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Protenas
Biotecnologa
Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo
Los aptmeros son cidos nucleicos de cadena sencilla, ADN o ARN, que reconocen
una gran variedad de molculas. Cada aptmero posee una estructura tridimensional
particular que le permite unirse con afinidad y especificidad altas a la molcula diana.
Los aptmeros tienen propiedades de reconocimiento equiparables a las de los
anticuerpos; sin embargo, por la naturaleza de su composicin tienen ventajas
significativas en cuanto a su tamao, produccin y modificacin. Estas caractersticas
los hacen excelentes candidatos para el desarrollo de nuevas plataformas
biotecnolgicas. Todos estos avances ocurridos durante las dos ltimas dcadas
permiten anticipar el protagonismo que tendrn los aptmeros como agentes
diagnsticos y teraputicos en un futuro cercano. Los aptameros y los chips de
protenas se utilizan en el diagnostico y tratamiento de enfermedades.
Aptmeros y Chips de Protenas
Aptmeros y
Chips de
Protenas
Biotecnologa
APTAMEROS
DIFINICION
APTAMEROS 1
Aptmeros y Chips de Protenas
En los aptmeros la afinidad est ligada al nmero de ciclos de SELEX que se lleven a cabo y a la
efectividad del proceso de separacin de secuencias que se unen con alta o baja afinidad a la
molcula diana. En algunos casos ha sido posible obtener aptmeros con afinidades destacadas que
evidentemente superan a los anticuerpos y para las que se reportan valores de un dgito picomolar.
La especificidad mostrada por los aptmeros es otra caracterstica interesante de estos elementos de
biorreconocimiento, que se evidencia en su capacidad para diferenciar cambios estructurales
mnimos entre la molcula diana y molculas inespecficas. Un ejemplo claro de esta caracterstica es
el aptmero antiteofilina, que distingue especficamente la teofilina de la cafena, a pesar de que solo
un grupo metilo diferencia estas dos molculas. En la mayora de las aplicaciones mdicas, se logran
altos niveles de afinidad y especificidad utilizando anticuerpos, pero existen limitaciones en el uso
de estos en diversas pruebas clnicas. Algunas de estas limitaciones estn relacionadas
principalmente con su produccin (se requieren animales o clulas), variabilidad de cada lote de
anticuerpos, frecuente inmunogenicidad, su tamao que dificulta el acceso a compartimentos
biolgicos pequeos y su susceptibilidad en procesos de desnaturalizacin. En contraste, los
aptmeros se seleccionan in vitro y se generan de forma reproducible utilizando procedimientos
convencionales de sntesis en fase slida con el mtodo de la fsforo-amidita. De igual forma, se los
puede modificar fcilmente en el proceso de sntesis para mejorar su estabilidad frente a nucleasas o
adicionarles grupos funcionales (ejemplo: grupos fluorescentes) para incrementar su aplicabilidad.
La tabla 1 muestra las principales ventajas y desventajas en el uso de aptmeros y anticuerpos.
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Aptmeros y Chips de Protenas
mediante aumento de la temperatura o del pH, pero luego pueden retornar a su estado activo
utilizando las condiciones ptimas de reconocimiento (buffer, temperatura, etc.). Todo lo anterior
contrasta con los anticuerpos en los que cualquier episodio de desnaturalizacin generalmente les
produce una prdida en la capacidad de reconocimiento y por lo tanto en su funcin en un sensor.
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Aptmeros y Chips de Protenas
APTAMEROS 4
Aptmeros y Chips de Protenas
Aptmero anti-IgE: Las personas que sufren cuadros alrgicos presentan con frecuencia niveles
elevados de IgE comparadas con las no alrgicas. Por lo tanto, se puede deducir la importancia de
cuantificar los niveles de IgE en el tratamiento de un episodio alrgico. La determinacin de IgE se
hace generalmente mediante ELISA o radioinmunoanlisis (RIA). Sin embargo, estos mtodos son
costosos y consumen mucho tiempo. Partiendo de la necesidad de una deteccin de IgE mucho ms
rpida y confiable, Yao y colaboradores desarrollaron un sensor basado en aptmeros que mide en
15 minutos los niveles de IgE, de forma especfica y reproducible. Este sensor utiliza una
microbalanza de cristal de cuarzo en la que previamente se ha inmovilizado el aptmero anti-IgE.
Una vez que dicho aptmero reconoce la IgE en solucin (suero), el biosensor traduce su nivel que es
directamente proporcional a la masa depositada en l (figura 3). Este tipo de dispositivos abre una
puerta hacia la utilizacin generalizada de aptmeros en muestras clnicas, campo en el que an
predominan los anticuerpos como molculas de biorreconocimiento. Es posible entonces, que la
tecnologa basada en aptmeros sea una alternativa futura para el diagnstico clnico, cuando se
generen sensores eficientes y de bajo costo que puedan competir con los mtodos convencionales.
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Aptmeros y Chips de Protenas
Los aptmeros han tenido un gran impacto en el desarrollo de nuevas terapias; se destacan las
orientadas a las enfermedades hematolgicas, el cncer y la infeccin por VIH. En la revisin llevada
a cabo por Keefe y colaboradores, se recopilaron los aptmeros ms destacados en modelos
teraputicos. Los aptmeros se pueden usar en dos formas diferentes en el desarrollo de procesos
teraputicos: 1. Como molculas efectoras para reconocer un receptor y ejercer directamente la
funcin teraputica; 2. Como vehculos para la entrega de una molcula secundaria. En este caso, se
utiliza el aptmero nicamente como elemento
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Aptmeros y Chips de Protenas
CHIPS DE PROTEINAS
DEFENICION
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Aptmeros y Chips de Protenas
Los arrays de protenas son una plataforma que permite el anlisis masivo, en paralelo y simultneo
de interacciones proteicas.
CONSTITUCIN
El chip consta de una superficie de soporte tal como un portaobjetos de vidrio, membrana de
nitrocelulosa, perla o placa de microtitulacin, a la que una serie de protenas de captura es obligada.
de la sonda molculas, normalmente marcados con un colorante fluorescente, se aaden a la matriz.
Cualquier reaccin entre la sonda y la protena inmovilizada emite una seal fluorescente que es
ledo por un escner lser.
TIPOS DE MATRICES
En esta tcnica, una biblioteca de anticuerpos, aptmeros o aficuerpos se visti sobre la superficie de
apoyo. Estos se utilizan como molculas de captura ya que cada une especficamente a una protena
particular.
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Aptmeros y Chips de Protenas
implican muestras complejas, tales como lisados de tejidos. Se aslan las clulas de diversos tejidos
de inters y se lisan. El lisado se visti sobre el microarrays y se sonde con anticuerpos contra la
protena diana de inters.
Hay cinco reas principales en las que se estn aplicando arrays de protenas: diagnstico, la
protemico, anlisis funcional de protenas, caracterizacin de anticuerpos y desarrollo del
tratamiento
Diagnstico
Caracterizacin de anticuerpos
La protemico
se refiere a la expresin de protenas de perfiles, es decir, que las protenas se expresan en el lisado
de una clula particular.
Anlisis funcional
El tratamiento
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Aptmeros y Chips de Protenas
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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