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GUA DE PRCTICA DE
LABORATORIO
PROCESOS BIOLGICOS
EQUIPO DOCENTE:
Mori Castro, Jaime Alberto
jaime.mori@upnorte.edu.pe
PROCESOS BIOLOGICOS
UNIDAD I:
BASES QUMICAS DE LA VIDA: COMPUESTOS ORGNICOS E INORGNICOS
PRACTICA N 01
MATERIALES DE LABORATORIO
INTRODUCCIN
El contenido y volumen del manual de prcticas de laboratorio, corresponden al Programa de
enseanza del curso de "Procesos Biolgicos".
Se trata de una ciencia natural que ha ido forjando a travs del tiempo en una lucha constante
por conocer y transformar la naturaleza. En el proceso de su desarrollo, ha surgido una
diversidad de campos especializados dentro de los que destaca la gentica, con sus estudios del
genoma humano, la clonacin de animales, la terapia gnica y la transgnica.
Asimismo cabe destacar los estudios ecolgicos de contaminacin, tales como la lluvia cida, la
destruccin de la capa de ozono y el efecto de invernadero.
Sin embargo a pesar de su progresivo avance, muchas veces el conocimiento biolgico no est
al alcance de las mayoras y lo que es ms grave, no se orienta a solucionar los problemas
sociales ms apremiantes como el hambre, la destruccin y las enfermedades.
Siendo la Biologa una ciencia que se debe estudiar aplicando la teora con la parte prctica, se
ha elaborado esta gua de prcticas de laboratorio con prcticas que puedan ser tiles a los
estudiantes.
INSTRUCCIONES GENERALES
Para el desarrollo de las prcticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales
que deben ser observadas con toda escrupulosidad.
1. Antes de realizar una prctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara
de su objetivo, fundamento y tcnica. Los resultados deben ser siempre anotados
cuidadosamente apenas se conozcan.
2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En
consecuencia, al terminar cada prctica se proceder a limpiar cuidadosamente el
material que se ha utilizado.
3. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material.
4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es
el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulacin; No devolver nunca a los
frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor;
No tocar con las manos y menos con la boca los productos qumicos.
5. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios,
deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos.
6. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) deben mantenerse alejados de las
llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se
har al bao Mara, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se
debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama.
7. Cuando se manejan productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) deber hacerse con
cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se vertern
bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarn resbalar suavemente por su
pared.
8. Cuando se vierta un producto lquido, el frasco que lo contiene se inclinar de forma que
la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre lquido se deteriore
dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco.
9. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o
artilugio que se disponga en el Centro.
10. Las pipetas se cogern de forma que sea el dedo ndice el que tape su extremo superior
para regular la cada de lquido.
11. Al enrasar un lquido con una determinada divisin de escala graduada debe evitarse el
error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la
visual al enrase sea horizontal.
PROCESOS BIOLOGICOS
12. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen lquidos debe evitarse la
ebullicin violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo
se acercar a la llama inclinada y procurando que sta acte sobre la mitad superior del
contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullicin rpida, se retirar, acercndolo
nuevamente a los pocos segundos y retirndolo otra vez al producirse una nueva
ebullicin, realizando as un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitar
dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona.
13. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo despus de haberlos
calentado con el fin de evitar roturas.
14. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se
engrasen.
MATERIALES DE LABORATORIO
Los materiales y equipos constituyen la principal herramienta en el laboratorio, su nmero y
variedad es grande, segn el tipo y prueba a realizar. Los materiales para ser considerados de
calidad, deben cumplir ciertos requisitos y condiciones, como son: construidos con insumos de
calidad, neutro, resistente a la accin mecnica y a los cambios de temperatura entre otros
factores. Los equipos son elaborados en acero inoxidable y son de mucha utilidad en los
laboratorios.
OBJETIVO
Conocer el uso y manejo de los materiales y equipos del laboratorio de biologa.
MATERIALES
Mascarilla
Guantes de ltex
Materiales de laboratorio
PROCEDIMIENTO
Observe y reconozca los materiales y equipos de laboratorio
Materiales de vidrio
En el laboratorio de biologa, el material de vidrio constituye una de las principales herramientas
de trabajo. Existe una gran variedad de acuerdo a las necesidades de cada laboratorio. Como
requisito general el material de vidrio debe ser: de buena calidad, ya que estos son sometidos a
repetidas esterilizaciones, ser transparentes, de superficie lisa, sin ralladuras, contener una
mmica cantidad de lcali libre, tener bajo coeficiente de dilatacin.
Tubos de prueba o ensayo
Son de vidrio neutro, de paredes gruesas y con reborde para facilitar el taponamiento. Si son
con tapa rosca, debe ser tambin de vidrio neutro. Los tubos de centrfuga, las medidas son
variadas desde 10 cc. a 250 cc. Graduadas al cm. o mm; Pueden ser cnicos o cilndricos y
siempre de paredes gruesas.
Placas Petri
Compuestas de dos cristalizadores, el mas grande hace de tapa. Los ms usados son de 10 x
100, 20 x 100 y se emplean para el cultivo y aislamiento de grmenes. Existen tambin con
divisiones internas de dos y cuatro compartimientos.
Pipetas
Se utilizan las serolgicas y volumtricas. Las pipetas serolgicas, son terminales y con
capacidad de 0.1 a 25 ml. Se emplean para dispensar lquidos en pequeos volmenes. Las
pipetas volumtricas, se reconocen por presentare una dilatacin bulbosa central con una marca
de aforamiento impreso en el extremo proximal angosto de la pipeta. Son utilizadas para llenar
medios de cultivo en tubos, placas petri y frascos. Se les conoce tambin como pipetas de bola,
la capacidad volumtrica de estas pipetas estn comprendidas entre 10 y 100ml.
Matraces Erlenmeyer
Recipientes volumtricos de gran utilidad para la preparacin y almacenamiento de soluciones,
colorantes y reactivos, medios de cultivo y otros. La calidad debe ser la misma recomendada en
los requisitos generales.
Fiolas
Su forma es semejante a los balones, estn calibrados a medidas exactas mediante un aforo en
la parte media del cuello, en el que se indica la medida. Poseen tapa de vidrio esmerilado y de
plstico. Se emplea para la preparacin de soluciones valoradas.
Kitazato
PROCESOS BIOLOGICOS
Es un matraz que posee una tubuladura costa lateral, y sirve para hacer vaco. Se utiliza como
complemento del equipo de filtracin.
Probetas
Son recipientes cilndricos con base para su estabilidad, sus paredes son de un mayor dimetro
comparado con los materiales indicados anteriormente. Tienen graduaciones y pueden venir con
o sin tapa. Se utilizan para medir soluciones. Su capacidad vara desde 25 ml. hasta 2500 ml.
Beakers o Vasos de Precipitacin
Recipientes cilndricos y cortos con una escotadura (pico) en uno de los mrgenes, su utilidad es
muy amplia. Se fabrica de varias medidas, muy comunes para facilitar la mezcla de una
solucin, el vidrio debe ser resistente al calor.
Materiales de Metal y otros
Trpodes
Son de metal, sobre estos se colocan una malla cuadrada cubierta en el centro con varias capas
de asbesto. Sirven para colocar envases que van a calentarse o slo como soporte.
Esptulas de metal
Son de acero inoxidable y sirven para transferir sustancias en polvo, cuando se pesan para su
preparacin.
Mecheros de Bunsen
Son de metal, con una rueda corrediza en la parte baja del tubo, que sirve para regular la
intensidad de la llama.
Gradillas
Pueden ser de alambre metlico, madrera, acero inoxidable o plastificadas, estas ltimas son las
ms recomendadas. Sirven para colocar los tubos de prueba de diferentes dimensiones.
Equipos
Balanzas de precisin
La sensibilidad de una balanza es la masa ms pequea que puede pesar con precisin. Pueden
ser digitales o mecnicas.
Centrfugas
Son equipos que sirve para separa dos fase de diferentes densidades con la finalidad de
separarlas. Su velocidad se mide en revoluciones por minuto rpm.
Incubadora
Esta provista de un calentador que nos permite obtener temperaturas entre 25 a 100C., es
controlada mediante un termmetro. Sirve para mantener una temperatura constante de un
producto que se quiere preparar.
Autoclave
Este equipo sirve para esterilizar los materiales que son usados en microbiologa o que por su
uso requieren estar libres de grmenes patgenos.
Se basa en el uso del vapor de agua sobrecalentado y a presin lo que permite que la
temperatura suba hasta los 200 a 250 C.
CONCLUSIONES
CUSTIONARIO
1. Qu diferencias existe entre una pipeta serolgica y una pipeta volumtrica?
2. Qu tipo de frascos son recomendados para guardar reactivos?
3. Dibuje los materiales y equipos observados.
PRECAUCIONES EN EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO
Las medidas oportunas y la comprensin de las prcticas a seguir harn del laboratorio un lugar
seguro como cualquiera saln de clases. Para ello debern tenerse en cuenta en forma general.
Las siguientes precauciones:
1. Observa dnde dejas el material caliente cerciorndote de que est frio antes de tomarlo
con la mano
2. Cuando caliente un tubo de ensayo, no lo apuntes haca ti o hacia tus compaeros, puede
proyectarse su contenido.
PROCESOS BIOLOGICOS
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Procesos Biolgicos
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Procesos Biolgicos
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Procesos Biolgicos
PRACTICA N 02
MICROSCOPIA
Un microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una
imagen y permite la observacin de mayores detalles de los posibles a simple vista. El
microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolucin
del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar
como mnimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para
captar la informacin. La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el
espesor del espcimen, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin. Tericamente la
mxima resolucin que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una luz con longitud de onda
de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con objetos
condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no
puede aumentar la resolucin. Existen distintos microscopios pticos generales y de
investigacin que se diferencian en factores tales como la longitud de onda de la iluminacin del
espcimen, la alteracin fsica de la luz que incide en la muestra y procesos analticos que se
aplican a la imagen final.
OBJETIVO
Conocer las partes del microscopio y sus funciones
Adquirir habilidad y destreza en el manejo del microscopio
Realizar observaciones con este instrumento
MATERIALES
microscopios compuestos
Estereoscopios
Lminas porta y cubre objetos
Servilletas de papel
Muestras
Goteros
PROCEDIMIENTO
Mediante explicaciones y observaciones de figuras, reconozca las partes del microscopio.
Durante el trabajo debe aplicar correctamente el uso y manejo del microscopio y estereoscopio,
para el cuidado es importante su limpieza despus del uso, son hbitos que contribuyen a la
buena conservacin de estos equipos.
PARTES DEL MICROSCOPIO
1. Parte Mecnica
- SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
- PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.
- CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular,
- REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.
- TORNILLOS DE ENFOQUE: Micromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que
consigue el enfoque correcto.
2. Parte ptica
- OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo.
- OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.
- CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.
- DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
- FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador
CARACTERSTICAS DE LA VISIN CON EL MICROSCOPIO
1. Grado de Aumento
Es la magnificacin total que sufre la imagen del objeto. Se obtiene multiplicando el nmero de
veces que aumenta el lente ocular por el nmero de veces que aumenta el lente del objetivo. Si
el objetivo aumenta la imagen de un objeto 40 veces, sta al pasar por la lente ocular ser
nuevamente aumentada. Si el ocular aumenta 10 veces la magnificacin total en este caso ser:
40X x 10X = 400x.
Este resultado permite, saber cuntas veces ms grande estamos viendo la imagen de un
objeto.
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Procesos Biolgicos
2. Poder de Resolucin
Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos entre s. Cuando mayor sea el
poder de resolucin, menor ser la distancia entre dos puntos a la cual pueden distinguirse
como tales. La distancia lmite en la cual dos puntos pueden ser todava distinguibles se
denominan lmite de resolucin. El poder de resolucin de un microscopio compuesto depende
de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura numrica (propiedad ptica de la
lente). Este puede ser calculado mediante la siguiente frmula:
DLR = 0.61 X / A.N.
Donde:
DLR = Distancia lmite de resolucin
X = Longitud de onda de la fuente luminosa
A.N. = Apertura numrica de la lente
Existe una correspondencia entre el aumento de un objeto y su apertura numrica de tal modo
que las lentes con mayores aumentos generalmente tendrn mayores aperturas numricas. El
poder de resolucin es quizs la caracterstica ms importante de un buen microscopio ya que
de nada sirve una imagen muy grande del objeto si est se ve borrosa y no pude distinguirse en
sus detalles.
3. Distancia de Trabajo
Es la distancia que existe entre el objeto en observacin y el lente objetivo. Esa distancia es
caracterstica y constante para cada lente.
MANEJO DEL MICROSCOPIO PTICO
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera
estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del ocular, ya que
se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin pudindose daar alguno de
ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntido la muestra, girar el
micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se
perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y
repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la
preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de
inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc con el objetivo de inmersin.
6. Empleo del objetivo de inmersin:
a. Bajar totalmente la platina.
b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
c. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre ste y el
de x40.
d. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
e. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de inmersin.
f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.
g. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo
de accidente es muy grande.
h. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se puede volver
a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de aceite. Por tanto, si desea
enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operacin desde el paso 3.
10
Procesos Biolgicos
RESULTADOS
1. Seale las partes de los microscopios en los esquemas
Vista de frente
2. Hallar el poder de resolucin de cada uno de los objetivos de su microscopio, considerando
que la longitud de onda de la luz verde es 5,50 A y llene el siguiente cuadro:
3. Observacin de muestras:
Muestra 01: Lminas fijas
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Procesos Biolgicos
X
Observacin: describa lo que observa
Muestra 02: Gota de agua estancada
X
Observacin: describa lo que observa
CONCLUSIONES:
CUESTIONARIO
a. Problema N01: La distancia entre dos hongos del levaduras del gnero Saccharomyces es
de 5,161 A, valor que concuerda con la distancia lmite de resolucin del mayor aumento.
Cul es el grado de aumento total que se obtiene con este lente?
b. Cul es la apertura numrica de este lente?
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Procesos Biolgicos
PRACTICA N 03
MTODO CIENTFICO
El mtodo cientfico est sustentado por dos pilares fundamentales. El primero de ellos es la
reproducibilidad, es decir, la capacidad de repetir un determinado experimento en cualquier
lugar y por cualquier persona. Este pilar se basa, esencialmente, en la comunicacin y
publicidad de los resultados obtenidos. El segundo pilar es la falsabilidad. Es decir, que toda
proposicin cientfica tiene que ser susceptible de ser falsada (falsacionismo). Esto implica que
se pueden disear experimentos que en el caso de dar resultados distintos a los predichos
negaran la hiptesis puesta a prueba. La falsabilidad no es otra cosa que el modus tollendo
tollens del mtodo hipottico deductivo experimental. Segn James B. Conant no existe un
mtodo cientfico. El cientfico usa mtodos definitorios, mtodos clasificatorios, mtodos
estadsticos, mtodos hipottico-deductivos, procedimientos de medicin, etctera.
OBJETIVO
- Practicar la tcnica sobre la observacin cientfica
MATERIALES
- Una hoja de una planta vegetal
- Un insecto
- Un piedra
PROCEDIMIENTO
MUESTRA 01 : Hoja vegetal
Preparacin : Realice observaciones de una hoja vegetal
Observaciones : Dibuje la hoja, seale sus partes y anote como mnimo 30
observaciones
MUESTRA 02 : Insecto
Preparacin : Realice las observaciones del insecto
Observaciones : Dibuje el insecto, seale sus partes y anote como mnimo 30
observaciones
MUESTRA 03 : Piedra
Preparacin : Realice las observaciones de la piedra
Observaciones : Dibuje la piedra, seale sus partes y anote como mnimo 30
observaciones
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1. De todas lo que ha anotado diga cuales cree que no son observaciones.
2. Cmo podra definir que es una observacin?
3. Por qu cree que son importantes las observaciones?
4. Cmo debe ser una buena observacin?
5. Qu diferencia existe entre la observacin y la interpretacin?
13
Procesos Biolgicos
14
Procesos Biolgicos
PRACTICA N 04
CLULAS VEGETALES
El termino clula fue aplicado por primera vez por Robert Hooke en 1665, actualmente es
aceptado como la unidad bsica, morfolgica y funcional de todo organismo, adems de
presentar la unidad fundamental en cuanto a origen, dado que todo organismo procede de una
clula nica. La clula vegetal tpica presenta como partes principales: el protoplasto y la
pared celular.
OBJETIVOS
Reconocer los organelos caractersticos de la clula vegetal
Reconocer las principales componentes no protoplasmticos o sustancias ergsticas de la
clula vegetal.
MATERIALES
Hoja de yuyo
Harina de yuca y maz
Fruto rojo de rocoto, Capsicum pubescens
Corcho
Frutos de aceituna, Olea europea
PROCEDIMIENTO
ORGANELOS TPICAMENTE VEGETALES: PLASTIDIOS
MUESTRA 01 : Cloroplastos en yuyo
Preparacin : Coloque una hoja con una gota de agua en el porta objetos
Observaciones : Los cloroplastos se observan como corpsculos esfricos de color
verde dentro de la clula.
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Procesos Biolgicos
X X
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Procesos Biolgicos
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1. Dibujo de una clula vegetal y sus partes.
PRACTICA N 05
CLULA ANIMAL
La clula es la unidad biolgica, anatmica, gentica y fisiolgica de los seres vivos. Todos los
seres vivos estn constituidos por una o varias clulas. En los organismos superiores las clulas
que los conforman se organizan en menor o mayor grado, constituyendo: tejidos, rganos y
sistemas altamente especializados. La clula animal no presenta cloroplastos ni pared celular.
OBJETIVOS
Identificar la clula animal
Reconocer las estructuras propias de la clula animal.
MATERIALES
Lmina portaobjetos y cubreobjetos
Baja lengua
Lanceta
Colorante Wright
Aceite de cedro
Algodn
Alcohol medicinal 500 ml.
Un Sapo o Rana
PROCEDIMIENTO
MUESTRA 01 : Mucosa o epitelio bucal
Preparacin : Con el borde de un baja lenguas, realice un raspado de la mucosa bucal y
coloque en el centro de portaobjeto, en la que previamente se ha puesto
gota de suero fisiolgico. Agregar una gota de lugol o azul de metileno.
Observaciones: Reconozca la forma del ncleo y aspecto del Citoplasma.
MUESTRA 02 : Sangre capilar
Preparacin : Obtenga 1 o 2 gotas de sangre, realice un frotis sanguneo. Deje secar a
medio ambiente. Cubrir la extensin con unas gotas de colorante Wrigt.
Dejar en reposo durante 1 a 2 minutos, agregar sobre el colorante la
misma cantidad de agua destilada y mezclar rpidamente. Dejar reposar
la mezcla por 10 minutos, lavar con agua corriente, secar a la
temperatura ambiente. Observar en el microscopio con el objetivo de
menor aumento y luego con el de inmersin. (100X)
Observaciones : Clulas sanguneas: eritrocitos, leucocitos y plaquetas.
Eritrocitos Leucocitos
X X
Leucocitos Plaquetas
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Procesos Biolgicos
X X
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1. Qu diferencia morfolgica puede notar entre las clulas observadas?
2. Qu diferencia existe entre: rgano, organelo y organismo?
3. Dibujar una clula animal y considere sus partes
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Procesos Biolgicos
OBJETIVO
Reconocer las etapas del ciclo celular en las clulas meristemticas de la raz de Allium
cepa cebolla
MATERIALES
Luna de reloj
Solucin de orcena actica clorhdrica al 2% (colorante)
Pinzas metlicas
Microscopio compuesto
Papel filtro
Cebolla enraizada
Hoja de bistur
Fsforos
Mechero de alcohol
Lmina porta y cubreobjeto
PROCEDIMIENTO
MUESTRA 03 : Ovarios de vertebrados (peces o anfibios)
Preparacin : Sobre una lmina portaobjetos, colocar una gota de suero fisiolgico, con
la ayuda de una pinza extraer una porcin de huevos del ovario de un pez
o anfibio, colocarlo sobre la lmina portaobjetos disgregndolos unos a
otros. Colocar una lmina cubreobjetos, observar al microscopio
MUESTRA 01 : Races frescas de cebolla
Preparacin : Escoja un bulbo de cebolla fresca, quiete las races y fibras secas. De la
base del bulbo. Deje la cebolla en un recipiente con agua (solo la base
debe tocar la superficie del agua) por un periodo de 3 a 4 das para que
desarrollen races. Con un bistur, corte la mitad inferior de la punta de la
raz y colquela en una luna de reloj. Agregue suficiente colorante para
cubrir la raz y unas gotas de cido clorhdrico 1N. Caliente suavemente
sobre el mechero la preparacin, hasta que salga el primer vapor. El
colorante no debe hervir, retire la luna de reloj y espere a que se enfre.
Evite inhalar vapores. Repita el paso 5 varias veces por un perodo de 20
a 25 minutos. Coloque la raz coloreada en la lmina portaobjeto y realice
un corte de un milmetro en el extremo apical, deseche el resto y agregue
una gota de colorante fresco. Despedazar la muestra con la ayuda de una
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Procesos Biolgicos
FASES DE LA MITOSIS
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Procesos Biolgicos
PROFASE METAFASE
X .X
ANAFASE TELOFASE
.X .X
CUESTIONARIO
1. Enumere las caractersticas de las clulas meristemticas
2. Indicar las diferencias entre la mitosis de las clulas vegetales y las clulas animales.
3. Indicar la importancia gentica de la mitosis
4. Por qu es importante que cada clula resultante de la mitosis reciba exactamente la
misma cantidad de material nuclear?
5. Por qu los cromosomas son visibles durante la interfase?
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Procesos Biolgicos
PRACTICA N 07
DIFUSIN Y OSMOSIS EN CLULAS VEGETALES
Difusin es un fenmeno mediante el cual las molculas de varios fluidos situados en un mismo
recinto, debido a su movimiento continuo, tiende a formar una mezcla homognea. La osmosis
es la difusin de un lquido a travs de una membrana semipermeable que separa dos
diluciones que poseen concentraciones diferentes. Rn la osmosis el flujo de las molculas del
disolvente es el de la disolucin menor concentracin (hipotnica) a la de mayor concentracin
(hipertnica) y tiende a igualarlas (es decir hacerlas isotnicas). Los procesos de osmosis
intervienen de modo decisivo en la regulacin del equilibrio hdrico del organismo.
OBJETIVOS
Observar las caractersticas del proceso de difusin.
Conocer el proceso de osmosis.
MATERIALES
Lugol, Azul de metileno, Solucin de glucosa al 1%, Cloruro de Sodio
Almidn, Agua destilada, Algas del gnero Spirogyra
Tubo de desprendimiento de 10 cm., Papel celofn, Frascos de boca ancha, Ligas de jebe,
Permanganato de potasio, Azcar, Papa
Palitos mondadientes, Cronmetro
PROCEDIMIENTO
Y = AC BX
Tiempo
Volumen
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Procesos Biolgicos
parte sin cscara cubrir con parafina fundida. Llenar el tubo con una
solucin de glucosa 0.1 molar, colocar una marca en el menisco, la papa
as preparada colocar en un frasco conteniendo agua destilada, luego de
24 horas medir la altura de la columna formada.
Observacin : Osmosis en papa
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO
1. Qu es difusin y osmosis?
2. En qu consiste el crecimiento osmtico
3. Qu ventaja y desventaja significa para la clula los fenmenos de difusin y osmosis?
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Procesos Biolgicos
PRACTICA N 08
OBSERVACIN DE CLULAS SANGUNEAS DE PECES
La ictiohematologa puede ser definida, en trminos generales, como una disciplina que estudia
la sangre de los peces; sin embargo, en trminos prcticos, estudia las clulas sanguneas
morfolgica, bioqumica y funcionalmente, as como tambin los rganos hematopoyticos, las
enfermedades relacionadas con ellos y cualquier fenmeno o patologa que relacione las clulas
y/o sus rganos productores.
Los valores hematolgicos y la bioqumica sangunea son herramientas vlidas muy tiles en la
determinacin del estado de salud y el equilibrio metablico en los peces, tanto de vida silvestre
como en cultivos intensivos. La posibilidad de evaluacin de estos parmetros depende de la
disponibilidad de valores de referencia "normales" de diferentes componentes sanguneos que
son buenos indicadores del estado de salud de los peces en condiciones naturales, as como de
cambios en su hbitat.
Estudios sobre hematologa de peces demuestran que las variaciones en las condiciones
ambientales como temperatura, pH, oxgeno, entre otros, causan modificaciones fisiolgicas en
los niveles de algunos parmetros sanguneos Adems, se ha determinado que estos pueden
estar tambin influenciados por numerosos factores tales como la especie, la edad, el
fotoperiodo, el estado nutricional y la metodologa usada para su determinacin.
OBJETIVO
Identificar los glbulos rojos y blancos en una muestra de sangre de pescado
MATERIALES. Pipeta, Lminas portaobjetos, Alcohol etlico, Aceite de inmersin, Colorante
Wright (2.4 g. en un litro de alcohol metlico), Jeringa descartable de 2 cc, Algodn, Microscopio
compuesto, Agua destilada.
PROCEDIMIENTO
- Extraer con la jeringa descartable, sangre de la zona caudal del pescado.
- Deja caer una gota pequea de sangre en el borde de la lmina portaobjeto. Con el borde
de otra lmina portaobjeto, extiende la gota de sangre. La extensin debe ser lo ms fina
posible. Djala secar.
- Una vez seca, agregar con el gotero una pequea cantidad del colorante, lo suficiente
para cubrir la muestra, y djalo actuar durante 1 minuto. Luego, con una pipeta, agrega
suavemente agua destilada sobre el colorante, evitando que ste se derrame.
- Deja actuar esta solucin por 5 minutos, luego, lava con abundante agua destilada y deja
secar.
- Una vez que se haya secado bien, observa la muestra al microscopio compuesto con un
aumento de 1000x. Debes agregar el aceite de inmersin.
Gota
de
sangr
e
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Procesos Biolgicos
OBSERVACIONES
CUESTIONARIO
1. Identifica en los dibujos los distintos tipos de clulas sanguneas.
2. De qu color aparece teido el ncleo de los leucocitos?
3. Qu forma tienen los glbulos rojos? Tienen ncleo?
4. Son iguales los glbulos rojos de los peces que de los humano? Explique
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Procesos Biolgicos
o La reaccin en el tubo de ensayo nmero 1 nos sirve para identificar los cloruros. La
explicacin es la siguiente: Los cloruros en contacto con una solucin de nitrato de plata
forman cloruro de plata, que da lugar a un precipitado blanco de aspecto lechoso.
o La reaccin en el tubo de ensayo nmero 2 nos va a permitir identificar la presencia de
fosfatos. La explicacin es la siguiente: Los fosfatos en presencia de molibdato
amnico, forman un precipitado amarillo de fosfomolibdato amnico.
o La reaccin en el tubo de ensayo nmero 3 nos sirve para identificar el calcio. Esto es
debido a: El calcio al reaccionar con el oxalato amnico forma un precipitado blanco
cristalino de oxalato amnico.
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Procesos Biolgicos
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Procesos Biolgicos
2. REACCIN DE BIURET
La producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ya que se debe a la presencia
del enlace peptdico (- CO- NH -)que se destruye al liberarse los aminocidos.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia
compleja denominada biuret, de frmula:
Que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta
caracterstica.
TCNICA
1. Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3 cc. de albmina de huevo.
2. Aadir 2cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. A continuacin 4 5 gotas de solucin de sulfato cprico diluida al 1%.
Debe aparecer una coloracin violeta-roscea caracterstica.
3. REACCIN DE AMINOCIDOS AZUFRADOS
Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa
esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al
reaccionar con una solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.
TCNICA
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo (clara de huevo).
2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.
3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.
4. Calentar el tubo hasta ebullicin.
5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de
plomo, utilizndose el azufre de los aminocidos, lo que nos sirve para identificar
protenas que tienen en su composicin aminocidos con azufre.
PRACTICA N 13
RECONOCIMIENTO DE LPIDOS
OBJETIVOS
Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lpidos, algunas de las cuales pueden servirnos
para su identificacin.
Materiales de Laboratorio
Bao Mara. Mechero. Gradillas con tubos de ensayo. Vaso de precipitado con agua.
Aceite vegetal, Solucin de Sudn III en frasco cuentagotas. Tinta roja en frasco
cuentagotas. Solucin de Hidrxido sdico al 20%. ter o cloroformo
SAPONIFICACIN: Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico
descomponindose en los dos elementos que la forman: glicerina y los cidos grasos. Estos se
combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en definitiva las
sales sdicas o potsicas de los cidos grasos.
La reaccin es la siguiente:
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Procesos Biolgicos
TINCIN. Las grasas se colorean en rojo anaranjado por el colorante denominado Sudan III.
TCNICA. Proceder as:
1. Disponer en una gradilla dos tubos de ensayo, colocando en ambos 2cc de aceite.
2. Aadir a uno, 4 o 5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III. Al otro tubo aadir 4-5
gotas de tinta roja. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
3. Se observar en el tubo al que se le aadi Sudn, que todo el aceite aparece teido. En
cambio en el frasco al que se aadi tinta roja, la tinta se habr ido al fondo y el aceita
aparecer sin teir.
SOLUBILIDAD. Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequesimas gotitas formando una "emulsin" de aspecto lechoso, que es
transitoria, pues desaparece en reposo, por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa
que por su menor densidad se sita sobre la de agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgnicos como el ter,
benceno, xilol, cloroformo, etc.
TCNICA. Proceder de la siguiente manera:
1. Tomar dos tubos de ensayo y poner en cada uno de ellos 2-3 cc de agua y en el otro 2-
3cc de ter u otro disolvente orgnico.
2. Aadir a cada tubo 1cc de aceite y agitar fuertemente. Observar la formacin de gotitas
o micelas y dejar en reposo. Se ver como el aceite se ha disuelto en el ter y en cambio
no lo hace en el agua, y el aceite subir debido a su menor densidad.
PRACTICA N 14
ENZIMAS
OBJETIVOS
1. Poner de manifiesto la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
2. Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de las enzimas.
3. Comprobar la accin hidroltica de la amilasa.
MATERIALES
Gradilla Agua oxigenada Agua oxigenada
Tubos de ensayo Solucin de lugol Trocitos de hgado
Mechero Soluciones de Fehling Trocitos de tomate
Pipetas Bao Mara Almidn
1. RECONOCIMIENTO DE LA CATALASA
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales.
La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se
forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta
enzima, la catalasa, lo descompone en agua y
oxgeno, por lo que se soluciona el problema.
La reaccin de la catalasa sobre el H2O2, es la
siguiente:
Reaccin A
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha
para utilizar el agua oxigenada como desinfectante cuando se
echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias
patgenas son anaerobias (no pueden vivir con oxgeno),
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Procesos Biolgicos
mueren con el desprendimiento de oxgeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos
acta sobre el agua oxigenada.
En esta primera experiencia vamos a demostrar su existencia.
1. Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado.
2. Aadir 5 mililitros de agua oxigenada.
3. Se observar un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxgeno. Figura 1 (Observa
la reaccin A)
2. DESNATURALIZACIN DE LA CATALASA
Mediante esta experiencia, vamos a ver una propiedad fundamental de protenas, que es la
desnaturalizacin. Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos desnaturalizarla
al someterla a altas temperaturas. Puedes
recordarlo en la prctica de protenas. Al perder la
estructura terciaria, perder tambin la funcin y
como consecuencia su funcin cataltica, por lo
que no podr descomponer el agua oxigenada y
no se observar ningn tipo de reaccin cuando
hagamos la experiencia anterior con muestras de
tejidos hervidos.
1. Colocar en un tubo de ensayo varios trocitos
de hgado.
2. Aadir agua para hervir la muestra. Hervir
durante unos minutos.
3. Despus de este tiempo, retirar el agua
sobrante.
4. Aadir el agua oxigenada.
5. Observar el resultado. Figura 2
3. HIDRLISIS DEL ALMIDN
Mediante esta experiencia, vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina,
presente en la saliva.
Esta enzima acta sobre el polisacrido almidn, hidrolizando el enlace O-glicosdico, por lo que
el almidn se terminar por transformar en unidades de glucosa.
Es importante que recuerdes las reacciones caractersticas de glcidos para comprender esta
experiencia.
PROCEDIMIENTO:
1. Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo,
numerados del 1 al 4.
2. Aadir en cada tubo 5 mililitros de una solucin diluida de
almidn.
3. A los tubos 3 y 4 aadir una pequea cantidad de saliva.
Figura 3
Para ayudarte y formar ms saliva, piensa en un limn o en algo
que te apetezca mucho comer... As favoreces que formes ms
saliva.
o En el tubo 1, haz la Reaccin de Fehling.
o En el tubo 2, realiza la Reaccin de Lugol.
o Los resultados son los esperados para un polisacrido como el almidn.
Los tubos 3 y 4 que contienen el almidn, al que le hemos echado la saliva, ponerlos en un vaso
de precipitados al bao Mara, controlando la temperatura del agua para que no hierva, ya que
lo que intentamos, es que la enzima de la saliva trabaje a unos 37: C. Dejarlo unos 15 minutos
A continuacin realizar las siguientes reacciones:
En el tubo nmero 3, realizar la Reaccin de Fehling.
En el tubo nmero 4, realizar la Prueba del Lugol.
El resultado positivo obtenido en el tubo de ensayo 3, nos dice que no hay ya almidn,
porque la amilasa de la saliva ha hidrolizado el almidn transformndolo en glucosa, por
eso la reaccin de Fehling es ahora positiva.
De una manera similar, podemos interpretar el resultado del tubo de ensayo 4, ahora nos
da la reaccin de polisacridos negativa, ya que el almidn (polisacrido) se ha
hidrolizado.
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Procesos Biolgicos
BIBLIOGRAFA
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