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UERJ

INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL

Professora: Mrcia Monteiro Machado Gonalves

Prtica n 3 e 4: Dosagem de Glicdios Redutores (GR) Mtodo de Nelson e Dosagem de


Glicdios Redutores Totais (GRT)

1. OBJETIVO

Elaborar uma curva padro para determinao da concentrao de glicdios redutores presentes
numa amostra.
Determinar a concentrao de GR e GTRT presentes no caldo de cana de acar e a concentrao
de GRT na soluo padro de sacarose.

2. MATERIAL UTILIZADO

Vidraria: Balo volumtrico, erlenmeyer, becher, pipetas de 1mL, Tubos de Folin Wu.
Reagentes: Nelson A, Nelson B, Nelson C.
Solues: Padro de glicose (1%), padro de sacarose (20%) e caldo de casa de acar.
Espectrofotmetro

3. PROCEDIMENTOS

Prtica n 3: Dosagem de Glicdios Redutores (GR) Mtodo de Nelson

3.1. Curva Padro.


Preparou-se uma soluo padro de glicose de 20mg/100ml. Adicionou-se aos tubos de Folin-Wu
0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1,0 mL da soluo padro de glicose de 20 mg/100mL e completou-se para
1,0mL com gua destilada. Em seguida, adicionou-se em cada tubo 1,0 mL da mistura dos
reagentes Nelson A e Nelson B (24 mL de Nelson A + 1,0 mL de Nelson B) e aqueceu-se em
banho-maria em ebulio por 20 minutos. Retirou-se do banho-maria, resfriou-se os tubos em gua
corrente, adicionou-se 1,0 mL do reagente Nelson C e agitou-se at parar de espumar. Completou-
se o volume para 25 mL com gua destilada e homogeneizou-se para poder ler-se as absorbncias
em espectrofotmetro a 540 nm, tomando-se como referncia a soluo padro de glicose 20
mg/mL de 0 ml.

3.2. Determinao de GR no caldo de cana de acar.


Diluiu-se o caldo de cana nas propores 1:50, 1:100 e 1:250, adicionou-se 1,0 mL de casa caldo
diludo aos tubos de Folin Wu e fez-se o mesmo procedimento que foi feito com as solues de
glicose com os reagente Nelson A, B e C.

Prtica n 4: Dosagem de Glicdios Redutores Totais (GRT)


3.3. Hidrlise cida da soluo padro de sacarose e do caldo de cana de acar:
Colocou-se em erlenmeyer de 250mL, 20mL de amostra e 30mL de gua destilada e depois levou-
se a banho-maria na temperatura de 65C. Quando a temperatura de 65C foi alcanada, adicionou-
se 10 mL de HCl 6,2N e foi feita a homogeneizao. O erlenmeyer foi retirado do banho e feito
isso, foi necessrio esperar 30 minutos para poder transferir o hidrolisado para um balo de
500mL. O volume do mesmo foi completado com gua destilada. Pipetou-se 10mL da soluo do
hidrolisado para um balo de 500mL, e o mesmo foi neutralizado com 2,0mL de NaOH 0,62N e o
volume foi completado at alcanar 500mL.

3.4. Determinao de GR nos hidrolisados e no caldo de cana de acar in natura:


O caldo de cana foi diludo in natura na proporo de 1:100. Foram adicionados aos tubos de Folin
Wu 1mL de cada amostra (duplicata) e 1mL de gua destilada (branco). Foi adicionado 1 mL da
mistura dos reagentes Nelson A e Nelson B (24mL de Nelson A + 1,0mL de Nelson B) em todos os
tubos. O sistema foi aquecido em banho-maria em ebulio por 20 minutos. Feito isso, os tubos
foram resfriados em gua corrente. Ento, foi adicionado 1,0mL do reagente Nelson C. Os tubos
foram agitados at pararem de espumar e o volume foi completado at chegar 25mL com gua
destilada e foi feita a homogeneizao. Foi realizada a leitura das absorbncias das solues em
espectrofotmetro a 540m, zerando o aparelho com o branco.

3.5 Composio dos reagentes.

Nelson A:
Na2CO3 anidro ......................25 g/L
Tartarato de K .......................25 g/L
NaHCO3 ...............................20 g/L
Na2SO4 .................................200 g/L

Nelson B:
CuSO4 . 5 H2O ......................150 g/L (em gua destilada acidificada com H2SO4 20 gotas)

Nelson C:
Molibdato de Amnio ..........50 g/L
H2SO4 concentrado................42 mL/L
NaHAsO4 . 7 H2O .................6 g/L

4. RESULTADOS

4.1. Curva Padro

Clculos da diluio:

C0 = 20 x 0,0 / 100 = 0,00 mg Onde Ci = Concentrao de cada diluio


C1 = 20 x 0,2 / 100 = 0,04 mg
C2 = 20 x 0,4 / 100 = 0,08 mg
C3 = 20 x 0,6 / 100 = 0,12 mg
C4 = 20 x 0,8 / 100 = 0,16 mg
C5 = 20 x 1,0 / 100 = 0,20 mg

Na tabela 01, encontram-se a leitura das absorbncias em relao a cada concentrao feita aps a
diluio a 540 nm a partir de uma soluo padro de glicose 20 mg/100mL.
Tabela 01: Leitura das absorbncias - glicose
[glicose] (mg/mL) Absorbncias em 540 nm
0 0
0,04 0,035
0,08 0,060
0,12 0,100
0,16 0,145
0,20 0,165

A partir dos valores da tabela 01, pode-se construir o grfico 01: absorbncia x Concentrao, uma
curva padro de comprimento de onda 570 nm.

Grfico 01: Curva padro de 570 nm: Absorbncia x Concentrao

A partir do grfico 01, obteve-se a equao para a absorbncia:

Abs = 0,8625C - 0,0025 (1)

4.2. Determinao de GR no caldo de cana de acar.

Na tabela 02, encontram-se a leitura das absorbncias em relao a cada concentrao feita aps a
diluio da cana de acar a 540 nm.

Tabela 02: Leitura das absorbncias caldo de cana


Diluies do caldo de cana Absorbncias em 540 nm
1:50 0,480
1:100 0,140
1:250 0,045

A partir dos dados da tabela 01 e da equao 01 determinou-se a concentraes de GR no caldo de


cana.
Diluio 1:50

Abs = 0,8625C - 0,0025


0,480 = 0,8625C - 0,0025
C = 0,5594 mg/mL

GR = 0,5594 x 50 = 27,97 mg/mL

27,97 mg ------ 1 mL
x mg ------ 100 mL x = 2797 mg/100 mL

Concentrao de GR no caldo de cana = 2,797 g/100 mL

Diluio 1:100

Abs = 0,8625C - 0,0025


0,140 = 0,8625C - 0,0025
C = 0,1652 mg/mL

GR = 0,1652 x 100 = 16,52 mg/mL

16,52 mg ----- 1 mL
x mg ----- 100 mL x = 1652 mg/100mL

Concentrao de GR no caldo de cana = 1,652 g/100mL

Diluio 1:250

Abs = 0,8625C - 0,0025


0,045 = 0,8625C - 0,0025
C = 0,0551 mg/mL

GR = 0,0551 x 250 = 13,775 mg/mL

13,775 mg ----- 1 mL
x mg ----- 100 mL x = 1377,5 mg/mL

Concentrao de GR no caldo de cana = 1,3775 g/100mL

4.3.Valores de absorbncia na Prtica n 4


Na tabela 03, encontram-se a leitura das absorbncias em relao a cada concentrao feita aps a
diluio a 540 nm para a soluo padro de sacarose, caldo de cana de acar hidrolisado e caldo
de cana de acar.

Tabela 03: Leitura das absorbncias padro sacarose e caldo de cana natural e hidrolisado

Amostra Absorbncias a 540 nm


Soluo padro de sacarose 0,260
Soluo padro de sacarose 0,290
Caldo de cana de acar 0,270
Caldo de cana de acar 0,275
Caldo de cana de acar hidrolisado 0,295
Caldo de cana de acar hidrolisado 0,285

4.4. Determinao da concentrao de GRT na soluo de sacarose e da eficincia da hidrlise:

4.4.1. Determinao da concentrao de GRT

Abs = 0,260 + 0,290 / 2 = 0,275

Abs = 0,8625C 0,0025


0,275 = 0,8625C 0,0025
C = 0,3217 mg/mL

[GRT] = 0,3217 x 1250 = 402,17 mg/mL

402,17 mg ----- 1 mL
x mg ----- 100 mL x = 40217 mg/100mL = 40,22 g/100 mL

[GRT] na soluo padro de sacarose = 40,22 g / 100mL

4.4.2. Determinao da eficincia da hidrlise

[sacarose] = GRT x MM(glicose + frutose)


MM(sacarose)

[sacarose] = GRT x (342/360) = GRT x (0,95)

[sacarose] = 40,22 x 0,95 = 37 g/100mL

20 g ----- 100%
37 g ----- x x = 185 %

4.5. Determinao da concentrao de GR no caldo de cana de acar


Abs = 0,270 + 0,275 / 2 = 0,2725

Abs = 0,8625C 0,0025


0,2725 = 0,8625C 0,0025
C = 0,3188 mg/mL

[GRT] = 0,3188 x 100 = 31,88 mg/mL

31,88 mg ----- 1 mL
x mg ----- 100 mL x = 3188 mg/100mL = 3,19 g/100mL

[GR] no caldo de cana = 3,19 g/100mL

4.6. Determinao da concentrao de GRT no caldo de cana de acar

Abs = 0,295 + 0,285 / 2 = 0,290

Abs = 0,8625C 0,0025


0,290 = 0,8625C 0,0025
C = 0,3391 mg/mL

[GRT] = 0,3391 x 1250 = 423,91 mg/mL

423,91 mg ----- 1 mL
x mg ----- 100 mL x = 42391 mg/100mL = 42,39 g/100mL

[GRT] no caldo de cana hidrolisado = 42,39 g/100mL

4.7. Determinao da concentrao de sacarose no caldo de cana de acar

[sacarose] = ( [GRT] - [GR] ) x (342 /360)


[sacarose] = (42,39 3,19) x (0,95)
[sacarose] = 37,24 g/100mL

5. CONCLUSES
Atravs do mtodo de Nelson obtivemos a concentrao de glicdios redutores no caldo de cana. O
valor de GR no caldo de cana obtido atravs das trs diluies era para ser o mesmo, mas devido a
erros experimentais no preparo das diluies, erros de pipetagem, entre outros, houve variao nos
resultados obtidos.
A porcentagem da eficincia da hidrlise cida da soluo padro de sacarose encontrada, de
acordo com os clculos, foi de 1855%, um valor estranho, porque no seria possvel hidrolisar
alm de 100%. No entanto, no havia sacarose disponvel na aula para efetuar tal reao, logo,
acredito que tal erro tenha ocorrido de acordo com algum problema na soluo que j se
encontrava pronta na aula que foi a utilizada para a leitura no espectrofotmetro (ao invs de ser
uma soluo de 20% de sacarose, poderia ser uma de 40% aparentemente). A concentrao de GRT
na soluo padro de sacarose encontrada foi de 40,22 g/100mL. O uso dos reagentes Nelson A, B
e C diferentes do que foram utilizados para a curva padro tambm pode ser uma explicao para o
valor de 185%. A concentrao de GRT obtida no caldo de cana foi de 42,39 g/100mL. A
concentrao de GR no mesmo foi de 3,19 g/100mL. Logo, a concentrao de sacarose no caldo de
cana foi de 37,24 g/100mL.