CAPITULO 7

Fosforilacion oxidativa

Los seres vivos necesitan alimentarse permanentemente, los nutrientes son

utilizados en la sntesis de las molculas imprescindibles para cada organismo y en la
produccin de energa para cumplir con las necesidades vitales tales como crecer,
reproducirse y moverse. Para producir esta energa los seres vivos queman
metablicamente las biomolculas en un proceso que guarda similitudes con la
combustin. Si se aplica este concepto a un ejemplo donde se quema glucosa, se tiene
la siguiente ecuacin:

El estudio de la sntesis y degradacin de las distintas biomolculas y la

interrelacin entre los metabolismos de todas ellas, ha mostrado que a lo largo de estas
transformaciones se consume o produce energa, bajo la forma de ATP y se produce o
consume poder reductor, bajo la forma de NADH, NADPH y/o FADH2. Ahora se abordar
el estudio del metabolismo en el que el NADH y el FADH2 producidos en la gluclisis, en la
-oxidacin de los cidos grasos y en el ciclo de Krebs, se reoxidan y generan una gran
cantidad de energa que es aprovechada para sintetizar ATP.

Resumidamente se puede describir a la fosforilacin oxidativa como un proceso en

el que las coenzimas reducidas, formadas durante los pasos catablicos, vuelven a
oxidarse, cediendo los electrones al O2, que pasa a un estado de oxidacin -2 y forma
agua. Al mismo tiempo, la energa producida se aprovecha para sintetizar ATP a partir de
ADP y Pi.

El flujo de electrones desde las coenzimas reducidas hasta el O2 es mediado por

una serie de complejos proteicos localizados en la membrana interna de la mitocondria;
concomitantemente con este flujo se produce un bombeo de protones desde la matriz
mitocondrial hacia el espacio intermembrana, que genera una diferencia de concentracin
de H+ a ambos lados de la membrana interna de la mitocondria. Cuando esta diferencia
de concentracin se disipa a travs de un complejo enzimtico, se sintetiza ATP.

Es decir que la oxidacin de las coenzimas y la fosforilacin del ATP estn

acopladas por un gradiente de protones a travs de la membrana interna de la
mitocondria.

Como se analizar ms adelante, en la fosforilacin oxidativa el potencial de

transferencia de electrones de las coenzimas reducidas se transforma, primero en fuerza
protomotriz, y posteriormente, en potencial de transferencia de fosforilos del ATP.

La fuerza que dirige la fosforilacin oxidativa es el potencial de transferencia de

electrones del NADH y el FADH2. Al calcular el G correspondiente a la oxidacin de las
coenzimas reducidas con el O2, se obtiene lo siguiente:

O2 + 2H+ + 2e- H20 E0= +0,82V

NAD+ + H+ + 2e- NADH E0= -0,32 V

O2 + NADH + H+ H2O + NAD+ E0= +1,14 V

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 La energa libre de oxidacin de esta reaccin ser entonces:

G = - nFE0

donde,

n = nmero de electrones transferidos

F = constante de Faraday

E0 = diferencia de Potencial Redox.

G = -2 x 23,06 Kcal/Vmol x 1,14 V = -52,6 Kcal/mol

Como se ha visto, el proceso de respiracin tiene similitudes con la combustin;

sin embargo, la respiracin presenta como particularidad, que la energa se libera por
etapas y de manera controlada. Si la liberacin de energa se produjera en un solo paso,
se elevara la temperatura de la clula hasta valores incompatibles con la vida. Adems
cuando la energa se libera en cantidades controladas, se puede aprovechar para
sintetizar ATP y quedar almacenada bajo esta forma.

Planteando la ecuacin de la combustin para la respiracin, se tiene:

Re-oxidacin de las coenzimas reducidas

Los electrones del NADH y el FADH2 son cedidos al O2 para que ste pase a un
estado de oxidacin 2 y pueda formar agua. La transferencia de electrones en la cadena
respiratoria se realiza a travs de tres grandes complejos proteicos y dos transportadores
mviles. Es importante destacar que el flujo electrnico se realiza a favor del potencial
redox, es decir que la transferencia es energticamente favorable para el sistema (Fig. 7-
1).

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 ESPACIO INTERMEMBRANA

4H+ 2H+ 4H+

C-c

NADH-Q Citocromo C Citocromo ATP

Reductasa Reductasa Oxidasa Sintasa
Ub

FADH2 FAD+
NADH NAD+ 2H+ + O2 H2O

ADP + Pi ATP
MATRIZ MITOCONDRIAL H+

Fig. 7-1. Transferencia de electrones en la cadena respiratoria.

El NADH cede sus electrones al primer complejo proteico denominado NADH-Q

reductasa, una enzima formada por 34 cadenas polipeptdicas y con una masa
molecular de aproximadamente 900 Kd. Un grupo prosttico de este complejo es la
flavina mononucletido (FMN), que recibe los electrones provenientes del NADH, segn:

NADH + H+ + FMN FMNH2 + NAD+

Posteriormente los 2 electrones son transferidos a una serie de complejos hierro-

azufre, capaces de tomar y ceder electrones merced a que sus tomos de hierro pueden
existir como Fe2+ y Fe3+. Estas protenas hierro-azufre son las encargadas de transferir
los electrones al primer transportador mvil, la ubiquinona o coenzima-Q. Esta pequea
molcula liposoluble toma primero un electrn y se reduce a un intermediario,
semiquinona intermedia, que al tomar otro electrn se transforma en ubiquinol. El papel
de los transportadores mviles es transferir los electrones entre los complejos proteicos,
as el ubiquinol cede los dos electrones al complejo citocromo reductasa y se reoxida
volviendo al estado de ubiquinona.

El segundo complejo proteico (citocromo reductasa) est formado por dos tipos
de citocromos, denominados citocromo b y citocromo c1. En sus estructuras participan,
una protena hierro-azufre y diferentes cadenas polipeptdicas. El complejo citocromo
reductasa participa en el transporte de electrones mediante un mecanismo altamente
complejo, ya que debe transferir los dos electrones desde el ubiquinol hasta el segundo
transportador mvil, el citocromo c, capaz de transportar un solo electrn. Para ello toma
primero slo un electrn del ubiquinol, que pasa a la forma semiquinona intermedia. El
citocromo c1 es el encargado de transferir este electrn hasta el citocromo c;
seguidamente el intermediario cede el segundo electrn al citocromo b que por un
mecanismo de reciclaje reduce a otra molcula de citocromo c. El resultado neto del
accionar de la citocromo reductasa es que un par de electrones del ubiquinol es
transferido a dos molculas de citocromo c.

El citocromo c est formado por una sola cadena polipeptdica de poco ms de

100 aminocidos, a la que se une de manera covalente un grupo hemo; la protena es

109
aproximadamente esfrica y se ubica en la parte exterior de la membrana, hacia el
espacio intermembrana.

Cuando las dos molculas de citocromo c toman los electrones provenientes de la

citocromo reductasa se reducen a ferrocitocromo c, y en este estado llevan los electrones
hasta la citocromo oxidasa, ltimo de los complejos proteicos de la cadena respiratoria.
La citocromo oxidasa es un complejo de 10 subunidades y contiene dos grupos hemo y
dos iones cobre. La citocromo oxidasa es la encargada de entregar los electrones al
oxgeno para que se forme agua. El oxgeno tiene una alta afinidad por los electrones y
esto le otorga un gran impulso termodinmico a la fosforilacin oxidativa. Pese a ser un
fuerte aceptor de electrones, el oxgeno molecular sin catalizadores reacciona muy
lentamente, el principal riesgo de esta reaccin es la formacin de compuestos
parcialmente reducidos, como por ejemplo el anin superxido, una molcula altamente
destructiva que se forma por la transferencia de un slo electrn al oxgeno molecular.
Para evitar este inconveniente la citocromo oxidasa enlaza al O2 y con la participacin de
los iones hierro y cobre le cede 4 electrones para reducirlo, luego captura 4 H+ y forma
dos molculas de agua; recin en este momento el oxgeno formando el agua- es
liberado.

El FADH2 no es capaz de ceder sus electrones al complejo NADH-Q reductasa,

pero su potencial redox es suficiente para transferir sus electrones a nivel de la
ubiquinona y lo hace mediante un complejo succinato-Q reductasa, una protena
intrnseca de la membrana interna mitocondrial. Los electrones incorporados a la cadena
respiratoria por la reoxidacin del FADH2 continan hasta la formacin de H2O el mismo
recorrido descrito para los electrones provenientes del NADH.

Sntesis de ATP

El flujo de electrones desde el NADH hasta el oxgeno es un proceso exergnico.

O2 + NADH + H+ H2O + NAD+ G= -52,6 Kcal/mol

Esta energa se utiliza para un proceso endergnico: la sntesis de ATP.

ADP + Pi + H+ ATP + H2O G= + 7,3 Kcal/mol

Es decir que la transferencia de dos electrones desde el NADH hasta el oxgeno

proveera la energa necesaria para sintetizar poco ms de 7 molculas de ATP. Es claro
que aunque las clulas tengan una eficiencia energtica superior a la de cualquier
mquina creada por el hombre, parte de esa energa no ser aprovechada para la
formacin de ATP.

La oxidacin y la fosforilacin estn acopladas por medio de una fuerza

protomotriz, durante el transporte de electrones se genera una diferencia de
concentracin de protones a los dos lados de la membrana interna mitocondrial. Esta
diferencia se forma porque concomitantemente con el transporte de electrones a lo largo
de la cadena respiratoria, se produce un transporte de protones desde la matriz
mitocondrial hacia el espacio intermembrana.

La membrana interna mitocondrial no es libremente permeable a los protones,

stos salen de la matriz por un bombeo que realizan los tres complejos proteicos de la
cadena respiratoria: la NADH-Q reductasa, la citocromo reductasa y la citocromo oxidasa.
El flujo de un par de electrones desde el NADH hasta la ubiquinona mediante la NADH-Q
reductasa, provoca el bombeo de 4 protones desde la matriz mitocondrial hacia el
espacio intermembrana. Cuando estos dos electrones son transferidos a travs del
complejo citocromo reductasa se bombean dos protones hacia el lado citoslico de la
membrana y 4 protones ms a nivel de la citocromo oxidasa. Cuando se transfieren

110
electrones provenientes del FADH2, slo se bombean los 2 protones a nivel de la
citocromo reductasa y los 4 en la citocromo oxidasa, por lo que la diferencia de
concentracin de protones y por lo tanto la fuerza protomotriz- que produce la
reoxidacin del FADH2 es menor.

El gradiente de concentracin de protones se disipa a travs de un complejo

enzimtico denominado ATP sintetasa o ATP sintasa. Este complejo est formado por un
conducto de protones F0 y una unidad catalizadora de la sntesis de ATP, llamada F1 (Fig.
7-2).

ESPACIO INTERMEMBRANA
Canal Protnico

F0

F1

ADP + Pi ATP
H+
MATRIZ MITOCONDRIAL

Fig. 7-2. Sntesis de ATP mediante la ATP sintasa.

La unidad F0 es un segmento hidrofbico formado por 4 cadenas polipeptdicas,

que se ubica atravesando la membrana interna de la mitocondria y se constituye en el
conducto a travs del cual los protones pasan desde el espacio intermembrana hacia la
matriz mitocondrial. La unidad F1 est formada por 9 cadenas polipeptdicas y tiene una
masa de 378 Kd, su funcin es catalizar la formacin de ATP a partir de ADP y fosfato,
segn la siguiente reaccin:

3-
ADP + Pi2- + H+ ATP 4-
+ H2O

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 Se estima que para que se sintetice una molcula de ATP es necesario que pasen
por la ATP sintasa 3 protones desde el espacio intermembrana hacia la matriz
mitocondrial.

Las molculas de NADH generadas en metabolismos tales como la gluclisis, se

encuentran en el citosol; los electrones deben ingresar a la mitocondria para poder ser
incorporados a la cadena respiratoria. La membrana interna de la mitocondria es
totalmente impermeable al NADH y al NAD+, pero es necesario que este ltimo sea
regenerado para continuar con la gluclisis (es importante recordar que en los
organismos anaerbicos las coenzimas oxidadas son regeneradas en la fermentacin).

El mecanismo por el que los electrones del NADH citoslico son cedidos a la
cadena respiratoria se denomina lanzadera, una de ellas es la lanzadera del glicerol
fosfato que, segn puede verse en la figura, ingresa los electrones para cedrselos a FAD
que forma FADH2 y puede ingresar a la cadena respiratoria a nivel de la ubiquinona (Fig.
7-3).

Esta lanzadera es especialmente activa en el msculo de vuelo de los insectos,

mientras que en corazn e hgado funciona la lanzadera de malato-aspartato (Fig. 7-4).

Dihidriacetona Glicerol-3-
Fosfato NADH NAD+ Fosfato
CH2OH CH2OH
| |
C=O CH-OH
| Glicerol Fosfato |
CH2OPO3 Deshidrogenasa CH2OPO3
Citoplasmtica

Glicerol Fosfato
CH2OH Deshidrogenasa CH2OH
| Mitocondrial |
C=O CH-OH
| |
CH2OPO3 CH2OPO3
FADH2 FAD+
Dihidriacetona Glicerol-3-
Fosfato Fosfato
Matriz Mitocondrial

Fig. 7-3. Lanzadera del glicerol fosfato.

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 Oxalacetato Glutamato
Malato NADH
Deshidrogenasa
Citoplasmtica NAD+
Aminotrasferasa
Malato

Aspartato -Cetoglutarato

Aspartato -Cetoglutarato
Malato
Malato NAD+
Deshidrogenasa Aminotrasferasa
Mitocondrial
NADH

Oxalacetato Glutamato

Matriz Mitocondrial

Fig. 7-4. Lanzadera de malato-aspartato.

La lanzadera de malato-aspartato tiene como ventaja que hace ingresar los

electrones a la matriz mitocondrial como NADH, pero como es reversible slo ingresa
electrones cuando la relacin NADH/NAD+ es menor en la mitocondria que en el
citoplasma.

Tampoco el ADP y el ATP difunden libremente a travs de la membrana interna

mitocondrial, para poder transponerla se valen de la ADP-ATP translocasa, que es un
dmero de dos subunidades idnticas de 30 Kd y que contiene un nico centro de unin
que se expone alternativamente hacia el espacio intermembrana y hacia la matriz
mitocondrial; como producto de este accionar el ADP puede ingresar a la matriz
mitocondrial para sintetizar ATP, y el ATP puede salir hacia el citosol para participar en
los distintos metabolismos (Fig. 7-5).

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 Citoplasma

ATP ADP

ATP
ADP

Matriz Mitocondrial

Fig. 7-5. Esquema del funcionamiento de la translocasa.

Este intercambio de ATP por ADP conlleva la transferencia de una carga negativa
hacia el espacio intermembrana, porque el ATP tiene una carga negativa ms que el ADP,
entonces se produce una disminucin en la diferencia de carga a ambos lados de la
membrana y disminuye la fuerza protomotriz.

La reoxidacin de una molcula de NADH produce el bombeo de 10 protones

desde la matriz mitocondrial hacia el espacio intermembrana, para la sntesis de una
molcula de ATP es necesario que atraviesen la ATP sintetasa 3 protones, mientras que
la salida de una molcula de ATP hacia el citosol y la entrada de una de ADP a la matriz
mitocondrial supone el gasto de un protn. Con estos datos se puede calcular cual es la
produccin de ATP por cada molcula de NADH que se reoxida. Actualmente la
estimacin ms aceptada es que el resultado de la transferencia de los dos electrones del
NADH al oxgeno es la formacin de 2,5 molculas de ATP en el citosol. Esta afirmacin
se basa en que para sintetizar las 2,5 molculas de ATP es necesario que 7,5 protones
atraviesen la ATP sintetasa (ya que se necesitan 3 protones para la sntesis de cada
molcula de ATP) y 2,5 protones son el gasto necesario para sacar las 2,5 molculas de
ATP de la matriz mitocondrial (ya que se supone un consumo de un protn por cada
molcula de ATP translocada); es decir que con los 10 protones transferidos cuando se
reoxida una molcula de NADH se sintetizan 2,5 molculas de ATP y se sacan al exterior
de la matriz mitocondrial.

Cuando se reoxida una molcula de FADH2 no se produce el bombeo de protones

a travs de la NADH-Q reductasa, debido a que los electrones son incorporados a nivel de
la ubiquinona; por lo tanto se verifica un bombeo de 2 protones en la citocromo
reductasa y 4 protones en la citocromo oxidasa. Estos 6 protones transferidos pueden
generar la sntesis de 1,5 molculas de ATP en el citosol, ya que 4,5 protones sern
utilizados para el funcionamiento de la ATP sintasa y 1,5 para translocar 1,5 molculas
de ATP hacia el citosol.

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 Con esta informacin es posible realizar clculos de energa en los distintos
metabolismos; por ejemplo la cantidad de ATP que se produce por la oxidacin completa
hasta CO2 y H2O de cada molcula de glucosa, provenientes del almidn que compone la
racin de un animal monogstrico.

ATP ADP ATP ADP 2NAD 2NADH 2ADP 2ATP

1 Glucosa 1 Glucosa-6P 1 Fructosa-6P 1 Fructosa-DP 2 G-3P 2 DPG 2 PG

2 PEP
2ADP
2ATP

2 Piruvato

20 ATP 30 ATP

2NAD 2NADH
8NADH 8NAD
2NADHcit
O2 2 Acetil-CoA 2 Piruvato

3 ATP Cadena
Respiratoria 2FADH2 2CO2 2CoA
2NAD H20 Ciclo
de
6NADH 4CO2
2FAD 2FADH2 Krebs
2GTP
3 ATP

Comparando con la cantidad de ATP producida por la fermentacin de cada

molcula de glucosa en una bacteria utilizada en la elaboracin de vino, se tiene:

ATP ADP ATP ADP 2NAD 2NADH 2ADP 2ATP

1 Glucosa 1 Glucosa-6P 1 Fructosa-6P 1 Fructosa-DP 2 G-3P 2 DPG 2 PG

2 ATP 2 PEP
2NAD 2NADH 2ADP
2ATP

2 Etanol 2 Acetaldehdo 2 Piruvato

CO2

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