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So Paulo
2010
Monique Nouailhetas Simon
So Paulo
2010
2
Ficha Catalogrfica
1. Normas de reao de
desenvolvimento 2. Modulao fenotpica 3.
Variao da temperatura
I. Universidade de So Paulo. Instituto de
Biocincias. Departamento de Fisiologia
Geral.
Comisso Julgadora:
________________________ _______________________
Prof. Dr. Prof. Dr.
______________________
Prof. Dr. Carlos A. Navas Iannini
Orientador
3
Dedicatria
A Viviane Nouailhetas,
me e amiga desde meu nascimento,
exemplo para toda a minha vida.
4
Epgrafe
VERDADE
5
Agradecimentos
Agradeo ao meu orientador, Prof. Carlos Navas, pelo apoio, pelas discusses
tericas e pela liberdade de traar meu prprio caminho no mestrado.
Agradeo a Francisco de Assis e sua famlia pela muito importante ajuda de
campo em So Miguel e por sempre me acolherem com carinho.
Agradeo aos amigos do laboratrio de Ecofisiologia e do departamento de
Fisiologia pela ajuda em campo e por discusses e avaliaes de apresentaes,
especialmente a Pedro Leite Ribeiro, pela colaborao na pesquisa (por vezes rdua),
pelas viagens de campo divertidas (e s vezes abruptas) e pelos emprstimos de carro.
Agradeo aos amigos que me ajudaram em campo: Maysa, Marcelo, Mauro,
Renato, Pedro, Joana e Fabiano.
Agradeo aos professores que colaboraram com meu amadurecimento
cientfico: Jos Eduardo de Carvalho, Fernando Gomes e Jos Guilherme.
Agradeo ao meu irmo, Ricardo, por revisar o ingls do resumo desta
dissertao, e minha me, Viviane, pelas discusses sobre o trabalho.
Agradeo aos motoristas do Instituto de Biocincias pelas viagens de campo.
Agradeo a Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo (FAPESP) pelo
suporte financeiro como bolsa e como auxlio pesquisa.
Agradeo ao Instituto de Biocincias e ao Departamento de Fisiologia pelo uso
de carros e infra-estrutura.
Agradeo direo e administrao da Estao Biolgica de Boracia por
autorizar a minha pesquisa e prover a minha estadia em campo.
Agradeo aos meus amigos pelo suporte e pela companhia agradvel que eles
sempre foram e sero: Maz, Talita, Camila, Chico, Joo, Caqui, Cris, Liss, Letcia,
Nina, Michele, End, Marcelo.
Finalmente, mas no de menos importncia, agradeo minha famlia por
compartilhar alegrias e tristezas, e pelos ensinamentos de vida que me passaram.
6
ndice
Introduo
1. Plasticidade fenotpica.......................................................................10
2. Plasticidade fenotpica e
Normas de reao de desenvolvimento...................................................14
3. Mudanas ambientais e Normas de reao.........................................16
4. A caatinga como um novo ambiente
e a Fauna de anfbios anuros..................................................................19
5. Plasticidade fenotpica em larvas de anfbios anuros..........................21
6. Abordagem comparativa de normas de reao....................................23
7. O fator temperatura na caatinga
e Normas de reao trmicas em larvas de anuros..................................25
Objetivos
1. Objetivo geral....................................................................................28
2. Objetivos especficos.........................................................................28
Materiais e Mtodos
1. Locais de estudo.................................................................................29
2. Espcies.............................................................................................29
3. Coleta de dados climticos em campo................................................32
4. Caracterizao dos microhabitats larvais............................................33
5. Distribuio natural de massa estgio-especfica................................33
7
6. Experimentos de campo.....................................................................34
6.1. Rhinella ornata e Rhinella ictrica..............................................34
6.2. Rhinella granulosa.......................................................................34
7. Experimentos de laboratrio...............................................................40
7.1. Normas de reao de variao trmica.........................................40
7.2. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima.....................47
8. Anlise Estatstica..............................................................................49
Resultados
8
Discusso
1. Heterogeneidade ambiental.................................................................71
2. Heterogeneidade ambiental e Plasticidade da massa larval..................74
3. Sobrevivncia.....................................................................................76
4. Normas de reao bivariadas das espcies de floresta atlntica...........77
5. Efeitos da moda e da variao trmica
nas espcies de floresta atlntica.............................................................79
6. Normas de reao de variao trmica
das espcies de floresta atlntica.............................................................82
7. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima............................87
8. Especulaes sobre a plasticidade de desenvolvimento
de R. granulosa e Consideraes finais..................................................89
Concluses............................................................................................91
Resumo.................................................................................................93
Abstract.................................................................................................94
Referncias Bibliogrficas...................................................................95
Anexos.................................................................................................103
9
Introduo
1. Plasticidade Fenotpica
10
desenvolvimento so irreversveis, pois h fixao da alterao da via de
desenvolvimento. Um exemplo dessa plasticidade irreversvel da metamorfose
facultativa em anfbios (Semlitsch, 1987). Porm, mudanas fenotpicas reversveis
durante a ontogenia tambm podem ser importantes em eventos evolutivos, como
sugerido no trabalho de (Gomez-Mestre e Buchholz, 2006).
Recentemente, o debate sobre a importncia do ambiente e da plasticidade
fenotpica em evoluo culminou em hipteses alternativas sobre a existncia de um
controle gentico para a plasticidade. Sara Via, uma geneticista, publicou um artigo em
1993 que defende que a plasticidade um sub-produto da seleo natural, e no um
carter em si, com base gentica (Via, 1993). Sua argumentao fundamentou-se na
idia de que cada ambiente possui um timo para determinado carter, e a seleo de
diferentes mdias desse carter nos diferentes ambientes produz uma resposta plstica.
Portanto, para Via, seleo na prpria plasticidade no necessria para a evoluo da
plasticidade adaptativa. Uma resposta direta a esse artigo foi elaborada por
(Schlichting e Pigliucci, 1993): o modelo de Via (1993) bastante plausvel para as
respostas plsticas que envolvem sensibilidade allica, mas para as respostas de limiar
(que envolvem vias alternativas de desenvolvimento), genes especficos que regulam
essas vias existem comprovadamente.
A discusso sobre plasticidade fenotpica e evoluo envolve respostas que
diferem em caractersticas importantes. Essas respostas foram categorizadas em
sensibilidade allica ou modulao fenotpica e resposta de limiar ou converso de
desenvolvimento (Smith-Gill, 1983). Assim, para entendermos o debate, as
caractersticas dessas duas respostas precisam ser contrastadas. Segundo Smith-Gill
(1983):
Modulao fenotpica
uma resposta a aspectos fisiolgicos;
Mantm a mesma via de desenvolvimento;
Ocorre em qualquer estgio do desenvolvimento;
Produz fentipos contnuos;
Pode ou no ser adaptativa.
11
Converso de desenvolvimento
uma resposta modulada por controle gentico especfico;
Ativa vias alternativas de desenvolvimento;
Ocorre em determinados estgios do desenvolvimento;
Produz fentipos discretos;
adaptativa.
12
mudana ambiental, e inclusive serem um passo intermedirio da evoluo de uma
resposta mais sofisticada, como a de converso do desenvolvimento (Schlichting e
Pigliucci, 1995). Existem teorias sobre as condies ambientais que favorecem a
plasticidade e sobre os requisitos para que essa resposta surja, lidando principalmente
com converso de desenvolvimento, que so as respostas com maior chance de serem
adaptativas (Smith-Gill, 1983).
Uma teoria bastante importante a Teoria da Aptido em Ambientes
Heterogneos, desenvolvida por Richard Levins (Levins, 1962; 1963). Levins utilizou
uma abordagem ecolgica para determinar a aptido (medida em nmero mdio de
filhotes) de uma espcie, considerando toda sua distribuio geogrfica,
compreendendo que os organismos distribuem-se em ambientes nos quais os fatores
ambientais variam, ou seja, nos quais h heterogeneidade/variao ambiental. A teoria
baseada na existncia de freqncias distintas de nichos ecolgicos disponveis para
uma populao e seu efeito na aptido da mesma. Para simplificar a modelagem,
Levins considerou apenas dois nichos (1 e 2), organizados em trs tipos de padres
ambientais:
13
converso do desenvolvimento). Se os indivduos ou toleram um nicho ou toleram o
outro, o polimorfismo gentico poder surgir.
Entretanto, apesar da heterogeneidade ambiental, existem outros requisitos
para que uma resposta plstica adaptativa possa surgir e se manter (Newman, 1992):
14
todas as possibilidades de respostas plsticas, incluindo plasticidade zero (ou seja,
expresso de um fentipo fixo independente de alteraes do ambiente).
Uma concepo distinta de plasticidade a de tratar a expresso de um carter
em diferentes ambientes como caracteres distintos, relacionados por correlao
gentica (rae = coeficient of correlation among environments (Via, Gomulkiewicz et
al., 1995). Essas correlaes podem ocorrer devido ligao gnica, pleiotropia e/ou
epistasia de genes que regulam a resposta plstica. Essa abordagem foca nos
mecanismos genticos da plasticidade, sem considerar aspectos fisiolgicos ou
ecolgicos, e limitada para estudo em somente dois ambientes, restringindo a
quantidade de variao ambiental a ser estudada.
A NRD contextualiza os caracteres dos organismos, por levar em conta a
ecologia, e considera o fenmeno por meio do qual as variaes fenotpicas so
produzidas, o desenvolvimento. Sua concepo especialmente importante quando
notamos que a varincia ambiental depende da distribuio de gentipos, e a varincia
gentica depende da distribuio de ambientes (Lewontin, 1974). Alm disso, uma
NRD reflete a histria natural e o potencial futuro de um gentipo (Schlichting e
Pigliucci, 1998). As respostas de modulao fenotpica e converso de
desenvolvimento podem ser representadas como normas de reao contnuas e
discretas, respectivamente (Figura 1).
Por meio das NRD, o estudo da plasticidade torna-se mais detalhado, sendo
possvel analisar atributos como magnitude e padro da resposta plstica, atravs da
altura e da forma da norma de reao (Schlichting e Pigliucci, 1998). Outro aspecto
importante que pode ser visualizado pelas NRD a ocorrncia de canalizao diante
de uma faixa ampla de variao ambiental. A canalizao uma caracterstica do
sistema de desenvolvimento, mantida pela seleo natural, que limita a variao final
do fentipo diante de variaes ambientais, garantindo o fentipo timo (Waddington,
1942). Waddington (1960) visualizava a seleo estabilizadora (que elimina variaes
distantes demais do fentipo timo) em duas formas: a seleo normalizadora que
tende a eliminar alelos que produzem fentipos anormais em condies ambientais
normais, e a seleo canalizadora que tende a eliminar alelos que tornam o sistema de
desenvolvimento sensvel a estresses ambientais. Perante essas consideraes sobre as
NRD, consideramos seu uso como essencial para este estudo.
15
Sensibilidade allica Regulao gnica
Controle gentico
Mecanismo de
desenvolvimento
Fentipo
16
influncia da plasticidade de populaes de plantas em permanecerem em novas
condies ambientais de densidade e clima, respectivamente. Ambos os autores
realizaram experimentos de transplante de indivduos das populaes nativas de um
ambiente para outros ambientes e caracterizaram a plasticidade por mtodos de
gentica quantitativa, inclusive determinando valores de intensidade e direo de
seleo. As perguntas centrais foram: (1) A plasticidade que evolu em resposta
variao ambiental dentro de um ambiente pode influenciar a expresso fenotpica em
um novo ambiente? e (2) As respostas plsticas surgidas em novos ambientes so na
direo dos valores fenotpicos favorecidos pela seleo? Os dois autores concluram
que as respostas a essas perguntas so afirmativas, indicando que a plasticidade pode
mitigar perdas de aptido, e assim contribuir para a colonizao de novos ambientes.
Estudos com colonizaes de novos ambientes por animais so menos comuns,
talvez porque haja uma tradio de se estudar plasticidade fenotpica e invases
biolgicas em plantas. O trabalho de Yeh e Price (2004) ilustra como a plasticidade
possibilitou a permanncia de uma populao de aves nativas das montanhas em um
ambiente de costa ocenica. Os autores detectaram um aumento da temporada de
reproduo na populao da costa, que foi correlacionada com a aptido. A variao
do tempo de reproduo se deu por plasticidade das fmeas, e sem o aumento desse
carter a populao comearia a diminuir em tamanho.
Estudos como os citados acima apresentam evidncia forte de como a
plasticidade pode permitir a permanncia de uma populao em novas condies
ambientais. Entretanto, Richards, Bossdorf et al. (2006) apontaram que faltam
trabalhos em um contexto comparativo mais amplo para responder a pergunta Qual o
grau de diferena na plasticidade de espcies invasoras e no-invasoras?. Acreditamos
que essa pergunta pode ser parcialmente respondida ao compararmos normas de
reao de desenvolvimento de espcies com diferentes histrias naturais quanto
colonizao/permanncia em novas condies ambientais.
A concepo de normas de reao muito interessante para se estudar
plasticidade diante de novos ambientes, porm pouco utilizada nessa conjuntura (Lee,
Remfert et al., 2003; Richards, Bossdorf et al., 2006). Schmalhausen (1949), em seu
livro Factors in Evolution, levantou a idia de que a parte efetivamente expressa de
uma norma de reao depende do ambiente, mas que tambm existem partes de
potencial expresso (refletindo a potencialidade do sistema de desenvolvimento em
17
gerar novos fentipos em Pigliucci, 2001). Uma mudana do ambiente ou uma
migrao do organismo para outro ambiente podem resultar em partes da norma antiga
no mais expressas nem expostas seleo, enquanto outras novas partes sero
expostas, culminando em uma alterao da norma ancestral (Pigliucci, 2001). Essas
idias traduzem-se atualmente nos conceitos de normas de reao ocultas e
variao gentica crptica (Schlichting, 2008). Ou seja, haveria a possibilidade de
partes da norma que aparecem somente em novas condies ambientais, evidenciando
um potencial de desenvolvimento revelado em novas condies. A expresso de uma
norma oculta refere-se expresso de fentipos novos, em relao aos fentipos
ancestrais, e est relacionada com condies ambientais nunca experimentadas pela
aquela populao ou de baixa freqncia de ocorrncia naquele ambiente (Figura 2).
No
Varivel fenotpica
vo
fen
ti
po
Canalizao
Pla
stic
id ade
Novas/Raras Freqentes
Condies ambientais
Figura 2. Padres possveis de uma norma de reao. Esto representados trs padres de resposta
fenotpica em pores de uma norma de reao: norma oculta (em vermelho), norma canalizada e norma
plstica. Uma parte oculta de uma norma significa uma expresso fenotpica que somente se revela em
condies ambientais novas ou raras, gerando fentipos no produzidos anteriormente, ou seja, h
liberao de variao fenotpica escondida ou crptica. A parte canalizada de uma norma refere-se
poro no plstica, que no varia em seu valor fenotpico diante de variaes ambientais. Estas
provavelmente so variaes comumente encontradas pelos indivduos, mas as quais o organismo no
sensvel. Finalmente, a norma plstica expressa em condies freqentes porm que flutuam,
originando variao no valor fenotpico conforme sua aptido nas determinadas condies, se a
plasticidade for adaptativa. Modificado de Schlitching 2008.
18
4. A caatinga como um novo ambiente e a Fauna de anfbios anuros
19
caatinga em um passado recente, j que a diferenciao gentica entre as populaes
da mesma espcie pequena.
Considerando todas essas evidncias, podemos caracterizar a caatinga como
um ambiente recente, e portanto muito interessante para se estudar a manuteno de
espcies representando diferentes linhagens, inclusive evidenciando adaptao s novas
condies climticas. A possibilidade da caatinga ter sido uma floresta mida, um
habitat to diferente do regime semi-rido atual, favorece ainda mais a escolha desse
bioma como um sistema de estudo. Neste contexto, muitos organismos poderiam ser
estudados. Contudo, escolhemos os anfbios anuros como modelo por diversas razes.
A fauna de anuros bem caracterizada para a caatinga. As famlias Hylidae,
Bufonidae, Microhylidae, Phyllomedusidae, Pipidae e Leptodactylinae (subfamlia da
antiga Leptodactylidae Lynch, 1971), possuem representantes nesse habitat, mas
apenas as duas primeiras so diversas, com mais de 15 espcies, sendo as demais
famlias representadas por apenas duas espcies. Um aspecto extremamente relevante
que no h anuros endmicos na caatinga (Trefaut-Rodrigues, 2003). Talvez a nica
exceo seja a espcie Corythomantis greeningi, um hildeo que possui co-ossificao
do crnio e se esconde em buracos em rvores (Jared, Antoniazzi et al., 2005).
Alm disso, algumas caractersticas climticas da caatinga pareceram-nos
adversas dada sua sazonalidade na disponibilidade de gua e suas altas temperaturas,
particularmente nos stios de reproduo das espcies de anuros. Parece-nos, portanto,
que a aridificao que ocorreu na regio da caatinga reduziu drasticamente a
diversidade de anuros. Porm, algumas espcies continuam l, e a sua presena leva a
perguntas sobre quais mecanismos permitiram essas espcies a se manterem nesse
novo ambiente.
5. Plasticidade fenotpica em larvas de anfbios anuros
20
algumas espcies que habitam a caatinga, como Corythomantis greeningii, que
seleciona microhabitats protegidos e midos (Jared, Antoniazzi et al., 1999), e
Pleurodema diplolistris, que permanece enterrado em areia ao longo da seca (Pereira,
2009). No entanto, bastante improvvel que as larvas de anuros da caatinga tenham
uma amplitude grande de escolha de microhabitats nas poas em que habitam (muitas
vezes pequenas e rasas), e uma estratgia como a estivao ocorre somente em fases
aps a metamorfose.
A hiptese de polimorfismo gentico poderia ser importante na caatinga, mas
somente se a tolerncia a fatores ambientais de uma parcela da populao de larvas
fosse distinta do resto (Levins, 1963). Essa resposta resultaria em variantes genticos
especficos para determinados ambientes, j que nesses casos um alelo favorecido em
um ambiente enquanto outro alelo favorecido em outro ambiente (Falconer e
Mackay, 1996). Contudo, no h uma razo forte para supormos que a tolerncia seria
diferente entre partes da populao de larvas de uma espcie, uma vez que a
sazonalidade de chuvas da caatinga favorece o uso de microhabitats temporrios por
todos os indivduos.
Larvas de anfbios anuros so muito estudadas quanto plasticidade fenotpica.
Existem diversos modelos na literatura criados para explicar a variabilidade no tempo
de desenvolvimento e no tamanho ou massa na metamorfose nesses organismos (por
exemplo, Wilbur e Collins, 1973; Smith-Gill e Berven, 1979; Werner, 1986). O modelo
de Wilbur e Collins (1973) prediz que o tempo de desenvolvimento regulado pela
taxa de crescimento e por presses ecolgicas. Os autores trabalharam com Rana
sylvatica e nveis de alimentao ou densidade, e notaram que os recm-
metamorfoseados possuam uma faixa limitada de massa em comparao com as
larvas. Eles propuseram que existiam um limite mnimo (denominado b) para a massa
na metamorfose, imposto evolutivamente pela pequena sobrevivncia de metamorfos
de pouca massa, e um limite mximo (denominado b + c), imposto pelo risco de
morte apresentado no habitat aqutico. Segundo Wilbur e Collins, a larva continua a
crescer se sua histria recente de crescimento maior que um determinado limiar de
taxa de crescimento (denominada g). Posteriormente, Werner (1986) expandiu o
modelo de Wilbur e Collins ao verificar que o potencial de crescimento na fase
terrestre influencia a seleo da massa na metamorfose. Um exemplo dado foi de
Rhinella (Bufo) marina, na qual 99,9% do crescimento total ocorre na fase terrestre.
21
Werner considerou que o tamanho timo na metamorfose depende da taxa de
crescimento e da mortalidade no habitat aqutico e no habitat terrestre, determinando
assim um compromisso entre taxa de crescimento e risco de mortalidade. O tempo
timo de desenvolvimento ocorreria quando o compromisso fosse o menor nos dois
habitats.
O modelo de Smith-Gill e Berven (1979) foi o primeiro em destacar a
relevncia da taxa de diferenciao na determinao do tempo at a metamorfose e da
massa na metamorfose. Esse modelo possu um carter mais fisiolgico diante dos
outros dois modelos citados, que so mais ecolgicos, por acessar as sensibilidades
trmicas dos fenmenos do desenvolvimento. Smith-Gill e Berven construram normas
de reao para as taxas de crescimento e diferenciao em trs espcies de Rana,
diante de quatro temperaturas. Essas normas so denominadas normas de reao
trmicas, e seus coeficientes angulares correspondem sensibilidade trmica das
espcies em fenmenos do desenvolvimento. Quanto mais inclinada a norma trmica,
maior a sensibilidade temperatura, pois o fentipo se altera mais com a temperatura.
Os autores verificaram que a sensibilidade trmica das taxas de crescimento menor
que a sensibilidade da diferenciao, indicando que a temperatura altera mais a
diferenciao das larvas de Rana que o crescimento. Essa regra de sensibilidade resulta
em menor massa na metamorfose em maiores temperaturas, pois a diferenciao mais
acelerada que o crescimento, gerando metamorfos de idades precoces e massa menor.
O modelo de Wilbur e Collins (1973) foi testado e confirmado empiricamente
por alguns autores (por exemplo, Morey e Reznick, 2000). A expanso de Werner
(1986), junto das consideraes dos argumentos de Smith-Gill e Berven (1979), foram
utilizados para a incluso de outros parmetros considerados importantes na ecologia e
fisiologia das larvas de anfbios anuros, como a possibilidade de fixao do tempo de
desenvolvimento (Hensley, 1993; Hentschel, 1999) e de taxas de mortalidade que
variam com o tempo (por exemplo, Rudolf e Rdel, 2007). Apesar das diferenas entre
os diversos modelos, todos os estudos apontam para uma alta plasticidade das larvas
de anfbios anuros. Diante disso, e das consideraes sobre os estudos que
confirmaram a ao da plasticidade na colonizao de novos ambientes, hipotetizamos
que as larvas das espcies que se mantm na caatinga possuem alta plasticidade de
desenvolvimento em comparao com larvas de espcies que no se mantiveram nessa
bioma.
22
6. Abordagem comparativa de normas de reao
23
habitat mais efmero na natureza, S. couchii, foi distinta das demais espcies. A parte
da norma de S. couchii expressa em seu ambiente natural a poro invarivel no
perodo larval, portanto essa espcie no apresenta plasticidade de desenvolvimento
em condies naturais de alimentao, sendo o perodo larval sempre curto, condizente
com um habitat que permanece por pouco tempo (Morey e Reznick, 2004). Porm, S.
couchii no perdeu o potencial de desenvolvimento (expresso como a parte oculta
na natureza da norma de reao) de expressar uma norma similar s outras espcies
que habitam ambientes diferentes.
Os achados de Morey e Reznick (2000, 2004) foram expandidos por Buchholz
e Hayes (2002), que estudaram dez espcies aparentadas filogeneticamente de quatro
gneros: Pelobates e Pelodytes, do velho mundo, e Scaphiopus e Spea, do novo
mundo. Buchholz e Hayes (2002) construram normas de reao de perodo larval e
tamanho na metamorfose diante de trs temperaturas, que representaram a variao na
mdia dos habitats naturais das espcies estudadas. As taxas de desenvolvimento foram
diferentes para as espcies do velho e novo mundo, mais rpidas nas ltimas, enquanto
que as taxas de crescimento foram mais similares entre todas as espcies. Os autores
sugeriram que os perodos larvais curtos em Scaphiopus e Spea evoluram aps a
divergncia de Pelobates e Pelodytes em resposta ao aumento da efemeridade dos
stios de reproduo dessas espcies, ao longo da desertificao de seu habitat. Esse
trabalho, em especial, mostra como a abordagem comparativa de normas de reao
pode esclarecer a evoluo de plasticidade de um grupo diante de mudanas
ambientais.
24
conseguinte um fator que representa a mudana ambiental que ocorreu e que ainda
ocorre nessa regio.
A temperatura do corpo um dos fatores ambientais mais influentes para
animais ectotermos devido sua interferncia em taxas enzimticas e bioqumicas
(Hochachka e Somero, 2002). Alm desse efeito direto nos processos bioqumicos, a
temperatura tambm afeta padres de atividade tipo e durao (Bellis, 1962) e
conseqentemente a taxa na qual energia e nutrientes podem ser obtidos e assimilados
(Berven, 1982). Pelos efeitos importantes da temperatura sobre o desempenho
comportamental, fisiolgico e ecolgico, muitos estudos com anfbios anuros
correlacionam a variao trmica com medidas de sobrevivncia e aptido. Esses
estudos salientam parmetros fisiolgicos com clara relevncia ecolgica, como curvas
de desempenho comportamental (Huey e Stevenson, 1979; Berven, 1982; Navas,
1996), mas tambm parmetros clssicos da fisiologia trmica, como tolerncia trmica
(Brattstrom, 1968; Sherman, 1980; Floyd, 1982). Finalmente, a relao da temperatura
com a variao na plasticidade, especialmente nas larvas, tambm culminou em muitos
trabalhos (por exemplo, Smith-Gill e Berven, 1979; Newman, 1989; 1998; Morey e
Reznick, 2000; Alvarez e Nicieza, 2002; Buchholz e Hayes, 2002; Olsson e Uller,
2002; Niehaus, Wilson et al., 2006).
As tolerncias trmicas mnima e mxima de uma espcie podem ser avaliadas
pelos parmetros denominados temperatura crtica mnima e mxima (TCMin e
TCMax, respectivamente). Esses parmetros, em teoria, representam as temperaturas
corpreas nas quais os indivduos no conseguem mais desempenhar atividades
ecolgicas (Huey e Stevenson, 1979; Figura 3), e podem ser medidos com referncia
ao controle motor ou sobrevivncia (Lowe e Vance, 1955).
Bayard H. Brattstrom (1968) mostrou que esses parmetros esto relacionados
com a distribuio geogrfica de vrias espcies de anuros. Brattstrom descreveu que
anuros tropicais no toleram temperaturas baixas, como entre 5oC e 15oC e que as
espcies habitantes de maior latitude so mais tolerantes ao frio. Navas, Antoniazzi et
al. (2007) verificaram que os juvenis de Rhinella granulosa, anuro presente na
caatinga, toleram at 44oC, a TCMax mais alta relatada para o gnero. Esses trabalhos
mostram que as espcies de anuros so capazes de ajustar evolutivamente suas
tolerncias trmicas em relao ao ambiente em que habitam.
25
Temperatura tima
Faixa de tolerncia
Temperatura corprea
Figura 3. Curva de desempenho e faixa de tolerncia trmica. O esquema mostra
onde se inserem os parmetros temperatura crtica mxima e mnima na curva de
desempenho. Os limites trmicos determinam a faixa de tolerncia, fora da qual o
desempenho dos indivduos seriamente comprometido. Tambm est apresentada a
temperatura tima, na qual o desempenho mximo. Modificado de Huey e Stevenson
1979.
26
pioneiros em determinar a sensibilidade trmica das taxas de crescimento e
diferenciao. Em outros trabalhos, Berven mostrou que a sensibilidade trmica do
desenvolvimento pode evoluir, tornando-se mais baixas em populaes de R. clamitans
da montanha que das terras baixas (Berven, Gill et al., 1979); e que as populaes de
montanha de R. sylvatica apresentam adaptaes a esse ambiente, como maior
tamanho de ovos e ninhos (Berven, 1981; Berven, 1982).
27
Objetivos
1. Objetivo geral
2. Objetivos especficos
28
Materiais e Mtodos
1. Locais de estudo
2. Espcies
29
gneros distintos, considerados monofilticos, para resolver sua polifilia e parafilia.
Entre esses gneros, estava Rhinella, para o grupo de B. magaritifer, e o gnero
Chaunus, com a espcie-tipo de B. granulosus. Segundo Frost e col. (2006), as
espcies que ns estudamos pertenciam ao gnero Chaunus. Entretanto, com o artigo
de (Chaparro, Pramuk et al., 2007), todas as espcies do gnero Chaunus foram
mudadas para o gnero Rhinella. Apesar das mudanas de nomenclatura, as relaes
filogenticas entre as espcies estudadas continuaram as mesmas de quando ainda eram
do gnero Bufo.
A espcie R. ornata foi revalidada, ainda como B. ornata, na reviso de 2004
de Baldissera, Caramaschi et al., aps ter sido considerada uma sub-espcie de B.
crucifer. Sua distribuio abrange o sudeste do ES, RJ e SP, at o nordeste do PR. Os
adultos de R. ornata habitam diversos tipos de habitats terrestres: floresta primria e
secundria, clareiras e pastos, e esto sempre associados ao ambiente florestal (Heyer,
1990). A reproduo de R. ornata explosiva e restrita ao incio (junho- julho) e ao
fim (outubro novembro) da estao chuvosa (Bertoluci e Rodrigues, 2002).
R. icterica pertence ao grupo de R. marina e possui ampla distribuio
geogrfica, abrangendo Brasil, Paraguai e Argentina (Pramuk, 2006). Como R. ornata,
ocupa diferentes tipos de habitats: florestais, clareiras, bancos de areia e at mesmo
imediaes de estradas, quando vai reproduzir. Essa espcie possui reproduo ao
longo de diversos meses, concentrada em agosto a dezembro, e no-explosiva
(Bertoluci e Rodrigues, 2002).
Recentemente, Narvaes e Rodrigues (2009) publicaram uma reviso
taxonmica do grupo de R. granulosa, que possui doze espcies. A identificao das
espcies foi por comparaes da morfologia externa e de dados morfomtricos. Todas
as espcies so associadas a habitats abertos da Amrica do Sul e Panam, sendo que
no Brasil ocupam os domnios da caatinga, do cerrados e de restinga. R. granulosa
ocorre predominantemente na caatinga, nos estados de MG, BA, ES, AL, CE, PB, PE,
PI, RN e SE. Assim como R. ornata, tambm possui reproduo explosiva associada a
chuvas mais fortes, no entanto, a quantidade de indivduos reproduzindo por vez
muito maior em R. granulosa (observao pessoal).
As trs espcies so muito prximas filogeneticamente, sendo que os grupos de
R. marina (o qual pertence R. icterica) + R. crucifer (o qual pertence R. ornata)
considerado como grupo-irmo de R. granulosa (Pramuk, 2006; Chaparro, Pramuk et
30
al., 2007; Pramuk, Robertson et al., 2008). Essas relaes de parentesco so
consideradas bastante confiveis, uma vez que as filogenias foram construdas com
dados morfolgicos combinados com dados moleculares.
Angicos, RN
So Paulo, SP
31
3. Coleta de dados climticos em campo
32
uma hora com registradores de dados de 1,0oC de preciso (ibuttons Maxim),
protegidos da gua com luvas de borracha. Os ibuttons foram posicionados no fundo
dos corpos de gua. A coleta dos dados de temperatura durou em torno de trinta dias
nos microhabitats da EEB, 20 dias nos microhabitats maiores de S. Miguel e oito dias
nos menores e mais efmeros (poas nas rochas ou na vegetao).
As medidas de pH foram feitas com um analisador bioqumico (HACH) em
intervalos de 3 horas, das 6:00 s 18:00. As medidas destes parmetros foram sempre
associadas a uma rea onde havia um ibutton e os eletrodos foram posicionados na
mesma profundidade que os registradores quando possvel (em casos de grande
profundidade, o eletrodo ficou acima do registrador), na maioria das vezes
correspondendo profundidade mxima do microhabitat. Cada microhabitat foi
amostrado no mnimo 3 dias, com exceo do microhabitat Pedreira de Boracia, que
foi amostrado somente um dia, devido falta de gel de KCl para medir o pH na
ocasio. Apresentamos os dados como mdia diria e variao diria mdia. .
Alm dessas medidas, a maioria dos microhabitats foi descrita quanto ao tipo
de substrato, exposio ao sol e quanto ao tamanho e profundidade mxima. Em
relao aos fatores biticos, somente se identificou outros gneros de anuros
coexistindo nos mesmos microhabitats de Rhinella, e a ocorrncia de potenciais
predadores das larvas.
33
girinos foram anestesiados com uma soluo de uretana a 3 g/L, e os indivduos foram
levemente secos em papel toalha (para retirar o excesso de gua) para a determinao
do peso. Para identificar os estgios, usou-se uma lupa. Ao final, as larvas foram
fixadas em formol 10%.
Em Boracia, no foi possvel diferenciar as espcies R. ornata e R. icterica. As
distribuies de massa estgio-especfica so para o gnero, portanto. Em S. Miguel, a
identificao de R. granulosa foi possvel, pelas larvas serem claramente distinguveis
de outras espcies presentes no mesmo microhabitat.
6. Experimentos de campo
34
(registro de hora em hora) em cada uma e uma grande quantidade de alga para
alimentao das larvas.
As larvas eram monitoradas em cada gaiola semanalmente. Aps a abertura das
gaiolas, as larvas eram postas em sacos plsticos e levadas ao laboratrio da EBB. L,
10 larvas por gaiola eram sorteadas para serem analisadas. Cada indivduo era
colocado em um mini-aqurio (construdo com lminas de microscopia e com uma
escala de 1,0 mm ao fundo Figura 7B) e sua foto era tirada. Esse procedimento foi
adotado para minimizar o tempo em que a larva era mantida fora da gua. As fotos
foram analisadas com o software ImageJ para a identificao dos estgios, j que era
possvel aumentar o tamanho da imagem sem distorc-la, e verificar os caracteres
morfolgicos marcantes, como indicado na tabela de identificao de Gosner (1960).
Figura 7. Fotos
representativas da gaiola
(A) e do mini-aqurio (B)
utilizados nos
experimentos de campo.
A) As gaiolas foram
confeccionadas com o uso
de cestos de plstico com
aberturas laterais e sem
fundo, recobertas por uma
tela. Periodicamente, as
gaiolas eram abertas e as
larvas coletadas para serem
pesadas e estagiadas. B)
Mini-aqurio construdo
com lminas de
microscpio e borrachas de
paredes. As fotos eram
tiradas nesse aparato,
permanecendo as larvas em
posio lateral e em gua.
35
Em seguida as larvas eram pesadas em balana de 0,01 g de preciso, aps
serem rapidamente secas em papel toalha. Ao final, contvamos o nmero de larvas
remanescentes em cada gaiola, para a posterior criao de curvas de sobrevivncia
pelo tempo. Terminadas as medies, descarregvamos os dados de temperatura de
cada gaiola e as larvas eram recolocadas nos sacos plsticos e devolvidas sua gaiola
de origem. Esse procedimento era repetido a cada semana at a maioria das larvas
atingir os estgios 41/42, que representam o final do desenvolvimento larval.
Os metamorfos sobreviventes de cada gaiola foram levados ao laboratrio e
criados com alimentao de drosfilas at crescerem o suficiente para serem
identificados. Com tamanhos de aproximadamente 1,0 cm, os juvenis de R. ornata j
so distinguveis dos juvenis de R. icterica, pelo formato do corpo, tamanho dos
membros posteriores e padro de manchas no dorso.
36
Aps cinco dias de desenvolvimento, os embries j haviam se tornado larvas, nos
estgios 25-26 (Figuras 8C e 8D), segundo a tabela de Gosner (1960), com as
brnquias externas atrofiadas e o oprculo fechado. Nessa fase, mais seis cordes de
ovos foram descartados por no apresentarem desenvolvimento adequado dos
embries. Como a maioria dos cordes inviveis estava nas bacias menores,
especulamos que o fator espao seja relevante para o sucesso do desenvolvimento das
larvas em condies semi-artificiais. O experimento estava programado para ter incio
quando as larvas atingissem o estgio 26, mas como as larvas ainda estavam muito
pequenas e frgeis para a manipulao, o experimento teve incio aps sete dias de
desenvolvimento. Nos dois dias anteriores ao incio, foram ofertados 20 g de
alface/dia, para que as larvas crescessem o suficiente para o incio das manipulaes.
No sendo possvel encontrar e manter nove poas temporrias naturais,
optamos por simul-las com o uso de recipientes de plstico alocados em buracos de 5
cm de profundidade na terra (Figura 9). Cada recipiente possuiu dois buracos a essa
mesma altura para evitar que se enchessem alm desse nvel com eventuais chuvas.
Trinta larvas de cada famlia foram sorteadas para serem postas em gaiolas e
distribudas aleatoriamente em uma das poas artificialmente construdas. Trs famlias
por dia foram distribudas nos microhabitats semi-naturais, sendo que as trs ltimas e
as trs primeiras famlias possuram dois dias de diferena no desenvolvimento.
Diariamente, o nvel de gua era conferido e completado quando necessrio com gua
de chuva provinda de cisternas. Cada gaiola foi suprida com 20 g de alface fervido. As
poas temporrias foram os microhabitats de maior variao trmica e de altas
temperaturas, sendo muito interessantes de serem estudados em campo.
Aps a distribuio das gaiolas, a cada dois dias de intervalo, as gaiolas eram
abertas, as larvas sobreviventes coletadas, contabilizadas, e trazidas casa de campo
para serem fotografadas e pesadas individualmente, com o mesmo procedimento que
as larvas de R. ornata e R. icterica. A cada dia, os dados de trs famlias eram
coletados, e as larvas permaneceram fora de seus microhabitats por aproximadamente
4 horas enquanto as manipulaes eram feitas.
Finalizada as manipulaes, as larvas eram devolvidas s suas gaiolas em seus
microhabitats iniciais, adicionadas de 20 g de alface fervido. Esse procedimento foi
repetido at que o ltimo grupo de larvas atingisse o ltimo estgio larval (Gosner 42,
37
quando os membros anteriores surgem) ou at a morte total das larvas em alguns
casos.
38
Figura 9. Gaiolas e microhabitats semi-naturais do experimento de campo
com Rhinella granulosa. A) Gaiola utilizada nas poas semi-naturais o controle
do nvel da gua foi possvel com o uso de recipientes plsticos com furos nas
laterais (5 cm de altura); B) Distribuio das poas semi-naturais cada recipiente
foi alocado em um buraco na terra e as gaiolas foram inseridas no interior dos
recipientes, tendo suas posies sorteadas.
39
7. Experimentos de laboratrio
40
1 4
(oC) 40 40
(oC)
Temperatura (oC)
Temperatura (oC)
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10
2 5
40 40
Temperatura (oC)
Temperatura (oC)
(oC)
(oC)
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10
3 6
Temperatura (oC)
40
( oC)
( oC)
Temperatura (oC) 40
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10
Dias Dias
41
temperaturas mximas pudessem ser atingidas. A gua foi oxigenada constantemente
por meio de bombas de ar (Acqua Flux, Master Ind. De Equip. para Piscicultura, So
Paulo-SP, Brasil), cada duas bacias com uma bomba de duas sadas. Cada bacia
conteve um carregador de temperatura medindo a cada dez minutos, por um perodo
de no mnimo duas semanas de experimento.
Com o intuito de calcularmos taxas de crescimento e tempos de
desenvolvimento individuais, optamos por manter as larvas separadas entre si, na
mesma bacia, com o uso de redinhas de aqurio. Estas permaneceram apoiadas em um
suporte de isopor, e cada bacia conteve 12 redinhas, com um volume aproximado de
0,5 L para cada redinha (Figura 11). Pelo fato da sala climatizada ser heterognea,
devido posio do equipamento de resfriamento, utilizamos um delineamento em
blocos, com todos os tratamentos em cada bloco. Foram 3 blocos A, B e C
organizados sistematicamente na sala, na tentativa de se distribuir entre os tratamentos
os possveis efeitos da heterogeneidade da sala (Figura 12). A posio dos blocos ficou
limitada pela distribuio das tomadas na sala, sendo que no foi possvel manter o
bloco A todo junto em frente ao equipamento de resfriamento.
42
PORTA A6 A3
PIA
A5 A2
A4 A1
VENTO
B3 B2
C5 C6
B6 B5 B1 B4 C3 C2
C4 C1
RESFRIAMENTO
43
Figura 13. Amplexo e cordes de ovos de R. ornata e R. icterica em Boracia. A)
Amplexo de um casal de R. ornata na pedreira. B) Cordo de ovos de R. ornata. C)
Cordo de ovos de R. icterica. D) Cordes de R. ornata, direita, e R. icterica, em
potes de coleta. Note a diferena de tamanho dos ovos das duas espcies.
44
suficiente. Para manter o mesmo padro com R. icterica, suas larvas tambm foram
alimentadas antes do incio do experimento, mesmo sendo as larvas nos estgios 25-26
de tamanho suficiente para se manterem nas redinhas.
A diviso das larvas nos diversos tratamentos foi feito por sorteio aps oito
dias de desenvolvimento. Um indivduo era pego do conjunto inicial de larvas de cada
famlia e atribudo a um tratamento (1 a 6) e a um bloco (A, B ou C). Em seguida, sua
posio na bacia (1 a 12) era sorteada. Quando a posio j estava ocupada por outra
larva, a prxima posio livre era selecionada. Cada tratamento possuiu duas larvas de
cada famlia (que no caso de R. ornata, totalizou doze larvas por bacia, e para R.
icterica somente duas larvas por bacia, pois houve apenas uma famlia no
experimento). Cada indivduo possuiu um cdigo de trs nmeros, que representava a
famlia, o tratamento e a rplica, respectivamente. De cada famlia, trinta e seis larvas
foram distribudas nos tratamentos, sendo que cada tratamento teve 6
rplicas/indivduos por famlia, totalizando 216 larvas no experimento todo para R.
ornata, e 36 mesmo para R. icterica. Posteriormente ao sorteio, cada larva recebeu
alface fervido ad libitum.
Somente para as larvas de R. icterica foi possvel tirar fotos e pesar no dia do
sorteio, pois no caso de R. ornata, as larvas foram muitas para ser feito o mesmo. As
fotos e a pesagem de cada larva foram efetuados a cada dois dias de intervalo, com o
uso do mini-aqurio e balana de 0,01 g de preciso. A balana foi calibrada em todos
os dias nas quais foi usada. As larvas eram retiradas das redinhas, postas no mini-
aqurio, a foto tirada, e aps a larva ser rapidamente seca com papel-toalha, era
finalmente pesada, em um pote com gua. Em seguida, a larva era devolvida bacia
original. Todo esse procedimento levou em torno de dois minutos por larva. As mortes
eram registradas no dia da ocorrncia, e os cadveres retirados das bacias. Essas
medies foram repetidas at que todas as larvas atingissem o estgio Gosner 42,
finalizando o desenvolvimento larval.
Ao longo do experimento, a gua foi trocada semanalmente (3/4 do total), um
bloco inteiro por dia. A gua era retirada das bacias com um sifo feito de mangueira
plstica e depositada em um balde, para ser descartada em seguida. Como as fezes das
larvas ficavam depositadas no fundo das bacias, esse mtodo de troca de gua foi
eficiente para sugar a sujeira. Usamos reservatrios de gua de torneira, descansada
por um dia (para evaporao do cloro), um com um aquecedor a 20oC e o outro com
45
aquecedor a 27oC, para a reposio da gua nos tratamentos 1-3 e 4-6,
respectivamente. Essa prtica permitiu que as temperaturas corretas fossem mantidas
nos tratamentos aps a troca da gua, que sempre era feita aps as 16:00, quando
todos os tratamentos j estavam na moda da temperatura. No momento da troca, o
suporte de isopor com as redinhas foi translocado para uma bacia de troca, na qual a
gua estava na moda da temperatura do tratamento original. Depois da troca, o
suporte de isopor era devolvido bacia original. A alimentao de alface fervido foi
conferida a cada um dia de intervalo. Quando as larvas chegaram em estgios mais
avanados de desenvolvimento (33-35 para frente), elas passaram a se alimentar mais,
e houve ocasies nas quais se notou falta de comida (que ocorreu somente nos
tratamentos quentes). Aps a deteco desse fato, a comida era reposta
imediatamente.
Ao atingirem o estgio Gosner 42, o incio da metamorfose, as larvas foram
retiradas das bacias e postas em aqurios, e a data registrada para posterior clculo do
tempo de desenvolvimento. Tanto o experimento de R. ornata quanto o de R. icterica
terminaram aps 40 dias.
A partir dos dados coletados de massa a cada dois dias, foram calculadas
curvas de regresso para cada indivduo que sobreviveu at a metamorfose, a fim de se
usar o coeficiente angular como indicador da taxa de crescimento. A grande maioria
das regresses foi linear (87% para R. icterica e 91% para R. ornata) e somente
aquelas com bom ajuste dos dados (r2 > 0,85) foram consideradas para o clculo das
taxas de crescimento e construo de normas de reao de variao trmica. Normas
de reao de massa na metamorfose (massa nos estgios Gosner 41/42) e de tempo de
desenvolvimento tambm foram construdas a partir dos dados de laboratrio; alm de
normas de reao bivariadas, ou seja, das relaes entre estas trs variveis. Com os
dados de contagem das larvas, construmos curvas de sobrevivncia cumulativa, com o
mtodo Kaplan-Meier.
46
seguida, os cordes foram divididos em duas bacias com gua filtrada, na sala
climatizada com fotoperodo controlado 12C : 12E. As bacias possuram bomba de ar,
aquecedor a 24oC e um carregador de temperatura medindo a cada 30 minutos. Aps
alguns dias da coleta, as larvas de um dos cordes de R. ornata foram descartadas, por
morte em excesso de anestsico (uretana a 3 g/L), pois apresentaram um
desenvolvimento inadequado.
Aps uma semana de desenvolvimento, 96 larvas foram pegas e sorteadas em
quatro grupos (24 larvas em cada): aclimatao a 20oC, por 3 dias; aclimatao a
20oC, por 6 dias; aclimatao a 30oC por 3 dias; ou aclimatao a 30oC por 6 dias; em
bacias de 15 L, com aquecedores, bombas de ar e tampadas com tampas plsticas, no
interior da sala climatizada a 17oC. Os perodos de aclimatao correspondem a 1/4 e
1/2 da durao mdia do desenvolvimento das larvas de R. granulosa em seus
microhabitats naturais em S. Miguel. A durao do desenvolvimento larval de R.
granulosa foi utilizada como referncia para os perodos de aclimatao para no
haver o risco das larvas desta espcie ultrapassarem o tempo de desenvolvimento ao
longo da aclimatao, tornando-se juvenis e inviabilizando o experimento. A
alimentao foi de alface fervido ad libitum.
Os experimentos de temperatura crtica mxima (TCMax) foram realizados em
um banho-maria, no qual as larvas eram colocadas em dois recipientes plsticos com
fundo de tela, 2 larvas por recipiente (Figura 14). As larvas permaneciam dez minutos
nesses recipientes temperatura de seu grupo original (20oC ou 30oC), para se
acostumarem com o novo ambiente. Aps os dez minutos, inicivamos o aumento da
temperatura uma taxa de aproximadamente 1oC por minuto (a taxa variou de 0,88oC
a 0,93oC). Os testes de aclimatao a 20oC e 30oC foram feitos no mesmo dia,
intercaladamente, para uma mesma famlia (desova) e mesmo tempo de aclimatao em
dias. Depois de um teste, toda a gua do banho era retirada por um sifo feito com
uma mangueira, e gelo era adicionado nova gua do banho (mantendo-se sempre um
mesmo nvel de gua, que era marcado com fitas adesivas nos potes ver na Figura
14), na quantidade suficiente, at a mesma atingir a temperatura de 20oC ou 30oC,
dependendo de qual teste iria ser o prximo. Em seguida, mais quatro larvas de
determinado grupo de aclimatao eram postas nos potes (duas em cada), e passados
os dez minutos, um novo teste era iniciado. Esse procedimento de intercalao dos
47
testes a 20oC ou 30oC evitou uma correlao de horrio do teste com temperatura de
aclimatao.
Ao redor dos 38oC, as larvas eram levemente tocadas na cauda com
termmetros para estimular o movimento. O experimento foi finalizado quando as
larvas no respondiam mais a cinco toques. Nesse momento, a temperatura
considerada como a TCMax era registrada com o termmetro e a larva transferida para
gua a temperatura ambiente, em potinhos de plstico, sendo que a ordem de teste das
larvas foi mantida para posterior identificao de cada indivduo. Testamos entre dez e
dezesseis larvas para cada temperatura de aclimatao, por famlia, sendo que o
experimento teve durao mdia de cinco horas. No dia seguinte, as larvas eram
conferidas em seus potinhos quanto sobrevivncia, e o dados de TCMax eram
considerados vlidos somente se a larva estivesse viva.
48
8. Anlise Estatstica
49
Resultados
10
Ms do ano
B 20
Pluviosidade (mm)
10
0
3/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10
Ms do ano
C 40
Temperatura (oC)
30
20
03/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10 5/10
Ms do ano
50
D
30
Temperatura (oC)
20
10
0
3/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10
Ms do ano
E
50000
Radiao solar diria (W/m2)
40000
30000
20000
10000
0
10/2/2009
3/09 23/3/2009 7/09
4/5/2009 15/6/2009
11/09 26/7/2009 3/10
6/9/2009
Ms do ano
F
50000
Radiao solar diria (W/m)
2
40000
30000
20000
10000
0
11/8/093/09 7/09
10/10/09 11/09
9/12/09 3/10
7/2/10
Ms
Msdo
doano
ano
Figura 15. Parmetros climticos de S. Miguel (A,C,E) e de Boracia (B,D,F). Os
parmetros mostrados foram medidos com o uso de estaes microclimticas instaladas
nos locais de estudo. O registro foi de um ano para Boracia e um ano e cinco meses para
S. Miguel. A,B) A distribuio de chuva mais homognea em Boracia que em Miguel,
e no segundo ano de medidas neste ltimo local houve uma seca; C,D) As temperaturas
so mais elevadas no geral em S. Miguel, porm a variao grande nos dois locais; E,F)
A radiao solar diria no geral maior em S. Miguel. Esses grficos demonstram a
grande diferena de clima entre os locais, indicando que S. Miguel tem caracterstica de
serto.
51
As diferenas entre os locais so bastante grandes: em Boracia a pluviosidade
anual foi de 3.427 mm, com chuvas relativamente bem distribudas pelos meses (menos
chuva nos meses de abril a setembro), enquanto que nos dois anos em S. Miguel foi de
898 e 228 mm, respectivamente, com chuvas concentradas nos meses de fevereiro a
abril; a temperatura em Boracia variou em mdia entre 14,0oC e 23,7oC (com
variaes sazonais perceptveis) e teve mdia de 17,8oC, ao passo que em S. Miguel,
variou em mdia entre 22,0oC e 35,0oC e teve como mdia 27,4oC; finalmente, a
radiao solar diria mdia foi de 19.206 W/m2 em Boracia, e de 31.935 W/m2 em S.
Miguel. Os dados de clima demonstram que S. Miguel um local tipicamente
caracterizado como serto semi-rido.
52
25oC para S. Miguel). J os valores de variao trmica diria so bem diversos dentro
do mesmo bioma, mas apresenta uma parcela de similaridade entre os biomas
(magnitudes de 3oC a 12oC), apesar de S. Miguel apresentar microhabitats temporrios
de maior variao (14oC a 17,5oC, Figuras 17 e 18). A amplitude trmica mdia de
cada microhabitat apresentou uma correlao de 0,93 e 0,96 com a temperatura
mxima mdia para Boracia e S. Miguel, respectivamente (Figura 18A testes de
correlao de Pearson p < 0,001 para ambas). Essa relao forte entre as variveis
amplitude de variao e temperatura mxima mostra que a diversidade dos
microhabitats dentro de um mesmo bioma causada pela diversidade de temperaturas
mximas atingidas. Boracia mostrou-se mais heterognea espacialmente que o
esperado, mesmo sem apresentar variao trmica to grande quanto S. Miguel.
53
Legenda
Mxima
Mnima
(oC)
Moda
Figura 17. Regimes trmicos dos microhabitats larvais em S. Miguel (Caatinga RN) e
em Boracia (Floresta Atlntica SP). As temperaturas foram registradas a cada 30
minutos, com uso de carregadores de dados depositados no fundo dos microhabitats, ao longo
de vrios dias. Esto representados como barras as amplitudes trmicas mdias, que so a
variao entre as temperaturas mnimas e as mximas mdias, considerando-se todos os dias
medidos. Os pontos so as modas de temperatura.
B
A
(oC)
(oC)
C
(oC)
(oC)
Figura 18. Relao entre amplitude trmica mdia e temperatura mxima mdia (A) e distribuies de
desvios padro das temperaturas mdias mnimas (B) e mximas (C) dos microhabitats de Boracia
(azul) e So Miguel (vermelho). A temperatura dos microhabitats foi medida com o uso de carregadores de
dados depositados no fundo de cada microhabitat, a cada 30 minutos. Cada ponto ou barra nos grficos
correspondem a um microhabitat particular. (A) A reta representa a correlao entre as variveis (Teste de
correlao de Pearson r = 0,93 e r = 0,96, para Boracia e S. Miguel, respectivamente). (B), (C) As
distribuies dos microhabitats de Boracia so mais direita que os de S. Miguel, mostrando que existe
maior variao dia a dia nesses primeiros.
54
As distribuies de desvios padro das temperaturas mdias mnimas (Figura 18B)
e mximas (Figura 18C) dos microhabitats de Boracia so mais deslocadas direita
que as distribuies de S. Miguel. Isso demonstra que os microhabitats de Boracia
variam mais dia a dia nas suas temperaturas mnimas e mximas, sendo por conseguinte
mais imprevisveis.
* Grande parcela das espcies do local: S. Miguel- Pleurodema diplolistris, Physalaemus sp., Scinax,
Phyllomedusa hypochondrialis; Boracia - Hypsiboas polytaenia, Hypsiboas faber, Hypsiboas
microps, Hypsiboas pardalis, Hypsiboas multilineata, Physalaemus cuvieri.
55
3. Distribuio natural de massa estgio-especfica
56
4. Experimentos de campo
Houve uma diferena muito maior na massa final que nos estgios de
desenvolvimento das larvas de R. icterica submetidas ao experimento de campo
(Figura 20). A mediana da massa final das larvas distribudas na cachoeira foi
praticamente duas vezes maior que das larvas na pedreira, e tambm houve diferena
entre as duas gaiolas na cachoeira (Figura 20B). O fator ambiente explicou 99% da
variao dos dados, e o sub-fator gaiola explicou 21% da variao dos dados dentro
do ambiente cachoeira (Tabela 2). Os regimes trmicos das gaiolas possuram modas
bastante similares (19,7oC; 20,1oC - cachoeira; 21,1oC e 21,3oC pedreira), porm as
amplitudes trmicas foram maiores para as gaiolas na pedreira (13oC contra 4oC). As
diferenas na massa mostram que as larvas de uma mesma famlia de R. icterica
possuem plasticidade na massa em condies prximas das naturais, tanto dentro de
um mesmo ambiente (diferena na mdia da massa nas gaiolas da cachoeira, Tabela 3)
quanto entre ambientes.
A
Figura 20. Estgios de
desenvolvimento (A) e massa final
(B) das larvas de R. icterica
submetidas a experimento de campo
com gaiolas. Uma desova de R. icterica
foi distribuda em quatro gaiolas
dispostas duas a duas em dois
ambientes distintos: cachoeira e
pedreira. Cada gaiola teve 30 larvas no
incio do experimento. A cada semana,
o nmero de larvas era contabilizado e
a massa e estgio das larvas
B a determinados. Os boxplots representam
b a mediana (trao), 50% (retngulo) e
95% da distribuio dos dados. (A) O
experimento foi finalizado quando a
Massa final (g)
57
4.2. Curvas de sobrevivncia
O nico parmetro em campo que pde ser comparado entre as trs espcies de
Rhinella foram as curvas de sobrevivncia (Figura 21). Observando-se as quedas das
curvas, notamos trs padres correspondentes a cada espcie: as mortes nas larvas de
R. granulosa somente ocorrem aps 2/3 do desenvolvimento, com uma queda brusca
na maioria dos casos (Figura 21A); em R. icterica, a queda bem gradual, para os dois
ambientes, havendo uma mesma proporo de morte ao longo de todo o
desenvolvimento (Figura 21B); e finalmente, em R. ornata, a queda mais brusca ocorre
logo no incio do desenvolvimento, e depois passa a ser gradual (Figura 21C). Os
regimes trmicos das gaiolas de R. icterica foram os descritos no item anterior, e os de
R. ornata tiveram moda e amplitude de 22,3 oC e 7,4 oC ; e 22oC e 5,4oC. As nicas
curvas que diferiram dentro de uma mesma espcie foram as de R. granulosa (Tabela
4), indicando que h variao na sobrevivncia entre famlias dessa espcie para
microhabitats similares, que foi uma simulao de poa temporria bem rasa. Os
regimes trmicos obtidos foram correspondentes com poas pequenas naturais,
atingindo uma temperatura mxima mdia de 37oC, e por vezes chegando a 40oC
(Figura 21D).
A B
C D
(oC)
Figura 21. Curvas de sobrevivncia cumulativa obtidas em campo para R. granulosa (A), R.
icterica (B) e R. ornata (C); e regimes trmicos simulados em campo para R. granulosa (D). As
gaiolas inciaram com 30 larvas cada, no estgio Gosner 27, e foram dispostas nos microhabitats
indicados nas legendas. A cada 3 dias (R. granulosa) ou a cada 7 dias (R. icterica e R. ornata) as
larvas em cada gaiola eram contabilizadas. Em D esto mostrados os regimes trmicos obtidos na
simulao de poas temporrias.
58
4.3. Massa das fmeas e dos cordes de Rhinella granulosa
Existe uma clara relao linear positiva entre a massa das fmeas de R.
granulosa e a massa de seus respectivos cordes de ovos (Figura 22, teste de
regresso linear F = 38,93 p<0,001), mostrando que quanto maior a fmea, maior o
cordo de ovos. A variao da massa da fmea explicou 73% da variao da massa do
cordo.
5. Experimentos de laboratrio
59
em torno de 8oC, um valor bastante similar diferena natural dos locais de estudo
(ver a diferena nas modas da figura 17). Apesar dos tratamentos terem sido
delineados segundo as modas (20oC para os tratamentos 1,2 e 3; e 27oC para os
tratamentos 4,5 e 6), achamos importante tambm verificar as mdias dos mesmos. As
mdias dos regimes, em geral, no diferiram por mais de 1,5oC das modas do mesmo
regime, embora em alguns tratamentos tanto a moda quanto a mdia diferiram por
mais de 1oC da moda prevista.
Quanto amplitude trmica mdia, notamos que os tratamentos A3, C3, C5 e
A6 de R. ornata ficaram aqum do programado, devido a falhas nos aquecedores ao
longo do tempo (Figura 23A). Para R. icterica, somente o regime B3 teve variao
menor que a esperada (Figura 23B).
A
Legenda
Mxima
Mnima
(oC)
Moda
B
(oC)
60
5.1.2.Curvas de sobrevivncia
61
5.1.3. Normas de reao bivariadas
62
geral das larvas que desenvolveram no bloco 3 (n = 24, enquanto que para os blocos 2
e 3, n = 34 e n = 42, respectivamente).
A B
(oC)
63
A
64
significativa para ambos os fatores isolados e para a interao entre eles (Figuras 27C e
27F, Tabela 7). A massa foi menor na moda correspondente ao tratamento de maior
temperatura e nos maiores valores de variao trmica. A interao entre moda e
variao trmica amenizou o efeito da moda, sendo que nas variaes de 4oC e 8oC a
massa na metamorfose a 20oC e a 27oC de moda foram as mesmas (Figura 29C).
A # D a b
b
E
B #
F
C * c
dc
d
(oC) (oC)
Figura 27. Efeitos independentes dos fatores moda e variao da temperatura nas variveis taxa de
crescimento(A e D), tempo de desenvolvimento (B e E) e massa na metamorfose (C e F) em R. ornata.
As trs variveis foram medidas nas larvas de R. ornata que foram submetidas ao experimento de
desenvolvimento, no qual testou-se os efeitos da moda da temperatura e de sua variao. As taxas de
crescimento foram obtidas pelos coeficientes angulares de regresses massa por tempo, e a massa na
metamorfose e o tempo de desenvolvimento foram determinados quando as larvas atingiram os estgios
Gosner 41/42. Os boxplots representam a mediana (trao), 50% (retngulos) e 95% (barras) da variao dos
dados. * p < 0,001 ANOVA; # p < 0,001 Mann-Whitney; a, b Kruskal-Wallis, seguido de Dunnett T3 p <
0,05; c,d ANOVA seguido de Tuckey p < 0,01.
65
Para R. icterica, no houve a possibilidade de avaliar efeito de famlia, pois
somente uma foi testada. Houve efeito de bloco somente para o tempo de
desenvolvimento (Kruskal-Wallis 2 = 8,35 p = 0,015), e assim como para R. ornata,
o bloco distinto foi o 3. Os efeitos da moda nas variveis de R. icterica foram
similares aos de R. ornata. A taxa de crescimento mdia foi maior para a moda de
27oC, e houve interao entre moda e variao da temperatura (Figura 28A, Tabela 8)
e o tempo de desenvolvimento foi menor nessa moda (teste de Mann-Whitney U = 2,0
p < 0,001; Figura 28B).
A *# D
B # E
C F
(oC) (oC)
Figura 28. Efeitos independentes dos fatores moda e variao da temperatura nas variveis taxa de
crescimento (A e D), tempo de desenvolvimento (B e E) e massa na metamorfose (C e F) em R. icterica.
Os procedimentos para obteno das variveis foram os mesmos descritos na figura anterior. Os boxplots
representam a mediana (trao), 50% (retngulos) e 95% (barras) da variao dos dados. * p < 0,001 ANOVA;
# p < 0,001 Mann-Whitney.
66
Nenhum fator foi significativo para a massa na metamorfose das larvas de R.
icterica, apesar do modelo ter sido significativo (Figura 28C e 28F, Tabela 9). Esse
resultado foi distinto de R. ornata. Alm disso, a variao da temperatura no causou
efeitos significativos em nenhuma das variveis de R. icterica (Figuras 28D, 28E e
28F), sendo esse padro bastante diferente de R. ornata. Porm, uma semelhana entre
as espcies so os efeitos de interao entre moda e variao da temperatura (Figura
29). No geral, maiores variaes trmicas causam uma maior igualdade entre os
valores mdios das variveis dependentes para as duas modas. Ou seja, a interao
entre moda e variao ameniza os efeitos isolados da moda.
A D
B E
Variao da
temperatura (oC)
0
4
8
C F
(oC) (oC)
Figura 29. Efeitos de interao entre moda e variao da temperatura nas larvas de R. ornata (A, B e
C) e de R. icterica (D, E e F) submetidas ao experimento de desenvolvimento. As retas so a mdia e o
desvio padro. Os efeitos de interao so perceptveis quando uma ou mais retas no so paralelas s
demais. Para a taxa mdia de crescimento (A, D) e para o tempo mdio de desenvolvimento (B, E) as retas
correspondentes variao de 8oC foram as mais distintas das demais variaes, indicando que nessa
magnitude de variao o efeito isolado da moda amenizado. Para a massa na metamorfose (C e F), a
variao de 4oC foi a mais distinta para as duas espcies, tambm amenizando o efeito isolado da moda.
Porm, em R. icterica, a variao de 8oC tambm causou o mesmo efeito.
67
5.1.5. Normas de reao de variao trmica
A tolerncia trmica mxima das larvas das trs espcies foi determinada pela
temperatura crtica mxima (TCMax). Os fatores espcie, temperatura de aclimatao,
e a interao entre eles foram significativos (Tabela 10). A 20oC de aclimatao, as
TCMax de R. ornata, R. icterica e R. granulosa foram 39,6oC; 41,2oC e 43oC,
respectivamente; enquanto que a 30oC de aclimatao, foram de 42,5oC; 42,5oC e
44,4oC, respectivamente (Figura 31). Observando a figura, percebemos que R.
granulosa possu maior TCMax nas duas temperaturas de aclimatao, com uma
68
norma de mesma inclinao que R. icterica, mas deslocada para cima. A norma de R.
ornata a mais plstica, porm a de menor tolerncia a 20oC de aclimatao.
B
Espcie
R. ornata
R. icterica
(oC)
Figura 30. Normas de reao de variao trmica de variveis do desenvolvimento
das larvas de R. ornata R. icterica. As retas so a mdia e o desvio padro. As larvas
de ambas as espcies foram submetidas aos seis regimes trmicos mostrados no eixo
das abscissas, e as variveis taxa de crescimento (A), tempo de desenvolvimento (B) e
massa na metamorfose (C) foram determinadas para cada indivduo. As normas so
muito similares para ambas as espcies, apesar do timo fisiolgico (maior taxa mdia
de crescimento e menor tempo mdio de desenvolvimento) ser diferente. Observe a
intensa canalizao da massa mdia na metamorfose por volta de 0,25g para ambas as
espcies.
69
Temperatura crtica mxima (oC)
70
Discusso
1. Heterogeneidade ambiental
71
anfbios anuros (por exemplo, (Smith-Gill e Berven, 1979; Olsson e Uller, 2002;
Arendt, 2006; Niehaus, Wilson et al., 2006).
Detectamos uma diferena grande entre as modas de temperatura dos
microhabitats de So Miguel (caatinga) e os de Boracia (floresta atlntica), em torno
de 7oC; e essa diferena foi suficiente para deflagrar diversos efeitos na plasticidade de
desenvolvimento e na tolerncia trmica das espcies em estudo. Porm, notamos uma
sobreposio de magnitudes de variao trmica entre os locais de estudo, indicando
que tanto S. Miguel quanto Boracia apresentam heterogeneidade espacial de
microhabitats de desenvolvimento. Ainda assim, em S. Miguel, encontramos
microhabitats temporrios que apresentaram uma variao de temperatura diria maior
que os de Boracia, como o esperado.
Segundo a Teoria da Aptido em Ambientes Heterogneos (Levins, 1962;
1963), a heterogeneidade ambiental uma condio necessria para o surgimento e
manuteno de plasticidade fenotpica. Portanto, a heterogeneidade espacial observada
para ambos os locais estudados pode ter contribudo para a plasticidade das larvas. Os
dados de tolerncia trmica das trs espcies esto de acordo com essa suposio.
Sendo as temperaturas crticas mximas (TCMax) das espcies superiores s
temperaturas mximas ambientais (Tmax), os indivduos possuem a capacidade
fisiolgica de se desenvolver em diversos microhabitats (considerando apenas a
temperatura), uma vez que toleram a diversidade de temperaturas mximas. Essa
tolerncia permite que as larvas desenvolvam-se em microhabitats trmicos diversos,
favorecendo o surgimento e a manuteno de plasticidade nas variveis de
desenvolvimento.
Contudo, alm da heterogeneidade espacial, ambos os locais possuem
heterogeneidade temporal, que pode ser decomposta em duas escalas: grossa o
indivduo experimenta o mesmo ambiente ao longo da ontogenia, e fina o indivduo
experimenta variao ambiental ao longo da ontogenia (Schlichting e Pigliucci, 1998).
A escala fina facilita o surgimento de uma plasticidade de modulao fenotpica,
enquanto que a grossa facilita o surgimento de fentipos especialistas de cada
ambiente. As distribuies de desvios padro das temperaturas mdias mnimas e
mximas construdas para os microhabitats de Boracia e de S. Miguel indicam o
quanto estes variam dia a dia, ou seja, o quanto variam ao longo do desenvolvimento
de um indivduo (variao em escala fina). Os microhabitats de Boracia so mais
72
heterogneos temporalmente em escala fina que os de S. Miguel, significando que em
Boracia existem condies mais favorveis para a ocorrncia de modulao
fenotpica. Os dados de desenvolvimento em laboratrio com as espcies de floresta
atlntica R. ornata e R. icterica so concordantes com uma alta plasticidade de larvas
provindas de microhabitats com variao de temperatura em escala fina.
bastante interessante notar que apesar dos microhabitats de Boracia serem
mais heterogneos temporalmente, o que facilita o surgimento de plasticidade, eles
tambm so mais imprevisveis, o que dificulta a manuteno de plasticidade
adaptativa. O fato de vrios microhabitats de Boracia apresentarem altos desvios
padro ao redor da mdia de temperatura indica que as mnimas e mximas no so as
mesmas ao longo dos dias. Diferente dos microhabitats de S. Miguel, que possuem
desvios pequenos, indicando que as temperaturas mnimas e mximas so bem
similares entre si, dia a dia. A previsibilidade da variao ambiental um requisito
muito importante para que uma resposta plstica adaptativa possa surgir (Newman,
1992). As larvas somente podero apresentar um fentipo mais vantajoso em
determinada condio se esta condio for possvel de ser detectada, ou seja, se ela for
previsvel de alguma forma. possvel, por conseguinte, que as larvas da floresta
atlntica estejam em condies ambientais que favoream maior plasticidade de
desenvolvimento, mas esta no ser necessariamente adaptativa.
Alm da heterogeneidade temporal ontogentica, ambos os locais apresentam
heterogeneidade temporal entre geraes. A disponibilidade de microhabitats pode
variar em S. Miguel diante dos ciclos de chuva e seca ao longo dos anos. Nos anos de
seca, como o de 2010, a chuva ainda mais escassa, e somente poas temporrias
pequenas se formam (observaes pessoais). Nesse ano, at o ms de abril, os adultos
de R. granulosa no reproduziram. O comportamento reprodutivo dessa espcie,
apesar de explosivo, no idntico ao de outras espcies que habitam a caatinga, como
Physalaemus sp e Pleurodema diplolistris, que se reproduzem mesmo em anos de
chuvas bastante escassas. Aparentemente, a reproduo de R. granulosa ocorre
somente em poas maiores, que se formam quando h mais chuva no ano. Portanto,
pode ser que essa espcie no experimente a heterogeneidade temporal entre geraes
como outras espcies da caatinga.
Devido grande extenso da poca reprodutiva das espcies R. ornata e R.
icterica, que se reproduzem desde o inverno (junho/julho) at o vero
73
(novembro/dezembro para R. ornata e at fevereiro/maro para R. icterica; Bertoluci e
Rodrigues, 2002), as populaes de larvas dessas espcies experimentam uma ampla
variao sazonal de temperatura, que se reflete na variao dos microhabitats. Logo,
considerando todo o conjunto de heterogeneidade ambiental, parece que as populaes
de larvas das espcies da floresta atlntica presenciam maior variao de temperatura
que R. granulosa. Essa sugesto dos dados vai contra a nossa previso de que a
caatinga seria mais heterognea que a floresta atlntica.
74
amplitudes trmicas muito distintas, sendo trs vezes mais varivel na pedreira (por
ocorrerem temperaturas mximas bem maiores que no poo da cachoeira). O uso das
gaiolas, permitindo o acompanhamento das mesmas larvas e impedindo a ao de
potenciais predadores; a alimentao idntica (alga) e o uso de larvas provindas de
uma mesma desova reduziram as diferenas entre os microhabitats de outros fatores
alm da temperatura, promovendo maior confiana na ao desse fator no
desenvolvimento. A diferena de praticamente duas vezes na massa das larvas que
desenvolveram na pedreira e das que desenvolveram no poo da cachoeira, alm da
diferena menor encontrada entre as gaiolas dentro do habitat cachoeira, sugerem que
as diferenas de variao trmica so efetivas em suscitar plasticidade fenotpica em R.
icterica.
Essa sugesto final est de acordo com a teoria de Levins (1962, 1963) e com
estudos experimentais, tanto intra-populacional quanto interespecfico, com larvas de
anuros (Van Buskirk, 2002; Lind e Johansson, 2007), de que a heterogeneidade
ambiental correlacionada com o grau de plasticidade fenotpica. Lind e Johansson
(2007) trabalharam com 14 populaes de Rana temporaria distribudas em diferentes
ilhas na Sucia, que diferiam na disponibilidade de habitats quanto permanncia
(durao antes de secarem). Os autores encontraram uma correlao positiva entre a
plasticidade no tempo de desenvolvimento das larvas e a variao de regimes de
permanncia (risco de secagem) dos habitats de uma mesma ilha. Van Buskirk (2002)
estudou a plasticidade morfolgica e comportamental em 16 espcies de anuros diante
de dois ambientes distintos: presena ou ausncia de predador (larva de liblula). As
espcies diferiam no uso de habitats, sendo mais ou menos permanentes, e portanto
com mais ou menos predadores. Ele utilizou estatstica filogentica para anlise dos
resultados e mostrou que maiores variaes na predao dos ambientes das espcies
(ou seja, ambientes com alta diversidade de permanncia de habitats) foram
acompanhadas de aumentos evolutivos na plasticidade de resposta predao. Esses
estudos indicam que a plasticidade fenotpica pode evoluir como resposta
heterogeneidade ambiental.
3. Sobrevivncia
R. ornata parece ser mais sensvel morte nos estgios mais iniciais de
desenvolvimento, apresentando queda na sobrevivncia cumulativa logo no incio do
75
experimento de campo, enquanto R. icterica e R. granulosa apresentaram uma queda
mais gradual na sobrevivncia. possvel que essas ltimas espcies sofram com a
exposio mais prolongada a possveis fatores de morte, enquanto R. ornata sofre j
com a exposio aguda. Esse argumento parece bastante plausvel para R. granulosa,
pois o regime trmico obtido nas gaiolas distribudas no campo foram similares aos de
poas temporrias, que apresentam maior risco de picos elevados de temperatura. Os
mximos de temperatura nessas gaiolas chegaram a 39,5oC/40 oC, temperaturas
bastante elevadas. Apesar disso, a sobrevivncia das larvas de R. granulosa por 2/3 do
experimento foi de aproximadamente 90%, havendo quedas somente bem ao final. Isso
mostra que as larvas toleraram altas temperaturas por relativamente um longo tempo
de desenvolvimento, mas que talvez essa exposio crnica as tenha fragilizado ou que
os estgios mais tardios (acima de Gosner 41) tenham sido mais sensveis a altas
temperaturas, como j reportado em algumas espcies de bufondeos (Sherman, 1979;
Floyd, 1982).
O padro de sobrevivncia ao longo da ontogenia das larvas de R. ornata em
laboratrio foi similar ao do campo. No experimento de desenvolvimento, houve maior
mortalidade nos regimes trmicos mais frios no incio do desenvolvimento, ao redor do
dcimo dia. Porm, esse padro no se repetiu para os regimes mais quentes, nos quais
a morte das larvas de R. ornata foi menor em geral e mais gradual. A maior
sobrevivncia nos regimes mais quentes, que so incomuns na floresta atlntica, foi
inesperada. A alta sobrevivncia em laboratrio das larvas de R. icterica tanto nos
regimes mais frios quanto mais quentes tambm foi inesperada, apesar de em campo a
sobrevivncia em distintos microhabitats de Boracia no ter sido diferente. Esse
resultado mostra que as espcies de floresta atlntica sobrevivem bem em novas ou
raras condies de temperatura, como os regimes tpicos da caatinga. Como
detectamos alta sobrevivncia em regimes mais quentes para as trs espcies,
possvel que essa varivel no limite a permanncia de espcies na caatinga, ao menos
na fase larval. Contudo, quanto s larvas das espcies de floresta, um possvel limite da
sobrevivncia em altas temperaturas pode existir, uma vez que no experimento de
desenvolvimento no foi possvel submeter as larvas a temperaturas to elevadas
quanto 40oC, mais comuns na caatinga.
76
Os tratamentos impostos s larvas de R. ornata e R. icterica foram efetivos em
deflagrar distintos padres de relao entre as variveis taxa de crescimento, tempo de
desenvolvimento e massa na metamorfose. A alterao dos padres se deu
especialmente devido aos efeitos suscitados pelas distintas modas de temperatura, que
foi a grande diferena observada entre os microhabitats de Boracia e S. Miguel. Essas
relaes entre variveis dependentes podem ser consideradas como normas de reao
bivariadas e analisadas dessa forma quanto plasticidade.
A taxa de crescimento a 27oC mudou mais com o tempo de desenvolvimento
do que a 20oC. Isso significa que a sensibilidade trmica das larvas na moda mais
quente maior, e que a relao entre taxa de crescimento e tempo de desenvolvimento
temperatura-dependente. Esse resultado est de acordo com os resultados de Smith-
Gill e Berven (1979) para Rana pipiens, nas correlaes entre tempo de
desenvolvimento e taxa de crescimento a 18oC, 23oC e 28oC (Figura 4 de Smith-Gill e
Berven, 1979). Apesar da correlao a 18oC no ter sido significativa, seu padro foi
inverso quando comparado a 23oC e 28oC, sendo positivo na primeira temperatura (ou
seja, taxas de crescimento maiores foram acompanhadas de tempos de
desenvolvimento maiores) e negativo nas duas outras. Portanto, uma diferena entre
5oC e 10oC na temperatura de desenvolvimento das larvas pode causar uma alterao
de sensibilidade trmica das mesmas ou at mesmo uma inverso nos padres de
normas bivariadas de taxa de crescimento e tempo de desenvolvimento, assim como
visto por Smith-Gill e Berven (1979).
As correlaes negativas que ns obtivemos para essas normas (ou seja, quanto
mais rpido o crescimento, menos tempo de desenvolvimento) esto de acordo com os
resultados de Newman (1989) para Scaphiopus couchii, que desenvolveram em menor
densidade ou maior disponibilidade de comida, e apresentaram desenvolvimento mais
rpido junto de crescimento mais rpido. Contudo, em Discoglossus galgonoi, Alvarez
e Nicieza (2002) no encontraram perodos larvais mais curtos diante de crescimento
mais rpido, associado com uma dieta protica diante de uma herbvora. Percebemos
ento que, para alguns fatores ecolgicos como densidade e quantidade de alimento,
assim como para algumas temperaturas, o desenvolvimento mais rpido est
correlacionado com um crescimento mais rpido. Mas, para outros fatores, como a
qualidade da dieta, esse padro no visto.
77
A correlao positiva entre massa na metamorfose e tempo de desenvolvimento
encontrada na moda de 20oC um resultado previsto pelas teorias ecolgicas
relacionadas com massa na metamorfose. A teoria de Wilbur e Collins (1973) prev
que larvas de crescimento mais lento (condizente com as menores taxas de crescimento
que obtivemos a 20oC) permanecero mais tempo no habitat aqutico at atingirem sua
massa tima na metamorfose (uma massa maior). Werner (1986), que expandiu a
teoria de Wilbur e Collins (1973) incluindo um compromisso entre mortalidade e taxa
de crescimento, previu que a extenso do tempo de desenvolvimento no habitat
aqutico seria vantajosa enquanto a oportunidade de crescer superasse o risco de
mortalidade. Finalmente, Rudolf e Rdel (2007) previram que em habitats
permanentes, o risco de mortalidade no varia com o tempo (pois no h risco de
secagem do habitat), no havendo portanto uma seleo para acelerao da
metamorfose. Deste modo, a resposta na moda mais fria est de acordo com todas as
teorias ecolgicas.
O padro inverso obtido para a norma bivariada de massa na metamorfose e
tempo de desenvolvimento na moda de 27oC mostra que essa relao tambm
temperatura-dependente. A correlao negativa indica que prolongar o tempo de
desenvolvimento no resulta em maior massa. Observando-se as normas de massa na
metamorfose e taxa de crescimento, que so correlaes positivas para ambas as
modas, notamos que as larvas a 27oC que atingiram a mesma faixa de massa que as
larvas a 20oC (entre 0,20 e 0,30g) foram as que atingiram taxas de crescimento
superiores (entre 20 e 30 mg/dia). Desse modo, apesar dessas larvas terem reduzido
seu tempo de desenvolvimento diante das larvas a 20oC, a maior acelerao nas taxas
de crescimento compensou a massa na metamorfose. Porm, existiram larvas na moda
mais quente que obtiveram as mesmas taxas de crescimento que as larvas a 20oC (entre
5 e 20 mg/dia), mas tambm reduziram o tempo de desenvolvimento. Ou seja, a
acelerao do desenvolvimento no foi acompanhada na mesma proporo por uma
acelerao do crescimento, e assim a massa na metamorfose ficou menor. Essas larvas
a 27oC que possuram massa menor, foram mais sensveis temperatura no tempo de
desenvolvimento que na taxa de crescimento. Esse resultado condizente com a regra
de Smith-Gill e Berven (1979), de que a sensibilidade trmica da taxa de diferenciao
maior que a de crescimento. No entanto, essa regra no foi vlida para todas as
78
larvas, uma vez que observamos acelerao do crescimento e do desenvolvimento na
mesma proporo.
O grande resultado dessas normas bivariadas que existem diferenas
individuais na sensibilidade trmica das larvas. A regulao do desenvolvimento diante
da temperatura pode ser modulada no nvel individual, indicando que existe substrato
para atuao da seleo natural na sensibilidade trmica individual. Esse resultado
suporta os achados de Berven, Gill et al. 1979, que encontrou diferentes sensibilidades
trmicas do desenvolvimento nas populaes de plancie e montanha de Rana
clamitans, no sentido de mostrar que existem diferenas individuais na sensibilidade
das larvas capazes de serem selecionadas em distintos ambientes, e resultarem em
populaes de sensibilidades distintas.
79
30oC), assim como R. icterica, quando comparamos a moda de 20oC com 27oC.
Provavelmente o aumento da taxa de crescimento de R. icterica compensou a reduo
do tempo de desenvolvimento, enquanto isso no ocorreu com R. ornata. Esse
resultado aponta para uma sensibilidade trmica do crescimento similar ao do
desenvolvimento em R. icterica, sendo um padro diferente do observado por Smith-
Gill e Berven (1979).
Os efeitos isolados da variao trmica revelaram que R. ornata mais sensvel
que R. icterica, j que nesta ltima espcie no houve nenhum efeito da variao da
temperatura. Em R. ornata, a maior variao trmica causou reduo da taxa de
crescimento com a conseqente reduo da massa na metamorfose. Esses resultados
diferem parcialmente do que foi encontrado em larvas de Limnodynastes peronii que
desenvolveram em um regime de mdia de 24oC constante e outro de mesma mdia,
mas que variou 14oC no dia (Niehaus, Wilson et al., 2006). As larvas de L. peronii
apresentaram maior taxa mdia de crescimento e menor tempo mdio de
desenvolvimento e massa na metamorfose no regime de variao trmica. Ou seja, os
efeitos da variao trmica nas taxas de crescimento foram opostos nas duas espcies e
similares na massa na metamorfose. Niehaus, Wilson et al. (2006) afirmaram que os
efeitos da variao trmica foram os mesmos dos efeitos de altas temperaturas
constantes reportados na literatura, e inclusive vistos nesse estudo para a moda de
27oC. As larvas aceleraram a metamorfose, mas no aceleraram as taxas de
crescimento na mesma proporo, havendo uma reduo da massa quando
comparados com o regime constante.
Sob uma perspectiva fisiolgica, a queda observada nas taxas de crescimento
em R. ornata diante de altas variaes trmicas intrigante. A grande diferena entre
os regimes constantes e os regimes variveis, dentro de uma mesma moda, foi a
magnitude dos picos de temperatura, pois a mnima diferiu muito pouco das modas
(18oC para 20oC nos frios e 25oC para 27oC nos quentes). Em temperaturas mais altas
o metabolismo basal dos ectotermos maior, e menos energia canalizada para o
crescimento (Hochachka e Somero, 2002). Porm, se as larvas aumentam sua captao
e assimilao de alimento, o crescimento ainda poderia ser mantido inalterado.
Aparentemente, as larvas de R. ornata em regimes variveis no aumentam seu ganho
de energia na mesma proporo que aumentam seu metabolismo diante de
temperaturas mais altas, gerando um compromisso de alocao. Uma maior parte da
80
energia assimilada foi alocada para a manuteno do metabolismo, restando menos
energia para o crescimento. Os compromissos ecolgicos, como de alocao, aquisio
e generalista-especialista, foram considerados por Angilletta, Wilson et al. (2003)
como moduladores da evoluo de normas de reao. O compromisso de alocao
pode ter ocorrido devido a uma menor captao de alimento ou a uma menor
assimilao da energia, se a digesto e a absoro forem menores em maiores picos de
temperatura. Esses processos fisiolgicos normalmente apresentam uma faixa de
temperatura tima, que determinada pelos timos de atividade enzimtica
(Hochachka e Somero, 2002). Com o compromisso, as larvas de R. ornata cresceram
menos e acabaram por ter uma massa menor nos regimes mais variveis.
As diferenas ecolgicas entre R. ornata, R. icterica e L. peronii tambm
podem ter contribudo para o efeito distinto da variao trmica nessas espcies. As
larvas das trs espcies ocorrem tanto em habitats aquticos mais permanentes quanto
mais efmeros, contudo Niehaus, Wilson et al. (2006) justificaram as respostas das
larvas de L. peronii de acelerar mais o desenvolvimento pelo fato de serem sujeitas ao
risco de secagem de habitats efmeros, os quais apresentam alta variao trmica
diria. Se seguirmos com essa linha de raciocnio, poderamos sugerir que as larvas de
R. ornata e R. icterica desenvolvem-se em habitats efmeros em menor freqncia que
as larvas de L. peronii, no apresentando a resposta tpica ao risco de secagem,
descrita inicialmente por Newman (1989) em Scaphiopus couchii. Essa resposta, de
acelerar o desenvolvimento, foi considerada como adaptativa, pois evita a morte no
habitat aqutico (Newman, 1992). Podemos pensar, ento, que enquanto as larvas de
R. icterica simplesmente no apresentam sensibilidade variao trmica por no
desenvolverem freqentemente em habitats efmeros, as larvas de R. ornata
apresentam uma resposta no-adaptativa pela mesma razo. Nesse caso, a sua
sensibilidade variao trmica no teria sido selecionada, e poderia ser uma
manifestao de restrio fisiolgica.
Alm dos efeitos isolados da moda e variao de temperatura, efeitos de
interao entre essas duas variveis foram encontrados, indicando que o efeito da
moda depende da magnitude de variao trmica. Nos regimes variveis as diferenas
na massa na metamorfose entre as duas modas diminuram, assim como as diferenas
na taxa mdia de crescimento e no tempo mdio de desenvolvimento tambm
diminuram, especialmente variao de 8oC. Isso sugere que os maiores picos de
81
temperatura dos regimes variveis alteram a fisiologia das larvas, principalmente na
moda mais fria, reduzindo mais o tempo de desenvolvimento do que acelerando a taxa
de crescimento, resultando em uma massa na metamorfose menor e mais similar
moda mais quente.
82
essa relao para as espcies da floresta atlntica, mas como o parentesco entre as trs
espcies de Rhinella alto, provvel que a relao seja vlida tambm para R. ornata
e R. icterica.
As formas das normas de reao de variao trmica foram bastante similares
entre as duas espcies, sendo condizente com seu alto parentesco filogentico e com os
resultados de outros estudos com espcies aparentadas (por exemplo, Blouin, 1992;
Morey e Reznick, 2004). Entretanto, as normas no foram idnticas: os regimes
trmicos nos quais as larvas de R. ornata e R. icterica apresentaram otimizao
simultnea da taxa mdia de crescimento e do tempo mdio de desenvolvimento no
foram os mesmos. R. ornata obteve maior crescimento e menor tempo de
desenvolvimento no regime quente constante e R. icterica obteve o mesmo no regime
quente de variao trmica de 4oC. Apesar dessa diferena, o regime trmico de maior
aptido (de maior massa) foi o mesmo para ambas as espcies, o de 20oC constante.
interessante notar que o fentipo de maior aptido no foi obtido nos regimes que
otimizaram as variveis de desenvolvimento, mas sim no regime que suscitou maior
crescimento total das larvas devido ao longo tempo de desenvolvimento apresentado
por estas. O fato das larvas terem maior aptido em um regime comum da floresta
atlntica aponta para um bom ajuste entre fentipo e ambiente nessas espcies. Essa
resposta tpica de larvas que freqentam habitats permanentes, sem restrio de
tempo e de baixa presso de predao (Wilbur e Collins, 1973; Werner, 1986; Rudolf e
Rdel, 2007).
Outra semelhana entre as normas de massa na metamorfose das duas espcies
que chama muita ateno a forte canalizao da massa em torno de 0,25 g ante uma
variao de regimes trmicos bastante grande. Essa canalizao resultado da
interao entre moda e variao de temperatura, j que os maiores picos de
temperatura nos regimes variveis de moda 20oC culminaram em uma massa menor
que a 20oC constante, igualando a massa na metamorfose nos regimes de modas 20oC
e 27oC. Essa queda da massa indica que as larvas perderam aptido com o efeito da
variao trmica, caracterizando, portanto, um custo de plasticidade fenotpica quando
comparamos com a ausncia de variao. Essa queda da massa est relacionada com a
regra de Smith-Gill e Berven (1979), de maior sensibilidade trmica do
desenvolvimento que do crescimento.
83
O custo de plasticidade descrito aqui distinto do custo de plasticidade
descrito por DeWitt, Sih et al. (1998). Segundo esses autores, o custo de um
organismo plstico deve ser comparado ao de um organismo no-plstico, sendo que o
custo medido como uma perda de aptido, ou seja, a apresentao de uma
plasticidade no-adaptativa. Acreditamos que comparar a aptido de fentipos em
diferentes ambientes tambm pode esclarecer se a plasticidade trouxe um benefcio ou
um custo. Parece, portanto, que as espcies de floresta atlntica, sendo sensveis ao
efeito da interao entre moda e variao trmica, apresentaram plasticidade no-
adaptativa e perderam aptido. Newman (1998) argumentou que a interao entre
fatores ambientais poderia limitar as condies nas quais a resposta plstica adaptativa
pudesse ocorrer, exatamente como visto empiricamente nesse estudo.
Quando focamos na resposta das larvas somente nos regimes trmicos de moda
27oC, percebemos que no houve uma queda da massa do regime constante para o
varivel em parte da norma de R. ornata e em toda a norma de R. icterica. Ou seja, a
canalizao da massa nessa poro da norma significou manuteno da aptido perante
variao trmica. Segundo (Waddington, 1960), a canalizao resulta da eliminao
por seleo natural de alelos que sensibilizem o sistema de desenvolvimento variao
ambiental estressante. A definio de um ambiente estressante pode ser dada de mais
de uma maneira. Em diversos estudos com larvas de anuros, estresse implicitamente
definido como uma condio ambiental que leva perda de aptido. Exemplos dessas
condies so altas densidades, risco de secagem do habitat aqutico, presena de
predadores, entre outros (por exemplo, Newman, 1989; Steiner e Van Buskirk, 2008).
Entretanto, seguindo a teoria de normas de reao, um ambiente estressante aquele
de baixa freqncia de ocorrncia, no exercendo uma presso seletiva significativa
sob a populao (Schlichting e Pigliucci, 1995) ou um ambiente nunca encontrado
antes pela populao, impondo um desafio manuteno da homeostase (Ghalambor,
Mckay et al., 2007). Se utilizarmos esta ltima definio, realmente podemos denotar
os regimes mais quentes como estressantes para as larvas de R. ornata e R. icterica,
pois so regimes tpicos da caatinga.
O argumento de Waddington (1960) poderia ser aplicado para a canalizao da
massa vista nas espcies da floresta se alelos que determinam a sensibilidade diferencial
da diferenciao e do crescimento (seguindo a regra de Smith-Gill e Berven, 1979)
tivessem sido eliminados das suas populaes, resultando em uma insensibilidade
84
trmica da massa na metamorfose. Porm, para que essa sugesto seja vivel, alelos
distintos teriam que ser expressos em regimes mais frios e mais quentes. Se fossem os
mesmos alelos, a eliminao destes tambm conferiria insensibilidade da massa nos
regimes de 20oC de moda. Se so alelos distintos expressos nos regimes de distintas
modas, a resposta das espcies poderia ser denominada de converso do
desenvolvimento, em vez de modulao fenotpica, havendo um limiar de temperatura
para a expresso de um conjunto de alelos ou a expresso do outro conjunto. Uma
explicao alternativa que os alelos que conferem a sensibilidade diferencial da
diferenciao e do crescimento nos regimes frios no so expressos nos regimes
quentes. Essas consideraes tornam-se de fato relevantes quando verificamos que a
evoluo da sensibilidade trmica teoricamente prevista (Huey e Kingsolver, 1989) e
empiricamente comprovada (por exemplo, Berven, Gill et al., 1979; Olsson e Uller,
2002; Gomez-Mestre e Buchholz, 2006), alm de termos observado nas espcies R.
ornata e R. icterica variao individual na sensibilidade trmica.
Custos de plasticidade (por exemplo, Newman 1992; DeWitt, Sih et al. 1998;
Relyea, 2002) comearam a ser investigados recentemente em estudos com larvas de
anuros. At o momento, poucos estudos encontraram esses custos (revisto por Van
Buskirk e Steiner, 2009), porm Lind e Johansson (2009) ressaltaram que isso pode
ser decorrente da investigao de populaes de baixo grau de plasticidade, se os
custos esto associados com populaes de alta plasticidade. Esses autores
encontraram um custo de plasticidade, ante um experimento de reduo do volume de
gua, em populaes de Rana temporaria de alta plasticidade no tempo de
desenvolvimento. As populaes mais plsticas tiveram menor massa que as menos
plsticas. Esse argumento tambm se aplica s espcies de floresta atlntica que ns
estudamos, pois a plasticidade tanto no tempo de desenvolvimento quanto nas taxas de
crescimento foram bastante altas e encontramos um custo de plasticidade associado
sensibilidade interao entre moda e variao da temperatura.
Estudos que reportam custos de canalizao so ainda mais recentes na
literatura de larvas de anuros (por exemplo, Steiner e Van Buskirk 2008; Lind e
Johansson 2009). Steiner e Van Buskirk (2008) determinaram a plasticidade de vrios
caracteres em larvas de Rana temporaria em resposta presena de predadores. Para
se estimar possveis custos de plasticidade e de canalizao, os autores submeteram
larvas de diferentes graus de plasticidade, diante da presena de predador, a um
85
experimento de competio em diferentes densidades de larvas. Um custo de
canalizao foi detectado em larvas de baixa plasticidade de morfologia da cauda, uma
vez que estas desempenharam pior na competio com larvas de alta plasticidade. Lind
e Johansson (2009) alm de detectarem custos de plasticidade, encontraram um custo
de canalizao nas populaes de Rana temporaria de baixa plasticidade no tempo de
desenvolvimento, novamente no regime de reduo do volume de gua, que obtiveram
menor massa que as larvas mais plsticas.
Nas nossas populaes de R. ornata e R. icterica, ns detectamos na verdade
um ganho de canalizao nos regimes tpicos da caatinga para parte da norma, em R.
ornata, e para toda a norma em R. icterica. O ganho de canalizao pode ser
considerado como um aspecto novo da norma de reao das espcies de floresta
quando exposta a variao ambiental nova. Entretanto, se considerarmos que os
regimes tpicos da caatinga no so estressantes para as espcies da floresta, uma vez
que a aptido no perdida, o argumento de Waddington (1960) no se aplicaria mais.
Um outro argumento, de que a canalizao corresponde a faixa ambiental
historicamente mais comum para as espcies (Lewontin, 1974) faria mais sentido nesse
caso. Apesar dos regimes tpicos da caatinga no serem encontrados no habitat atual
das espcies de floresta, isso no impede que tenham sido comuns no passado,
pensando na linhagem das espcies. Se este for o caso, as espcies retiveram em sua
norma de reao uma parte de sua histria natural, e os regimes mais frios poderiam
ento ser considerados como variao ambiental nova. A plasticidade encontrada no
regime de 20oC constante passaria ento a ser considerada como adaptativa, pois
aumenta a aptido.
Contudo, o fato da canalizao em R. ornata ter sido perdida no regime mais
quente de maior variao trmica, enfraquece a idia de que os regimes da caatinga
eram comuns na linhagem ancestral das espcies. Nesse regime, as larvas de R. ornata
apresentaram plasticidade no-adaptativa, com perda de massa, e portanto de aptido.
Essa resposta est relacionada com o fato dessa espcie ter sensibilidade tanto
interao entre moda e variao de temperatura, quanto prpria variao trmica
isolada, diferente da insensibilidade de R. icterica. Essa plasticidade no-adaptativa de
R. ornata est relacionada com o compromisso de alocao destacado no item
anterior. Portanto, a nossa concepo inicial de que os regimes da caatinga so uma
86
variao nova para as espcies de floresta tem mais suporte, ainda mais se seguirmos a
teoria de normas de reao sobre o que significa um ambiente estressante.
87
Considerando as pocas reprodutivas das duas espcies, notamos que R. icterica
estende sua reproduo desde o inverno at o vero, sofrendo uma variao sazonal
dos mximos de temperatura bastante alta. Apesar dessa maior variao no ter se
refletido em uma maior plasticidade, a maior tolerncia a 20oC indica que essa espcie
ocupa microhabitats que apresentam temperaturas mximas mais altas, comuns no
vero. R. ornata reproduz somente at novembro, no passando pela variao sazonal
do vero. Isso sugere que seus microhabitats freqentes de desenvolvimento no
atingem temperaturas to altas quanto os de R. icterica. Uma alternativa a essa
explicao poderia ser simplesmente que as duas espcies selecionam microhabitats
distintos quanto aos picos de temperatura. O fato de R. ornata ser mais sensvel que R.
icterica variao trmica, perdendo aptido, sugere que essa espcie no selecione
microhabitats de picos mais altos de temperatura, que correlacionam-se com maior
amplitude trmica.
A diferena entre TCMax e Tmax ambiental pode ser denominada como
tolerncia ao aquecimento (warming tolerance), apesar de originalmente ter sido
definida como a diferena entre TCMax e temperatura mdia ambiental (Deutsch,
Tewksbury et al., 2008). Entretanto, seguindo a opinio de outros autores, ns
achamos que as temperaturas mximas so muito mais relevantes em determinar os
TCMax que as mdias ambientais (por exemplo, Chown, Hoffmann et al., no prelo).
Se considerarmos como Tmax a temperatura mxima mdia do microhabitat mais
quente em Boracia (Pedreira 27,1oC) e em S. Miguel (Poa rochas 39,4oC), e
calcularmos a tolerncia de aquecimento diante da TCMax a 30oC de aclimatao,
teremos os valores 15,4oC para as espcies de floresta, e 5,0oC para R. granulosa. Ou
seja, a tolerncia ao aquecimento das espcies de floresta trs vezes maior que de R.
granulosa. Isso indica que esta ltima espcie corre um risco muito mais alto de
mortalidade caso uma temperatura mais elevada que a mdia mxima ocorra. Portanto,
as condies de temperatura da caatinga so de alto risco para R. granulosa, mas as
larvas dessa espcie conseguem se manter nesse bioma.
O alto valor da tolerncia ao aquecimento encontrado para as espcies de
floresta sugere que em sua histria evolutiva episdios raros de temperaturas
extremamente altas ocorreram, selecionando indivduos de maior tolerncia. Se as
espcies de floresta fossem submetidas ao mximo mdio de temperatura da caatinga,
teriam uma tolerncia ao aquecimento de apenas 3,1oC, sendo as condies da caatinga
88
de risco extremamente alto de morte para essas espcies. O fato da aridificao da
caatinga ter sido gradual pode ter contribudo para o aumento da tolerncia ao
aquecimento de R. granulosa em comparao com R. ornata e R. icterica, em
condies de temperatura tpicas de caatinga.
89
A idia de fixao do tempo de desenvolvimento, para o mais curto possvel,
em espcies tpicas de habitats aquticos efmeros teoricamente prevista por alguns
autores (por exemplo, Alvarez e Nicieza, 2002; Rudolf e Rdel, 2006) e
empiricamente comprovada em Scaphiopus e Spea (Morey e Reznick, 2004; Gomez-
Mestre e Buchholz, 2006) e em algumas populaes de Rana temporaria (Lind e
Johansson, 2007). A idia de que essas espcies perderam sua plasticidade no tempo
de desenvolvimento diante de seleo forte para desenvolvimento rpido bastante
atraente, e concordante com as idias de Richards, Bossdorf et al. (2006), por
exemplo, de que a plasticidade seja vantajosa somente no estgio inicial de invaso (ou
manuteno) em um novo ambiente, mas selecionada contra em um estgio posterior.
Diante dessas reflexes, um potencial cenrio de que as larvas da espcie R.
granulosa no apresentariam maior plasticidade de desenvolvimento que as espcies R.
ornata e R. icterica nas condies atuais. Isso foi verificado para a temperatura crtica
mxima, sendo esta maior, mas no mais plstica, em R. granulosa.
Por fim, importante ressaltar dois pontos: (1) Esse trabalho um estudo de
caso, pois foi restrito a somente uma populao de cada uma das espcies. Por
conseguinte, os resultados encontrados no se aplicam necessariamente s espcies
como um todo; (2) A grande maioria das teorias e dos estudos com larvas de anfbios
anuros foi conduzida com espcies do hemisfrio norte, como as do gnero Rana por
exemplo, e os padres descritos no necessariamente se aplicam s espcies que ns
estudamos. A descoberta de um padro distinto da regra de sensibilidade trmica
diferencial da diferenciao e do crescimento, reportado por Smith-Gill e Berven
(1979), um exemplo disso. Pode ser que justamente esse novo padro seja
importante para a manuteno de espcies de anuros em um ambiente como a caatinga.
90
Concluses
91
8. Foram detectados um custo de plasticidade nos regimes trmicos
frios e um ganho de canalizao da massa na metamorfose nos
regimes trmicos quentes nas larvas de R. ornata e R. icterica;
92
Resumo
93
Abstract
94
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102
Tabela 2. ANOVA hierrquica paraa varivel massa no experimento de campo com Rhinella icterica. O fator gaiola, com
Anexos
quatro nveis, foi aninhado no fator ambiente, com dois nveis. Ambos os fatores foram significativos, e o fator ambiente explicou 99%
da variao dos dados.
103
Tabela 3. ANOVA univariada e teste de comparaes mltiplas de Tukey da massa mdia do experimento de campo com
Rhinella icterica. O fator gaiola, com quatro nveis, foi considerado como principal na anlise e comparaes entre todas as gaiolas,
par a par, foram feitas pelo teste de Tukey HSD. Somente as gaiolas 3 e 4, presentes na pedreira, no foram diferentes. 1: Cachoeira 1;
2: Cachoeira 2; 3: Pedreira 1; 4: Pedreira 2.
104
Tabela 4. Comparaes das curvas de sobrevivncia do experimento de campo com Rhinella granulosa. As curvas de
sobrevivncia no foram iguais para as larvas de R. granulosa submetidas aos regimes trmicos semi-naturais em campo, mostrando
que existiu variao entre famlias na sobrevivncia.
105
Tabela 5. Comparaes das curvas de sobrevivncia do experimento de desenvolvimento com Rhinella ornata. Verificada a
diferena entre as curvas na comparao geral, comparaes par a par foram feitas entre todos os tratamentos: 1) moda de 20oC ; 2)
moda de 20oC e variao de 18 a 22oC; 3) moda de 20oC e variao de 18 a 26oC; 4) moda de 27oC; 5) moda de 27oC e variao de 25 a
29oC e 6) moda de 27oC e variao de 25 a 34oC.
Quiquadrado gl Sig.
Log Rank (Mantel-Cox) 21,891 5 ,001
Tes te de igualdade das funes de sobrevivnci a para os
diferentes nveis de R. ornata.lab
106
Tabela 6. Correlaes das variveis de desenvolvimento de Rhinella ornata. Foram feitas correlaes de Pearson para as variveis
taxa de crescimento, tempo de desenvolvimento e massa na metamorfose, para cada uma das modas de temperatura. As correlaes
direita so para a moda de 20oC, e esquerda, para a moda de 27oC. Todas as correlaes foram significativas.
107
Tabela 7. ANOVA de duas vias e testes pos-hoc de Tuckey para a massa na metamorfose das larvas de Rhinella ornata
submetidas ao experimento de desenvolvimento. Os fatores moda e variao da temperatura foram analisados como fixos. No teste
de Tuckey, somente diferiram os tratamentos de variao 4oC e 8oC.
108
Tabela 8. ANOVA de duas vias para os dados de taxa de crescimento do experimento de desenvolvimento com R. icterica. Os fatores moda
e variao foram analisados como fixos. A moda isolada e a interao entre moda e variao da temperatura foram significativas.
Tabela 9. ANOVA de duas vias para os dados de massa na metamorfose do experimento de desenvolvimento com R. icterica. Os fatores
moda e variao foram analisados como fixos. Apesar do modelo ter sido significativo, nenhum dos fatores ou a interao entre eles o foram.
109
Tabela 10. ANOVA de duas vias para os dados de Temperatura Crtica Mxima (TCMax). Os fatores temperatura de aclimatao e espcie
foram analisados como fixos. Ambos foram significativos, assim como a interao entre eles. O teste de Tuckey indicou que as trs espcies so
distintas quanto aos seus respectivos TCMax. 1: R. ornata, 2: R. granulosa e 3: R. icterica.
110