EXTRACCIN: AISLAMIENTO Y PURIFICACIN DE LA CAFENA

Procedimiento

Extraccin.
Con el objeto de preparar la solucin de caf o t, colocar 100 mL de agua en un vaso de
precipitados de 250 mL. Cubrir el vaso con un vidrio de reloj y calentar el agua en una
placa de calentamiento, hasta que este casi hirviendo. Luego colocar 10 g de caf (o el
nmero de bolsas de t negro cuyo contenido sea equivalente a los 10 g) en el agua
caliente asegurndose que el agua disuelve completamente el caf o que rebase las
bolsas de t. Retirar el vidrio de reloj y continuar calentando durante otros 10 minutos.
Como el agua se evapora durante esta etapa de calentamiento, se debe adicionar agua
con una pipeta de Pasteur. Permitir que la solucin se decante por un periodo de 10
minutos y transferir cuidadosamente (evitando trasvasar material slido) la solucin de
caf o t concentrado a un nuevo vaso de precipitados de 250 mL.
Con el objeto de precipitar los taninos presentes en el extracto de caf, en vaso de
precipitados donde se encuentra la solucin cruda, se le adicionaron 2 g de carbonato de
calcio y se calienta nuevamente a reflujo suave durante unos 5 minutos, evitando el
sobrecalentamiento.
Taninos Fenlicos + Carbonato de Sodio Fenxidos de Sodio
Luego del calentamiento, se deja enfriar la disolucin a temperatura ambiente, y se
procede a extraer el alcaloide utilizando un embudo de separacin de 150-250 mL con
una porcin de 15 mL de cloruro de metileno (diclorometano), agitando la mezcla
vigorosamente durante 1 minuto. Las capas se deben separar despus de varios minutos.
Si hay presentes emulsiones en la capa orgnica inferior, dicha emulsin puede romperse
adicionando solucin de NaCl saturada. La capa orgnica obtenida se recoger en un
erlenmeyer seco que contiene un agente desecante (sulfato de sodio o magnesio
anhidro). El proceso de extraccin se repite por dos ocasiones ms con 15 mL de
diclorometano y las fases orgnicas son nueva mente recolectadas en el erlenmeyer
inicial que contiene el agente desecante. Estos extractos deben quedar claros, sin mostrar
signos visibles de la contaminacin del agua. Si algo de agua debe pasar a travs del
filtro, repita el secado, con una nueva porcin de sulfato de magnesio. Filtrar los extractos
para retirar el sulfato utilizado y recoger los extractos secos en un nuevo erlenmeyer seco.
Enjuague el magnesio sulfato con 15 a 20 mL de diclorometano fresco.
Verter los extractos orgnicos secos en un baln de 250 mL de fondo redondo, y llevar a
sequedad en el rotavapor. El residuo en el baln de destilacin contiene la cafena, la cual
debe ser purificada

Recristalizacin.
Adicional 5 mL de etanol al slido y calentar suavemente hasta disolucin de la cafena. Si
el slido no se disuelve, adicional otros 5 mL de etanol. Una vez disuelto, dejar enfriar a
t.a. y colocar en un bao de hielo hasta que aparezcan los cristales.
EXTRACTION OF OLEANOLIC ACID FROM CLOVES
1.-Objetivos:

Ejemplificar el aislamiento de componentes orgnicos voltiles e insolubles en agua a

partir de material de origen biolgico (o de una mezcla compleja), utilizando vapor de
agua.

2.-Introduccin:

Los monoterpenos constituyen una de las familias de compuestos ms simples de origen

vegetal. Muchos son componentes claves de sabores y olores familiares: algunos
fcilmente accesibles experimentalmente, ya que son voltiles y por esto pueden ser
arrastrados por una corriente de vapor desde los frutos o semillas. Entre ellos
encontramos al limoneno, o eugenol.

3.-Procedimiento:

3.1.-Aislamiento de eugenol a partir de clavos de olor.

El aceite esencial de clavo se Clove oil was removed from clove powder (groun d cloves)
(1 Kg) in a water (2L) slurry by steam distillation for 4h as shown in Fig.3 .3. The mixture
was prevented from dehydration by the periodic addit ion of wat er ( 5OOml). The oil and
water residue was yellow, not dark coloured.

The oil-free clove powder was air-dried for two weeks on top of a laboratory oven. Soxhlet
extraction of the powder for 48 to 60h (MeOH (4L until the extract was colourless
followed. Clove pwder was supported in a Soxhlet apparatus with cotton wool (Rg.3.4).

The volume of the extract was reduced to 400 ml by evaporation of organic solvent, and
treated with H2S0 4 (dil.) until the mixture was acidic. The OA was extracted into the oeM
organic phase, leaving alkaloids in the acidic aqueous phase. The residue was dried,
filtered and the organic solvent evaporated.

The presence of OA was verified by t.l.c. analysis using EtOAc:hexane (1:4) mobile phase.
The OA spot appeared as a long tailing spot in the clove extract compared with a non-
tailinq spot for the standard. The best eluent ratio for separating OA was determined by
t.l.c, Column chromatography with EtOAc:hexane (1:4) mobile phase was initially used.
The mobile phase was changed to EtOAc:hexane (9:11) and fractions 9 to 15 collected.
After removal of solvent by evaporation, the crude oleanolic acid residue (12g; 1.2%) was
obtained.

The residue was recrystallised (isopropanol) by standing for a few days until "white balls"
of crystals were formed. Upon filtration, the white crystals were scraped from the filter
paper after the solvent had evaporated. Re15 crystallisation was repeated until a pure
material (8g; 0.8%) had been obtained.

Se parte de 2 g de clavo de olor sin moler y se los coloca en un baln de 300 ml, junto con
unos trozos de material poroso y 150 ml de agua. Al baln se le adapta un cabezal, un
refrigerante y una

alargadera que desemboca en una probeta. Se lleva a ebullicin sobre tela metlica y se
destilan unos

80 ml (aprox. 1 h).

El destilado se alcaliniza con 10 ml de una solucin de NaOH 20 % y se extrae con 20 ml

de CH2Cl2.

La fase orgnica se desecha y la fase acuosa se acidifica con HCl 20% (papel pH) y luego
se extrae

con 20 ml de CH2Cl2, desechndose la fase acuosa.

La fase orgnica se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se evapora a presin reducida.
El

residuo (aprox. 230 mg), est constituido casi exclusivamente por el eugenol (4-alil-2-

metoxifenol).

Se preparan microplacas de slica gel, con y sin indicador fluorescente, en portaobjetos, y

se siembra

en ella 1 o 2 gotas de eugenol disueltas en un solvente apropiado. Se prueban varios

solventes de

desarrollo y se anotan los resultados obtenidos en cada solvente. Las placas de slicagel
sin indicador

se observan con luz UV, luego se revelan con I2. Las placas con indicador fluorescente se
observan

con luz UV. Otro revelador que puede usarse es solucin de FeCl3 Por qu?
4.-CUESTIONARIO
1) Explique brevemente el fenmeno de arrastre con vapor.
2) Cul es el objeto de alcalinizar el destilado? Cul es el objeto de la primera
extraccin con sv.
orgnico? Qu pasara si se alcalinizara con NaHCO 3? Qu ocurrira si se
empleara Na2CO3?
3) De los siguientes desecantes, Cules usara para secar el extracto orgnico
de eugenol? Justifique.
a) NaOH en forma de lentejas.
b) Sulfato de magnesio.
c) Sulfato de sodio.
d) cido sulfrico concentrado.
e) Pentxido de fsforo.
4) Qu masa de agua es necesario agregar al baln para arrastrar todo el
eugenol presente en 10 g de
clavos de olor (aprox. 15 % de eugenol), y qu masa de agua se necesita para
arrastrar el 85 % del
eugenol presente?

Objetivos
Conocer y apropiarse de la tcnica de destilacin por arrastre con
vapor, una metodologa ampliamente utilizada para obtener aceites
esenciales a partir de material vegetal de plantas aromticas y medicinales.

Aislar el eugenol del clavo empleando el proceso de destilacin por

arrastre con vapor y posterior extraccin del compuesto fenlico a partir del
aceite esencial obtenido.

Confirmar la presencia del grupo funcional fenol (ArOH) y el doble

enlace Carbono-Carbono (C=C) en la estructura por medio del espectro
infrarrojo (IR) y utilizando pruebas cualitativas de identificacin.

Introduccin
La separacin y purificacin de compuestos orgnicos voltiles que son
inmiscibles o casi inmiscibles con agua, a menudo se puede lograr por
destilacin al vapor. La tcnica implica normalmente la codestilacin de una
mezcla de lquidos orgnicos y el agua (aunque algunos slidos orgnicos
tambin pueden ser separados y purificados por este mtodo). Dentro de
los diferentes mtodos de destilacin, la destilacin con vapor es la tcnica
que utilizada con menor frecuencia, debido a limitaciones que presentan las
diferentes sustancias que pueden ser utilizadas. Sin embargo, su mayor
utilidad se presenta en el aislamiento de compuestos a partir de sus fuentes
naturales.
Si un lquido hierve cuando su presin de vapor se equilibra con la presin
exterior, dos lquidos inmiscibles entre s lo hacen conjuntamente cuando,
por un calentamiento gradual, la suma de las presiones de vapor de ambos
lquidos iguala la presin exterior. Con base en este hecho, gran nmero de
compuestos orgnicos pueden destilarse a temperaturas inferiores a su
punto de ebullicin normal sin ms que someterlos a una corriente de vapor
de agua. Finalmente, la sustancia puede recuperarse del destilado

por simple decantacin puesto que, al ser inmiscibles los dos lquidos, existe una clara
separacin entre las diferentes fases. En resumen, la destilacin al vapor proporciona un
mtodo para separar y purificar compuestos orgnicos lquidos moderadamente voltiles,
adems de slidos que son insolubles o casi insolubles en agua, a partir de compuestos
no voltiles. Aunque se utilizan en la destilacin por arrastre con vapor condiciones
relativamente suaves, no puede ser utilizado para las sustancias que se descomponen en
contacto prolongado con vapor o agua caliente, que reaccionan con el agua, o que tienen
presiones de vapor de 5 mm Hg (0.006 atm) o menos a 100 C, todas estas limitaciones
significativas para el mtodo.

Por otra parte, los aceites esenciales son sustancias de olores caractersticos que pueden
obtenerse fcilmente a partir de algunas plantas, mediante la destilacin por arrastre con
vapor, o por extraccin con solventes del material vegetal. Dichos aceites se caracterizan
por ser una mezcla de compleja de varios compuestos orgnicos voltiles, tales como los
terpenos, los alcoholes, los aldehdos, las cetonas, los steres los teres y los fenoles. Un
ejemplo de estos aceites esenciales, es el aceite de clavo, el cual es generalmente
extrado de las flores secas, en forma de clavos, de rboles de familias Eugenia
caryophyllata y Syzygium caryophyllatum. Este aceite esencial ha sido utilizado en
culturas como la griega y la china para el tratamiento del mal aliento y el alivio del dolor.
Actualmente, se contina empleando en la medicina gracias a las propiedades
farmacolgicas asociadas a sus respectivos constituyentes. El componente principal de
este aceite es el eugenol, el cual, se extrae fcilmente de las hojas o tallos y ms
ampliamente de las flores secas. Dicho compuesto, aunque no es un verdadero
analgsico local, posee propiedades analgsicas y antiinflamatorias.

Con base en lo anterior y teniendo en mente que la destilacin por arrastre con vapor es
una tcnica verstil y universalmente utilizada para obtener aceites esenciales de plantas
aromticas y medicinales, en este experimento se llevar a cabo la destilacin por
arrastre con vapor del aceite esencial del clavo, seguido del respectivo aislamiento de su
componente mayoritario el eugenol utilizando la extraccin lquido-lquido y finalmente
confirmar la presencia del grupo funcional fenol y el doble enlace Carbono-Carbono del
radical allico por medio del espectro infrarrojo y utilizando pruebas cualitativas de
identificacin.

Procedimiento
Preparacin de la muestra:

Pesar aproximadamente 15 g de clavo en un papel y anotar el peso exacto.

Romper las semillas utilizando un mortero o cortar los trozos ms grandes en
pedazos ms pequeos con unas tijeras. Mezclar la especia macerada o cortada
con 150 mL de agua en un baln fondo redondo de 250 mL, aadir un par de
piedras porosas y conectar al respectivo aparato de destilacin (Figura N5).
Se debe permitir que el clavo macerado o cortado permanezca en remojo
en el agua durante 15 minutos, antes de comenzar el respectivo
calentamiento. Asegrese de que los trozos de clavo estn completamente
mojados (agitar el matraz suavemente, si fuese necesario).
Destilacin por arrastre con vapor:
Haga circular el agua de enfriamiento a travs del condensador y comience
a calentar la mezcla hasta proporcionar una velocidad de destilacin
constante. Si usted se acerca al punto de ebullicin demasiado rpido,
podra tener dificultad con la formacin de espuma e incluso sobre saltos
por recalentamiento (asegrese de encontrar el calor necesario que
proporciona una velocidad constante en el proceso de destilacin, una tasa
de destilacin recomendada sera una gota de lquido recogido cada 3-5
segundos). Continuar la destilacin hasta que al menos 50 mL de destilado
se han recogido. Normalmente, en una destilacin al vapor del destilado
ser algo turbio debido a la separacin del aceite esencial cuando los
vapores se enfran. Sin embargo, usted podra no notar esto y todava
obtener resultados satisfactorios.
Extraccin del aceite esencial:
Transferir el destilado a un embudo de separacin y aadir 15 mL de
diclorometano para extraer el destilado. Agitar el embudo vigorosamente y
ventilar con frecuencia. Permita que las capas se separen (revolver
suavemente con una esptula puede algunas veces ayudar a resolver una
posible emulsin). Separar la fase orgnica, colocarla nuevamente en el
embudo de decantacin y lavarla con aproximadamente 10 mL de una
solucin saturada de cloruro de sodio. Transferir la capa inferior de
diclorometano a un erlenmeyer limpio y seco. Repita este procedimiento de
extraccin con una nueva porcin de 15 mL de diclorometano y colocar en
el mismo erlenmeyer que se utiliz en la primera extraccin. Se debe tener
cuidado de trasvasar gotas visibles de agua, si fuese este el caso, de debe
transferir la solucin de diclorometano cuidadosamente a un frasco limpio y
seco dejando que las gotas de agua detrs. Para llevar a cabo el proceso de
secado de la solucin se le adiciona al erlenmeyer aproximadamente 2 g de
sulfato de sodio anhidro granular. Se deja la solucin reposar durante 10-15
minutos y con agitacin espordica.
La evaporacin:
Luego de que la solucin orgnica se seca, se debe pesar con precisin un
tubo de ensayo limpio y seco (este peso es muy importante anotarlo porque
permitir calcular por diferencia la cantidad de eugenol extrado a partir de
la flor seca del clavo). Colocar una porcin de la capa orgnica seca y
travesar al tubo de ensayo (aproximadamente unas tres cuartas partes),
dejando atrs el agente desecante empleado. Luego en una cabina de
extraccin el disolvente diclorometano es evaporado lentamente
empleando una suave corriente de aire o nitrgeno y calentamiento a
aproximadamente con un bao de agua. Cuando la primera porcin se
reduce a un pequeo volumen de lquido, aadir una segunda porcin de la
solucin de diclorometano y se evapora como antes. Cuando se evaporado
la totalidad del disolvente es apropiado utilizar pequeas cantidades de
disolvente limpio para enjuagar el agente desecante, lo que le permite
transferir la totalidad de la solucin que queda en el tubo de ensayo
previamente tarado. Se debe tener cuidado con una evaporacin muy
rpida del disolvente y adems tenga cuidado con no transferir sulfato de
sodio al tubo de ensayo, no dude en pedir al profesor asesora, l es
precisamente un tutor y mediador.
Una vez obtenido el eugenol de debe determinar la cantidad de eugenol
aislado y calcular el porcentaje de recuperacin de eugenol basado en el
peso del material vegetal de partida, las flores secas del clavo. Adems se
debe identificar la estructura del eugenol por medio del espectro infrarrojo
(IR) y confirmar la presencia del grupo funcional fenol (ArOH) y el doble
enlace Carbono-Carbono (C=C) utilizando pruebas cualitativas de
identificacin.