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ESTUDIO MICROSCOPICO DE LAS BACTERIAS Y SISTEMAS DE COLORACION

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01/09/2004
INTRODUCCION

Las bacterias son microorganismos unicelulares sencillas, que diferencia de las clulas
humanas carecen de organelos intracelulares recubiertos de membrana, como el ncleo,
por lo que sus actividades fundamentales se realizan dentro del citoplasma y la cubierta
de las mismas. En general las bacterias que carecen de ncleo verdadero se clasifican
como procariotas.

Las diferencias entre clulas humanas y bacterianas es muy importante para la


elaboracin de antibiticos, o simplemente para proteger al hombre de las enfermedades
que stas producen, por lo cual se requiere de un amplio estudio de las mismas para
determinar su funcionamiento, sus caractersticas y su morfologa.

Para realizar estudios microscpicos de bacterias se requiere de sistemas de coloracin


para poder apreciar su estructura, forma, y morfologa utilizando diferentes tipos de
coloraciones simples diferenciales y estructurales, las cuales permiten identificar, un tipo
de estructura determinada o diferenciar bacterias entre s.
OBJETIVOS

- OBJETIVO GENERAL:

Identificar y clasificar morfolgicamente los diferentes tipos de bacterias empleando


diversos sistemas de coloracin de acuerdo a lo que se desea investigar.

- OBJETIVOS ESPECFICOS:

Realizar un montaje en fresco a partir de agua sucia estancada


Preparar frotis a partir de cultivos bacterianos en medios slidos y lquidos
Realizar frotis a partir de secrecin faringea
Teir los diferentes frotis con las correspondientes tinciones
Clasificar morfolgicamente los microorganismos de las muestras en estudio.
1. MARCO TEORICO

Las bacterias son los organismos unicelulares ms pequeos capaces de duplicarse por
si solos a expensas del medio que les rodea. Las bacterias se caracterizan porque
carecen de organelos intracelulares recubiertos de membrana y las actividades
fundamentales de metabolismo y biosntesis son realizadas dentro del citoplasma y de la
cubierta celular.

Por lo general cada bacteria de nombra por su gnero y especie, y en algunos casos las
bacterias de subdividen en estereotipos y subespecies conforme a los antgenos
superficiales, su capacidad para causar estados de enfermedad con los cuales se
relacionan en forma nica o por sus caractersticas metablicas o biosintticas.

La mayor parte de las bacterias se identifican en forma inicial hacindolas crecer en un


cultivo puro o en un medio artificial y despus se examina la forma y el color de las
mismas mediante la colocacin de una muestra del cultivo en un portaobjetos y su tincin.
En casi todos los casos el procedimiento inicial clave es la tincin o coloracin de las
muestras (Frotis teido), aunque se puede hacer un examen en fresco.

1. Examen en Fresco: se utiliza para observar las caractersticas de movilidad,


presencia de cpsulas etc. En estos montajes muchas veces no se aprecian muy bien
las clulas, debido a la falta de contraste por eso es necesario realizar las tinciones.

2. Frotis Teido: el estudio del frotis fijado y teido es de gran utilidad, ya que permite
determinar la forma, tamao, disposicin, formacin de esporas, ubicacin, nmero de
flagelos y la composicin de la pared celular, por su comportamiento frente a las
coloraciones de Gram o Zielh- Neelsen. La clula bacteriana se tie fcilmente con
colorantes bsicos como el cristal violeta, azul de metileno y Fucsina bsica, pero se
tie pobremente, con colorantes cidos como la eosina, esto se debe al carcter cido
del protoplasma de la clula.

Se conocen varios tipos de coloracin como:

1. Coloracin Simple: utiliza un solo colorante y las clulas se observan todas de un


mismo color.
Ejemplo: coloracin de azul de metileno, tincin con plata.
2. Coloracin Diferencial: utiliza dos colorantes, primero acta un colorante sobre las
clulas bacterianas, luego, viene un proceso de decoloracin con alcohol, y por ultimo
acta otro colorante como contraste. Las clulas dependiendo de la composicin
qumica de la pared celular van a toma el color del primer colorante o del colorante de
contraste.
Ejemplo: Coloraciones de Gram y Zielh-Neelsen, Koster.
3. Coloracin de Estructuras: se usa para identificar la presencia de ciertas
estructuras en la clula bacteriana tales como esporas o cpsulas.
Ejemplo: Schaeffer-Fulton y Hiss, Schiff Acido perydico.
2. PROCEDIMIENTO

El estudio microscpico de las bacterias y los sistemas de tincin empleados se pueden


dividir en 3 pasos:

- Montaje en fresco
- Frotis
- Coloraciones o tinciones.

2.1 MONTAJE EN FRESCO

Obtencin de Muestra Agua sucia


estancada

Aplicacin de la
Portaobjetos
Muestra y cubreobjetos

Observacin 10X y 40X

Anotaciones

Para realizar un montaje en fresco se toma una muestra de agua sucia estancada, se
aplica sobre un portaobjetos y se cubre con un cubreobjetos para su posterior
observacin con el objetivo 10X y 40X. Finalmente se analiza y reporta lo observado.
2.2 FROTIS Y COLORACIONES

2.2.1. Frotis de secrecin faringea con azul de Metileno

Amgdalas,
Obtencin de Muestra Bajalenguas
Escobilln

Aplicacin de
la Muestra Portaobjetos

Secado T Ambiente

Fijacin 3 veces por calor

Azul de Metileno 2 minutos

Lavado Agua Destilada

Secado T Ambiente

Objetivo de
Observacin Inmersin.

Anotaciones
El frotis de secrecin faringea requiere de una muestra obtenida de la parte interna de la
boca usando bajalenguas y escobilln para luego ser aplicada en un portaobjeto
dejndola secar a temperatura ambiente y luego fijarse con calor.

Posteriormente se colorea la muestra con azul de Metileno, que recubre la muestra


durante dos minutos, luego es lavada con agua destilada, secada a temperatura ambiente
y observada usando el objetivo de inmersin. Finalmente de acuerdo a las observaciones
se reporta lo observado.
2.2.2. Cultivo en medio lquido. 2.2.3. Cultivo en medio slido

Esterilizacin Marcar Nombre Marcar Esterilizacin


de asa redonda portaobjeto Grupo y portaobjeto asa en
fecha punta

Tomar la Proteus sp 1 gota Agregar Tomar la


muestra solucin salina muestra

Aplicacin de Mezclado de
la muestra La muestra

Extensin Extensin

Secado T Ambiente Secado

Fijacin Fijacin
3 veces por calor

Enfriamiento Enfriamiento

TINCION DE GRAM

Para realizar frotis a partir de cultivos bacterianos se debe esterilizar un asa redonda (m.
lquido), o en punta (m. slido), colocar la muestra en el portaobjetos (debidamente
marcado) , bien sea directamente o diluido en soluciones salinas para el caso del medio
slido. Posteriormente se seca al aire libre, se fija por calor, se enfra para luego teir
Gram.
- Tincin de Gram.
TINCIN DE GRAM

Cristal Violeta 1 min.

Lavado Agua Destilada

Lugol 1 min.

Lavado Agua Destilada

Alcohol Acetona 14 seg.

Lavado Agua Destilada

Safranina de Gram 30 seg.

Lavado Agua Destilada

Secado T Ambiente

Observacin Objetivo de
inmersin

Anotaciones

La tincin de Gram emplea 1 ml de cristal violeta, un lavado con agua destilada, luego se
adiciona Lugol por un minuto, se lava con agua destilada, se decolora con alcohol
acetona durante 14 segundos, se lava con agua destilada, se adiciona Safranina de
Gram durante 30 segundos, se lava con agua destilada, y se seca a temperatura
ambiente. Finalmente al realizar los frotis de cultivo en medio lquido y en medio slido
teidos con la tcnica de Gram, se analiza y se reporta lo observado para las dos
muestras.
Frotis de tierra con coloracin Zielh Neelsen.

Frotis de tierra

T Ambiente
Secado y Fijacin 3 veces por calor

Calentamiento
Fucsina Bsica Hervir 10 min.

Enfriamiento

Lavado Agua Destilada

Alcohol Acido Decoloracin

Lavado Agua Destilada

Azul de Metileno 2 min.

Lavado Agua Destilada

Secado T Ambiente

Observacin Objetivo de
inmersin

Anotaciones

Se realiz un frotis de tierra que fue secado a temperatura ambiente, fijado con calor,
luego fue recubierta la muestra con Fucsina bsica, y fue calentada hasta emisin de
vapores sin dejar de hervir durante 10 minutos. Luego fue enfriada la muestra y lavada
con agua destilada para ser decolorada con alcohol cido y nuevamente ser lavada con
agua destilada. Posteriormente la muestra fue cubierta con azul de metileno durante dos
minutos, lavada con agua destilada, secada a temperatura ambiente y observada con el
objetivo de inmersin anotando finalmente lo observado.
2.2.4. Frotis de Bacillus subtilis en coloracin de Shaeffer Fulton (Esporas)

Frotis de Bacillus subtilis

Secado y fijacin T Ambiente


3 veces por calor
Calentamiento
Verde de Malaquita Durante 30 seg

Enfriamiento T Ambiente

Lavado Agua Destilada

Safranina al
1 min
0.5%

Lavado Agua Destilada

Secado T Ambiente

Observacin Objetivo de
inmersin

Anotaciones

Para la tincin de ShaefferFulton se realiz un frotis de Bacillis subtilis en un


portaobjetos, se sec y se fij con calor, luego se cubri con verde de malaquita
calentndose por 30 segundos para un posterior enfriamiento, y lavado con agua
destilada. Posteriormente se adicion safradina al 0.5% por un minuto, se lav con agua
destilada, se dej secar a temperatura ambiente y se observaron sus caractersticas con
el objetivo de inmersin.
2.2.5. Frotis de Klebsiella Pneumonie con coloracin de Hiss (cpsula)

Frotis de Klebsiella pneumonie

Secado T Ambiente

Fijacin T Ambiente

Sln acuosa de
Colorante de Hiss Cristal violeta 1%

Sln acuosa de
Lavado Sulfato de Cobre 20%

Secado T Ambiente

Observacin Objetivo de
. inmersin

Anotaciones

Para la coloracin con Hiss se realiz un frotis de Klebsiella Pneumonie se sec a


temperatura ambiente sin fijacin con calor, luego se adicion colorante de Hiss, el cual
consiste en una solucin acuosa de cristal violeta al 1%, para luego ser lavada con sulfato
de cobre al 20%, ser secada a temperatura ambiente y ser observada con objetivo de
inmersin.
3. RESULTADOS

3.1 MONTAJE EN FRESCO

Al observar la muestra de agua sucia estancada con el objetivo de 10X se pudo observar
pequeas manchas o sucios del agua pero no era posible distinguir algn tipo de
microorganismo, al igual cuando se observ con el objetivo de 40X se increment el
aumento y se vean mucho ms las partculas sucias del agua, pero no se poda definir ni
clasificar morfolgicamente ningn tipo de microorganismo, slo se apreciaba pequeos
movimientos de partculas.

3.2. FROTIS Y COLORACIONES

3.2.1 . Cultivo en medio lquido teido con Gram.


A l observar la muestra de un cultivo de Proteus sp en medio lquido se pudo diferenciar
en mayor cantidad cocos, diplococus y streptococus teidos de rojo, pero tambin se
observaron microorganismos teidos de violeta oscuro, bacillus y diplobacillus en menor
proporcin.

3.2.2. Cultivo en medio slido teido con Gram.


Al observar con el objetivo de inmersin (100X) una muestra de Bacillus cereus se
distinguan grandes cantidades de Bacillus, diplobacillus y bacillus de empalizada teidos
de color violeta oscuro, y muy pocos streptococus teidos de rojo.

3.2.3. Frotis de secrecin faringea teido con azul de metileno.


Al observar con el objetivo de 100X la muestra, se vieron pequeas partculas teidas de
azul y algunos cocos. Esas partculas parecan clulas teidas de un solo color.
3.2.4. Frotis de tierra teido con Zielh-Neelsen.
Al observar con el objetivo de inmersin (100X) se observaban pequeas estructuras de
color tierra, algunas teidas de azul y otras no. No se pudo diferenciar claramente algn
tipo de microorganismo en la muestra.

3.2.4. Frotis de Bacillus subtilis con coloracin de Shaffer- Fulton.


Al observar la muestra con objetivo 100X se diferenciaban bacilos de color rojizo con una
pequea esfera verde en su interior, es decir una espora (endoespora).

3.2.5. Frotis de Klebsiella pneumonie con coloracin de Hiss.


Al observar con el objetivo de inmersin (100X) se observ todo el microorganismo de
color morado muy intenso rodeado de un azul cielo en forma de unos delgados alambres
en todas partes de la muestra, con pequeas florecillas de color claro en algunos de los
alambres azul claro y algunas partes era brillante.
4. ANALISIS DE RESULTADOS

4.1 MONTAJE EN FRESCO.

En esta observacin no se pudo distinguir estructuras bacterianas debido a la falta de


contraste, esto se debe a que el montaje en fresco tiene como fin observar movilidad, lo
cual se present, pero no permite apreciar en forma definida clulas, ya que para esto es
necesario teirlas.

4.2. FROTIS Y COLORACION.

4.2.1. Cultivo en medio lquido teido con Gram.

En las estructuras observadas del cultivo Proteus sp se distinguan bacillus de color


violeta, es decir Gram positivo, mientras que los cocos los cuales se encontraban en
mayor cantidad (rojas) son Gram negativos, es decir los cocos presentan en su estructura
poca cantidad de pptido glucano, permitiendo su coloracin al agregar alcohol acetona,
tomando luego el color de la safranina de Gram. Por lo tanto se puede deducir que los
cocus, streptococus y sthapylcocus observados poseen poco pptido glucano, poseen
periplasma y una membrana externa que los diferencia, por medio de la tincin de Gram
de otros microorganismos como los bacilos.

4.2.2.. Cultivo en medio slido teido con Gram.

Al observar la muestra de Bacillus cereus se distinguan grandes cantidades de bacilos


teidos de violeta, es decir, Gram positivo, lo cual permite clasificarlos porque en su pared
celular contiene 90% de mureina a diferencia de los cocos, por lo cual tomaron el color
cristal violeta resistiendo a la decoloracin con alcohol acetona.
4.2.2. Frotis de secrecin faringea
Al observar la muestra del frotis faringeo teida de azul se observ como una especie de
clulas teidas de azul y algunos pocos cocos.

4.2. Frotis de tierra teido con Zielh-Neelsen.

Al observar la muestra de tierra teida con Zielh-Neelsen no se pudo apreciar ningn


microorganismo, pero en realidad se debieron observar pequeos bacilos, de los cuales
algunos se deberan haber teido de color fucsia o rojo (bacilos cido alcohol resistentes),
mientras que los bacilos que se encuentren teidos de color azul, son bacilos no cido
alcohol resistentes.

4.3.5. Frotis de Bacillus subtilis con coloracin de Shaffer-Fulton


Al observar la muestra de este microorganismo se observ una estructura verde en su
interior, lo cual indica la formacin de esporas es decir, este microorganismo desarroll su
forma esporulada. El tipo de espora formada por el Bacillus subtilis es la endoespora, y su
alrededor se encuentra en forma vegetativa lo cual se tie de un color rojo. En este
estado, el Bacillus subtilis no realiza metabolismo, sino que se encuentra dormida. En el
proceso de tincin e microorganismo desarroll la espora debido a que fue sometida al
calor del mechero durante 30 segundos y de esta forma protegerse.

4.3.6. Frotis de Klebsiella pneumonie con coloracin de Hiss.


Al observar la Klebsiella pneumonie, sta se observ de color violeta, mientras que los
pequeos hilos que se encontraban a su alrededor se observaban de azul claro, las
cuales son cpsulas, es decir, estructuras facultativas que envuelven al microorganismo
sin interferir en su permeabilidad, proporcionndole caractersticas de adherencia,
resistencia, caractersticas antignicas y virulencia. Igualmente en las observaciones
realizadas en el microscopio todo microorganismo que tenga cpsula es brillante y
hmedo. La cpsula de los microorganismos es importante en la especifidad de tipo de la
inmunidad, ya que no se puede inmunizar contar todo, sino contra uno o ms tipos
capsulares determinados. Tambin se debe tener en cuenta la composicin antignica de
las cpsulas, ya que hay distintos tipos de cpsula que se diferencian en la forma de los
polisacridos que la cpsula.

5. CUESTIONARIO.

1. Mencione el fundamento qumico celular de la coloracin de Gram.

RTA: La tincin de Gram es una tcnica de coloracin usada para examen microscpico
directo de muestras y subcultivos. Esta tcnica diferencial est basada en las
caractersticas qumicas y estructurales de la pared celular. El microbiologo Cristian Gram
descubri que al haber un preparado microscpico sucesivamente con un colorante
violeta, un fijador, un lavado con alcohol y un colorante de contraste rosa o rojo, algunas
bacterias aparecan violetas y otras rosadas.

Las clulas bacterianas fijadas por calor en un portaobjetos se tien de cristal azul violeta
(violeta de Genciana) que sirve como colorante primario y se une a la pared celular
bacteriana cuando se trata la llamada Disolucin de Lugol ( yodo y yoduro de potasio),
que sirve como mordiente para la unin del colorante, esto se debe a que el yodo forma
un complejo con el colorante azul que es insoluble en agua, pero soluble en etanol o
acetona.

Algunas especies de bacterias debido a la naturaleza qumica de sus paredes celulares


tienen la capacidad de retener el cristal violeta, incluso del tratamiento con un decolorante
orgnico, es decir, al adicionar alcohol, este no puede penetrar las paredes celulares de
algunas bacterias ( Bacterias Gram positivas) debido a su estructura gruesa, hidroflicas y
libres de lpidos; pero en cambio, si se puede difundir a travs de la pared celular rica en
lpidos de algunas bacterias ( Gram negativas). Como consecuencia el tratamiento con
alcohol disuelve y elimina los complejos de yodo colorante de las bacterias Gram
negativo pero no el de los Gram positivos, por lo tanto para que este tipo de bacterias
puedan ser visualizados se les debe teir con un colorante de contraste como Safranina o
Fucsina bsica.

Al final del proceso las bacterias o clulas que retienen el primer colorante (cristal azul
violeta) y se tien de violeta o azul oscuro se llaman Gram positivas, mientras que las
clulas que se tien con el colorante de contraste o segundo colorante, que aparecen
teidas de rojo se llaman Gram negativas.

Cuando estas reacciones de coloracin de Gram son observadas junto con el tipo (cocos
y bacilos) y la disposicin de las clulas bacterianas, pueden ser usadas para realizar
identificaciones presuntivas. Adems, la coloracin de Gram tambin puede ser utilizada
para identificar formas no bacterianas, como las tricomonas, larvas estrogiloides y otros
Parsitos.

Todos los resultados de la tincin de Gram estn condicionadas en cierta medida al


estado fisiolgico de la clula, pero tambin corresponde con diferencias fundamentales
en la composicin qumica y ultraestructura de sus paredes celulares.

2. Cual es la finalidad de fijar con calor los frotis bacterianos?

RTA: Cualquier tincin precisa una fijacin previa de la preparacin, que en la mayora de
los casos se hace a la llama y en el caso de cpsulas termolbiles con alcohol metlico.

Con la fijacin se pretende adherir fuertemente la preparacin al portaobjetos, matar al


germen (por precaucin en el caso de las esporas carbuncosas), conservar las
estructuras visibles de la clula y mejorar su capacidad de tincin. En un proceso de
fijacin no se puede evitar la muerte celular, pero se presenta a la clula de la
descomposicin, manteniendo su estructura morfolgica.
3. Cual es la importancia del lugol en la tcnica de Gram?

RTA: El lugol es una solucin dbil de yodo (yodo y yoduro de potasio), el cual sirve
como mordente para la unin del colorante formando un complejo con este (cristal azul
violeta), es decir, se utiliza para fijar la tincin. Por lo general, la solucin de lugol se
encuentra a un 3% de I2 y KI.

4. Qu son los colorantes cidos y bsicos y como actan?

RTA: Los colorantes cidos y bsicos son compuestos orgnicos, los cuales indican si
una parte de una determinada molcula es catinica (bsicos) o aninica (cidos), de esta
forma los colorantes cidos se usan para teir sustancias bsicas o cargadas
positivamente, mientras que los colorantes bsicos se usan para teir sustancias cidas o
cargadas negativamente. Algunas sustancias cargadas negativamente son en general las
superficies celulares, mientras que dentro de las sustancias bsicas encontramos la
estructura citoplasmtica. Algunos colorantes son, cidos : eosina y bsicos: azul de
metileno.

5. Qu otras tcnicas de coloracin se conocen para observar estructuras o tipos


de microorganismos?

RTA: Se distinguen varios tipos de coloraciones: las coloraciones simples, diferenciales y


coloracin de estructuras. Dentro de esta gran variedad de coloraciones se encuentran
las siguientes tcnicas de coloracin:

Tincin de Koster: Este tipo de tincin se emplea para la diferenciacin de brucelas


y es una de las pocas tinciones que proporciona un diagnstico puramente
microscpico . en esta tincin, la preparacin fijada se tie con safranina alcalina, se
decolora con cido sulfrico diluido y finalmente se tie en contraste con azul de
metileno. De esta forma, las brucelas y las nickettsias se ven como pequeas
estructuras cocoides rojas localizadas intracelularmente, ante un fondo azul claro.
Tinciones Fluorocromicas para microbacterias: Los colorantes fluorocrmicos
anamina y rodamina se emplean para detectar bacilos resistentes a cido. Al aplicar
estos colorantes, las clulas bacterianas se ven amarillas contra un fondo negro, en el
que el permanganato de potasio se utiliza como colorante de contraste. Las tinciones
de cido resisten como estas tambin pueden ser empleadas para identificar
microorganismos no bacteriano.

Tinciones con plata: Algunos microorganismos no se tien bien por mtodos


convencionales debido a que son muy delgados, como la Borrelia burgdorferi, o se
encuentra en muy baja concentracin y no puede detectarse, en especial algunos
tipos de espiroquetas. La tincin de plata se usa para observar este tipo de
microorganismos en cortes de tejidos; utiliza los colorantes de impregnacin Warthin-
Starry y Steiner evidenciando las espiroquetas fijadas con formalina. Con este tipo de
tincin, las espiroquetas como la Borrelia burgdorferi se tien de negro contra un
fondo amarillo tostado.

Tincin de naranja de Acridina (AO) ; se utiliza con frecuencia para detectar


bacterias en extendidos preparados a partir de lquidos y exudados en los que se
espera encontrar bacterias de bajas concentraciones, o atrapados en un grueso
agregado de restos, lo que hace difcil verlos por tinciones convencionales. Esta
tincin es recomendada para el examen de cultivos de sangre en medio lquido,
porque la tcnica es suficientemente sensitiva, incluso, es ms sensitiva que la tincin
de Gram.

Tincin de blanco de calco flor: Esta tincin utiliza el blanco de color flor, el
cual es una sustancia incolora utilizada por su fluorescencia, ya que por medio de esta
se pueden detectar hongos en preparados hmedos, en extendidos y en corte de
tejido. Tambin se utiliza mucho esta tcnica para detectar clulas de levadura, hifas
y seudohifas en raspado de piel y membranas mucosas. Cuando se observan
microscpicamente presentan un brillo verde manzana, o blanquecino fantasmal. Esta
tincin tiene la ventaja de que las secciones de tejido puedan ser teida con
coloracin de cidos o cualquier otra tincin especial sin interferir; adems
proporciona una buen definicin de estructuras fngicas finas y un mejor contraste
con respecto al fondo.

Tincin de Wright-Giemsa: Esta tintura (Wright Giemsa) se usa para teir


elementos celulares en extendios de sangre perifrica. Se usa mucho para detectar
las levaduras intracelulares de Histoplasma capsulatum..

Tincin Schiff- Acido perydico: esta tincin se basa en la oxidacin de hexosas y


hexosamina por el cido perydico. La mayora de sustancias que contienen hexosas
y hexosaminas se tien de rojo contra un fondo verde o azul, dependiendo del
colorante
del contraste utilizado. Este tipo de tincin se usa para teir corte de tejido en
bsqueda de elementos fngicos.
6. CONCLUSIONES

La coloracin de muestras es muy importante tanto para la identificacin, como para la


clasificacin de las mismas, por lo tanto es necesario emplear diferentes tcnicas de
tincin dependiendo a la bacteria en estudio, para as poder identificar su morfologa o
algn organelo en especial, o lo ms comn, poder diferenciarla de un microorganismo
similar por medio de una tcnica de coloracin diferencial. Dentro de estas tcnicas la
ms utilizada es la tcnica de Gram, la cual permite diferenciar entre bacterias con mayor
y menor contenido de pptido glucano, clasificndolos en Gram positivas y Gram
negativas.

Tambin existen otras tcnicas de diferenciacin como la tcnica de Hiss (cpsula), la


tcnica de Shaeffre Fulton (esporas), entre otras.
7. BIBLIOGRAFA

PANIAGOS, Ricardo. Biologa celular. Ed. Mac Graw Hill S.A. (Mxico). 1995.

SMITH Y WOOD. Biologa celular. Ed. Addison Wesley. Iberoamericana. 1998.

FEY, Hans. Compendio de bacteriologa general medica. Ed Acribia. Zaragoza


(Espaa) 1978.

STANIER, Roger. Microbiologa. Editorial Revert S.A. Segunda edicin. Barcelona


Espaa 1996.
ANEXO A.

1. MONTAJE EN FRESCO

Frotis de Agua sucia estancada


Objetivo 10X y 40X

2. FROTIS Y COLORACION

2.1. C. DE AZUL DE METILENO

Frotis de secrecin faringea teido


con Azul de Metileno
Objetivo de inmersin (100X)

2.1. COLORACION DE GRAM

Frotis de cultivo en medio lquido


teido con Gram
Objetivo de inmersin (100X)
2. 2 COLORACION CON GRAM

Frotis de cultivo en medio slido


teido con Gram
Objetivo de inmersin (100X)

2.3 COLORACION CON ZIELH-NEELSEN

Frotis de tierra con Zielh -Neelsen


Objetivo de inmersin (100X)

2.4 COLORACION CON SHAEFFER-FULTON

Frotis de Bacillus subtilis


Objetivo de inmersin (100X)
2.4 COLORACION CON COLORANTEDE HISS

Frotis de Klebsiella pneumonie


Objetivo de inmersin (100X)