentraes de cido glico, expostos na Tabela 2 que, tambm, apresenta o
estudo do intervalo da curva analtica.
1
0,9
0,8
0,7
Absorbncia
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 200 400 600 800 1000 1200
Concentrao g/mL
Figura 24 Curva analtica mdia do cido glico padro de referncia secundrio (n=6)
O clculo da regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados gerou a equao da
reta descrita na Equao 4, com valores de interseco com o eixo y e coeficiente angular
(inclinao da reta) iguais a 0,0055 e 0,0009, respectivamente, e coeficiente de correlao
linear (R2) mdio igual a 0,9971.
y = 0,0009 x + 0,0055
Equao 4 - Equao da reta da curva analtica mdia do cido glico padro de referncia
secundrio obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados. Onde x a concentrao do cido
glico padro de referncia secundrio (g/mL) e y a absorbncia.
A partir da equao da reta obtida foi possvel calcular o teor de polifenis totais dos
extratos gliclicos, conforme exposto na Tabela 3. Esse teor foi calculado por meio da
52
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Equao 4, sendo obtido a partir da substituio de y pelo valor da absorbncia obtida nos
ensaios de quantificao de polifenis e expresso em EAG (equivalentes de cido glico)
mg/mL. O programa STATISTICA Release 7.0 foi utilizado para determinar diferenas
estatisticamente significativas entre os teores de polifenis totais dos extratos gliclicos.
Utilizou-se anlise de varincia (one-way ANOVA) seguida do Teste de Tukey (n = 3;
p<0,05). O resultado obtido est expresso na Tabela 3. A Figura 25 ilustra,
comparativamente, os teores de polifenis dos extratos gliclicos.
Verificou-se, de acordo com a Tabela 3 e a Figura 25, que o extrato gliclico de rom
(P. granatum) apresentou o maior teor de polifenis totais dentre os extratos avaliados. Os
extratos de erva-mate (I. paraguariensis), menta (M. piperita), ch verde (C. sinensis), aa
(E. oleracea), ginco (G. biloba) e prpolis apresentaram, nesta ordem, valores decrescentes de
polifenis totais. Os extratos gliclicos de uva (V. vinifera) e morango (F. vesca) no
apresentaram diferena estatisticamente significativa entre si, assim como os extratos de
acerola (M. glabra) e castanha da ndia (A. hippocastanum), esses quatros extratos
apresentaram teores de polifenis inferiores ao do grupo de extratos citado anteriormente. O
extrato de framboesa (R. idaeus) foi o que apresentou menor teor de polifenis totais.
Considerando as diferenas estatisticamente significativas, puderam-se ordenar os
extratos gliclicos na seguinte ordem decrescente de teor de polifenis totais: rom; erva-
mate; menta; ch verde; aa; ginco; prpolis; acerola e castanha da ndia; uva e morango; e
framboesa.
Estudos envolvendo a quantificao de polifenis totais em matrias-primas
cosmticas so importantes para garantir a eficcia das formulaes desenvolvidas com as
mesmas. Diversas atividades clnicas so atribudas aos componentes naturais utilizados na
Cosmetologia, entretanto, tornam-se necessrios estudos cientficos in vitro e in vivo que
comprovem tais atividades (DAVIS; PEREZ, 2009).
A literatura cientfica apresenta inmeros trabalhos relacionados ao estudo de extratos,
porm, poucas pesquisas envolvem extratos comerciais gliclicos. A avaliao de extratos
comerciais utilizados na indstria cosmtica fundamental para assegurar a qualidade, a
eficcia e a segurana dos produtos formulados com os mesmos.
53
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Tabela 2 - Dados para a construo da curva analtica do cido glico padro de referncia secundrio, obtidos por espectrofotometria a 750 nm
Tabela 3 - Dados para o clculo do teor de polifenis totais (mgEAG/mL) dos extratos gliclicos
Extratos gliclicos
Aa Acerola Castanha Ch Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia verde
A1 0,401 0,429 0,546 0,145 0,294
0,469 0,384 0,345 0,514 0,323 0,593 0,273
A2 0,366 0,416 0,548 0,155 0,282
0,478 0,393 0,340 0,497 0,328 0,579 0,271
A3 0,380 0,449 0,538 0,145 0,289
0,449 0,384 0,350 0,481 0,317 0,588 0,274
Amdia
0,465 0,382 0,387 0,431 0,544 0,148 0,345 0,497 0,323 0,288 0,587 0,273
Adp 0,015 0,017 0,005 0,016 0,005 0,006 0,005 0,016 0,006 0,006 0,007 0,001
Teor de polifenis totais (mgEAG/mL) e anlise estatstica
Diluio 2,5 ----- ----- 5 12,5 ----- 3,33 5 ----- 3,33 25 -----
T1 1,289 0,401 0,421 2,353 7,500 0,155 1,255 2,825 0,353 1,066 16,306 0,298
T2 1,313 0,416 0,431 2,279 7,532 0,166 1,236 2,731 0,358 1,023 15,926 0,295
T3 1,231 0,440 0,421 2,464 7,398 0,154 1,273 2,641 0,347 1,048 16,292 0,299
Tmdio 1,278 0,419 0,424 2,365 7,477 0,159 1,255 2,732 0,353 1,045 16,174 0,297
Tdp 0,043 0,020 0,006 0,093 0,070 0,007 0,018 0,092 0,005 0,021 0,214 0,002
Teste de E G G D B H EF C GH F A GH
Tukey
Teor(%) 0,1278 0,0419 0,0424 0,2365 0,7477 0,0159 0,1255 0,2732 0,0353 0,1045 1,6174 0,0297
Legenda: A1 a A3: absorbncias em triplicata; Amdia: mdia das absorbncias; Adp: desvio padro das absorbncias; T1 a T3: teor de polifenois totais em
triplicata (mgEAG/mL); EAG: equivalentes de cido glico; Tmdio: mdia dos teores de polifenis totais; Tdp: desvio padro dos teores de polifenis
totais; Teor(%): teor de polifenis expresso em porcentagem. Letras diferentes indicam resultados estatisticamente distintos (p< 0,05; n = 3)
55
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
18 A
16
14
12
10 B
8
6
(mgEAG/mL)
4 D C
E EF F
2 G G H GH GH
Extratos gliclicos
Figura 25 - Teor de polifenis (mgEAG/mL) totais dos extratos gliclicos. EAG: equivalentes de cido glico, letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos entre os extratos gliclicos analisados; p< 0,05; n = 3.
56
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
valores superiores em extratos metanlicos e etanlicos obtidos da semente e pele de uva (V.
vinifera). O teores dos extratos analisados variaram no intervalo de 7,33 a 67,88 mgEAG/g
(CASAZZA et al., 2010; KUSKOSKI et al., 2006; MILIVOJEVIC et al., 2011; VARGAS et
al., 2008).
Khknen e colaboradores, 1999, avaliaram o teor de polifenis totais do extrato de
framboesa (R. idaeus) preparado com acetona e gua destilada obtendo o valor de 23,9
mgEAG/g. Valor inferior foi determinado por Milivojevic e colaboradores, 2011, em extrato
de framboesa (R. idaeus) preparado com metanol, gua destilada e cido hidroclrico. Os
autores obtiveram, aproximadamente, 1,20 mgEAG/g. De acordo com a Tabela 3, verificou-
se que o valor do teor de polifenis totais do extrato comercial gliclico de framboesa (R.
idaeus) foi 0,159 mgEAG/mL. Esse teor foi inferior ao encontrado nas duas pesquisas citadas
anteriormente (KHKNEN et al.; 1999; MILIVOJEVIC et al., 2011).
Verificou-se que os extratos comerciais gliclicos de rom (P. granatum) e aa (E.
oleracea) apresentaram teores de polifenis totais dentro de intervalos descritos na literatura.
Os extratos gliclicos de menta (M. piperita), ch verde (C. sinensis), ginco (G. biloba) e uva
(V. vinifera) apresentaram teores de polifenis totais inferiores aos teores descritos por
determinados autores. Entretanto, esses mesmos teores se aproximavam de resultados obtidos
por outros autores. Os extratos de erva-mate (I. paraguariensis), prpolis, acerola (M.
glabra), morango (F. vesca), castanha da ndia (A. hippocastanum) e framboesa (R. idaeus)
apresentaram teores de polifenis totais inferiores aos encontrados na literatura.
Diversos fatores esto relacionados com a variabilidade do teor de metablitos
secundrios das plantas. A poca de colheita das mesmas pode determinar a quantidade e a
natureza de seus constituintes ativos, uma vez que variaes sazonais no contedo das classes
de metablitos secundrios so comuns. O ritmo circadiano tambm pode interferir no teor de
metablitos secundrios. Pesquisas demonstraram que a composio desses metablitos pode
variar consideravelmente durante o ciclo dia/noite. Algumas plantas atingem o mximo de
concentrao de determinado metablito na parte da manh, enquanto outras o atingem na
parte da tarde. A idade e o desenvolvimento da planta, a temperatura, a disponibilidade
hdrica e de nutrientes, a radiao ultravioleta e a poluio atmosfrica tambm so fatores
que podem influenciar a quantidade total de metablitos produzidos (GOBBO-NETO;
LOPES, 2007).
Esses fatores podem ter contribuido com o baixo teor de polifenis totais encontrado
na maioria dos extratos comerciais gliclicos avaliados. Outros fatores relacionados com o
preparo dos extratos tambm podem ter contribuido com esse baixo teor de polifenis. Sabe-
60
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Concentrao g/mL
O clculo da regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados gerou a equao da
reta descrita na Equao 5, com valores de interseco com o eixo y e coeficiente angular
(inclinao da reta) iguais a 0,0061 e 0,0297, respectivamente, e coeficiente de correlao
linear (R2) mdio igual a 0,9991.
y = 0,0297 x - 0,0061
Equao 5 - Equao da reta da curva analtica da quercetina padro de referncia secundrio
obtida pelo mtodo dos mnimos quadrados. Onde x a concentrao de quercetina padro de
referncia secundrio (g/mL) e y a absorbncia
A partir da equao da reta obtida foi possvel calcular o teor de flavonoides totais dos
extratos gliclicos, conforme exposto na Tabela 5. Esse teor foi calculado por meio da
61
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Equao 5, sendo obtido a partir da substituio de y pelo valor da absorbncia obtida nos
ensaios de quantificao de flavonoides e expresso em EQ (equivalentes de quercetina)
mg/mL. O programa STATISTICA Release 7.0 foi utilizado para determinar diferenas
estatisticamente significativas entre os teores de flavonoides totais dos extratos gliclicos.
Utilizou-se anlise de varincia (one-way ANOVA) seguida do Teste de Tukey (n = 3;
p<0,05). O resultado obtido est expresso na Tabela 5. A Figura 27 ilustra,
comparativamente, os teores de flavonoides dos extratos gliclicos.
Verificou-se, de acordo com a Tabela 5 e a Figura 27, que o extrato gliclico de rom
(P. granatum) apresentou o maior teor de flavonoides totais dentre os extratos avaliados
(0,492 mgEQ/mL). Os extratos de erva-mate (I. paraguariensis), menta (M. piperita),
prpolis, ginco (G. biloba), castanha da ndia (A. hippocastanum) e ch verde (C. sinensis)
apresentaram, nesta ordem, os seguintes valores decrescentes de flavonoides totais: 0,246;
0,208; 0,188; 0,113; 0,097 e 0,089 mgEQ/mL. Os extratos de aa (E. oleracea) e acerola (M.
glabra) apresentaram, respectivamente, 0,056 e 0,017 mgEQ/mL. Os extratos gliclicos de
castanha da ndia (A. hippocastanum) e ch verde (C. sinensis) no apresentaram diferena
estatisticamente significativa entre si, assim como os extratos de uva (V. vinifera) e morango
(F.. vesca) que apresentaram, respectivamente, 0,012 e 0,007 mgEQ/mL. O extrato de
framboesa (R. idaeus) foi o que apresentou menor teor de flavonoides totais (0,004
mgEQ/mL) no grupo de extratos analisados.
Considerando as diferenas estatisticamente significativas, puderam-se ordenar os
extratos gliclicos na seguinte ordem decrescente de teor de flavonoides totais: rom; erva-
mate; menta; prpolis; ginco; castanha da ndia e ch verde; aa; acerola; uva e morango; e
framboesa.
A anlise comparativa dos teores de flavonoides totais dos extratos gliclicos
comerciais com os resultados da literatura foi realizada, preferencialmente, com trabalhos
cientficos que envolviam a determinao de flavonoides totais por meio da metodologia de
complexao com cloreto de alumnio. Entretanto, o teor de flavonoides totais do extrato
gliclico de castanha da ndia (A. hippocastanum) foi comparado com o teor obtido em
metodologia envolvendo cromatografia lquida de ultra eficincia, devido escassez de
trabalhos envolvendo esse extrato e o mtodo de complexao com cloreto de alumnio.
Observou-se, tambm, a ausncia dessa metodologia em pesquisas envolvendo extratos de
aa (E. oleracea) e acerola (M. glabra). Assim, o teor de flavonoides totais desses extratos
foi comparado com teores de antocianinas totais (compostos pertecentes ao grupo dos
flavonoides).
62
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Tabela 4 - Dados para a construo da curva analtica da quercetina padro de referncia secundrio, obtidos por espectrofotometria a 425 nm
Tabela 5 - Dados para o clculo do teor de flavonoides totais (mgEQ/mL) dos extratos gliclicos
Extratos gliclicos
Aa Acerola Castanha Ch Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia verde
A1
0,328 0,481 0,575 0,550 0,880 0,117 0,628 0,740 0,212 0,645 0,575 0,367
A2
0,343 0,496 0,56 0,54 0,889 0,113 0,695 0,733 0,208 0,678 0,58 0,349
A3
0,304 0,499 0,58 0,484 0,851 0,119 0,667 0,742 0,191 0,679 0,581 0,348
Amdia
0,325 0,492 0,572 0,525 0,873 0,116 0,663 0,738 0,204 0,667 0,579 0,355
Adp 0,019 0,001 0,001 0,036 0,020 0,003 0,033 0,005 0,011 0,019 0,003 0,011
Teor de flavonoides totais (mgEQ/mL) e anlise estatstica
Diluio 5 ----- 5 5 8,3 ----- 5 8,3 ----- 8,3 25 -----
T1 0,056 0,016 0,098 0,094 0,248 0,004 0,107 0,209 0,007 0,182 0,489 0,013
T2 0,059 0,017 0,095 0,092 0,250 0,004 0,118 0,207 0,007 0,191 0,493 0,012
T3 0,052 0,017 0,099 0,083 0,240 0,004 0,113 0,209 0,007 0,191 0,494 0,012
Tmdio 0,056 0,017 0,097 0,089 0,246 0,004 0,113 0,208 0,007 0,188 0,492 0,012
Tdp 0,003 0,000 0,002 0,006 0,006 0,000 0,006 0,001 0,000 0,005 0,003 0,000
Teste de G H F F B I E C HI D A HI
Tukey
Teor(%) 0,006 0,002 0,010 0,009 0,025 0,0004 0,011 0,021 0,001 0,019 0,049 0,001
Legenda: A1 a A3: absorbncias em triplicata; Amdia: mdia das absorbncias; Adp: desvio padro das absorbncias; T1 a T3: teor de flavonoides totais em
triplicata (mgEQ/mL); EQ: equivalentes de quercetina; Tmdio: mdia dos teores de flavonoides totais; Tdp: desvio padro dos teores de flavonoides totais;
Teor(%): teor de flavonoide expresso em porcentagem. Letras diferentes indicam resultados estatisticamente distintos entre os extratos (p< 0,05; n = 3)
64
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
1,5
(mgEQ/mL)
A
0,5 B
F F C D
G H E HI HI
I
Extratos gliclicos
Figura 27 - Teor de flavonoides (mgEQ/mL) totais dos extratos gliclicos. EG: equivalentes de quercetina, letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos entre os extratos gliclicos analisados; p< 0,05; n = 3.
65
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
totais no intervalo de 14,0 a 28,3 mgEQ/g. Esses valores foram superiores ao valor de 0,113
mgEQ/mL encontrado no extrato comercial gliclico de ginco (G. biloba) (Tabela 5) (CHEN
et al., 2011).
Pereira e colaboradores, 2009, quantificaram o teor de flavonoides totais de amostras
comerciais de ch verde (C. sinensis). As amostras foram preparadas adicionando 100 mL de
gua destilada a 1 g do material comercial. Os autores verificaram que os teores de
flavonoides totais das amostras comerciais variaram na faixa de 0,61 a 1,10 mgEQ/g de
amostra. Esse valor foi superior ao valor de 0,089 mgEQ/mL encontrado no extrato comercial
gliclico de ch verde (C. sinensis) (Tabela 5) (PEREIRA et al., 2009).
Kapusta e colaboradores, 2007, determinaram a concentrao total de flavonoides em
sementes de castanha da ndia (A. hippocastanum) utilizando cromatografia lquida de ultra
eficincia. Os autores obtiveram valor superior (0,88% em matria seca) ao encontrado no
extrato comercial gliclico de castanha da ndia (A. hippocastanum) (0,097 mgEQ/mL
Tabela 5) (KAPUSTA et al., 2007).
O teor de flavonoides totais de extrato metanlico de frutos de F.. vesca foi
determinado por Cheel e colaboradores, 2007. Os autores encontraram, aproximadamente,
100 mgEQ/100g de fruto fresco, esse valor foi superior ao valor de 0,007 mgEQ/mL
determinado no extrato gliclico comercial de morango (F. vesca) (Tabela 5) (CHEEL et al.,
2007).
Kuskoski e colaboradores, 2006, avaliaram o teor de antocianinas totais de polpas
comercializadas de aa (E. oleracea) e acerola (M. glabra) obtendo, respectivamente, 22,8
mg/100g e 16,0 mg/100g. Esses valores foram superiores aos teores de flavonoides totais
obtidos nos extratos comerciais gliclicos de aa (E. oleracea) e acerola (M. glabra) (0,056 e
0,017 mgEQ/mL, respectivamente) (KUSKOSKI et al., 2006).
Observou-se que os teores de flavonoides totais dos extratos comerciais gliclicos
foram inferiores aos teores descritos na literatura. Os resultados expostos no item 5.2
indicaram que a maioria dos extratos analisados possua teores de polifenis totais inferiores
aos descritos na literatura. A partir desses resultados, esperava-se que os teores de flavonoides
totais dos extratos fossem inferiores aos da literatura.
O mtodo empregado na determinao do teor de flavonoides totais foi baseado na
formao de complexos estveis entre os flavonoides em metanol e o ction alumnio. O
complexo flavonoide-Al promoveu um desvio batocrmico (para maiores comprimentos de
onda) e uma intensificao da absoro na anlise espectrofotomtrica. Esse fato evitou a
67
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
100
% de inibio do radical DPPH
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400
Concentrao de Trolox M
O clculo da regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados gerou a equao da
reta descrita na Equao 6, com valores de interseco com o eixo y e coeficiente angular
(inclinao da reta) iguais a 0,3842 e 0,2699, respectivamente, e coeficiente de correlao
linear (R2) mdio igual a 0,9975.
y = 0,2699 x - 0,3842
A partir da equao da reta obtida foi possvel calcular a atividade antioxidante dos
extratos gliclicos, expressa em mol de Trolox equivalente/ mL (molTE/mL), conforme
exposto na Tabela 7. Esse teor foi calculado por meio da Equao 6, sendo obtido a partir da
substituio de y pelo valor da inibio do radical DPPH, calculado com o auxlio da
Equao 3. O programa STATISTICA Release 7.0 foi utilizado para determinar diferenas
estatisticamente significativas entre as atividades antioxidantes dos extratos gliclicos.
Utilizou-se anlise de varincia (one-way ANOVA) seguida do Teste de Tukey (n = 3;
p<0,05). O resultado obtido est expresso na Tabela 7. A Figura 29 ilustra,
comparativamente, as atividades antioxidantes dos extratos gliclicos.
De acordo com os resultados obtidos na Tabela 7 e na Figura 29, verificou-se que o
extrato de rom (P. granatum) apresentou a maior atividade antioxidante, em Trolox
equivalente, seguido do extrato de erva-mate (I. paraguariensis) e, posteriormente, do extrato
de menta (M. piperita), e prpolis. O extrato de ch verde (C. sinensis) apresentou atividade
antioxidante estatisticamente igual do extrato de menta (M. piperita). Os demais extratos,
exceto o de aa (E. oleracea), no apresentaram diferenas estatisticamente significativa
entre si e apresentaram atividade antioxidante inferior aos extratos citados anteriormente. O
extrato de aa (E. oleracea) apresentou a menor atividade antioxidante dentre todos os
extratos analisados.
69
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Tabela 6 - Dados para a construo da curva analtica do Trolox padro de referncia secundrio, obtidos por espectrofotometria a 517 nm
Tabela 7 - Dados para o clculo da atividade antioxidante em Trolox equivalente (molTE/mL) dos extratos gliclicos
Extratos gliclicos
Aa Acerola Castanha Ch Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia verde
PI1
45,9 44,9 37,4 71,4 51,0 63,1 40,1 57,8 78,8 53,5 53,5 67,1
PI2
50,7 43,7 33,9 67,7 46,1 69,2 35,8 53,2 77,3 48,3 50,8 70,3
PI3
52,5 43,2 36,6 66,5 47,9 60,7 35,4 54,2 75,9 52,6 52,6 68,1
PImdia
49,8 43,9 35,9 68,5 48,3 64,3 37,1 55,1 77,4 51,5 52,3 68,5
PIDP 3,40 0,87 1,82 2,58 2,52 4,34 2,61 2,46 1,48 2,76 1,37 1,64
Atividade antioxidante em Trolox equivalente (molTE/mL) e anlise estatstica
Diluio 2,5 7 7 50 200 3 15 50 5 18 500 3
AA1 0,422 1,155 0,960 13,162 37,544 0,697 2,208 10,647 1,454 3,543 98,421 0,742
AA2 0,467 1,125 0,870 12,464 33,845 0,765 1,971 9,780 1,427 3,197 93,423 0,777
AA3 0,483 1,110 0,940 12,246 35,241 0,671 1,946 9,963 1,399 3,480 96,675 0,753
AAmdio 0,458 1,130 0,924 12,624 35,543 0,711 2,042 10,130 1,426 3,407 96,173 0,757
AADP 0,032 0,023 0,047 0,479 1,868 0,048 0,145 0,457 0,027 0,184 2,537 0,018
Teste de
E DE DE C B DE DE C DE D A DE
Tukey
Legenda: PI1 a PI3: rplicas das porcentagens de inibio do DPPH (n=3); AAmdia: mdia das atividades antioxidantes; AAdp: desvio padro das
atividades antioxidantes. AA1 a AA3: rplicas das atividades antioxidantes (molTE/mL) (n=3); PImdio: mdia das porcentagens de inibio;
PIDP: desvio padro das porcentagens de inibio TE: Trolox equivalente. Letras diferentes indicam resultados estatisticamente distintos (p<
0,05; n = 3).
71
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
120 A
A
100
80
60
B
40
C
(molTE/mL)
20 E DE DE DE DE C DE D
DE
Atividade antioxidante
0
Aa Acerola Castanha Ch verde Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia
Extratos gliclicos
Figura 29 Atividade antioxidante (molTE/mL) dos extratos gliclicos por DPPH. TE: Trolox equivalente, letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos entre os extratos; p< 0,05; n = 3.
72
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
valores foram superiores aos determinados nos extratos gliclicos comerciais de G. biloba
(2,042 molTE/mL) e M. piperita (10,130 molTE/mL) (GKTAS et al., 2008;
KALOGEROPOULOS et al., 2009; YI; WETZSTEIN, 2010).
Os compostos fenlicos apresentam atividade antioxidante devido s suas
propriedades redutoras e estrutura qumica. Essas duas caractersticas exercem papel
fundamental na neutralizao ou sequestro de radicais livres e na quelao de metais de
transio, agindo nas etapas de iniciao e propagao do processo oxidativo. Observou-se
que os quatro extratos gliclicos com maior teor de polifenis totais (rom, erva-mate, menta
e ch verde) exibiram as maiores atividades antioxidantes do grupo de extratos analisados.
(SOUSA et al., 2007).
35
rea sob a curva (AUC) * 10-6
30
25
20
15
10
0
0 20 40 60 80 100 120
Concentrao de Trolox M
O clculo da regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados gerou a equao da
reta descrita na Equao 7, com valores de interseco com o eixo y e coeficiente angular
(inclinao da reta) de 4106262,29 e 273475,58, respectivamente, e coeficiente de correlao
linear (R2) mdio igual a 0,9800.
74
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
y = 273475,58 x 4106262,29
A partir da equao da reta obtida foi possvel calcular a atividade antioxidante dos
extratos gliclicos, expressa em mol de Trolox equivalente/ mL (molTE/mL), conforme
exposto na Tabela 8. Esse teor foi calculado por meio da Equao 7, sendo obtido a partir da
substituio de y pelo valor da rea sob a curva de decrscimo (AUC) da perda de
fluorescncia da fluorescena. O programa STATISTICA Release 7.0 foi utilizado para
determinar diferenas estatisticamente significativas entre as atividades antioxidantes dos
extratos gliclicos. Utilizou-se anlise de varincia (one-way ANOVA) seguida do Teste de
Tukey (n = 3; p<0,05). O resultado obtido est expresso na Tabela 8. A Figura 31 ilustra,
comparativamente, as atividades antioxidantes dos extratos gliclicos.
Tabela 8 Atividades antioxidantes determinadas por ORAC dos extratos gliclicos tratadas
estatisticamente
140 A
120
100
B B
80
60 C
CD
40
(molTE/mL)
EF DE
FG
20 EFG FG G FG
Atividade antioxidante
0
Aa Acerola Castanha Ch verde Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia
Extratos gliclicos
Figura 31 Atividade antioxidante (molTE/mL) dos extratos gliclicos por ORAC. TE: Trolox equivalente, letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos entre os extratos; p< 0,05; n = 3.
76
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
Observou-se, de acordo com a Tabela 8 e com a Figura 31, que o extrato de erva-
mate apresentou a maior atividade antioxidante em Trolox equivalente, seguido do extrato
de rom e de menta que no apresentaram diferenas estatisticamente significativa entre si.
Na sequncia, seguiram os extratos de prpolis, ch verde, ginco, castanha da ndia e aa. Por
fim, seguiram os extratos de uva, morango e acerola que apresentam atividades antioxidantes
estatisticamente iguais entre si. O extrato de framboesa apresentou a menor atividade
antioxidante desse grupo.
Dados da literatura demonstraram que extratos aquosos de erva-mate (I.
paraguariensis), menta (M. piperita), ch verde (C. sinensis) e framboesa (R. idaeus),
avaliados pela metodologia ORAC, apresentaram atividade antioxidante de 5092; 1409; 4704
e 608 molTE/g, respectivamente. Esses valores foram superiores aos valores de 115,51;
62,870; 24,723 e 2,398 molTE/mL obtidos, respectivamente, nos extratos comerciais
gliclicos de erva-mate (I. paraguariensis), menta (M. piperita), ch verde (C. sinensis) e
framboesa (R. idaeus) (Tabela 8) (DUDONN et al., 2009; KRATCHANOVA et al., 2010;
MACEDO et al., 2011).
Schauss e colaboradores, 2006, determinaram a atividade antioxidante por ORAC de
extrato de aa (E. oleracea) preparado com acetona e gua. Os autores obtiveram 997
molTE/g. De acordo com a Tabela 8, esse valor foi superior ao valor de 6,249 molTE/mL
obtido no extrato comercial gliclico de aa (E. oleracea). Mller e colaboradores, 2010,
utilizaram a mesma metodologia para determinar a atividade antioxidante de polpa de acerola
e morango obtendo, respectivamente, 94,2 e 38,3 molTE/g. Os extratos comerciais gliclicos
de acerola (M. glabra) e morango (F. vesca) apresentaram atividade antioxidante inferior a
esses valores (3,416 e 4,559 molTE/mL, respectivamente). Estudo realizado com extratos de
sementes de uvas (V. vinifera) demonstrou que a atividade antioxidante dos mesmos,
determinada por ORAC, variou no intervalo de 1425,9 a 3009,2 molTE/g. Conforme
indicado na Tabela 8, o extrato comercial gliclico de uva (V. vinifera) apresentou atividade
antioxidante inferior (5,796 molTE/mL) ao intervalo determinado no estudo citado (BOZAN
et al., 2008; MLLER et al., 2010; SCHAUSS et al., 2006).
Hudnall, 2007, demonstrou que um extrato de prpolis preparado com gua e acetona
apresentou atividade antioxidante, determinada por ORAC, de 2459 molTE/g. Esse valor foi
superior ao valor de 32,227 molTE/mL encontrado no extrato comercial gliclico de
prpolis. Jardini, 2010, avaliou a atividade antioxidante por ORAC de fraes de cidos
fenlicos da polpa e das sementes de rom (P. granatum) obtendo valores no intervalo de
740,92 a 12.202,06 molTE/g. Esses valores foram superiores ao encontrado no extrato
77
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
comercial gliclico de rom (P. granatum) que apresentou atividade antioxidante de 63,661
molTE/mL. Zheng e Wang, 2001, determinaram a atividade antioxidante, por ORAC, de
extrato de ginco (G. biloba) preparado com tampo fosfato obtendo o valor de 13,18
molTE/g. O valor determinado no extrato comercial gliclico de ginco (G. biloba) foi
levemente superior (16,961 molTE/mL) ao valor determinado pelos autores (HUDNALL,
2007; JARDINI, 2010; ZHENG; WANG, 2001).
Observou-se que a maioria dos extratos comerciais apresentou atividade antioxidante,
determinada por ORAC, inferior aos dados da literatura. O mesmo comportamento foi
verificado nos resultados gerados pela metodologia do DPPH (item 5.4). Adicionalmente,
verificou-se que, no ensaio ORAC, os trs extratos comerciais com maior teor de polifenis
totais (rom, erva-mate e menta) apresentaram as maiores atividades antioxidantes do grupo
de extratos analisados.
Os valores de atividade antioxidante obtidos pelos ensaios de DPPH e ORAC, para
cada extrato, foram analisados comparativamente com o auxlio do teste t de Student pareado
(p<0,05) visando verificar diferenas estatisticamente significativas. Os resultados esto
expressos na Tabela 9 e na Figura 32.
140
120
100
80
60
(molTE/mL)
40
20
Atividade antioxidante
0
Aa Acerola Castanha Ch verde Erva-mate Framboesa Ginco Menta Morango Prpolis Rom Uva
da ndia
DPPH
ORAC Extratos gliclicos
Figura 32 Anlise comparativa da atividade antioxidante (molTE/mL) dos extratos gliclicos por DPPH e ORAC. TE: Trolox equivalente
79
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
menor interferncia dos compostos coloridos presentes na amostra. Alm disso, utiliza o
radical peroxila como pr-oxidante, o que confere maior significado biolgico (LIMA,2008).
Embora os resultados gerados pelos mtodos sejam diferentes, foi possvel determinar por
meio dos dois mtodos que os extratos de rom, erva-mate e menta apresentaram valores de
atividade antioxidante, em equivalente de Trolox, superiores aos demais extratos.
6. CONCLUSES
Os mtodos propostos para a quantificao do teor de polifenis totais e flavonoides
totais em amostras comerciais de extratos gliclicos no padronizados demonstraram-se
adequados. Foi possvel selecionar, dentre os doze extratos estudados, aqueles que
apresentaram maior teor de flavonoides totais e polifenis totais. Neste contexto, destacaram-
se os extratos de rom (P. granatum), erva mate (I. paraguariensis), menta (M. piperita),
prpolis, ginco (G. biloba) e ch verde (C. sinensis). Esses extratos foram escolhidos para os
ensaios de estabilidade e anlise do Fator de Proteo Solar (FPS) descritos, respectivamente,
nos Captulos 2 e 3.
A atividade antioxidante determinada por mtodos distintos, um amplamente utilizado
(DPPH) e outro despontando como nova opo de metodologia (ORAC), elegeu os extratos
de rom (P. granatum), erva mate (I. paraguariensis) e menta (M. piperita), como os de
maior valores de atividade antioxidante. A maioria dos extratos comerciais gliclicos
apresentou teores de polifenis e flavonoides totais e valor de atividade antioxidante
inferiores aos descritos na literatura.
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91
Captulo 1 Caracterizao fitoqumica de extratos gliclicos
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Journal of agricultural and food chemistry v. 49, n.11, p. 5165-70, 2001.
CAPTULO 2
RESUMO
1. INTRODUO
A indstria nacional de Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosmtica (HPPC) apresentou
crescimento de 10,60% nos ltimos treze anos detendo, atualmente, o terceiro maior mercado
mundial. Seu faturamento ExFactory, lquido de imposto sobre renda, passou de R$ 4,90
bilhes em 1996 para R$ 24,90 bilhes em 2009. Apesar da crise no setor financeiro
internacional ocorrida em 2009, a indstria nacional de HPPC permaneceu em contnuo
crescimento. A grande maioria das empresas desse setor agiu com pr-atividade diante desse
quadro adverso, mantendo seus planos de investimento em marketing, comunicao e pesquisa
e desenvolvimento, aumentando a produtividade e minimizando os efeitos da crise (ABIHPEC
ANURIO, 2010; ABIHPEC PANORAMA, 2010).
Segundo dados da Euromonitor, o mercado brasileiro de produtos para a pele
movimentou US$ 3,60 bilhes no ano de 2008, atingindo a sexta colocao no ranking
mundial com participao de 4,80%. Japo, Estados Unidos, China, Frana e Alemanha
ocupam, respectivamente, as primeiras colocaes nessa categoria que apresentou, em 2008,
crescimento mundial de 10,38% com movimentao de US$ 75,77 bilhes. Em relao
categoria proteo solar, o mercado nacional movimentou US$ 720 milhes no mesmo ano,
atingindo a segunda colocao no ranking mundial com participao de 9,20%. O mercado
total da categoria apresentou crescimento de 9,57% movimentando US$ 7,81 bilhes, sob a
liderana dos Estados Unidos que detm 18,40% do mercado (ABIHPEC ANURIO, 2010).
Inmeros produtos so destinados pele como os esfoliantes, anticelulites, antiestrias
hidratantes, bronzeadores, antiaging e protetores solares. Muitos desses produtos apresentam
componentes de origem vegetal em suas composies, seguindo a tendncia de incorporao
de ingredientes naturais em formulaes cosmticas. Extratos vegetais so amplamente
utilizados em formulaes para a pele, apesar das variaes de solubilidade e estabilidade
apresentadas pelos mesmos que desafiam a vida de prateleira (shelf-life) e a estabilidade dos
produtos acabados. Dessa forma, estudos de estabilidade dos produtos acabados e das matrias-
primas so fundamentais no desenvolvimento de produtos para o cuidado da pele (ABIHPEC
ANURIO, 2010; EPSTEIN, 2009).
2. REVISO DA LITERATURA
consumidor no haver qualquer mudana que afete negativamente seu desempenho, que o
torne menos aceitvel ou que o faa causar riscos ao consumidor. Estudos de estabilidade so
partes integrantes do processo de desenvolvimento de produtos cosmticos, tais estudos
orientam o desenvolvimento da formulao adequada e a escolha correta dos materiais de
acondicionamento, estimam o prazo de validade e fornecem informaes para a sua
confirmao, fornecem subsdios para o aperfeioamento das formulaes e auxiliam no
monitoramento da estabilidade organolptica, fsico-qumica e microbiolgica. A execuo
desses testes deve ser realizada minuciosamente para garantir a confiabilidade e segurana dos
produtos (ABIHPEC, 2007; BUTLER, 2000).
O teste de estabilidade tem por objetivo assegurar que os novos produtos cosmticos e
os produtos modificados, ou seja, aqueles que sofreram alteraes em suas formulaes ou no
material de acondicionamento, atendam aos padres de qualidade fsicos, qumicos e
microbiolgicos e mantenham a funcionalidade e a esttica quando armazenados sob condies
apropriadas. Cannell, 1985, relata que o teste de estabilidade determina se um dado produto em
seu material de acondicionamento possui adequada vida de prateleira (shelf-life) sob as
condies do mercado em que o mesmo vendido. Segundo a International Federation of
Societies of Cosmetic Chemists (IFSCC), o teste de estabilidade considerado um
procedimento preditivo, ou seja, seus resultados no so absolutos, mas tm probabilidade de
sucesso. Ele baseia-se em dados obtidos de produtos armazenados em condies que visam a
acelerar alteraes passveis de ocorrer nas condies do mercado (BRASIL, 2004;
CANNELL, 1985; CTFA & COLIPA, 2004).
de responsabilidade de cada empresa a avaliao da estabilidade de seus produtos,
antes de disponibiliz-los ao consumo, tal requisito fundamental para manter a qualidade e
segurana dos mesmos. Produtos disponveis aos consumidores que apresentem problemas de
instabilidade organolptica, fsico-qumica e/ou microbiolgica podem colocar em risco a
sade do consumidor. A legislao brasileira vigente exige a apresentao dos dados de
estabilidade no ato da regularizao do produto acabado e nas inspees realizadas pela
autoridade sanitria. Alm disso, deve ser cumprido o Termo de Responsabilidade firmado
pela empresa, no qual a mesma declara possuir dados que atestam eficcia e a segurana do
seu produto (ABIHPEC, 2007).
cosmticos com menos de 3 anos de estabilidade sejam rotulados com uma data de
vencimento. No Reino Unido, o regulamento de 2008 relativo segurana de produtos
cosmticos (Cosmetic Products (safety) regulations) exige que produtos cosmticos com
durabilidade de 30 meses ou menos sejam comercializados com uma data de durao mnima
(best-before date), a indicao da data deve ser mencionada da seguinte forma: melhor
utilizar antes de e, em seguida, deve constar a data (dia/ms/ano ou ms/ano) ou a indicao
de onde a mesma se localiza na embalagem. Tambm, deve haver a descrio de qualquer
condio particular que afete a durabilidade do produto (BUTLER, 2000; CANNELL, 1985;
COSMETIC PRODUCTS (SAFETY) REGULATIONS, 2008).
Os produtos que apresentam durabilidade maior que 30 meses devem ser
comercializados com o smbolo indicado na Figura 1, juntamente com a indicao (meses ou
anos) do perodo aps a abertura que o produto pode ser usado sem causar riscos ao
consumidor (COSMETIC PRODUCTS (SAFETY) REGULATIONS, 2008).
Figura 1 Smbolo exigido para cosmticos com durabilidade maior que 30 meses
(COSMETIC PRODUCTS (SAFETY) REGULATIONS, 2008)
Vida de prateleira pode ser definida como o intervalo de tempo que o produto
permanece em conformidade com suas especificaes, sendo armazenado sob as condies do
mercado, ou seja, o perodo de tempo entre a data de fabricao do produto e a data em que
o mesmo cessa de cumprir com suas especificaes. natural que os produtos apresentem
modificaes com a passagem do tempo at tornaram-se insatisfatrios para o uso. Um
produto que est perto do limite de suas especificaes, em relao a qualquer parmetro,
quando liberado para a venda apresentar um tempo relativamente pequeno para comear a
descumprir com suas especificaes, indicando que sua vida de prateleira curta. Por esta
razo, dois tipos de especificaes so estabelecidos para avaliao da vida de prateleira:
especificao de liberao (release specification) e especificao de checagem (check
specification). A primeira deve ser cumprida pelo produto na fabricao do mesmo e na
liberao para a venda e a segunda, durante todo o perodo de sua vida de prateleira
(BUTLER, 2000; CANNELL, 1985).
97
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
110
105
Especificao
Especificao de de checagem
100 liberao
95
90
Vida de Prateleira
tempo
Figura 2 Especificao de liberao e checagem como determinantes da vida de prateleira
(BUTLER, 2000)
Fatores extrnsecos
Os fatores extrnsecos (tempo, temperatura, luz e oxignio, umidade, material de
acondicionamento, micro-organismos e vibrao) influenciam a estabilidade de diferentes
formas. O tempo responsvel pelo envelhecimento da formulao, podendo gerar alteraes
nas caractersticas organolpticas, fsico-qumicas, microbiolgicas e toxicolgicas. As
temperaturas elevadas aceleram a taxa com que as modificaes ocorrem como consequncia
da acelerao das reaes fsico-qumicas e qumicas que levam a alteraes na viscosidade,
cor, odor, aspecto e atividade de componentes do produto. Por outro lado, temperaturas baixas
aceleram alteraes fsicas como turvao, precipitao e cristalizao (BRASIL, 2004;
BUTLER, 2000).
O oxignio e a luz ultravioleta participam da gerao de radicais livres e desencadeiam
reaes de xido-reduo, assim, produtos sensveis luz devem ser envasados em material
de acondicionamento escuro ou opaco e devem receber a adio de substncias antioxidantes
a fim de retardar o processo oxidativo. A umidade responsvel por causar alteraes fsicas,
principalmente, em produtos slidos, modificando seu peso ou volume e tornando-o
amolecido e pegajoso, tambm favorece a contaminao microbiolgica. Os diversos
materiais de acondicionamento de produtos cosmticos, tais como, vidro, plstico, papel e
metal podem alterar a estabilidade da formulao, dessa forma, deve ser realizada a anlise
prvia da interao do material com a formulao a fim de determinar a melhor relao entre
eles (BRASIL, 2004; VELASCO-DE-PAOLA, 2001).
Emulses, gis, suspenses e solues so os produtos cosmticos mais susceptveis
contaminao microbiolgica devido presena de gua nos mesmos. A conservao de tais
formulaes depende da adio de um sistema conservante adequado e validado e da
99
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
execuo das Boas Prticas de Fabricao. A vibrao que ocorre durante o transporte dos
produtos pode provocar separao de fases de emulses, compactao de suspenses,
alterao da viscosidade, entre outros danos formulao, assim, o controle desse fator
minimiza seus efeitos (BRASIL, 2004; VELASCO-DE-PAOLA, 2001).
Fatores intrnsecos
Incompatibilidade fsica e qumica so as principais alteraes determinadas por
fatores intrnsecos, tais alteraes nem sempre so visualizadas pelo consumidor. A primeira
gera modificaes no aspecto fsico das formulaes, como precipitao, separao de fases,
cristalizao, entre outras. Valor de pH inadequado, reaes de xido-reduo, reaes de
hidrlise, interaes entre ingredientes da formulao e entre os mesmos e o material de
acondicionamento representam a incompatibilidade qumica. O valor de pH do produto deve
atender a trs aspectos, estabilidade dos ingredientes da formulao, eficcia e segurana do
produto evitando, assim, alteraes no mesmo. As reaes de xido-reduo podem modificar
as caractersticas organolpticas e fsicas da formulao e alterar a atividade das suas
substncias ativas. As reaes de hidrlise ocorrem, principalmente, em substncias com
funo ster e amida e so favorecidas por teores elevados de gua nas formulaes. Alm das
reaes de xido-reduo e de hidrlise, reaes indesejveis podem ocorrer entre os
ingredientes da formulao, anulando ou alterando sua atividade. A interao entre os
componentes do material de acondicionamento e os ingredientes da formulao pode gerar
modificaes em nvel fsico ou qumico (BRASIL, 2004; VELASCO-DE-PAOLA, 2001).
fabricaes terceirizadas e o uso de novos equipamentos (BABY, 2005; BABY et al., 2007;
BONTORIM, 2009; BRASIL, 2004; ISAAC et al., 2008; VELASCO et al., 2008).
Este estudo apresenta, normalmente, durao de 90 dias, entretanto, em casos
especficos, pode-se estender o estudo por 6 meses ou at um ano. As amostras so submetidas
ao aquecimento em estufas, resfriamento em refrigeradores, exposio radiao luminosa e s
condies ambientais. Posteriormente, so analisadas em relao aos vrios parmetros
determinados em funo da forma cosmtica avaliada. O Quadro 2 apresenta sugestes das
condies de realizao do estudo. A avaliao das amostras ocorre, geralmente, no tempo
inicial 0 (T0), aps 24-48 horas da manipulao ou elaborao da formulao e nos tempos
correspondentes ao 3, 7, 15, 30, 60 e 90 dias, sendo a escolha dos perodos realizada de
acordo com o desenho do experimento. Essa periodicidade pode variar conforme experincia
tcnica, especificaes do produto, caractersticas especiais de algum componente da
formulao ou sistema conservante utilizado. No caso de estudo estendido, aps a realizao
das anlises iniciais citadas anteriormente correspondentes aos 90 dias de estudo, recomenda-
se que a avaliao seja realizada uma vez por ms at seu trmino (BABY, 2005; BABY et al.,
2007; BRASIL, 2004; ISAAC et al., 2008; VELASCO et al., 2008).
Assim como na Estabilidade Acelerada, os parmetros avaliados so definidos pelo
formulador de acordo com as caractersticas das amostras e dos componentes utilizados no
preparo das mesmas. So analisados parmetros relacionados com caractersticas
organolpticas (aspecto, cor, odor e sabor quando aplicvel), fsico-qumicas (valor de pH,
viscosidade, densidade, entre outros) e microbiolgicas (estudo do sistema conservante do
produto realizado por meio do Teste de Desafio efetuado antes e ou aps o perodo de estudo
normal) (BRASIL, 2004).
Estufa: 37,0 2,0 C Geladeira: 5,0 2,0 C Luz solar captada por vitrines especiais para
este fim
Estufa: 40,0 2,0 C Freezer: -5,0 2,0 C Lmpadas de espectro de emisso semelhante
ao do sol: lmpadas de xennio
Estufa: 45,0 2,0 C Freezer: -10,0 2,0 C Fontes de luz ultravioleta
3. OBJETIVOS
O presente trabalho teve por objetivo avaliar a estabilidade organolptica, fsico-
qumica e qumica de seis extratos gliclicos de uso cosmtico (ch verde, erva-mate, ginco,
menta, prpolis e rom), no padronizados e disponveis no mercado brasileiro, por meio de
parmetros estabelecidos de acordo com a natureza dos mesmos, em diferentes condies de
temperatura e luminosidade.
106
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
4. MATERIAL E MTODOS
4. 1 Material
4.1.1 Equipamentos / Acessrios
4.1.4 Matrias-primas
-Extratos comerciais gliclicos no padronizados, fornecidos pela indstria brasileira A.
Optou-se por no revelar o nome da empresa visando evitar marketing da mesma nesse estudo
acadmico:
- Ch verde (C. sinensis), INCI: Camellia sinensis leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
-Erva-mate (I. paraguariensis), INCI: Ilex paraguariensis leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha
- Ginco (G. biloba), INCI: Ginkgo biloba leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
- Menta (M. piperita), INCI: Mentha piperita leaf extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Folha;
- Prpolis, INCI: Propolis extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Substncia resinosa;
- Rom (P. granatum), INCI: Punica granatum fruit extract;
Parte utilizada no preparo do extrato: Fruto
4. 2 Mtodos
4.2.1 Estudo da estabilidade dos extratos gliclicos
Tabela 1 - Protocolo do Estudo de Estabilidade Normal dos extratos gliclicos de uso cosmtico
Ginco (G. biloba) Temperatura ambiente (23,0 2,0 C) Viscosidade dinmica t2(15)
protegida da incidncia de luz
Menta (M. piperita) Temperatura ambiente (23,0 2,0 C) Densidade absoluta t3 (30)
exposta luz solar indireta
Prpolis Teor de flavonides totais t4 (45)
Tabela 2 Critrios para avaliao dos extratos gliclicos em relao aos parmetros
organolpticos
Parmetro
O clculo da viscosidade dinmica dos extratos gliclicos foi realizado por meio da
Equao 1 e o resultado expresso em centipoise (cP) (FRANCHETTI; MARCONATO,
2010).
2 x 1 x t1
1 =
2 x t2
O valor final da viscosidade dinmica das amostras foi resultado da mdia dos valores
de quatro determinaes para cada condio e tempo do estudo de estabilidade.
113
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
D = MBf - MBi
V
Equao 2 Clculo de densidade absoluta (g/mL); onde D = densidade absoluta;
MBf = massa conjunta do balo com a amostra (grama); MBi = massa do balo (grama) vazio e
V = volume do balo (mL)
foram realizadas em duplicata para cada condio e tempo do estudo de estabilidade e o teor
de polifenis totais obtido por meio da equao da reta da curva analtica do cido glico
padro de referncia secundrio e expresso em Equivalentes de cido Glico (EAG)
(FARMACOPIA BRASILEIRA, 2010 b; SINGLETON et al., 1999).
5. RESULTADOS E DISCUSSO
Os extratos gliclicos foram analisados individualmente em relao estabilidade
fsica, fsico-qumica e qumica. Os critrios de aprovao dos mesmos foram baseados no
Guia de Estabilidade de Cosmticos da ANVISA. Em relao estabilidade fsica, adotou-se
como critrio de aprovao, a manuteno da integridade do extrato em todas as condies
por todo o teste (pequenas alteraes em temperatura elevadas foram aceitveis) e a
manuteno da cor e do odor por, no mnimo, 15 dias luz solar (BRASIL, 2004).
Em relao estabilidade fsico-qumica e qumica, no existem recomendaes
especficas no Guia de Estabilidade de Cosmticos para a aprovao dos produtos. Existe
apenas uma orientao para os ensaios de viscosidade, recomendando a definio dos limites
de aceitao, pelo formulador, baseada na percepo visual e sensorial decorridas de
alteraes. Os limites de aceitao dos parmetros avaliados nos estudos de estabilidade
fsico-qumica e qumica foram definidos baseados em especificaes de checagem (check
specification) e no de liberao (release specification) (Figura 2), pois as matrias-primas
avaliadas estavam disponveis no mercado. Adotou-se como critrio de aprovao o intervalo
de 10,0 %, sendo que os valores obtidos em temperaturas elevadas foram, cuidadosamente,
estudados, pois, muitas vezes, o comportamento gerado nessas condies no se reproduz na
temperatura ambiente. Assim, pequenas alteraes fora do intervalo de aprovao estipulado
que ocorreram em temperaturas elevadas foram aceitveis (BRASIL, 2004; BUTLER, 2000).
Tabela 3 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de ch verde (C. sinensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N N N N N N N N N
t3 N N N N L N N N N N N N
t4 N N N N L N N N N N N N
t5 N N N N L N N N N N N N
t6 N N N N M N N N R N N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem alteraes;
(L): amostra levemente modificada; (M): amostra modificada; (R): amostra com reduo da intensidade do odor
120
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 4 - Anlise visual da cor do extrato gliclico de ch verde (C. sinensis), aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condio de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
____________________________________________________________________________________________________________________
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: aps 90 dias
121
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 5 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de ch verde (C. sinensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 5,39 0,0 5,35 0,0 5,41 0,0 5,39 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,00 0,0 2,69 0,0 2,68 0,0 2,69 0,0 2,68 0,0
A A A A A A A A A A A A
t1 5,17 0,0 5,28 0,0 5,37 0,1 5,25 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,70 0,0 2,72 0,6 2,70 0,0 2,76 0,0
B C AE B A A A A A A A A
t2 5,26 0,0 5,45 0,0 5,48 0,0 5,40 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,70 0,0 2,74 0,0 2,70 0,0 2,74 0,0
C D B A A A A A A A A A
t3 5,04 0,0 5,37 0,0 5,34 0,0 5,30 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,72 0,5 2,76 0,0 2,76 0,0 2,76 0,0
D AB DE C A A A A A A A A
t4 5,09 0,0 5,55 0,0 5,41 0,0 5,38 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,74 0,0 2,70 0,0 2,70 0,6 2,70 0,6
E E A A A A A A A A A A
t5 4,84 0,0 5,36 0,0 5,27 0,0 5,23 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,69 0,0 2,74 0,5 2,69 0,0 2,74 0,0
F AB C BD A A A A A A A A
t6 4,85 0,0 5,38 0,0 5,29 0,0 5,22 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,69 0,5 2,68 0,6 2,70 0,6 2,70 0,6
F AB CD D A A A A A A A A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam
resultados estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
122
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 6 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de ch verde (C. sinensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
molTE/mL
t0 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 1,33 0,0 1,33 0,0 1,33 0,0 1,33 0,0 7,95 0,2 7,95 0,2 7,95 0,2 7,95 0,2
A A A A AB A AB AB A A A A
t1 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 1,21 0,1 1,14 0,0 1,16 0,0 1,17 0,0 6,59 0,2 6,420,3 5,75 0,3 6,24 0,5
AB A A A AC B A A B A AB B
t2 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 0,05 0,0 1,47 0,0 1,58 0,1 1,66 0,1 1,49 0,0 5,40 0,1 5,80 0,1 5,45 1,1 5,60 0,2
ABC A A AB B C C BC C A B B
t3 0,05 0,0 0,05 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 1,10 0,0 1,21 0,0 1,17 0,0 1,11 0,1 5,50 0,4 5,25 0,1 5,18 0,1 5,93 1,0
ABC A A AB C AB A A BC A B B
t4 0,05 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 1,31 0,0 1,55 0,0 1,61 0,1 1,60 0,0 5,15 0,4 5,41 0,3 5,24 1,0 5,17 0,3
ABC A A AB AB C C C C A B B
t5 0,06 0,0 0,05 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 1,09 0,0 1,63 0,0 1,51 0,0 1,67 0,1 5,57 0,5 5,50 1,8 6,17 0,7 6,31 0,6
BC A A AB C C BC C BC A AB AB
t6 0,06 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 0,04 0,0 1,09 0,1 1,55 0,0 1,51 0,0 1,60 0,0 5,71 0,1 6,15 1,3 5,63 0,6 5,73 0,1
C A A B C C BC C BC A B B
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05).
123
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
outro aumento semelhante, aps 60 dias. A condio estufa apresentou oscilao, durante todo
o estudo, no intervalo de 13,0 a 26,1% apresentando, aps 90 dias, um aumento de 26,1% no
teor de flavonoides totais. Esses resultados indicaram que temperaturas elevadas podem
comprometer a estabilidade qumica do extrato gliclico de erva-mate.
O teor de polifenis totais, expresso em equivalentes de cido glico (Figura 14),
apresentou-se estvel durante todo o estudo em todas as condies, indicando que a
temperatura de armazenamento no exerceu influncia sobre esse parmetro. Os resultados da
atividade antioxidante, expressa em Trolox equivalente (Figura 15), demonstraram que,
aps 7 dias de estudo, as amostras armazenadas em temperatura ambiente com e sem
exposio solar e em geladeira apresentaram aumento de 2,1 a 12,9 % no valor inicial da
atividade antioxidante com subsequente estabilidade at o final do estudo. A amostra
armazenada em estufa sofreu oscilaes no valor da atividade antioxidante at o 30 dia de
estudo. Essas oscilaes variaram de 7,8 a 17,5 %. Ao final do estudo, o valor da atividade
antioxidante da amostra armazenada em estufa foi estatisticamente igual ao valor determinado
no tempo inicial (t0).
Os resultados obtidos nos ensaios de determinao da atividade antioxidante e de
quantificao de flavonoides totais indicaram que as amostras de extratos de erva-mate
apresentaram variaes ao longo do estudo de estabilidade superiores ao intervalo de 10,0
%. Nesses dois ensaios, as amostras armazenadas em estufa apresentaram-se menos estveis
que as demais porque geraram oscilaes ao longo de todo o estudo. Assim, sugere-se que o
extrato de erva-mate deve ser armazenado em temperatura ambiente ou em geladeira (5 C).
Ceni, 2005, avaliou a estabilidade do extrato bruto de folhas de erva-mate (I.
paraguariensis) em relao atividade enzimtica do mesmo. As amostras do extrato foram
estocadas nas seguintes temperaturas: -80, -4, 4, 20, 40, 60 e 80 C. A autora avaliou a
atividade de duas enzimas, a polifenoloxidase (PFO) e a peroxidase (POD). Essas enzimas
esto associadas s alteraes de cor, sabor e aroma das folhas de erva-mate. Elas so capazes
de promover a oxidao de compostos fenlicos. Os resultados obtidos nesse trabalho
evidenciaram que a exposio a temperaturas moderadas e altas afetou a atividade das
enzimas avaliadas, reduzindo-a (CENI, 2005; SANTOS, 2004).
A oxidao dos compostos fenlicos pode comprometer as atividades clnicas
atribudas erva-mate. Sabe-se que o processamento da erva-mate utilizada como bebida
(chimarro) envolve tratamento com temperaturas elevadas entre 400 a 600 C para promover
a inativao das enzimas oxidases, esse processo denominado sapeco mecnico (SANTOS,
2004). A produo do extrato de erva-mate para fins cosmticos deve considerar esse
127
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 7 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de erva-mate (I. paraguariensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N N N N N N N N N
t3 N N N N N N N N N N N N
t4 N N N N N N N N N N N N
t5 N N N N L N N N N N N N
t6 N N N N L N N N N N N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; T1: aps 7 dias; T2: aps 15 dias; T3: aps 30 dias; T4: aps 45 dias; T5: aps 60 dias e T6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem
alteraes; (L): amostra levemente modificada
130
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 8 - Anlise visual do extrato gliclico de erva-mate (I. paraguariensis), aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condio de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
____________________________________________________________________________________________________________________
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: aps 90 dias.
131
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 9 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de erva-mate (I. paraguariensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 5,32 0,0 5,32 0,0 5,32 0,0 5,32 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,95 0,5 2,95 0,5 2,83 0,6 2,88 0,5
A A A A A A A A A A A A
t1 5,36 0,0 5,39 0,0 5,39 0,0 5,38 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0 2,83 0,6 2,88 0,5
B B B B A A A A A A A A
t2 5,31 0,0 5,38 0,0 5,41 0,0 5,39 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,03 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0 3,02 0,5
A B B B A A A A A A B B
t3 5,30 0,0 5,44 0,0 5,42 0,0 5,43 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0 3,01 0,5 2,95 0,5
A C B C A A A A A A B AB
t4 5,06 0,0 5,28 0,0 5,27 0,0 5,28 0,0 1,02 0,1 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,1 3,01 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0 2,95 0,0
C D C D A A A A A A B AB
t5 5,17 0,0 5,44 0,0 5,42 0,0 5,42 0,0 1,02 0,0 1,02 0,1 1,02 0,0 1,02 0,1 2,95 0,0 3,01 0,0 3,01 0,5 2,95 0,0
D C B C A A A A A A B AB
t6 5,16 0,0 5,49 0,0 5,47 0,0 5,48 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,95 0,0 3,01 0,0 3,01 0,5 2,95 0,0
D E D E A A A A A A B AB
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam resultados
estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
132
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 10 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de erva-mate (I. paraguariensis) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
mol TE/mL
t0 0,23 0,0 0,23 0,0 0,23 0,0 0,23 0,0 7,29 0,5 7,29 0,5 7,29 0,5 7,29 0,5 37,10,2 37,10,2 37,10,2 37,10,2
A A A A A A A A AB A A A
t1 0,26 0,0 0,24 0,0 0,23 0,0 0,25 0,0 7,04 0,4 7,43 0,0 6,68 0,1 7,03 0,3 44,60,3 42,60,1 38,51,1 42,61,0
BC AB A A A A A A D B AB B
t2 0,26 0,0 0,26 0,0 0,24 0,0 0,25 0,0 7,89 0,1 7,65 0,1 7,80 0,0 7,35 0,1 43,60,1 44,10,8 44,20,8 41,51,8
B BC AB A A A A A CD B B AB
t3 0,28 0,0 0,27 0,0 0,27 0,0 0,26 0,0 7,03 0,4 7,18 0,1 7,83 0,5 7,52 0,2 40,01,8 42,71,3 38,20,4 42,90,9
CD C C A A A A A BC B AB B
t4 0,27 0,0 0,25 0,0 0,24 0,0 0,24 0,0 7,31 0,3 7,22 0,4 7,93 0,2 7,44 0,0 34,92,0 41,91,7 38,50,7 37,90,6
BC AB AB A A A A A A AB AB AB
t5 0,31 0,0 0,26 0,0 0,26 0,0 0,26 0,0 7,26 0,1 7,47 0,5 7,99 0,3 7,75 0,3 35,81,4 42,61,6 41,72,0 42,42,2
E BC BC A A A A A AB B AB AB
t6 0,29 0,0 0,24 0,0 0,24 0,0 0,26 0,0 6,74 0,2 7,91 0,1 7,80 0,7 7,49 0,1 38,160,8 44,33,2 36,93,8 42,82,8
DE AB AB A A A A A AB B A B
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05).
133
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
Tabela 11 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de ginco (G. biloba) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N N N N N N N N N
t3 N N N N L N N N N N N N (N)
t4 N N N N L N N N N N N N
t5 N N N N M N N N N N N N
t6 N N N N M N N N N N N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem alteraes;
(L): amostra levemente modificada; (M): amostra modificada;
138
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 12 - Anlise visual comparativa do extrato gliclico de ginco (G. biloba), aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condies de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
____________________________________________________________________________________________________________________
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: aps 90 dias.
139
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 13 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de ginco (G. biloba) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 4,94 0,0 4,94 0,0 4,94 0,0 4,94 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 4,52 0,0 4,52 0,0 4,52 0,0 4,52 0,0
AB A A A A A A A A A A A
t1 4,92 0,0 4,95 0,0 5,00 0,0 4,97 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 4,58 0,0 4,56 0,0 4,52 0,0 4,56 0,0
A AB BC AB A A A A A A A A
t2 4,96 0,0 4,96 0,0 4,95 0,0 4,96 0,0 1,03 0,0 1,03 0,0 1,02 0,0 1,03 0,0 4,56 0,6 4,56 0,6 4,56 0,6 4,56 0,6
BC AB AB AB A A A A A A A A
t3 5,02 0,0 5,03 0,0 5,09 0,0 5,06 0,0 1,02 0,1 1,02 0,0 1,02 0,1 1,02 0,0 4,52 0,0 4,58 0,0 4,52 0,0 4,52 0,0
D C E C A A A A A A A A
t4 4,94 0,0 4,97 0,0 5,03 0,0 4,99 0,0 1,03 0,0 1,02 0,0 1,02 0,1 1,02 0,1 4,58 0,5 4,52 0,5 4,52 0,5 4,52 0,5
AB B CD B A A A A A A A A
t5 4,98 0,0 5,03 0,0 5,04 0,0 5,04 0,0 1,02 0,1 1,03 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 4,56 0,0 4,58 0,0 4,56 0,0 4,52 0,0
C C D C A A A A A A A A
t6 5,09 0,0 5,13 0,0 5,00 0,0 5,12 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 4,58 0,0 4,56 0,0 4,56 0,0 4,56 0,0
E D BC E A A A A A A A A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam resultados
estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
140
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 14 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de ginco (G. biloba) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
molTE/mL
t0 0,11 0,0 0,110,0 0,11 0,0 0,11 0,0 1,16 0,0 1,16 0,0 1,16 0,0 1,16 0,0 3,35 0,1 3,35 0,1 3,35 0,1 3,35 0,1
A A A AB AB A A A A A ABC A
t1 0,11 0,0 0,11 0,0 0,10 0,0 0,11 0,0 1,32 0,0 1,35 0,0 1,23 0,1 1,30 0,1 3,00 0,1 2,97 0,1 3,13 0,0 3,17 0,1
AB A A ABC BC BC AB AB AB A ABD A
t2 0,12 0,0 0,11 0,0 0,10 0,0 0,11 0,0 1,39 0,1 1,42 0,1 1,48 0,1 1,48 0,0 2,85 0,2 2,92 0,3 3,05 0,1 2,93 0,2
BC A A ABC C C B D AB A AD A
t3 0,12 0,0 0,110,0 0,11 0,0 0,11 0,0 1,12 0,1 1,32 0,0 1,29 0,1 1,43 0,1 3,01 0,2 3,44 0,0 3,53 0,1 3,44 0,3
CD A A ABC AB BC AB BC AB A BC A
t4 0,13 0,0 0,10 0,0 0,11 0,0 0,10 0,0 1,08 0,0 1,38 0,0 1,39 0,0 1,49 0,0 2,75 0,1 3,14 0,1 2,97 0,1 3,18 0,0
D A A A A C AB D AB A D A
t5 0,14 0,0 0,12 0,0 0,12 0,0 0,12 0,0 1,27 0,1 1,43 0,1 1,34 0,1 1,40 0,1 2,65 0,3 3,63 0,1 3,41 0,2 3,01 0,3
E A A BC ABC C AB BC B A ABC A
t6 0,14 0,0 0,13 0,0 0,12 0,0 0,13 0,0 1,09 0,0 1,25 0,1 1,42 0,0 1,43 0,0 3,02 0,1 3,49 0,4 3,69 0,0 3,28 0,1
E A A C A AB B BC AB A C A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05)...................................
141
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
10,0 %, exceto a variao de 11,6 % ocorrida na amostra armazenada em estufa, aps 45 dias
de anlise.
Os resultados da atividade antioxidante, expressos em Trolox equivalente (Figura
27), indicaram que as amostras armazenadas em geladeira e em temperatura ambiente sem
exposio solar apresentaram-se estveis durante todo o estudo de estabilidade. A amostra
estocada em temperatura ambiente com exposio solar apresentou declnio de 7,8 % no valor
inicial da atividade antioxidante, aps 90 dias de anlise. Ao final do estudo, a amostra
armazenada em estufa apresentou declnio de 25,8 % no valor inicial da atividade
antioxidante. Esses resultados sugerem que o extrato comercial gliclico de menta deve ser
armazenado em geladeira (5 C) protegido da incidncia de luz solar.
Arabshahi e colaboradores, 2007, estudaram a estabilidade de extrato seco de folhas de
menta. As amostras do extrato foram aquecidas a 100 C por 15 minutos para averiguar a
ao do aquecimento sobre o extrato de menta. A atividade antioxidante do extrato foi
mensurada antes e aps o aquecimento. Os autores, tambm, avaliaram o comportamento do
extrato de menta armazenado, no escuro, temperatura ambiente (25 C) e sob refrigerao (5
C). Nesse ensaio, a atividade antioxidante foi determinada no momento do armazenamento e
aps 15 dias. Os autores observaram que o aquecimento a 100 C provocou aumento de 15 %
na atividade antioxidante do extrato de menta. Segundo os autores, a temperatura elevada
pode ter melhorado a biodisponibilidade dos antioxidantes presentes no extrato de menta. Os
resultados obtidos no ensaio do extrato comercial gliclico de menta indicaram reduo da
atividade antioxidante na amostra armazenada a 45 C, que pode ter ocorrido devido
formao de compostos pr-oxidantes ou inativao de antioxidantes do extrato gliclico.
Como os extratos so diferentes, seco e gliclico, o comportamento trmico dos mesmos pode
variar. Alm disso, os mtodos empregados na determinao da atividade antioxidante foram
distintos. Arabshahi e colaboradores, 2007, determinaram a atividade antioxidante de acordo
com a quantidade de malonaldedo formado por oxidao do cido linolico. E os ensaios
com o extrato comercial gliclico de menta envolveram o radical DPPH. A atividade
antioxidante do extrato seco de menta armazenado a 25 C e a 5 C no apresentou variao,
aps 15 dias de anlise. Esse resultado foi semelhante ao encontrado no estudo da estabilidade
do extrato gliclico de menta (ARABSHAHI et al., 2007).
Materska, 2010, avaliou a estabilidade de extrato etanlico de menta e de suas trs
fraes preparadas com gua e com 40 e 70 % de metanol. As amostras foram armazenadas
por 6 meses a 5 C e o teor de polifenis totais foi determinado no dia do armazenamento e
aps 3 e 6 meses. Os resultados demonstraram que o extrato etanlico de menta apresentou
145
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
reduo do teor de polifenis totais, aps 3 e 6 meses de estudo. Observou-se que, aps 6
meses, o teor de polifenis totais inicial foi reduzido a 50 %. A frao aquosa desse extrato
apresentou comportamento distinto. O teor de polifenis totais, aps 3 meses de estudo,
apresentou um pequeno decrscimo. Ao final do estudo, ou seja, aps 6 meses, esse teor
apresentou um aumento, tornando-se, praticamente, igual ao teor determinado no incio do
estudo. Comportamento semelhante foi observado na amostra de extrato comercial gliclico
de menta armazenada em geladeira. Observaram-se oscilaes no teor de polifenis totais ao
longo do estudo, entretanto, aps 90 dias de anlise, o teor de polifenis totais foi,
praticamente, igual ao teor determinado no primeiro dia do estudo (MATERSKA, 2010).
A frao obtida do extrato etanlico de menta com 40% de metanol apresentou
discreto decrscimo no teor de polifenois totais, aps 6 meses de estudo. A frao do mesmo
extrato obtida com 70 % de metanol apresentou-se estvel durante o estudo de estabilidade.
Os resultados dessa pesquisa demonstraram que a estabilidade dos compostos fenlicos do
extrato de menta pode variar de acordo com o solvente utilizado. Assim, o comportamento
observado no extrato comercial gliclico de menta pode ser especfico para o solvente
utilizado no preparo do mesmo (MATERSKA, 2010).
146
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 15 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de menta (M. piperita) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N N N N N N N N N
t3 N N N N N N N N N N N N
t4 N N N N N N N N R N N N
t5 N N N N N N N N R N N N
t6 N N N N N N N N R N N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem alteraes
(R): amostra com reduo da intensidade do odor.
147
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 16 - Anlise visual do extrato gliclico de menta (M. piperita), aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condies de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
____________________________________________________________________________________________________________________
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: aps 90 dias.
148
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 17 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de menta (M. piperita) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 5,54 0,0 5,55 0,0 5,55 0,0 5,54 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 1,02 0,0 2,71 0,0 2,71 0,0 2,71 0,0 2,71 0,0
A A A AB A A A A A A A A
t1 5,62 0,0 5,69 0,0 5,67 0,0 5,64 0,0 1,02 0,0 1,01 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,71 0,5 2,71 0,5 2,71 0,6 2,71 0,6
B B D B A A A A A A A A
t2 5,42 0,0 5,54 0,0 5,52 0,0 5,53 0,0 1,02 0,0 1,01 0,0 1,02 0,1 1,01 0,0 2,73 0,0 2,60 0,5 2,70 0,6 2,60 0,5
C A AB AB A A A A A A A A
t3 5,30 0,0 5,48 0,0 5,48 0,0 5,45 0,0 1,02 0,0 1,01 0,0 1,02 0,1 1,01 0,0 2,70 0,0 2,73 0,0 2,73 0,0 2,76 0,0
D C C A A A A A A A A A
t4 5,58 0,0 5,89 0,0 5,78 0,0 5,81 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,70 0,0 2,63 0,6 2,76 0,5 2,73 0,6
E D E C A A A A A A A A
t5 5,23 0,0 5,57 0,0 5,49 0,0 5,60 0,1 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,70 0,0 2,60 0,0 2,70 0,0 2,60 0,0
F E BC B A A A A A A A A
t6 5,23 0,0 5,65 0,0 5,48 0,0 5,47 0,0 1,02 0,0 1,01 0,0 1,010,0 1,01 0,0 2,60 0,6 2,71 0,5 2,73 0,0 2,71 0,5
F F C A A A A A A A A A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam resultados
estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
149
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 18 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de menta (M. piperita) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
molTE/mL
t0 0,22 0,0 0,22 0,0 0,22 0,0 0,22 0,0 2,830,4 2,830,4 2,830,4 2,830,4 10,3 0,2 10,3 0,2 10,3 0,2 10,3 0,2
A A A A AB AB ABC A A A A AB
t1 0,21 0,0 0,20 0,0 0,21 0,0 0,21 0,0 2,94 0,0 3,06 0,0 2,93 0,0 2,97 0,1 10,7 1,6 11,3 3,9 10,6 0,6 10,4 0,3
A A A A A A A A A A A AB
t2 0,22 0,0 0,22 0,0 0,22 0,0 0,22 0,0 2,92 0,1 3,10 0,0 2,85 0,1 2,95 0,3 10,9 0,7 11,5 0,8 11,2 0,4 11,1 0,4
A A A A BC AB A A A A A A
t3 0,22 0,0 0,22 0,0 0,22 0,0 0,23 0,0 2,63 0,2 2,58 0,0 2,64 0,1 2,98 0,1 10,5 0,2 11,0 0,4 10,8 1,4 10,4 0,0
A A A A AB A AB A A A A AB
t4 0,23 0,0 0,21 0,0 0,23 0,0 0,22 0,0 3,16 0,1 3,02 0,2 3,16 0,1 3,13 0,0 10,2 0,5 10,7 0,0 10,3 0,2 10,5 0,1
A A A A C B BC B A A A AB
t5 0,23 0,0 0,22 0,1 0,23 0,0 0,22 0,1 2,68 0,2 3,02 0,0 3,13 0,0 2,80 0,2 9,84 0,2 10,7 1,1 10,6 1,4 11,0 0,6
A A A A ABC B C AB AB A A A
t6 0,20 0,0 0,20 0,0 0,20 0,0 0,21 0,0 2,62 0,1 2,87 0,1 2,99 0,3 2,69 0,0 7,64 0,1 9,94 0,1 9,73 0,2 9,49 0,5
A A A A AB AB BC AB B A A B
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05)...........................
150
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
O teor de polifenis totais, expresso em equivalentes de cido glico (Figura 32), das
amostras armazenadas em geladeira, em temperatura ambiente sem exposio solar e em
estufa apresentou, respectivamente, aumento de 11,1, 12,3 e 13,6 %, aps 7 dias de estudo.
Nas anlises seguintes, esse teor retornou ao valor determinado no incio do estudo,
permanecendo constante at o final das avaliaes. A amostra exposta luz solar permaneceu
constante durante todo o estudo. Os resultados da atividade antioxidante, expressos em
Trolox equivalente (Figura 33), permaneceram constantes em todo o estudo de estabilidade
e em todas as condies.
Lu e colaboradores, 2003, avaliaram a estabilidade trmica de extrato etanlico de
prpolis oriunda de Taiwan. Amostras do mesmo foram aquecidas a 50, 80 ou 100 C por
uma hora. Os autores avaliaram a atividade antioxidante e antibacteriana dessas amostras
antes do aquecimento e aps o mesmo. Os resultados obtidos demonstraram que a atividade
antimicrobiana do extrato de prpolis mostrou-se estvel aps o aquecimento do mesmo a
diferentes temperaturas. Os resultados da atividade antioxidante determinada pelo ensaio de
DPPH revelaram que as trs amostras submetidas ao aquecimento de 50, 80 e 100 C
apresentaram reduo estatisticamente igual no valor da atividade antioxidante (LU et al.,
2003). A amostra de extrato comercial gliclico de prpolis armazenada em estufa (45 C)
no apresentou reduo no valor da atividade antioxidante ao longo do estudo de estabilidade,
a mesma permaneceu estvel durante os 90 dias de anlise. A diferena observada entre os
resultados das duas pesquisas pode ser atribuda a variaes de composio qumica entre os
dois extratos analisados. Sabe-se que a prpolis pode apresentar composies qumicas
variadas de acordo com sua origem geogrfica. O extrato de prpolis analisado no estudo de
Lu e colaboradores, 2008, era originrio de Taiwan e o extrato comercial gliclico de prpolis
tem origem brasileira. Assim, possveis composies qumicas distintas entre os extratos
podem ter determinado os comportamentos opostos observados nos ensaios de determinao
da atividade antioxidante (LU et al., 2003).
Marquele-Oliveira e colaboradores, 2007, avaliaram a estabilidade de extratos
alcolico e gliclico de prpolis de origem brasileira. A atividade antioxidante das amostras
dos extratos armazenadas em temperatura ambiente e a 40 C foram analisadas
periodicamente durante 360 dias. Os autores observaram que ambos os extratos apresentaram
estabilidade em relao atividade antioxidante durante o perodo de estudo, nas duas
condies avaliadas. O mesmo comportamento foi observado no presente estudo, as amostras
do extrato comercial gliclico de prpolis armazenadas em temperatura ambiente e em estufa
(40 C) mostram-se estveis ao longo de 90 dias (MARQUELE-OLIVEIRA et al., 2007).
154
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 19 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de prpolis submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N L N N N N N N N
t3 N N N N L N N N N N N N
t4 N N N N L N N N N N N N
t5 N N N N L N N N N N N N
t6 N N N N L N N N N N N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem alteraes;
(L): amostra levemente modificada.
155
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 20 - Anlise visual do extrato gliclico de prpolis, aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condies de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
____________________________________________________________________________________________________________________
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: aps 90 dias.
156
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 21 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de prpolis submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 5,45 0,0 5,45 0,0 5,45 0,0 5,45 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 3,54 0,5 3,54 0,5 3,54 0,5 3,54 0,5
AB A A AB A A A A A A A A
t1 5,54 0,0 5,57 0,0 5,55 0,0 5,51 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 0,92 0,0 3,69 0,0 3,59 0,5 3,68 0,0 3,69 0,0
F C AB C A A A A BC AB AB AB
t2 5,29 0,0 5,25 0,0 5,92 0,5 5,30 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,92 0,1 3,62 0,6 3,51 0,5 3,68 0,0 3,76 0,0
D D B D A A A A B A AB B
t3 5,42 0,0 5,45 0,0 5,47 0,0 5,45 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 3,76 0,5 3,68 0,0 3,76 0,5 3,69 0,0
E A A AB A A A A C B B AB
t4 5,45 0,0 5,52 0,0 5,51 0,0 5,47 0,0 0,93 0,0 0,92 0,0 0,92 0,1 0,92 0,0 3,69 0,0 3,59 0,5 3,76 0,5 3,69 0,0
A BC AB B A A A A BC AB B AB
t5 5,47 0,0 5,49 0,0 5,50 0,0 5,51 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 3,69 0,0 3,69 0,0 3,76 0,0 3,76 0,5
BC AB AB C A A A A BC B B B
t6 5,47 0,0 5,55 0,0 5,30 0,0 5,43 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 0,93 0,0 3,69 0,0 3,59 0,0 3,76 0,5 3,76 0,0
C BC A A A A A A BC AB B B
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam resultados
estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
157
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 22 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de prpolis submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
molTE/mL
t0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,81 0,0 0,81 0,0 0,81 0,0 0,81 0,0 3,62 0,0 3,62 0,0 3,62 0,0 3,62 0,0
A A A A AB ABC AB A A A A A
t1 0,19 0,0 0,18 0,0 0,18 0,0 0,19 0,0 0,92 0,0 0,93 0,0 0,91 0,1 0,94 0,0 3,55 0,0 3,72 0,0 3,57 0,0 3,66 0,3
B AB AB A B C BC A A A A A
t2 0,20 0,0 0,20 0,0 0,19 0,0 0,20 0,0 0,72 0,0 0,90 0,1 0,94 0,0 0,93 0,1 3,72 0,4 3,97 0,2 3,42 0,1 3,57 0,3
C B B A A BC C A A A A A
t3 0,17 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,79 0,1 0,79 0,1 0,79 0,0 0,79 0,0 3,34 0,3 3,25 0,4 3,35 0,0 3,06 0,0
A AB A A AB AB AB A A A A A
t4 0,18 0,0 0,18 0,0 0,18 0,0 0,18 0,0 0,79 0,0 0,74 0,0 0,71 0,0 0,71 0,1 3,66 0,1 3,32 0,1 3,38 0,2 3,32 0,1
AB AB AB A AB A A A A A A A
t5 0,19 0,0 0,17 0,0 0,18 0,0 0,17 0,0 0,80 0,1 0,78 0,0 0,74 0,1 0,77 0,0 3,29 0,2 3,56 0,3 3,59 0,0 3,36 0,3
BC AB AB A AB AB A A A A A A
t6 0,18 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,17 0,0 0,80 0,1 0,78 0,0 0,74 0,0 0,77 0,1 3,41 0,1 3,57 0,3 3,32 0,3 3,63 0,1
B AB A A AB AB A A A A A A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05).
158
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
Tabela 23 - Estabilidade fsica do extrato gliclico de rom (P. granatum) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 N N N N N N N N N N N N
t1 N N N N N N N N N N N N
t2 N N N N N N N N N N N N
t3 N N N N N N N N N N N N
t4 N N N N N N N N N N N N
t5 N N N N L N N N R R N N
t6 N N N N L N N N R R N N
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; (N): amostra normal sem alteraes;
(L): amostra levemente modificada; (R): amostra com reduo da intensidade do odor
164
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 24 - Anlise visual do extrato gliclico de rom (P. granatum), aps 90 dias de Estudo de Estabilidade Normal
Condies de armazenamento
Estufa (45,0 2,0 C) Geladeira (5,0 2,0 C) T.A (23,0 2,0 C) T.A E.S. (23,0 2,0 C)
Legenda: T.A.: Temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: Temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t6: Aps 90 dias.
165
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 25 - Estabilidade fsico-qumica do extrato gliclico de rom (P. granatum) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
t0 4,55 0,0 4,55 0,0 4,52 0,0 4,55 0,0 1,01 0,0 1,02 0,0 1,01 0,0 1,01 0,0 2,83 0,5 2,83 0,5 2,83 0,5 2,83 0,5
A A AB A A A A A A A A A
t1 4,41 0,0 4,56 0,0 4,52 0,0 4,51 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,89 0,0 2,89 0,0 2,88 0,6 2,88 0,6
B A AB B A A A A A A A A
t2 4,36 0,0 4,50 0,0 4,46 0,0 4,46 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,89 0,0 2,95 0,0 2,88 0,0 2,95 0,0
C B AC C A A A A A A A A
t3 4,46 0,0 4,56 0,0 4,53 0,0 4,55 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,84 0,0 2,84 0,5 2,84 0,0 2,95 0,5
D A B A A A A A A A A A
t4 4,31 0,0 4,48 0,0 4,48 0,0 4,46 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,89 0,0 2,89 0,0 2,83 0,5 2,89 0,0
E C ABC C A A A A A A A A
t5 4,21 0,0 4,37 0,0 4,44 0,0 4,37 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,83 0,0 2,83 0,6 2,83 0,0 2,89 0,6
F D C D A A A A A A A A
t6 4,20 0,0 4,46 0,0 4,45 0,0 4,46 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 1,02 0,0 2,88 0,6 2,88 0,6 2,88 0,6 2,88 0,6
F E C C A A A A A A A A
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias. Letras distintas representam resultados
estatisticamente diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 4 e p< 0,05).
166
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
Tabela 26 - Estabilidade qumica do extrato gliclico de rom (P. granatum) submetido ao Estudo de Estabilidade Normal
PARMETRO AVALIADO
Teor de flavonides (EQ) (mg/mL) Teor de polifenois (EAG) (mg/mL) Atividade Antioxidante (TEAC)
molTE/mL
t0 0,54 0,0 0,54 0,0 0,54 0,0 0,54 0,0 13,680,3 13,680,3 13,680,3 13,680,3 149,70,0 149,70,0 149,70,0 149,70,0
A A A A A A A AB A A AB A
t1 0,57 0,0 0,53 0,0 0,54 0,0 0,54 0,0 13,750,9 13,610,2 13,460,1 13,550,4 122,99,5 129,97,7 128,52,3 122,31,9
A AB A A A A AB AB A B AC B
t2 0,55 0,0 0,50 0,0 0,53 0,0 0,54 0,0 13,910,5 13,840,4 13,470,2 13,840,9 146,50,6 143,91,6 148,82,2 144,31,3
A B A A A A AB AB A AB B AB
t3 0,57 0,0 0,54 0,0 0,54 0,0 0,54 0,0 13,770,4 13,840,9 13,720,3 13,600,2 135,79,0 129,14,0 133,10,0 131,79,9
A AB A A A A A AB A B ABC AB
t4 0,56 0,1 0,52 0,0 0,54 0,0 0,55 0,0 12,380,0 12,420,3 12,780,1 12,510,1 131,312 128,56,6 145,80,5 146,15,6
A AB A A A A AB AB A B AB A
t5 0,56 0,1 0,52 0,0 0,50 0,1 0,51 0,1 12,390,2 12,350,3 12,560,5 12,330,3 138,74,8 127,91,9 119,66,5 131,20,2
A AB A A A A B A A B C AB
t6 0,59 0,0 0,54 0,0 0,55 0,0 0,54 0,0 13,540,4 13,870,2 13,650,3 13,880,4 139,212 135,80 145,112 144,712
A AB A A A A A B A AB AB AB
Legenda: T.A.: temperatura ambiente protegida da incidncia de luz; T.A. E.S.: temperatura ambiente exposta luz solar indireta; t0: tempo
inicial; t1: aps 7 dias; t2: aps 15 dias; t3: aps 30 dias; t4: aps 45 dias; t5: aps 60 dias e t6: aps 90 dias; EQ: equivalentes em quercetina; EAG:
equivalentes em cido glico; TEAC: atividade antioxidante em Trolox equivalente. Letras distintas representam resultados estatisticamente
diferentes entre os tempos (t0 a t6) de cada condio analisada individualmente em cada parmetro (n = 2 e p< 0,05).
167
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
30
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da densidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da viscosidade(%)
20
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
20
Variao do teor de
flavonoides (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao do teor de
20
polifenis (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
30
Variao da atividade
20
antioxidante (%)
10
0
0 20 40 60 80 100
-10
-20
-30
tempo (dia)
6. CONCLUSES
7. REFERNCIAS
ARABSHAHI S.; DEVI D.; UROOJ A. Evaluation of antioxidant activity of some plants and
their heat, pH and store stability. Food Chemistry. v. 100, p. 1100-1105, 2007.
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172
Captulo 2 Estudo da estabilidade de extratos gliclicos
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Ptychopetalum olacoides Bentham Revista de Cincias Farmacuticas Bsica e Aplicada,
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WANG HF, WANG YK, YIH KH. DPPH free-radical scavenging ability, total phenolic
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WANG H.; HELLIWELL K. Epimerisation of catechins in green tea infusions. Food
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CAPTULO 3
RESUMO
1. INTRODUO
A radiao ultravioleta (UV), cuja maior fonte natural o sol, pode provocar danos ao
DNA, alteraes qumicas e histolgicas na epiderme, envelhecimento precoce, cataratas,
imunossupresso e carcinognese, dentre outras deterioraes. O fotoenvelhecimento
responsvel por danos agressivos pele que geram modificaes da superfcie da mesma, tais
como: perda da elasticidade, manchas escuras ou claras, rugas finas e profundas e alterao da
superfcie. A pele pode apresentar-se mais spera, ressecada e descamativa. Atualmente, o
cncer de pele um grave problema de sade pblica devido ao aumento de sua incidncia
provocado, principalmente, pelas mudanas de hbitos da populao mundial com maior
exposio radiao solar. Nas duas ltimas dcadas, iniciou-se, efetivamente, a busca pela
proteo contra a radiao solar, uma vez que, os efeitos nocivos do sol tornaram-se mais
conhecidos e divulgados. Na atualidade, a necessidade da fotoproteo uma realidade
irrefutvel, quer seja pela ao profiltica e teraputica contra o envelhecimento precoce ou
pela diminuio da incidncia de cncer de pele (COSTA; WEBER, 2004; GONZLEZ et al.,
2008; MILESI; GUTERRES, 2002; PALM; O DONOGHUE, 2007; PATHAK, 1997;
SGARBI et al., 2007; WILKINSON; MOORE, 1990).
A fotoproteo o mtodo que previne os efeitos danosos da radiao ultravioleta
(UV). realizada por meio do uso de protetores solares, roupas protetoras e acessrios
adequados e exposio segura ao sol. A primeira linha de defesa contra estes efeitos nocivos
envolve a utilizao dos fotoprotetores. Em 1992, o mercado nacional de fotoprotetores
comercializou um montante de 650 toneladas de produtos. Em 2002, a produo evoluiu para
aproximadamente 4.200 toneladas, revelando no apenas a crescente importncia deste
segmento, como tambm sugerindo o potencial elevado de crescimento para os prximos
anos. Segundo dados da Euromonitor, em 2008, o mercado brasileiro de proteo solar
movimentou US$ 720 milhes, atingindo a segunda colocao no ranking mundial, com
participao de 9,2%, perdendo, apenas, para os Estados Unidos que deteve 18,4% do
mercado com movimentao de US$ 1,44 bilho. Nesse mesmo ano, o mercado total desta
categoria de produtos movimentou US$ 7,81 bilhes e apresentou crescimento de 9,57%
(ABIHPEC, 2010; FLOR et al., 2007; GONZLEZ et al, 2008; MAIER; KORTING, 2005;
SHEU et al., 2003; WOLF et al., 2001).
177
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
2. REVISO DA LITERATURA
2.1 SOL
O sol a estrela mais prxima da Terra. Trata-se de uma enorme esfera de gs
incandescente que gera energia por meio de reaes termo-nucleares em seu ncleo.
composto por aproximadamente 92% de hidrognio e 8% de hlio e outros elementos, como
oxignio, carbono e nitrognio. Esses elementos apresentam-se ionizados, devido s altas
temperaturas. Seu nascimento ocorreu h aproximadamente 4,6 bilhes de anos e sua morte
ocorrer em, no mnimo, 5 bilhes de anos. O sol apresenta combustvel nuclear suficiente
para manter-se ativo durante esse perodo, aps o mesmo, o sol crescer e se tornar uma
estrela gigante vermelha, posteriormente se tornar uma an branca e na sua fase final, uma
an preta. As Figuras 1 e 2 ilustram imagens em trs dimenses do sol obtidas pela National
Aeronautics and Space Administration (NASA) (FILHO; SARAIVA, 2009; NASA, 2009 b;
SILVA, 2006).
A partir de 1980, com o advento dos satlites, o conhecimento sobre essa estrela
aumentou de maneira considervel. Seu dimetro aproximadamente 1.390.000 km, valor
que equivale a 109 dimetros da Terra. Seu volume 1.300.000 maior que o volume da Terra,
atingindo um valor inimaginvel de 1,406 x 1018 km3. Sua massa aproximadamente 1,989 x
1030 kg, o que corresponde a 300.000 vezes a massa da Terra. Seu interior apresenta
temperaturas elevadssimas, variando na faixa de 7,0 x 106 C (12,6 x 106 F) a 15 x 106 C
(27 x 106 F) (FILHO; SARAIVA, 2009; NASA, 2009; SILVA, 2006).
A luz solar foi pesquisada ao longo dos sculos por diferentes cientistas. Em 1704,
Isaac Newton publicou importante material sobre a luz solar, o Opticks, revelando os
resultados de suas experincias de decomposio da luz solar utilizando um prisma. Ele
178
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
demonstrou que a luz visvel do sol uma mistura de um espectro contnuo de cores, que se
estende do violeta ao vermelho. Em 1800, Willian Herschel descobriu que as cores do
espectro contnuo da luz solar produziam temperaturas distintas e que as mesmas aumentavam
na progresso da cor azul vermelha. Alm disso, ele observou que a temperatura produzida
na regio invisvel alm do vermelho era mais elevada, Herschel descobrira o infravermelho
(NASA, 2009; SILVA 2006).
Johann Wihelm Ritter, ao ouvir sobre os trabalhos de Herschel, interessou-se por
estudar a outra extremidade do espectro contnuo de cores, a regio do violeta. Ritter
acreditava na existncia de uma radiao invisvel alm do violeta. Com seus conhecimentos
qumicos, ele provou sua teoria demonstrando que a regio alm do violeta era capaz de
decompor cloreto de prata a prata mais rapidamente que a regio do visvel. Rittler descobrira
o ultravioleta (UV). No incio do sculo XIX, Thomas Young reforou a teoria proposta em
1690 por Christiaan Huygens. Ele demonstrou, por meio de importantes experimentos, as
propriedades de onda da luz. Posteriormente, em 1905, Einstein provou que a luz tambm
apresentava propriedades de partculas (NASA, 2009).
No sculo XIX, James Clerk Maxwell introduziu o conceito de onda eletromagntica.
Ele estudou o comportamento de campos eltricos e magnticos e suas interaes, concluindo
que a oscilao de cargas eltricas produzia um campo eletromagntico. Adicionalmente,
concluiu que este fenmeno eletromagntico apresentava propriedades de onda. Ele props
que a luz solar era uma onda eletromagntica e que a poro visvel correspondia a uma
pequena parte de um espectro de radiao eletromagntica. Em 1886, Heinrich Hertz provou a
teoria de Maxwell, conseguindo transmitir ondas de rdio para um receptor atravs do ar.
Posteriormente, Guglielmo Marconi viu uma aplicao para os experimentos de Hertz, a
telegrafia sem fios. Seus estudos foram base para o desenvolvimento de rdios sem fio e
radares. Na mesma poca, Willian Carl Roentgen descobriu um outro tipo de emisso
eletromagntica, os raios X (NASA, 2009; SILVA, 2006).
Na atualidade, sabe-se que o espectro eletromagntico abrange um intervalo amplo de
comprimentos de onda, desde 10-6 nm (1 nm = 10-9 m) at 100 km. Apresenta-se dividido em
faixas, porm podem ocorrer sobreposies entre as mesmas, uma vez que existem
dificuldades na determinao dos limites exatos entre elas. O sol emite radiao ao longo de
todo o espectro eletromagntico, desde quilomtricas ondas de rdio at os energticos raios
X e gama abrangendo o ultravioleta, visvel, infravermelho e microondas. Grande parte desta
radiao emitida atenuada ou desviada pelas camadas atmosfricas da Terra, entretanto trs
radiaes, denominadas no-ionizantes, conseguem atingir a superfcie da mesma.
179
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
(CPDs)
(6-4PPs)
A vida curta da maioria das ERO faz com que as mesmas danifiquem estruturas
prximas aos seus stios de formao. Danos ao DNA representam a consequncia mais
drstica das reaes oxidativas induzidas pela radiao UV, sendo a base guanina fortemente
danificada pelas ERO. Ocorre a formao de 8- hidroxideoxiguanosina (8-OHdG) e outros
produtos em estresse oxidativo, aps exposio radiao UVA e UVB. Considera-se a 8-
OHdG como marca do estresse oxidativo. A formao destes produtos pode conduzir
mutagnese. A Figura 5 ilustra as principais leses ao DNA causadas por danos oxidativos
(ICHIHASHI et al., 2003; TRAUTINGER, 2001).
8-hidroxi-dG 8-hidroxi-dA
Timina glicol
5-hidroxi-dC
Figura 5 - Leses ao DNA provocadas por danos oxidativos (ICHIHASHI et al., 2003)
2.2.3 IMUNOSSUPRESSO
O sistema imune reconhece sustncias potencialmente danosas e responde a elas por
diferentes mecanismos. As clulas de Langerhans e os queratincitos so a primeira linha de
defesa ativada aps danos pele por trauma externo. As primeiras comunicam-se com os
linfcitos T e os queratincitos produzem diversas citocinas que participam do
reconhecimento imune na pele. Observa-se que a radiao UV promove uma srie de efeitos
sobre o sistema imune, como a depleo da resposta imune celular na hipersensibilidade de
contato, depleo das reaes de hipersensibilidade retardada, alterao da secreo de
citocinas e na disposio de linfcitos e induo de clulas T supressoras e T auxiliares
secretoras de IL-4, entre outros. A imunossupresso possui papel importante no
desenvolvimento da fotocarcinognese. Este fato pode ser observado em pacientes submetidos
184
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
transcrio e danos ao DNA. A radiao UVB tambm gera ERO, mas seu principal
mecanismo de ao a interao direta com o DNA gerando danos ao mesmo
(BERNEBURG; KRUTMANN, 2000).
Os fatores de transcrio como AP-1 e NF-kB induzidos pela radiao UV na
epiderme e ERO induzem a expresso de metaloproteinases de matriz (MMPs). Estas so
enzimas envolvidas no metabolismo dos tecidos que se apresentam divididas em pelo menos
28 tipos, e que exercem importante papel na degradao de componentes da matriz
extracelular e na ativao de citocinas. MMP-1 degrada colgeno tipo I, II e III e MMP-9
colgeno tipo IV, V e gelatina, sendo ambas denominadas gelatinases. As ERO tambm
induzem mutaes no DNA mitocondrial. Pesquisas recentes investigaram o papel do DNA
mitocondrial no fotoenvelhecimento e percebeu-se que peles fotoenvelhecidas apresentaram
frequncia de mutao maior no DNA mitocondrial do que pele protegidas da exposio
solar. Essas mutaes podem estar relacionadas com o aumento da expresso de MMP-1,
entretanto so necessrios estudos adicionais para compreenso do relacionamento de
mutaes no DNA mitocondrial com o fotoenvelhecimento. A Figura 6 sintetiza a ao da
radiao UVA e UVB no fotoenvelhecimento cutneo (BERNEBURG; KRUTMANN, 2000;
ONOUEA et al., 2003).
Epiderme Queratincitos
Derme Fibroblastos
2.4 FOTOPROTEO
Segundo Gonzlez e colaboradores, 2008, fotoproteo um elemento profiltico e
teraputico frente aos efeitos danosos da radiao UV. A abordagem realizada por meio do
uso de protetores solares, vestimentas protetoras e exposio restrita luz solar. A primeira
linha de defesa contra estes efeitos nocivos envolve a utilizao dos fotoprotetores, tambm
187
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
denominados protetores solares. Eles podem ser compostos de vrios filtros UV, incluindo
filtros inorgnicos e orgnicos. Os filtros inorgnicos so bloqueadores fsicos e os orgnicos
so absorvedores qumicos. A eficcia destes pode ser determinada por metodologias in vitro
e in vivo por meio da obteno do valor do fator de proteo solar (FPS) e est relacionada
com a radiao UVB (FLOR et al., 2007; GONZLEZ et al., 2008; MAIER; KORTING,
2005; SHEU et al., 2003; WOLF et al., 2001).
solares inorgnicos promove aumento no valor do FPU. Tecidos clssicos, como o algodo,
podem igualmente ter seu valor de FPU elevado com a incorporao de filtros solares. Um
exemplo o uso de Rit SunGuard, produto utilizado na lavagem de roupas, capaz de
fornecer o filtro Tinosorb FD (UVA e UVB), contido no mesmo, aos tecidos. Este
procedimento promove aumento no valor do FPU dos mesmos. Verificou-se aumento no FPU
de camisas de algodo lavadas uma nica vez com o produto e aumento superior com
lavagens sucessivas (BARON et al., 2008).
Alm das vestimentas, outros acessrios so igualmente importantes para a
fotoproteo como culos escuros, luvas, bons e chapus. Os chapus so teis para a
proteo do couro cabeludo, orelha, cabelo, olhos, testa e pescoo, alm de prover sombra
para o rosto, que pode proteger as bochechas, o nariz e o queixo. A eficcia da proteo de um
chapu ou bon est relacionada com o tamanho da borda dos mesmos, bem como o material
utilizado para sua confeco. Chapu com borda larga reduz a superfcie ocular exposta
radiao UV em 50%. E aquele com borda de pelo menos 4 cm protege a parte posterior do
pescoo. As luvas so teis para a preveno dos sinais de fotoenvelhecimento das mos,
como as manchas na superfcie das mesmas (BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008;
PALM; O DONOGHUE, 2007; SHEEDY; EDLICH, 2004).
Os culos escuros previnem os diversos danos oculares provocados pela radiao UV,
como cataratas, fotoconjuntivites e perda progressiva da viso. A proteo exercida deve
abranger a radiao UV e a visvel e deve cobrir todo o campo lateral da viso. Alguns fatores
influenciam a proteo dos mesmos: tamanho, forma, capacidade de bloqueio da radiao
ultravioleta e reflexo do verso da lente (BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008;
PALM; O DONOGHUE, 2007).
Aconselha-se que os culos escuros possuam lentes com proteo lateral, colorao
cinza ou prxima do neutro, boa qualidade ptica e transmitncia do visvel adequada para o
conforto visual. A FDA (The Food and Drug Administration) definiu parmetros para os
culos escuros, como a permissividade que deve ser menor que 0,001% para comprimentos de
onda entre 200 e 320 nm e menor que 0,01% para comprimentos de onda entre 320 e 400
mm. A Academia Americana de Oftalmologia recomenda que os culos filtrem 99% da
radiao UV e que as lentes no transmitam mais do que 1% da radiao UVA e UVB
(BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008; PALM; O DONOGHUE, 2007; SHEEDY;
EDLICH, 2004).
190
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
2.4.3 FOTOPROTETORES
A utilizao de protetores solares, ou seja, produtos fotoprotetores, a principal
abordagem cosmtica contra os efeitos nocivos da radiao UV. Estudos diversos evidenciam
que o uso adequado e regular de fotoprotetores reduz o nmero de casos de queratose actnica,
carcinoma de clulas escamosas e atenua o desenvolvimento de novos nevos em crianas.
Adicionalmente, o uso regular de fotoprotetores evita o envelhecimento precoce da pele
(BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008; LAUTENSCHLAGER et al., 2007; PALM;
O DONOGHUE, 2007).
Os protetores solares so preparaes cosmticas que possuem formas de apresentao
diversas. Podem ser encontrados como loes hidroalcolicas, leos, gis oleosos e
hidroalcolicos, emulses leo em gua (O/A), emulses gua em leo (A/O), bastes e
aerossis, entre outras. As loes hidroalcolicas, geralmente, apresentam reduzida proteo
com formao de filme protetor irregular e podem provocar o ressecamento da pele, os leos
apresentam proteo superior s loes hidroalcolicas, mas no atingem valor de FPS alto.
Os gis oleosos apresentam composio oleaginosa gelificada com proteo superior aos
leos fluidos e as emulses so as formas de apresentao com maior proteo. Os bastes
so utilizados em formulaes labiais e os aerossis nas capilares ou corporais, por exemplo.
Os protetores contm filtros solares que so molculas ou complexos moleculares que
podem absorver, refletir ou dispersar a radiao UV. Os primeiros foram comercializados a
partir de 1928. Muito diferente das formulaes atuais, o primeiro fotoprotetor era composto
de uma combinao de salicilato e cinamato de benzila. Na Segunda Guerra Mundial,
soldados alocados em climas tropicais, com a finalidade de evitarem queimaduras solares,
utilizavam petrolato veterinrio vermelho, PABA (cido 4-aminobenzico) e cidos para-
dimetilaminobenzicos (BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008;
LAUTENSCHLAGER et al., 2007; PALM; O DONOGHUE, 2007).
Na dcada de 1940, a FDA comeou a regulamentar o desenvolvimento de
fotoprotetores. Atualmente, este rgo regulamenta o uso dos filtros solares, o Quadro 1
descreve, de acordo com a Nomenclatura Internacional de Ingredientes Cosmticos (INCI) e
com a Nomenclatura Qumica, os filtros aprovados para o uso nos EUA (BARON et al., 2008;
BRASIL, 2006; GONZLEZ et al., 2008; INVENTRIO DE COSMTICOS DA UNIO
EUROPIA, 2009; LAUTENSCHLAGER et al., 2007; PALM; O DONOGHUE, 2007).
191
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Quadro 1-Lista de filtros solares aprovados pela FDA (BARON et al., 2008)
Filtros Solares
Orgnicos Inorgnicos
UVA UVB UVA/UVB
INCI/Qumica INCI/Qumica INCI/Qumica
1-(4-TERT-BUTYLPHENYL)-3-(4- PABA/ cido 4 - aminobenzico TITANIUM DIOXIDE/
METHOXYPHENYL) PROPANE-1,3 Dixido de titnio
DIONE/ Avobenzona
MENTHYL ANTHRANILATE/ OCTYL (ou ETHYLHEXYL) ZINC OXIDE/ xido
Antranilato de mentila DIMETHYL PABA/ 4 - Dimetil- de zinco
aminobenzoato de 2 - etilhexila
BENZOPHENONE-8/ 2,2`-dihidroxi- HOMOSALATE/ Salicilato de
4 -metoxibenzofenona homomentila
regulatria de novos filtros nos EUA moroso porque os mesmos so tratados como produtos
OTC (venda sem prescrio mdica). No entanto, na Europa e demais localidades, o processo
de aprovao regulatria mais acelerado, uma vez que os filtros solares so considerados
pelas agncias regulatrias como cosmticos. Na dcada de 1970, o PABA tornou-se o
principal composto ativo em fotoprotetores comercializados com eficcia comprovada. Nas
duas prximas dcadas, a ateno se voltou para a formulao dos fotoprotetores cujo
objetivo era elevar o FPS daqueles disponveis no mercado, por meio da adio de novos
filtros solares. Atualmente, diante dos danos que a radiao UVA provoca, o desenvolvimento
de fotoprotetores visa obteno de produtos com proteo UVA e UVB, considerados de
amplo espectro (BARON et al., 2008; LAUTENSCHLAGER et al., 2007; PALM; O
DONOGHUE, 2007).
2.4.3.1 EFICCIA
A eficcia fotoprotetora pode ser determinada por metodologias in vitro e in vivo. O
Fator de Proteo Solar (FPS), que indica a proteo contra a radiao UVB, pode ser
definido como o quociente entre a dose eritematgena mnima (DEM) na pele protegida com
o fotoprotetor em anlise e a DEM na pele ausente de proteo. O DEM a quantidade de
energia efetiva, expressa em Joules/cm2, requerida para a produo da primeira reao
eritematgena perceptvel e com bordas claramente definidas, identificadas por profissional
habilitado e treinado (SHEU et al., 2003; WOLF et al., 2001).
A Equao 1 determina matematicamente o valor de FPS. Para tal, preconizado no
Brasil, o emprego de metodologia in vivo que atenda a Federal Register Norma FDA
Departament of health and Human Services Wednesday May 12, 1993 - Sunscreen Drug
Product for Over the Counter Human Use; Final Monograph; Final Rule; Subparte D Testing
Procedure, seo 352.70 a 352.73. ou a Norma Colipa- Colipa Sun Protection Factor Test
Method- The European Cosmetic Toiletry and Perfumary Association ref. 94/289 October
1994, de acordo com resoluo RDC no 237/02 de 22 de agosto de 2002 (BRASIL, 2002).
A razo entre o total de luz transmitida e o total de luz incidente conhecida como
transmitncia sendo mensurada quantitativamente. A transmitncia hemisfrica calculada
utilizando uma esfera de integrao que rene a luz espalhada em todos os ngulos. As
paredes internas dessa esfera so cobertas por material branco com alta capacidade de
reflexo (Figura 8). Um sistema com fonte de iluminao, esfera de integrao e fotodetector
est esquematizada na Figura 9.
194
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Figura 8 Esfera de integrao com suas paredes revestidas por material branco com alto
ndice de reflexo (LABSPHERE, 2010)
Esfera de
Amostra integrao
Lmpada Colimador
ptico defletor
Foto-detector
Nesse esquema, a luz emitida pela lmpada, aps ser colimada (seus raios tornaram-se
paralelos), atinge a superfce da amostra com incidncia normal. A iluminao interna
produzida na esfera integrada captada pelo fotodectector indicando a quantidade de luz
transmitida atravs da amostra. Esse sistema conhecido como geometria normal/hemisfrica
referente condio iluminao/deteco e abreviado como (0/h) ou geometria difusa
(0/d). Segundo o princpio de reciprocidade de Helmholtz, a perda de fluxo de luz dentro do
sistema no ser alterada se a direo de viagem da luz for reserva. Assim, o resultado no
ser alterado se a geometria de iluminao e deteco for alternada. Esse princpio
largamente utilizado pela engenharia tica, em clculos de medidas de luz, e empregado na
construo do Labsphere UV-2000S. A inverso da fonte de luz e do foto-detector no sistema
representado na Figura 9 caracteriza a geometria difusa/normal (d/0) esquematizada na
Figura 10 (OLIVEIRA, 2006; SPRINGSTEEN et al., 1999).
195
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
amostra Esfera de
integrao
Foto-detector defletor
Colimador
ptico
Lmpada
El Sl dl
FPS = 280nm
400nm
El Sl Tl dl
280nm
que a quantificao da proteo UVA dever ser realizada por meio de metodologias
reconhecidas devidamente validadas (BRASIL, 2002).
Absorbncia
FILTROS UVB
Os filtros UVB absorvem aproximadamente 90% da radiao de entre 290 e 320 nm.
O PABA (cido 4-aminobenzico) foi o primeiro filtro UV utilizado e um dos primeiros
aprovados pelo FDA, as reaes fotoalrgicas ocasionadas por ele ocorrem em mais de 4 %
da populao A partir da dcada de 1980 surgiram os produtos fotoprotetores livres de PABA.
Foram introduzidos no mercado seus steres, que apresentavam como vantagens, a reduo na
alergenicidade e reatividade. O nico ster aprovado pela FDA o padimato O ou octil
dimetil PABA (4-dimetil-aminobenzoato de 2-etilhexila), utilizado mais atualmente em
produtos para proteo capilar e em conjunto com outros filtros, visando o aumento do FPS
dos produtos fotoprotetores (GONZLEZ et al., 2008; PALM; O DONOGHUE, 2007).
Os cinamatos so os filtros UVB mais populares na Europa e nos EUA, entretanto,
apresentam substantividade reduzida, sendo muitas vezes combinados com demais filtros.
Apresentam potencial inferior de causar irritabilidade pele. O 4-metoxicinamato de 2-
etilhexila um exemplo deste grupo de filtros UVB sendo o mais potente e capaz de absorver
radiao de entre 270 e 328 nm. Estudos evidenciam que o processo de nanoencapsulao
deste em poli-D,L-lactdeo-co-glicoldeo resultou na diminuio da fotodegradao
(GONZLEZ et al., 2008; LAUTENSCHLAGER et al., 2007; PALM; O DONOGHUE,
2007).
Os salicilatos so compostos aromticos estveis, seguros, insolveis em gua e
apresentam substantividade elevada. Este grupo de compostos utilizado como filtro solar h
dcadas e tambm como solventes para filtros solares pouco solveis, como as benzofenonas.
Pode-se citar como exemplo o salicilato de 2-etilhexila, de homomentila e de trietanolamina.
O primeiro e o ltimo esto associados com a fotoinduo de reaes cutneas, fato que no
ocorre com o salicilato de homomentila. Os salicilatos apresentam proteo UVB no
intervalo de 290 a 315 nm sendo o de trietanolamina o mais usado em produtos para proteo
capilar (GONZLEZ et al., 2008; PALM; O DONOGHUE, 2007).
FILTROS UVA
Os principais filtros orgnicos UVA presentes nos fotoprotetores incluem as
benzofenonas (principalmente oxibenzona), avobenzona, cido tereftalideno dicnfora
sulfnico, drometrizol trisiloxano, metileno-bis-benzotriazolil tetrametilbutilfenol e bis-
etilexiloxifenol-metoxi-fenil triazina. Segundo Baron e colaboradores, 2008, o FDA aprovou,
recentemente, o uso do cido tereftalideno dicnfora sulfnico. Entretanto, o metileno-bis-
benzotriazolil tetrametilbutilfenol e bis-etilexiloxifenol-metoxi-fenil triazina, ainda, no foram
201
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
aprovados por este rgo. Classifica-se o antranilato de mentila como filtro UVA, mas o
mesmo raramente utilizado (BARON et al., 2008; GONZLEZ et al., 2008).
As benzofenonas so cetonas aromticas e a FDA aprovou o uso da oxibenzona
(benzofenona-3) no incio da dcada de 1980. Este filtro absorve radiao no intervalo de
comprimento de onda de 270 a 350 nm, abrangendo radiao UVB e UVA2. As
benzofenonas, como classe, so consideradas filtros solares alergnicos. Apresentam baixa
substantividade e a incidncia de dermatite de contato e de reaes fotxicas alta (PALM;
O DONOGHUE, 2007).
No final da dcada de 1980 e incio da dcada de 1990 introduziu-se, no mercado, a
avobenzona. Este filtro UVA revolucionou a proteo contra a radiao UVA. Foi o primeiro
a apresentar proteo UVA-I, abrangendo o intervalo de comprimento de onda de 310 a 400
nm. Ela apresenta significante degradao frente exposio luz. Apenas 60 minutos de
exposio radiao UV reduz a efetividade do produto de 50 a 90%; assim torna-se
necessria a fotoestabilizao das formulaes. Geralmente, adiciona-se um filtro solar com
boa proteo UVB, como o salicilato de homomentila (BARON et al., 2008;
BISSONNETTE, 2008; PALM & O DONOGHUE, 2007).
Pesquisas recentes visam o desenvolvimento de novos veculos para a avobenzona
contendo estabilizantes mais efetivos. As indstrias investem no desenvolvimento de
formulaes finais, envolvendo, por exemplo, combinaes da avobenzona com octocrileno
(2-ciano-3,3`-difenilacrilato de 2etilexila). A adio do bis-etilexiloxifenol-metoxi-fenil
triazina fotoestabiliza a avobenzona. Helioplex, produto comercial da Neutrogena (diviso
da Johnson & Johnson), apresenta avobenzona fotoestvel por meio da combinao de
dietilhexil 2,6- naftalato e oxibenzona (BARON et al., 2008; BISSONNETTE, 2008; PALM;
O DONOGHUE, 2007).
O cido tereftalideno dicnfora sulfnico foi aprovado pela FDA em 2006. Este filtro
foi desenvolvido pela L`Oral e patenteado em 1982. Trata-se de um filtro orgnico
fotoestvel que absorve intervalo de comprimento de onda entre 290 e 390 nm, com pico de
absoro mxima em 345 nm. Quando o mesmo combinado com avobenzona ocorre
aumento da proteo UVA. Estudos in vivo demonstraram proteo contra o
fotoenvelhecimento e o desenvolvimento de fotodermatoses. Anthelios SX, Anthelios e
Anthelios SX 40 so exemplos de produtos contendo cido tereftalideno dicnfora sulfnico
comercializados pela La Roche Posay, diviso da L`Oral (BARON et al., 2008;
BISSONNETTE, 2008; PALM; O DONOGHUE, 2007).
202
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
2.4.4 ANTIOXIDANTES
Os antioxidantes so definidos como substncias que, quando presentes em baixas
concentraes comparadas com as de um substrato oxidvel, diminuem ou previnem
significativamente a oxidao deste substrato. Podem agir evitando a formao de radicais
livres, reparando os danos gerados por eles ou seqestrando os mesmos. Muitos produtos
cosmticos presentes no mercado apresentam antioxidantes incorporados, visando combater
os sinais de envelhecimento da pele. Atualmente, diversos trabalhos investigam a ao dos
antioxidantes na fotoproteo. Alguns estudos avaliam a ao dos mesmos na preveno da
formao de eritema cutneo por meio da determinao do valor de FPS e outros analisam
seus efeitos protetores frente aos danos moleculares gerados por estresse oxidativo induzido
pela radiao UV (GLVEZ, 2010; HALLIWELL; GUTTERIDGE, 1985; WANG et al.,
2010).
Resultados destes trabalhos indicaram que a vitamina C apresenta importante ao
sobre a peroxidao lipdica e previne eritema cutneo fotoinduzido quando incorporada em
formulaes tpicas. Em associao com a vitamina E, eleva a eficcia fotoprotetora da
mesma. Matsui e colaboradores, 2009, avaliaram o efeito da vitamina C, vitamina E, cafena e
leo essencial de camomila em fotoprotetores com FPS 25. No foi verificada diferena
significativa entre fotoprotetores com e sem adio destes antioxidantes quanto reduo do
nmero de clulas de Langerhans, porm em relao reduo da expresso de MMP-1
203
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
2.4.5.4 NANOPARTCULAS
Nos ltimos anos, verificou-se o uso crescente de nanomateriais em componentes
eletrnicos, preparaes antifngicas, antimicrobianas, cosmticos, entre outros.
Nanopartculas so partculas nicas com dimetro abaixo de 100 nm que representam um
subgrupo dos nanomateriais, seus aglomerados podem apresentar tamanhos superiores a 100
nm. Nanopartculas insolveis com dimetro entre 50 e 200 nm, representadas principalmente
por dixido de titnio (TiO2) e xido de zinco (ZnO), so utilizadas em fotoprotetores. A
reflexo da radiao UV pelo TiO2 mais eficiente em partcula com tamanho entre 60 e 120
nm. O ZnO , geralmente, utilizado em partcula com tamanho entre 30 e 200 nm. O uso
dessas nanopartculas em fotoprotetores melhorou a aparncia esbranquiada dos
fotoprotetores tradicionais e criou um veculo mais transparente, menos viscoso e com melhor
espalhabilidade sobre a pele, o que melhorou a aceitabilidade do mesmo por parte dos
consumidores (NEWMAN et al., 2009; NOHYNEK et al., 2008).
Muitos toxicologistas creditam os riscos das nanopartculas inalao das mesmas por
meio da poluio e do aquecimento de alimentos, com consequente deposio e inflamao
no trato respiratrio, entretanto, o potencial danoso da aplicao de nanopartculas na
epiderme no pode ser ignorado. Este efeito resultado do tamanho das mesmas, da
habilidade de escapar dos mecanismos de defesa imunolgica e de formar complexos com
protenas, e principalmente, da capacidade de induzir a formao de radicais livres
(NEWMAN et al., 2009).
Alguns trabalhos de reviso sugeriram um potencial de penetrao na pele humana das
nanopartculas aplicadas topicamente, com produo de risco sade sistmica. Tambm,
sugeriram que estas podem penetrar na pele e serem distribudas por todo o corpo pelo
sistema circulatrio. A penetrao de materiais no estrato crneo limitada pelo tamanho
molecular. O espao intercelular entre as clulas do estrato crneo aproximadamente
100 nm3 e pode ser ampliado com aplicao tpica de diversos produtos, fato que motiva as
discusses sobre a penetrao das nanopartculas no estrato crneo. Um trabalho
206
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
3. OBJETIVOS
O presente trabalho teve por objetivo avaliar a eficcia fotoprotetora in vitro (FPS
estimado), por espectrofotometria de reflectncia difusa e anlise espectrofotomtrica de
solues diludas (mtodo de Mansur), de seis extratos gliclicos (ch verde, erva mate,
ginco, menta, prpolis e rom) de uso cosmtico, incorporados em formulaes fotoprotetoras
(emulses O/A).
4. MATERIAL E MTODOS
4. 1 Material
4.1.1 Equipamentos / Acessrios
- Balana analtica Sartorius (BL - 210S) Sartorius;
- Balanas semi-analticas Mettler (P - 120) Mettler e Scientech (SA210) Quimis;
- Banho ultrassnico Ultrasonic Cleaner - Unique Modelo 1600a;
- Cmera digital PowerShot A470 Canon 7.1 Megapixels;
- Destilador de gua (106) Fabbe;
- Espectrofotmetro UV-1203 UV/Vis Shimadzu com cubeta de quartzo com caminho ptico
de 1 cm - Beckman Coulter;
208
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
4. 2 Mtodos
4.2.1 Desenvolvimento das formulaes
O desenvolvimento das formulaes envolveu a elaborao de 21 emulses leo em
gua (O/A) estveis, macroscopicamente, durante o perodo de anlise das mesmas. Optou-se
pelo desenvolvimento deste tipo de preparao porque a mesma promove a maior proteo
solar possvel devido ao melhor desempenho do filme formado sobre a pele. A escolha da
apresentao leo em gua (O/A) ocorreu devido ao fato da mesma ser considerada o veculo
mais adequado e utilizado para o preparo de fotoprotetores (MUNDSTOCK; FRASSON,
2005).
As matrias-primas utilizadas no preparo das emulses encontram-se dispostas no
Quadro 2 que indica a porcentagem e a fase correspondente de incorporao das mesmas nas
emulses, alm de seus nomes comerciais, qumicos e a nomenclatura INCI (International
Nomenclature of Cosmetic Ingredients). O Quadro 3 resume as funes cosmticas, ou seja,
o estudo crtico dessas matrias-primas.
Aps a seleo dos componentes das emulses, procedeu-se com o preparo das
mesmas. Os componentes foram separados de acordo com as seguintes propriedades:
temperatura de fuso, suscetibilidade oxidao, evaporao ou degradao e solubilidade
em gua ou leo. Cera auto-emulsionante no-inica, bis-etilexiloxifenol metoxifenil triazina,
BHT e triglicrides do cido cprico/caprlico constituram a fase oleosa caracterizada pela
presena de componentes lipossolveis. Propilenoglicol, EDTA dissdico e gua destilada
formaram a fase aquosa constituda por componentes hidrossolveis e passveis de
aquecimento. A mistura de alquil parabenos e fenoxietanol e os extratos gliclicos foram
incorporados s emulses durante seu perodo de resfriamento com temperaturas inferiores a
40 C.
Os componentes da fase aquosa foram pesados em balana semi-analtica e
transferidos para bqueres de 250 mL. As matrias-primas da fase oleosa foram igualmente
pesadas em balana semi-analtica, com exceo do bis-etilexiloxifenol metoxifenil triazina
que foi pesado em balana analtica, e transferidas para recipientes de ao inox. As duas fases
foram aquecidas, individualmente, em bico de bunsen at a temperatura de 70 C controlada
210
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
com o auxlio de um termmetro. Em seguida, a fase aquosa foi vertida lentamente sobre a
fase oleosa em forma de fio constante e sob agitao manual permanente, que perdurou at a
formao da emulso final. Aps o resfriamento das emulses at a temperatura de 35 C,
incorporaram-se, sob agitao manual constante, a mistura de alquil parabenos e fenoxietanol
e os extratos gliclicos. Ajustou-se o valor de pH das formulaes para 6,0 1,0 com adio
de trietanolamina ou soluo de cido ctrico 10,0% p/p e as mesmas foram envasadas e
rotuladas permanecendo em repouso por 48 horas antes das anlises in vitro da determinao
do FPS (LACHMAN et al., 2001).
As 21 emulses desenvolvidas, com suas composies quali e quantitativas (% p/p),
encontram-se reunidas no Quadro 4. As formulaes A, A1 e A2 correspondem,
respectivamente, formulao base (sem adio do filtro solar e dos extratos gliclicos),
formulao base aditivada com 2,5 % do filtro solar e formulao base aditivada com 5,0 %
do filtro solar. As formulaes B, B1, B2, so, respectivamente, idnticas s formulaes A,
A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p do extrato gliclico de ch verde. O mesmo
procedimento foi adotado para os demais extratos gliclicos, assim, os grupos de formulaes
(C, C1 e C2), (D, D1 e D2), (E, E1 e E2), (F, F1 e F2) e (G, G1 e G2) representam,
respectivamente, formulaes aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de erva-mate,
ginco, menta, prpolis e rom. O preparo das emulses foi realizado em triplicata. As mesmas
foram fotografadas, aps 48 horas de repouso, tempo necessrio para a finalizao do
processo de emulsificao, por cmera digital PowerShot A470 Canon sob iluminao da
capela de exausto do Laboratrio de Farmacotcnica e Cosmetologia da Universidade de So
Paulo.
211
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Quadro 2 - Matrias-primas empregadas no desenvolvimento das emulses (CIBA, 2002; CRODA, 2010)
Quadro 3 - Estudo crtico das matrias-primas empregadas no desenvolvimento das emulses (CIBA, 2002; CRODA, 2010)
Crodamol GTCC 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0
Propilenoglicol 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0
ButilHidroxiTolueno 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Uniquelan NA2S 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Phenova 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Escalol S ou Tinosorb S ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0 ---- 2,5 5,0
Extrato gliclico de ch verde ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0 ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ----
Extrato gliclico de erva-mate ---- ---- ---- ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0 ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ----
Extrato gliclico de ginco ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0 ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ----
Extrato gliclico de menta ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0 ---- ---- ---- ---- ---- ----
Extrato gliclico de prpolis ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0 ---- ---- ----
Extrato gliclico de rom ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- ---- 10,0 10,0 10,0
320
FPS = FC x EE () x I () x abs ()
290
Equao 3 Clculo do FPS pelo mtodo de solues diludas (mtodo de Mansur). Onde
FC = fator de correo; EE = efeito eritemognico da radiao no comprimento de onda ();
I: Intensidade do sol no comprimento de onda (); Abs: leitura espectrofotomtrica da
absorbncia da soluo do filtro solar no comprimento de onda () (MANSUR et al., 1986).
Labsphere - UV 2000S
(H)
(I)
(F)
(G)
Figura 13 - Etapas envolvidas no preparo das placas de PMMA e anlise das mesmas em espectrofotmetro de reflectncia difusa (LABSPHERE, 2010)
218
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
5. RESULTADOS E DISCUSSO
Comprimento de onda/ nm
Figura 15 Comportamento do bis-etilexiloxifenol metoxifenil triazina na regio ultravioleta
do espectro (CIBA, 2002)
Tabela 1 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de ch verde
A A1 A2 B B1 B2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes B, B1 e B2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de ch
verde.
222
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 2 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de erva-mate
A A1 A2 C C1 C2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes C, C1 e C2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de erva-
mate.
223
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 3 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de gliclico de ginco
A A1 A2 D D1 D2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes D, D1 e D2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de
ginco.
224
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 4 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de menta
A A1 A2 E E1 E2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes E, E1 e E2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de menta
225
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 5 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de prpolis
A A1 A2 F F1 F2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes F, F1 e F2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de
prpolis
226
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 6 - Avaliao comparativa das caractersticas fsicas das emulses sem adio de extratos e das aditivadas com extrato de rom
A A1 A2 G G1 G2
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 correspondem, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar ou extrato gliclico), base
mais 2,5% p/p de filtro solar (Bis-Ethylhexyloxyphenol Methoxyphenyl Triazine - EscalolS) e base mais 5,0% p/p do mesmo filtro. As
formulaes G, G1 e G2 so, respectivamente, idnticas s formulaes A, A1 e A2, porm aditivadas com 10,0% p/p de extrato gliclico de rom
227
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
prpolis (F2) e rom (G2) apresentaram valores de FPS estimado estatisticamente iguais entre
si e distintos dos valores das demais formulaes. Os valores obtidos oscilaram na faixa de
6,13 a 7,57, indicando uma elevao no valor de FPS quando comparado com os valores dos
grupos de formulaes (A, B, C, D, E, F e G) e (A1, B1, C1, D1, E1, F1 e G1). Esse
aumentou ocorreu devido maior porcentagem do filtro solar (5% p/p) utilizada nessas
formulaes. Nenhum dos extratos gliclicos avaliados apresentou interao com o filtro solar
na propores utilizadas, elevando ou diminuindo o valor de FPS.
A anlise comparativa dos resultados das formulaes que continham 2,5% p/p do
filtro solar com aquelas que continham 5,0% p/p do mesmo revelaram que o valor de FPS das
formulaes com a mxima proporo do filtro foi, praticamente, o dobro do valor das
formulaes com a concentrao mnima do filtro. Houve uma relao diretamente
proporcional entre a proporo utilizada do filtro e o valor de FPS obtido, entretanto, a
proporo utilizada dos extratos (10,0 % p/p) no alterou o valor do FPS.
229
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Figura 16 Anlise comparativa do Fator de Proteo Solar (FPS) das formulaes desenvolvidas (emulses) analisadas pelo mtodo de Mansur
10
9 c c c c c
8 c c
7
6 b
5 b b
b b b b
4
3
(FPS) estimado
2
Formulaes
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 representam, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar e de extratos gliclicos),
formulao base aditivada com 2,5 % p/p de filtro solar e formulao base aditivada com 5,0 % p/p de filtro solar. As trades de formulao (B, B1
e B2), (C, C1 e C2), (D, D1 e D2), (E, E1 e E2), (F, F1 e F2) e (G, G1 e G2) so idnticas trade (A, A1 e A2), porm aditivadas,
respectivamente, por 10,0 % p/p de extrato gliclico de ch verde, erva-mate, ginco, menta, prpolis e rom. Letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos
231
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Figura 17 Anlise comparativa do Fator de Proteo Solar (FPS) das formulaes (emulses) analisadas por espectrofotometria de refletncia
difusa
10 b
b b
9
b
8 b b
7 ab
ab
6 ab
5 ab ab
ab
4 ab ab
3
(FPS) estimado
2 a a a a a a a
Formulaes
Legenda: As formulaes A, A1 e A2 representam, respectivamente, formulao base (sem adio de filtro solar e de extratos gliclicos),
formulao base aditivada com 2,5 % p/p de filtro solar e formulao base aditivada com 5,0 % p/p de filtro solar. As trades de formulao (B, B1
e B2), (C, C1 e C2), (D, D1 e D2), (E, E1 e E2), (F, F1 e F2) e (G, G1 e G2) so idnticas trade (A, A1 e A2), porm aditivadas,
respectivamente, por 10,0 % p/p de extrato gliclico de ch verde, erva-mate, ginco, menta, prpolis e rom. Letras diferentes indicam resultados
estatisticamente distintos
233
Captulo 3 Avaliao in vitro da eficcia fotoprotetora de extratos gliclicos
Tabela 9 Anlise comparativa dos valores de FPS determinados por Mansur e por
Labsphere UV-2000S
6. CONCLUSES
As metodologias empregadas para a determinao do Fator de Proteo Solar (FPS) de
formulaes fotoprotetoras contendo ou no extratos gliclicos de ch verde, erva-mate,
ginco, menta, prpolis e rom apresentaram resultados semelhantes que demonstraram a
ausncia de sinergismo entre os extratos gliclicos avaliados e o filtro solar de amplo espectro
bis-etilexiloxifenol metoxifenil triazina (Escalol S) nas propores utilizadas. O valor do
FPS foi proporcional quantidade de filtro utilizado nos resultados gerados pelo mtodo de
Mansur. Formulaes com ou sem adio dos extratos gliclicos e com 2,5% p/p do filtro
solar apresentaram FPS variando no intervalo de 3,57 a 4,07; enquanto que, aquelas que
continham 5,0% p/p do filtro aditivadas ou no de extrato gliclico apresentaram FPS
variando na faixa de 6,13 a 7,57. Os resultados gerados pelo espectrofotmetro de reflectncia
difusa indicaram FPS variando no intervalo de 6,0 a 7,0 para as formulaes com 5,0% p/p de
filtro aditivadas ou no de extrato gliclico. FPS variando no intervalo de 3,0 a 4,5 foi
observado nas formulaes que continham 2,5% p/p do filtro solar com ou sem adio dos
extratos.
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