PROTOCOLO DE HEMOCLASIFICACION

ELABORACIN REVISIN APROBACIN

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Gilma Navarro Huelgas

Cargo: Cargo: Cargo:

Bacteriologa
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HEMOCLASIFICACION
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PROTOCOLO DE HEMOCLASIFICACION PARA PACIENTES EN EL

LABORATORIO DE ANALISIS CLINICO HIDALGO

1 OBJETIVO: Disponer de una gua para realizar el procedimiento de

hemoclasificacion a cada paciente que requiera el servicio en nuestro laboratorio.

2 ALCANCE: Este protocolo aplica cada vez que se tome una muestra de sangre para
dicho procedimiento.

3 RESPONSABILIDAD: La responsabilidad es del bacterilogo de turno. y la

autoridad del director del Laboratorio

4 FRECUENCIA: Cada vez que se solicite HEMOCLASIFICAR muestras de usuarios

que requieran nuestro servicio.

4.1 CONSIDERACION GENERAL:

4.1.1 Todos los resultados de las pruebas realizadas de tipificacin sangunea a los
usuarios debern registrarse en la hoja de lista de trabajo, para posteriormente
ingresar al Xlab y ser validado.

5. PROCEDIMIENTO:
5.1 HEMOCLASIFICACION: SISTEMA ABO

Actualmente es posible determinar todos los antgenos de los diferentes sistemas de

grupos sanguneos presentes en los glbulos rojos de un individuo. Para esto se
emplean anticuerpos especficos y en ocasiones lectinas. Sin embargo, en los
procesos de rutina, cuando se solicita hemoclasificacion, se determinan nicamente
los antgenos de los sistemas ABO y Rh.

La prctica consiste en determinar el grupo sanguneo del sistema ABO de las

muestras proporcionadas.

5.1.1 HEMOCLASIFICACIN DIRECTA:

5.1.1.1 Prueba directa en lmina:

MATERIAL
Lminas portaobjeto de vidrio
Antisueros (anti-A, anti-B, anti-AB)
Glbulos rojos en estudio lavados y suspendidos al 5%
Pipetas dispensadores

METODO:
Marcar tres lminas portaobjeto como A, B.
Adicionar:
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A B
Reactivo anti-A 100 ul -
Reactivo anti-B - 100 ul
Sangre 50 ul 50 ul

Mezclar cada preparacin con un palillo en un rea de 20x40 mm

aproximadamente.
Rotar manualmente cada lmina.
Observar macroscpicamente aglutinacin y registrar los resultados.

POSITIVO: La aglutinacin fuerte de los glbulos rojos en presencia de cualquier

anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de aglutinacin
NEGATIVO: La presencia de una suspensin uniforme (0) de glbulos rojos.

5.3 HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D)

En el sistema Rh, existen varios antgenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo

se determina la presencia del Ag D en los eritrocitos y de acuerdo a su presencia o
ausencia se dice que un individuo es Rh D positivo Rh D negativo.

5.3.1 Prueba directa en lmina:

Marcar dos lminas como D y control.

Adicionar:

D Control
Suero anti-D 100 ul -
Liss - 100 ul
Sangre 50 ul 50 ul

Mezclar con unos palillos cada preparacin extendindola en un rea de 20x40

mm aproximadamente.
Rotar manualmente las lminas y observar aglutinacin.
Observar macroscpicamente aglutinacin y registrar los resultados- en la hoja
de lista de trabajo, para posteriormente ingresar al Xlab y ser validado.

POSITIVO: Aglutinacin de glbulos rojos.

NEGATIVO: Una suspensin uniforme de glbulos rojos.

OBSERVACIONES:
La desecacin en los bordes de la preparacin, no se debe confundir con aglutinacin.

5.3.2. Prueba directa en tubo:

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Lavar los glbulos rojos del paciente cinco veces por 45 seg con solucin salina
y suspenderlos del 5%.( ver POE suspensin celular)
Marcar dos tubos como D y control.

Adicionar:

D Control
Suero anti-D 100 ul -
Liss - 100 ul
GR paciente 50 ul 50 ul

Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 segundos.

Resuspender el botn celular y observar aglutinacin.

Observar macroscpicamente aglutinacin y registrar los resultados- en la hoja

de lista de trabajo, para posteriormente ingresar al Xlab y ser validado.

POSITIVO: La aglutinacin de los glbulos rojos con Anti-D.

NEGATIVO: Una suspensin uniforme de glbulos rojos con anti-D.

OBSERVACIONES:

Si en el control se observa aglutinacin, la prueba no se puede interpretar, hasta

realizar ms anlisis.

5.4 DETERMINACIN DE Ag DEBIL (VARIENTE DU)

Consiste en determinar la variante D dbil en una muestra previamente tipificada

como Rh: D negativo.

La determinacin de la variante D dbil, solo se realiza a muestras que por el mtodo

usual han resultado D negativas.

Lavar los eritrocitos a tipificar 5 veces por 45 seg con SS y suspenderlos al

5%.

Marcar dos tubos como D y Control.

Adicionar:

D Control
Anti-D 100 ul -
Liss - 100 ul
GR paciente 50 ul 50 ul
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Mezclar e incubar los tubos a 37C durante 15-30 minutos, segn las
especificaciones del fabricante.

Centrifugar 15 seg.

Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de

aglutinacin. Si el tubo anti-D, los eritrocitos estn fuertemente aglutinados,
pero no en el tubo control, registrar la prueba como D positiva y no realizar la
fase siguiente con el suero de Coombs.

Si las clulas no son aglutinadas o los resultados son dudosos, lavar los
eritrocitos 5 veces con abundante SS. Decantar la solucin salina.

Adicionar:

D Control
Suero de Coombs 100 ul 100 ul

Mezclar y centrifugar 15 seg.

Resuspender suavemente cada botn celular, examinar para aglutinacin y

registrar el resultado teniendo en cuenta la escala de intensidad. Si hay
aglutinacin en el tubo de prueba con anti-D, entonces el resultado es D positivo.

Registrar resultado en la hoja de trabajo, para posteriormente ingresar al Xlab y

ser validado.

Nota:
El grado de aglutinacin o la intensidad de la hemlisis deben anotarse, tubo en
mano, con cada lectura. Todo el personal debe emplear la misma metodologa e
interpretacin de las Lecturas. Una escala recomendada para la lectura de
aglutinacin es la siguiente.

ESCALA DE AGLUTINACIN: Cuadro No 1

GRADO DE INTERPRETACION
AGLUTINACION
4+ Un solo botn fuerte (macroscpicamente)
3+ Botn grande con pequeos grnulos alrededor
(macroscpicamente)
2+ Varios grumos medianos (macroscpicamente)
1+ Infinidad de pequeos grumos (macroscpicamente)
w Aglutinacin (microscpicamente)
H Hemlisis
O No hay aglutinacin

6. Limitaciones del Procedimiento:

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a. La contaminacin qumica o bacteriana de las muestras o reactivos puede conducir

a resultados falsos positivos o negativos
b. Inadecuado tiempo de incubacin, temperatura, centrifugacin de las muestras
pueden conducir a falsos positivos o negativos
c. Inadecuado almacenamiento de los reactivos puede llevar a resultados errneos.
d. Las reacciones positivas que se obtiene con muestras almacenadas pueden ser ms
dbiles que las que exhiben las muestras recin obtenidas.

7. RECOMENDACIONES:

a. Lea cuidadosamente el inserto que acompaa a los reactivos, en este encontrara

instrucciones especficas que el fabricante incluye para obtener resultados de calidad.
b. Almacenar adecuadamente los reactivos y muestras, controlando peridicamente
los equipos de refrigeracin destinados para ello.
c. Chequee la actividad de los antisueros antes de proceder a ejecutar las pruebas de
rutina de pacientes.
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8. BIBLIOGRAFIA

1. AMERICAN ASSOCIATION OF BLOOD BANCK Manual tcnico 13

edicin 2001
2. EL BANCO DE SANGRE, TEORIA, PRINCIPIOS Y PROCEDIMIENTOS -
Victor Hugo Dueas Universidad del Valle.
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