MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

2015 - 2016
 Conceptos tericos iniciales Prctica 1 Soluciones 46
I
El mtodo cientfico 05 Prctica 2 Regulacin del equilibrio cido-base despus de ejercicio 52
muscular intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio
El Sistema Internacional de Unidades (SI) 08
Matemticas para el laboratorio 12 Prctica 3 Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del 58
sustrato en la velocidad de la reaccin enzimtica

Notacin cientfica o exponencial 12 Prctica 4 Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de 63
los inhibidores de la cadena de transporte de electrones
de los desacoplantes.

El mtodo del factor unitario en los clculos 13 Prctica 5 Determinacin de glucosa en sangre total 67

Logaritmos 14 Prctica 6 Determinacin de colesterol y lipoprotenas plasmticas 73

Grficas 16 Prctica 7 Integracin metablica 81

Algunos mtodos utilizados en bioqumica 18
Centrifugacin 18 Prctica 8 Examen General de Orina (EGO) 91
Potenciometra 19
Electroforesis 22 Prctica 9 Pipeteo 97
Soluciones 25
Manejo de material biolgico 32 Prctica 10 Huella gnica 101

Medidas de seguridad 34

2
III Apndice 108

Soluciones 109

Concentracin normal de electrolitos 109

Instrucciones para el uso del microscopio 110

Marca Leica

Instrucciones para la operacin del

fotocolormetro Klett-Summerson 112

Uso del Glucmetro 113

Uso del Accutrend 115

Valores de referencia 117

3
CONCEPTOS TERICOS INICIALES

4
EL MTODO CIENTFICO
La cultura no puede comprenderse sin hacer referencia al mtodo
cientfico. La ciencia no es un sector de la civilizacin que pueda
separarse del resto de ella, sino un esfuerzo creativo con su
propio sistema de valores que, poco a poco, ha llegado a formar
parte de los valores generales en la sociedad moderna.
La ciencia est basada en el mtodo cientfico; su
capacidad y limitaciones estn definidas por l y dondequiera que
el mtodo cientfico sea aplicable, puede haber ciencia.
El origen de la ciencia se pierde en el ms remoto
pasado. Mucho antes de que existieran los registros histricos de
la humanidad, la magia primitiva dio origen tambin a la religin y,
mucho antes, al arte. Ciencia, religin y arte difieren en mtodos,
pero coinciden en metas: comprender e interpretar al universo y
la interaccin de sus partes para promover el progreso material y
espiritual de la humanidad.
El objetivo de la ciencia es hacer teoras. Las teoras
cientficas explican los hechos y predicen con alto grado de
probabilidad la ocurrencia de hechos similares.
La secuencia del mtodo cientfico es: observar, plantear
problemas, hacer hiptesis, experimentar y formular teoras.
Cada uno de los procesos del mtodo cientfico, tomado
aisladamente, forma parte de la actuacin cotidiana de todos los
seres humanos, pero, en su conjunto, utilizados
sistemticamente, constituyen la ms poderosa herramienta que
ha diseado la humanidad para conocer y controlar a la
naturaleza.
Observacin
El mtodo cientfico se inicia con la observacin. Lo que no puede
observarse, directa o indirectamente por medio de instrumentos o
de modificaciones de la conducta, no puede ser investigado por la
ciencia.
La observacin debe ser repetida en forma independiente
por observadores diversos. Las observaciones nicas, que no se
repiten ni actual ni potencialmente, no pueden ser objeto de
estudio cientfico.
Problema
Despus de que una observacin se hace y se repite, el segundo
tiempo del mtodo cientfico es plantear un problema; en otras
palabras, se hacen preguntas sobre la observacin: Cmo es
que los hechos ocurren de esta manera? Qu es lo que
determina su desarrollo, evolucin y trmino? Es en este punto
donde el cientfico difiere del hombre comn; ambos hacen
observaciones pero slo el primero muestra curiosidad cientfica
sobre ellas.
Plantear un problema es hacer preguntas, pero, hacer
buenas preguntas al igual que hacer buenas observaciones es
un arte muy preciado. Para que tengan valor cientfico los
problemas deben ser significativos y tener respuestas
comprobables por tcnicas apropiadas.
Las preguntas que se inician por cmo? o qu? se
resuelven mejor, cientficamente, que las que comienzan con
por qu?, pero los investigadores pueden formular los
problemas para que adopten la forma adecuada.
6
Hiptesis
Una vez planteado un problema adecuado, el cientfico
procede al tercer tiempo del mtodo: formular una explicacin o
hiptesis. Por supuesto que un problema puede tener varias
explicaciones posibles, pero slo una de ellas es la verdadera.
Las respuestas casuales a un problema son generalmente
errneas; pero el cientfico con su intuicin, su experiencia y, a
veces por incidentes afortunados, acierta en la hiptesis. Esto se
sabe al emplear el cuarto tiempo del mtodo cientfico.
Experimentacin
El objetivo de la experimentacin es comprobar la validez de la
hiptesis. Si los experimentos demuestran que la hiptesis es
errnea, se hace una nueva y se la sujeta a comprobacin. El
procedimiento puede prolongarse por mucho tiempo al formular
nuevas hiptesis y tratar de comprobarlas experimentalmente.
La situacin ideal en la experimentacin consiste en
reducir el problema a dos alternativas posibles que puedan
contestarse con claridad, afirmativa o negativamente; pero en
muchas ocasiones los resultados del experimento slo conducen
a soluciones parciales.
La experimentacin es la parte ms ardua del mtodo
cientfico. Cada experimento es un caso en s mismo; el
conocimiento anterior y la experiencia ayudan tcnicamente para
decidir la forma en que una hiptesis puede ser comprobada
experimentalmente. La eleccin correcta del experimento y su
interpretacin es lo que separa al genio del aficionado a la
investigacin.
Teora
Las pruebas experimentales son la base del quinto peldao,
final del mtodo cientfico: la formulacin de una teora. Cuando
una hiptesis se ha sostenido por pruebas convincentes,
obtenidas por muchos laboratorios e investigadores
independientes, se propone una teora que consiste en una
afirmacin con lmites mucho ms amplios que los experimentos
en que se basa y que expresa la creencia o probabilidad de que
sea valedera en cualquier combinacin de sujeto, tiempo y lugar
en donde se renan condiciones similares.
Desde este punto de vista una buena teora permite hacer
predicciones. Las predicciones cientficas tienen siempre un
soporte experimental muy slido y aun cuando no afirman que un
hecho ocurrir con certidumbre, s plantean que tiene una gran
probabilidad de ocurrir.
Unas pocas teoras han probado su validez tan
universalmente, y expresan tan alto grado de probabilidad, que se
las conoce con el nombre de leyes naturales. Por ejemplo,
ninguna excepcin se conoce al hecho de que una manzana
desprendida de su rbol caer al suelo si no es sostenida de
alguna manera. La ley de gravitacin se basa en esta
observacin.

7
 Las leyes naturales orientan la investigacin cientfica. Si en el
anlisis de un hecho se elimina lo imposible, aquello que es
contrario a las leyes naturales, lo que resta, aunque sea muy raro
y poco probable, debe ser la verdad. La verdad son los hechos
que nos rodean. Aunque acontecen sin cesar a nuestro
alrededor, muy pocas personas y muy pocas veces se hace un
anlisis cientfico de ellas.
Ei se emplean las leyes naturales para marcar lo imposible,
con el resto posible se hacen nuevas hiptesis, se comprueban
por experimentos, se formulan nuevas teoras y se acumula el
conocimiento cientfico que ha permitido al hombre situarse en un
Universo observable que tiene un radio (r) de millares de millones
de aos luz y que incluye un microcosmos tan pequeo que se
20
expresa en rdenes de magnitud menores de 10 m y adquirir
un dominio incuestionable sobre su ambiente.
Un sistema de medidas preciso requiere unidades bien
definidas. La Oficina Internacional de Pesas y Medidas revisa
peridicamente el sistema para incorporar los adelantos
tecnolgicos y mejorar la exactitud y precisin de las medidas.
Se han hecho muchos esfuerzos para desarrollar un
sistema de unidades universalmente aceptable. El producto de
estos esfuerzos es el Sistema Internacional de Unidades (cuya
abreviatura es SI en todos los idiomas). A partir del creciente
intercambio de informacin cientfica este sistema ha sido
aceptado por toda la comunidad y en especial en medicina. El SI
es esencialmente una versin ampliada del sistema mtrico
decimal.
El SI comprende tres tipos de unidades: las unidades de
base, las unidades derivadas, las unidades suplementarias y una
serie de prefijos que permiten tomar mltiplos y submltiplos
decimales de las unidades utilizadas.

SISTEMA INTERNACIONAL DE UNIDADES (SI) Unidades de base

Los resultados de todos los experimentos en que se basan las El SI consta de siete unidades bsicas que son
teoras cientficas y las leyes naturales derivan de las mediciones dimensionalmente independientes. Las unidades bsicas estn
de objetos o de sus propiedades. anotadas en el cuadro I.1, junto con los smbolos que hay que
utilizar para indicar estas cantidades.
Medir es comparar magnitudes; toda medicin comprende un
nmero y una unidad. La unidad identifica la clase de dimensin y Unidades SI derivadas
el nmero expresa las veces que la unidad est contenida en el
objeto o la propiedad medida. La medicin es un arte muy Al multiplicar una unidad de base por s misma o al asociar dos
refinado; en la actualidad emplea instrumentos muy complejos y o ms unidades de base por una simple multiplicacin o divisin,
alcanza una precisin extraordinaria. se puede formar un amplio grupo de unidades llamadas SI

8
derivadas (cuadro I.2). Ejemplo: la unidad derivada de volumen A cierto nmero de unidades SI derivadas se les ha dado
es el metro elevado al cubo, o metro cbico. nombres especiales, en su mayor parte tomados de los hombres
de ciencia que han hecho contribuciones notables al
La combinacin de unidades de base para formar las conocimiento del tema de estudio correspondiente (cuadro I.3).
unidades derivadas es una de las grandes ventajas del SI. En el
SI no es preciso memorizar factores de conversin; el factor a Prefijos SI
que se recurre para formar las unidades derivadas es 1 (unidad),
Cuando las unidades SI derivadas resultan demasiado
cualidad que hace al SI coherente.
grandes o demasiado pequeas para determinados fines (sera
Cuadro I.1. Unidades bsicas del SI. desproporcionado, por ejemplo, utilizar el metro cbico para
expresar el volumen de sangre del cuerpo humano), el SI
Magnitud Nombre Smbolo contiene una serie de prefijos que permiten formar mltiplos y
Longitud metro m
submltiplos decimales de las unidades SI (cuadro I.4).
Masa kilogramo kg
Tiempo segundo s
Cantidad de mol mol Los prefijos SI se anteponen directamente al nombre de la
sustancia unidad, sin signo de puntuacin alguno (ejemplo: nanmetro y no
Temperatura kelvin K
nano-metro).
termodinmica
Intensidad luminosa candela cd
Intensidad de ampere A El smbolo del prefijo se antepone tambin directamente al
corriente elctrica smbolo de la unidad, sin espacios intermedios ni signos de
puntuacin (ejemplo: mm, milmetros; nmol, nanomol que
9
Cuadro I.2. Algunas unidades derivadas simples equivale 10 moles).

Magnitud Nombre Smbolo

2
Superficie metro m
cuadrado
3
Volumen metro m
cbico
3
Concentracin mol/metro mol/m
de sustancia cbico
Velocidad metro por m/s
segundo

9
Cuadro I.3. Unidades SI derivadas con nombres especiales Cuadro I.4. Prefijos SI.
Magnitud Nombre Smbolo Definicin
2
Factor Prefijo Smbolo
Fuerza Newton Nm. kgm/s 18
10 exa E
Presin Pascal Pa N/m2 15
10 Peta P
Trabajo; Joule J Nm 12
10 Tera T
energa; 9
10 Giga G
cantidad de 6
10 Mega M
calor 3
A.s 10 Kilo K
Carga Coulomb C 3
10 Mili M
elctrica; 6
10 Micro
cantidad de 9
10 Nano N
electricidad 12
10 Pico P
Potencia; Watt W J/s 15
10 Femo F
flujo 18
10 ato Q
energtico
Tensin Volt V W/A
elctrica;
potencial
Unidades no pertenecientes al SI
elctrico
Temperatura Grado C
K273,16 Ciertas unidades ajenas al SI son de uso tan frecuente que en
Celsius Celsius
cierto modo forman parte de nuestra vida cotidiana y se acord
utilizarlas juntamente con el SI (cuadro I.5).

Algunas de estas unidades, en especial el litro y las unidades

de tiempo, son de gran importancia en las profesiones de la
salud. Conviene sealar que el litro es un nombre especial que se
da al submltiplo, decmetro cbico, de la unidad SI de volumen.

10
Cuadro I.5. Algunas unidades no pertenecientes al SI.
La multiplicacin de las unidades se indica con un punto a
Magnitud Unidad Smbolo Valor en
nivel o elevado (newton. metro=N.m) o un espacio (N m). La
SI
divisin se puede indicar mediante una barra oblicua o por
Tiempo minuto min 60 s
exponentes negativos:
hora H 3 600 s
1
Da D 86 400 s 1/s = s
-3 3
Volumen Litro loL 10 m mol por metro cbico puede expresarse por:
Energa calora cal 4.185J 3 3
mol/m o mol.m

Reglas de escritura de smbolos y cifras.

El SI tiene muchas ventajas y algunas desventajas, pero se
reconoce la realidad del esfuerzo para implantarlo como una
Los smbolos de las unidades no toman la terminacin del
forma de expresar los datos cientficos, comprensible para todos.
plural (ejemplo: dos mililitros se escribe 2 ml, y no 2 mls).
Se recomienda desechar las unidades que no pertenecen al SI a
la mayor brevedad posible, pero la realidad del uso de otras
Los smbolos de las unidades jams van seguidos de un
unidades en textos y comunicaciones cientficas no se puede
punto, salvo si estn al final de una frase (ejemplo: 5 ml y no 5
negar. En este Manual las unidades SI se anotarn entre
ml.).
parntesis cuando se juzgue conveniente.

Cuando se escriben cifras, la coma slo se puede utilizar para

indicar los decimales; las cifras deben agruparse en tros,
Algunas recomendaciones para utilizar el SI en bioqumica
dispuestos a la derecha y a la izquierda de la coma, y separados
entre s por un pequeo espacio. Ejemplo:
PARA EXPRESAR CONCENTRACIONES

forma correcta: 1 000 000

0,003 278 La concentracin de sustancias cuya masa molecular se
0.003 278 conoce se expresa en forma de cantidad de sustancia, es decir,
forma incorrecta: 1,000,000 en moles (o en submltiplos como el milimol o el nanomol) por
0.003,278 litro. Ejemplo:

11
 cido rico en el suero o plasma:
Varones: 0.18 a 0.53 mmol/l.
Mujeres: 0.15 a 0.45 mmol/l.
Colesterol en el suero o plasma: 3.9 a 7.2 mmol/l.
Glucosa en el suero o plasma: 3.6 a 6.1 mmol/l.
Vitamina A en el suero: 0.53 a 2.1 mol/l.
La concentracin en forma de cantidad de sustancia no
debe ser denominada concentracin molar o molaridad, ni
utilizar el smbolo M en vez de mol/l (como tampoco mM, nM,
etctera, en vez de mmol/l, nmol/l, etctera).
La concentracin de sustancias cuya masa molecular se
desconoce o es dudosa se expresa en kg/l, g/l, mg/l, etctera.
Ejemplo:
Protena srica total: 60 a 80 g/l.
Albmina srica: 33 a 55 g/l.
Globulina srica: 20 a 36 g/l.
Fibringeno en el plasma: 2 a 6 g/l.
Hormona antidiurtica en plasma: 2 a 12 pg/ml
Concentracin de sustancias en tejidos. Se expresa en
unidades de masa (si no se conoce la masa molecular) o en
moles (si se conoce la masa molecular) por kilogramo de tejido
seco o hmedo. Ejemplo:
g/kg, mg/kg o mol/kg, mmol/kg, etctera.
No se recomienda expresarla en unidades de volumen, es
decir en mg/ml, g/l, etctera.
Concentracin de iones hidrgeno. La concentracin de
hidrogeniones en los lquidos biolgicos se expresa en nmol/l, as
como en unidades de pH. El valor del pH se define como el
logaritmo negativo de la actividad de los iones hidrgeno (pH = -
+
log H ), esta actividad puede determinarse potenciomtricamente
con la ayuda de un pH-metro.
Actividad enzimtica. La unidad SI de actividad cataltica es
mol por segundo: mol/s (tambin llamado katal, smbolo: kat) y
corresponde a la cantidad de sustrato transformado por segundo
como resultado de la catlisis. La velocidad medida es
proporcional a la cantidad de enzima presente.
La actividad tambin puede ser expresada en trminos de
unidades (smbolo: U). Por definicin, una unidad es igual a la
concentracin de enzima necesaria para la formacin de un
micromol de producto por minuto (mol/min). La actividad
especfica de una enzima se define como la concentracin de
producto que se forma por 1 miligramo de enzima por minuto.
MATEMTICAS PARA EL LABORATORIO
Notacin cientfica o exponencial
Cuando se expresan cantidades muy grandes o muy
pequeas, como es el caso frecuente en bioqumica, la dificultad
de escribir y manipular muchos ceros se evita con el uso de la
notacin exponencial o cientfica.
En la notacin exponencial todo nmero puede expresarse como
una potencia entera de 10, o como un producto de dos nmeros,
uno de los cuales es una potencia entera de 10. Ejemplo: el
nmero de Avogadro seiscientos dos sextillones se escribe:
602 000 000 000 000 000 000 000
12
y en la notacin exponencial como una cantidad decimal significativas como mximo; los exponentes se suman
23
multiplicada por 10 elevada a la potencia apropiada = 6.02 x 10 . algebraicamente para multiplicar, se restan para dividir, se
Como ejercicio, examine las cantidades siguientes: multiplican por una potencia deseada para tener el exponente de
la misma y para encontrar races se divide el exponente entre el
2
200 = 2 x 10 x 10 = 2 x 10 ndice de la raz. Ejemplos:
2
205 = 2.05 x 10
5
205 000 = 2.05 x 10 6 3 9 10
1 6 x 10 por 3 x 10 = 18 x 10 = 1.8 x 10
0.205 = 2.05 x 10 6+3 9
4 ya que 6 x 3 = 18 y 10 = 10
0.000 205 = 2.05 x 10 6 3 3
7
0.000 000 1= 1/10 000 000 = 1 x 10 6 x 10 entre 3 x 10 = 2 x 10
63 3
ya que 6/3 = 2 y 10 = 10
El exponente de la base 10 para nmeros mayores de la
unidad es el nmero de lugares desde la coma o punto decimal
Para la adicin y la sustraccin usando notacin cientfica,
separada de la primera cifra significativa:
primero se escribe cada cantidad con el mismo exponente n.
2 Luego se realiza la operacin deseada entre los valores N1 y N2,
205 = 2.05 x 10 = 2 lugares
donde N1 y N2 son los nmeros obtenidos con el mismo

Para fracciones decimales menores de la unidad se separa la
primera cifra distinta de cero despus de la coma decimal y se
cuentan los lugares hacia la izquierda hasta la coma decimal,
incluso la cifra separada y el nmero es el exponente negativo:
0.000 205 = 0.000 205
del 2 a la coma decimal son 4 lugares; por lo tanto, es :
4 unitario. Esta tcnica se basa en las propiedades del nmero 1,
2.05 x 10 .
Las operaciones de multiplicar y dividir, elevar a potencias o
extraer races se facilitan manipulando los exponentes segn
reglas muy sencillas. La porcin decimal no exponencial se opera
en forma ordinaria, lo que reduce el manejo a tres cifras
exponente; estos ltimos permanecen iguales. Ejemplo:
2 3 3 3 3
(5.1 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = (0.51 x 10 ) + (3.4 x 10 ) = 3.91 x 10
El mtodo del factor unitario en los Clculos
El procedimiento que se utilizar para resolver problemas que
incluyan conversin de unidades se denomina mtodo del factor
es decir
:
Cualquier nmero al ser multiplicado por uno, sigue siendo el
mismo nmero (1 x 5 = 5).

13
 El nmero 1 puede ser escrito como el cociente de cualquier 3. Multiplicar la cantidad dada por ese factor. En esta
nmero dividido por si mismo (3/3 6/6). multiplicacin, las unidades idnticas se multiplican o
Se puede tomar cualquier ecuacin y dividirla por uno de los cancelan como si fueran nmeros.
miembros para obtener una razn igual al nmero 1.
-5
Por ejemplo, dada la ecuacin: Ejemplo: Cuntos l hay en 0.00005 L (5 x 10 L)?
0 minuto = 60 segundos, obtener la razn igual al nmero 1.
-6 6
1) 1 l = 10 L 1 L = 10 l
1 minuto = 60 segundos
1 minuto 1 minuto
6
2) 10 l
1= 60 segundos 1= 1 minuto 1L
1 minuto 60 segundos
-5 [-5+ 6] 1
3) 5 x 10 L x= 5 x 10 = 5 x 10 l = 50l.
Estas razones o factores que son equivalentes al nmero 1 se
conocen como factores unitarios, factores de conversin o En este mtodo las unidades se acarrean en todo el
coeficientes de conversin. proceso del clculo, por lo tanto si la ecuacin se establece en
forma correcta, todas las unidades se cancelan excepto la
El recproco de cualquier factor unitario es tambin un factor deseada.
unitario.
Logaritmos
En ambos casos el numerador y el denominador describen la
misma cantidad, por lo que se puede efectuar conversiones entre El logaritmo de un nmero es el exponente o potencia de una
diferentes unidades que miden la misma cantidad. base determinada que se requiere para obtener el nmero. Si el
n
nmero a elevado a la potencia n (a ) es igual al nmero N,
El mtodo del factor unitario consiste en: entonces n es el logaritmo de base a del nmero N. Es decir:
1. Tomar una relacin entre unidades y expresarla en forma de n
si a = N entonces n = loga de N
una ecuacin,
2. Luego expresar la relacin en forma de una fraccin (llamada La base a puede ser cualquier nmero; en la prctica mdica
factor de conversin) y, por ltimo; se usa como base el nmero 10 y los logaritmos resultantes se

14
conocen como logaritmos comunes o de Briggs. Su smbolo es:
log o log.10
Los logaritmos son indispensables para manejar los datos
bioqumicos; constan de dos partes que se separan por una coma
o punto decimal; a la izquierda, la caracterstica corresponde al
orden de magnitud y puede ser positiva o negativa segn sea la
cantidad mayor o menor de la unidad. El exponente de la base 10
para nmeros mayores de la unidad es siempre positivo. Cuando
es negativo se indica con el signo menos arriba del nmero que
la representa:
-3
0.001 = 10 caracterstica 3
-3
1 000 = 10 caracterstica 3
A la derecha, la mantisa es la fraccin decimal de exponente
que corresponde a los dgitos que ocupan el orden de magnitud;
se obtiene de tablas o de calculadoras electrnicas y siempre
tiene valor positivo:
2 0.3010
log = 0,3010 esto es 10 =2
Cuando la caracterstica y la mantisa son de diferente signo (+
o ) se opera con el cologaritmo que se obtiene por la suma
algebraica de la mantisa positiva con la caracterstica negativa es
un nmero todo negativo, ver el siguiente ejemplo:
Log 0.002 = 3.3010 = -2.6990
3.000
+0.3010
-2.6990 cologaritmo
La caracterstica indica la posicin del punto decimal en la cifra
representada por la mantisa y se determina por inspeccin del
nmero.
Para un nmero mayor que 1, la caracterstica es uno menos
que el nmero de cifras antes del punto decimal; as: la
caracterstica de 100 es 2 porque el nmero cien tiene 3 dgitos a
la izquierda del punto decimal. Para un nmero menor que 1, la
caracterstica es numricamente uno ms que el nmero de
ceros que siguen al punto decimal; as: la caracterstica de 0.000
000 1 es 7 con signo negativo.
Para encontrar el logaritmo de un nmero, por ejemplo: 0.000
809, se busca en la tabla las dos primeras cifras distintas de cero
de izquierda a derecha (80) en la primera columna vertical de las
tablas se sigue la horizontal correspondiente hasta la columna 9,
que es el otro nmero, en donde se lee 9 079, que es la mantisa
requerida. La mantisa para 809, 8.09, 0.0809, etctera; es la
misma (9 079), pero difiere la caracterstica. As:
Log 0.000 809 = 4.9079 = -3.0921
Si el nmero del cual se requiere el logaritmo tiene cuatro
cifras, la cuarta se busca en la misma columna horizontal en la
parte de la tabla que dice partes proporcionales y debe
agregarse a la mantisa como diez milsimos.
15
 Por ejemplo, para el nmero 8 091:
Mantisa para 809 = 9 079
parte proporcional para 1 = 1
0.9079
+ 0.0001
0.9080; log 8091 = 3.9080
El antilogaritmo es el nmero que corresponde a un logaritmo
dado. Para encontrarlo se busca la mantisa en la tabla de
antilogaritmos, se determina el nmero a que corresponde y se
fija la posicin del punto decimal segn la caracterstica. Por
ejemplo el antilogaritmo de 1.6747 es 47.29: la caracterstica es 1
(hay dos dgitos a la izquierda del punto decimal) y la mantisa es
0.6747, que se buscara en la tabla de logaritmos donde se
hallara que corresponde a 4 729.
Los estudiantes deben familiarizarse con el uso de logaritmos
en las operaciones comunes.
El logaritmo del producto de dos nmeros es igual a la suma
de sus logaritmos:
log a x b = log a + log b
El logaritmo del cociente de dos nmeros es igual al logaritmo
del dividendo menos el logaritmo del divisor:
log a/b = log a log b
El logaritmo de la potencia n de un nmero es igual a "n"
veces el logaritmo del nmero:
3
log a = 3 x log a
Grficas
"Una figura equivale a mil datos en una tabla numrica" y as
como se construye un modelo para visualizar un conjunto
complejo de hechos, se utiliza una grfica para presentar los
datos experimentales en tal forma que fcilmente se asimilen y
aprecien sus relaciones cuantitativas.
Se llama grfica a la representacin esquemtica de las
variaciones que sufren las distintas magnitudes que intervienen
en los fenmenos fsicos, qumicos, biolgicos, sociales o de
cualquier otra ndole. Tiene por objeto mostrar rpida e
intuitivamente la relacin que guardan las magnitudes
comparadas.
Entre las diferentes clases de grficas que existen las ms
importantes son:
Grfica poligonal. Consiste en expresar las variaciones de un
fenmeno continuo por medio de puntos y de representar la
marcha de dicho fenmeno por medio de una lnea que une esos
puntos.
Para elaborar una grfica poligonal se trazan en un papel, de
preferencia milimtrico, dos rectas perpendiculares entre s que
16
se corten en cero. En cada una de ellas se representar una de
las magnitudes que se van a relacionar. El punto cero (0) se
llama origen y la rectas son los ejes; 0X es el eje X y 0Y es el eje
Y. Para referirse al eje X generalmente se dice: eje horizontal o
eje de las abscisas (variable independiente) y para el eje Y: eje
vertical o eje de las ordenadas (variable dependiente).
Los ejes dividen su propio plano en cuatro regiones llamadas
cuadrantes que se numeran I, II, III y IV. En el laboratorio
utilizamos habitualmente slo el primer cuadrante (figura I.1).
Las distancias a la derecha de 0, a lo largo del eje X, se
consideran como positivas y las de la izquierda como negativas.
Similarmente, hacia arriba de 0, a lo largo del eje Y, se miden las
distancias positivas y hacia abajo de 0 las negativas.
Despus se trazan los puntos cuyas distancias a uno de los
ejes sean proporcionales a la magnitud que se va a representar y,
finalmente, al unir estos puntos por medio de segmentos de recta,
se tiene la grfica poligonal.
Nota: por lo general, es mejor que la curva llene una parte
considerable de la pgina. Muy bien puede usarse la misma
unidad de medida sobre los dos ejes, pero a menudo los valores
tienen un campo de variabilidad muy amplio, lo cual hace
necesario usar diferente escala para cada uno de los ejes.
Diagrama en barras. Cuando se quieren expresar simples
comparaciones de medidas entre s o para representar un
fenmeno discontinuo se emplean las barras, que pueden ser
horizontales o verticales.
Barras verticales. Las magnitudes se representan por medio
de rectngulos, barras de base igual que descansan en el eje de
las abscisas y cuya altura es proporcional a la intensidad del
fenmeno y se mide en el eje de las ordenadas.
Barras horizontales. Las barras descansan sus bases en el eje
de las ordenadas y el fenmeno se mide en el eje de las
abscisas.
Grfica de sectores circulares. Para hacer una grfica de este
tipo hay que tener en cuenta que el crculo debe tener el total de
las magnitudes que se van a representar.
Los sectores circulares son proporcionales a las magnitudes
que representan; magnitud que se mide en grados de
circunferencia. Para determinar el nmero de grados que deben
tener dichas partes se plantearn una serie de reglas de tres para
cada una de ellas en las cuales se consideran: como 100% a la
suma total de las magnitudes que se quieren graficar,
para obtener en cada caso el porcentaje correspondiente; una
vez obtenido ste, se pasar a grados, considerando 360 o como
100% y procediendo entonces a hacer la grfica.
17

ALGUNOS MTODOS UTILIZADOS EN BIOQUMICA
Centrifugacin
Un mtodo muy til en el laboratorio para separar sustancias
de diferente densidad suspendidas en un lquido es la
centrifugacin; en ella, la accin de la fuerza centrfuga (fuerza
necesaria para desplazar hacia afuera un determinado peso en
direccin radial) da como resultado que las partculas ms
pesadas se sedimenten ms rpido que las partculas ligeras.
La fuerza centrfuga depende de la cantidad de materia
(m) que se desplaza hacia afuera cuando est rotando a una
velocidad por minuto de (n) veces a una distancia radial (r) y se
expresa por la frmula:
2
f (en dinas) = 0.01096 n m r
En el sistema mtrico decimal, la unidad de f es la dina, la de
m es el gramo y la de r es el centmetro. Ejemplo: si se coloca un
gramo de agua en un tubo de centrfuga y se rota a 2 000 rpm
(revoluciones por minuto) a una distancia radial de 16 cm, la
fuerza es:
2
f = 0.01096 x 2000 x 1 x 16 = 701 440 dinas
Si transformamos las dinas a peso, entonces el gramo de agua
tiene peso porque es atrado al centro de la Tierra de acuerdo
con la ley de la gravitacin y es atrado en estado normal, con
980 dinas de fuerza. Si usamos, por lo tanto, peso en vez de
dinas como la unidad de nuestro problema tendremos:
2
f = 0.01096 x n mr = 717 g
980
o sea, interpretando la frmula, la fuerza de contencin para
sostener la unidad masa (el gramo) e impedir que se vaya del
centro de rotacin es la fuerza que la gravedad ejerca sobre 716
g o, dicho de otra manera, el gramo a esa velocidad pesa en el
fondo del tubo de la centrfuga 716 gramos comparado con el
tubo en reposo o 716 veces la fuerza de la gravedad (g).
La centrifugacin y ultracentrifugacin son operaciones que se
basan en el principio anterior y que permiten separar los
componentes de una mezcla.
Las centrfugas ordinarias operan a rotaciones menores de
10 000 revoluciones por minuto (rpm). Las condiciones que
limitan esta velocidad son la resistencia de la parte de la
18
centrfuga que sostiene el rotor (brazo), la friccin con el aire y el very high density) con Sf de 0 a 10, 10 a 400 y las muy densas
calentamiento. que no flotan y tienen una densidad mayor de 1.
El peligro del mal uso de la centrfuga deriva de la enorme fuerza
Las ultracentrfugas operan en cmaras refrigeradas, que alcanza en el radio de rotacin y el peso de las sustancias
evacuadas de aire, y el rotor no gira sostenido por un brazo sino colocadas en el campo gravitacional del aparato.
impulsado por chorros de aceite o aire comprimido que se aplica
a una porcin externa del rotor sostenido por una pared muy
Se debe tener cuidado con los siguientes puntos:
gruesa de una cmara cilndrica de rotacin. Se alcanzan
velocidades de 20 000 a 70 000 rpm. 1. Los tubos en las centrfugas debern colocarse por pares
para que no haya diferencia de peso en un lado de la centrfuga.
Enfrente de un tubo de un peso determinado debe estar otro, en
La sedimentacin en la ultracentrfuga se expresa en unidades
la misma posicin, con el mismo peso. El descuido de esta regla
Svedberg (smbolo: S) y se aplica a la comparacin prctica de
implica un desnivel que, a las velocidades y fuerzas sealadas,
tamaos moleculares que no slo dependen de la masa de las
puede romper los tubos y daar el aparato. Para balancear por
molculas implicadas sino tambin de su forma. Es importante
pares los tubos lo mejor es usar una balanza de dos brazos y
considerar que los valores de Svedberg no son aditivos, es decir,
ajustar el peso hasta que sea idntico.
dos partculas 5S no crean una partcula 10S. Sin embargo, hay
2. Para no forzar el motor arrnquese gradualmente la centrfuga
una correspondencia tosca que para las protenas esfricas es
hasta alcanzar la velocidad requerida.
de:
3. Nunca se frene una centrfuga; djese parar por su propia
inercia; el no hacer esto conduce a que se agite el contenido
2 S = 10 kdal
4 S = 50 kdal de los tubos y se eche a perder el trabajo.
8 S = 160 kdal 4. No alzar las tapas de la centrfuga cuando est en
16 S = 400 kdal movimiento.
5. Ante cualquier dificultad o duda consulte al profesor.
13
La unidad Svedberg es igual a 10 segundos; no pertenece al
Potenciometra
SI y puede suplirse por 0,1 picosegundo (ps) o 100 femtosegundo
(fs). En las molculas menos densas que el medio de
Muchas de las reacciones que se realizan en las clulas son
suspensin, como las lipoprotenas, el desplazamiento es hacia la
reacciones de oxidacin y de reduccin, es decir, en las que se
superficie y se expresa en Svedberg de flotacin (Sf) y permite la
transfieren electrones.
clasificacin en: LDL, HDL y VHDL (low density, high density y

19

La electroqumica estudia las reacciones qumicas en las que
hay transferencia de uno o ms electrones.
La oxidacin es la prdida o liberacin de electrones y la
molcula que los cede se denomina agente reductor.
La reduccin es la ganancia de electrones y la molcula que
los acepta se denomina agente oxidante.
Cuando se oxida un agente reductor, se transforma en su
forma oxidada y como la reaccin es reversible las formas
oxidada y reducida del compuesto constituyen un par conjugado
llamado par redox o par de oxidorreduccin.
El proceso de oxidacin siempre va acompaado del proceso
de reduccin ya que los electrones que cede una molcula
reductora son aceptados por una molcula oxidante, lo cual
constituye las reacciones de oxidorreduccin o reacciones redox.
La determinacin cuantitativa de la concentracin de las
molculas oxidantes y reductoras en una solucin es el objeto de
estudio de la potenciometra. En esta tcnica se determina el
potencial elctrico generado por la transferencia de electrones en
una reaccin redox en la cual estn involucradas las molculas a
estudiar. Este potencial se mide en una celda electroqumica. La
celda ms comn es la de Daniell (Fig. I.2), en la que en dos
compartimientos separados que contienen ZnSO 4 y CuSO4 se
colocan cinc y cobre metlico, respectivamente; las dos
soluciones se conectan por un puente salino (un tubo que
contiene agar embebido en una solucin de un electrolito como el
KCl). Cuando los dos electrolitos se conectan por un alambre
metlico, ocurre un flujo de electrones del electrodo de cinc al
electrodo de cobre, el cual puede ser medido por medio de un
voltmetro. Cuando el cinc cede los electrones se convierte en ion
soluble, mientras que el cobre disuelto, al aceptar los electrones,
se convierte en cobre metlico que se deposita en el electrodo. El
puente salino cierra el circuito elctrico entre las dos soluciones.
El hecho de que fluya una corriente elctrica del polo positivo
(nodo, que en este caso es el electrodo de cinc) al polo negativo
(ctodo, que en este caso es el electrodo de cobre), significa que
hay una diferencia de potencial entre los electrodos denominada
fuerza electromotriz (fem) de la celda. Dado que el potencial de
un electrodo est relacionado con la magnitud de cargas positivas
existentes, la diferencia de potencial compara las cargas relativas
existentes en dos puntos. Se denomina potencial de electrodo (E)
a la diferencia de potencial respecto a un electrodo de referencia
arbitrario y depende de la concentracin de las molculas en la
solucin y de la temperatura.
En general, el potencial de los electrodos se mide con
referencia al electrodo de hidrgeno al que se le ha asignado.
En general, el potencial de los electrodos se mide con referencia
al electrodo de hidrgeno al quese le ha asignado
o
arbitrariamente un potencial de cero a 25 C a una concentracin
de 1 mmol/L y una presin del gas de una atmsfera. Sin
embargo, en la prctica es inconveniente porque se trata de un
electrodo gaseoso.
20
 aplicaciones prcticas ms importantes de la potenciometra es la
determinacin del pH.

Dentro del electrodo de vidrio hay un alambre de plata con un

extremo sumergido en una solucin de HCl 0.1M. El bulbo de la
+
parte inferior es de un vidrio especial, permeable a los iones H .
La superficie interior de esta membrana de vidrio est en contacto
con la solucin de HCl y la exterior con la solucin cuyo pH se
quiere determinar. En las dos superficies la membrana de vidrio
absorbe agua y forma una capa de gel a travs de la cual
difunden los iones hidrgeno y desplazan a otros iones de la
estructura del vidrio (como sodio) y esto provoca el
Fig. 1.2 Celda de Daniell
establecimiento de un potencial. En una solucin amortiguadora
Es por ello, que se usan otros electrodos de referencia, como
que contenga Cl se sumerge un electrodo de Ag/AgCl. Cuando
el de calomel, en el cual el sistema de medicin es mercurio y
el electrodo se coloca en una solucin cuyo pH es diferente al de
cloruro mercuroso. En el caso de este electrodo, como sucede
la solucin amortiguadora, aparece una diferencia de potencial
con todos los pares redox, debe calibrarse con respecto al
entre los dos extremos, lo cual es una medida de la diferencia de
electrodo de hidrgeno.
los dos valores de pH.
Los pares redox de inters para el bioqumico incluyen a
La determinacin ms precisa del pH se realiza en un pH-
menudo al ion hidrgeno como reactivo o como producto, por lo
metro que consiste, fundamentalmente, en un potencimetro
que tales sistemas estn en funcin del pH del medio.
diseado para emplearse con un sistema de electrodo de vidrio.
Como una unidad de pH corresponde a 59 milivoltios a 25 C, el
Hay diferentes tipos de electrodos: los metlicos (como los de
mismo medidor se puede usar con dos escalas para hacer
la celda de Daniell), los metlicos-sal insoluble (como el de
lecturas en mv o en pH. El electrodo de vidrio consiste en una
plata/cloruro de plata), los gaseosos (como el de hidrgeno, que
membrana de vidrio situada al final de un tubo de vidrio o plstico
se adsorbe sobre platino), los electrodos selectivos de iones (que
de paredes ms gruesas. En el tubo se encuentra cido
pueden ser para aniones o para cationes) y los de vidrio (que son
+ clorhdrico diluido saturado de cloruro de plata y un hilo de plata
electrodos selectivos de iones, especiales para determinar H ).
que conecta a la terminal del voltmetro con un electrodo de
Estos ltimos son los ms utilizados ya que una de las
referencia. El pH se determina midiendo la diferencia de potencial
a travs de la membrana de vidrio que separa la solucin a la

21
cual se quiere determinar el pH, de la solucin de referencia cuya
concentracin de hidrogeniones se conoce.
El esquema del circuito de un potencimetro tpico se
encuentra en la figura I.3. La sensibilidad del medidor se puede
ajustar para cambios de acuerdo a la temperatura (botn de
control de temperatura). Con el botn de calibracin a cero se
introduce un voltaje lateral en el circuito que permite que la
lectura corresponda al pH de la solucin reguladora tipo. Los
medidores de pH se construyen de tal manera que el cero de la
escala del potencimetro corresponda a un pH de 7. El medidor
se calibra antes de usarlo, primero
con una solucin reguladora de pH 7, ajustando el cero para que
d la lectura exacta; se lava el electrodo con agua destilada o
desionizada y se calibra con una segunda solucin reguladora de
pH 4 10; se ajusta nuevamente el medidor, ahora con el control
de temperatura, para que d la lectura exacta; luego se determina
el pH de la solucin problema.
Electroforesis
Una partcula coloidal o un ion provistos de carga elctrica
emigran hacia el nodo o el ctodo bajo la influencia de un
campo elctrico externo. Si las partculas de una mezcla tienen
diferentes velocidades de desplazamiento, puede aprovecharse
esta propiedad para separarlas. El empleo de fuerzas elctricas
para lograr esta separacin se llama electroforesis y depende
fundamentalmente de la carga y no de la masa molar de las
partculas cargadas. Esta tcnica se ha empleado en la
separacin de protenas, pptidos, nucletidos, cidos orgnicos
y porfirinas, entre otros compuestos. Es importante considerar
que en el caso de una protena su carga depende del pH del
medio, por lo que es posible emplear la tcnica para determinar el
punto isoelctrico de la misma.
Si se aplica un campo elctrico a travs de una solucin, la
fuerza que acta sobre las molculas cargadas de soluto
depende de la carga elctrica (e); del nmero de cargas en la
molcula (z), y de la fuerza del campo elctrico (E).
Inmediatamente despus de poner a funcionar el campo, las
partculas cargadas se aceleran hasta que alcanzan un equilibrio,
o sea, cuando la carga electrosttica queda equilibrada por la
fuerza de friccin que ejerce el medio disolvente; entonces, se
mueven a una velocidad constante. La velocidad por unidad de
campo elctrico se denomina movilidad electrofortica. Dado que
la friccin depende del tamao de la partcula y de la viscosidad
del medio en que se mueve, la facilidad con la que se mueve una
partcula cargada depende directamente de su carga e
inversamente de su tamao y de la viscosidad del medio.
22

Existen dos tipos de electroforesis: la frontal y la zonal.
Electroforesis frontal o en medio lquido. Es el mtodo clsico
de Tiselius en el que la separacin de los componentes de una
mezcla se realiza en varios frentes o lmites que se traslapan a lo
largo del procedimiento. El movimiento de los frentes se realiza
en un canal vertical y la densidad de la solucin por debajo del
frente debe ser mayor que la de arriba, ya que en caso contrario
el sistema de frentes se destruira. En el mtodo, la solucin a
separar se coloca encima del medio amortiguador conductor. La
tcnica es difcil y costosa, aunque puede presentar la ventaja de
que se evitan las interacciones de los solutos con cualquier
superficie y se eliminan as los efectos adsorbentes y
desnaturalizantes. Adems, puede operarse en medios acuosos,
a baja temperatura y bajo condiciones favorables de pH y fuerza
inica.
Electroforesis zonal. Uno de los problemas que presenta la
tcnica anterior es la necesidad de estabilizar las zonas de soluto
contra la conveccin gravitacional y la difusin. Esto origin el
empleo de otra tcnica de electroforesis: la electroforesis zonal.
En ella, el empleo de gradientes de densidad, slidos porosos o
fibrosos y geles permite resolver el problema de la difusin y de la
conveccin gravitacional.
En este tipo de electroforesis la mezcla de solutos a separar se
aplica como una mancha o una banda delgada en un punto del
canal electrofortico. Los solutos migran con distintas velocidades
(de acuerdo a su movilidad) y se separan en zonas discretas. La
distancia de migracin es directamente proporcional al voltaje
aplicado y al tiempo. Los solutos migran a travs del solvente que
baa un soporte slido. Este soporte puede ser de diversa
naturaleza y cada uno presenta algunas ventajas y desventajas
en su uso. Los soportes ms comunes son papel, acetato de
celulosa, almidn, agar, agarosa y poliacrilamida. Dado que en el
caso de los geles es posible un manejo del tamao del tamizado
para lograr una mxima eficiencia en la separacin, este mtodo
es el ms usado en bioqumica.
En la tcnica hay que cuidar algunos aspectos que pueden
afectar la separacin como: la seleccin adecuada del soporte,
del amortiguador, vigilar la temperatura de la cmara, la
intensidad del campo elctrico, el tiempo, etctera.
Electroforesis en papel y en acetato de celulosa. La
electroforesis en papel fue el primer mtodo de separacin en
zonas en un campo elctrico. Es una tcnica sencilla y rpida,
que requiere pequeas cantidades de muestra y que es
especialmente til en las electroforesis de alto voltaje para
separar molculas de bajo peso molecular como aminocidos,
pptidos, oligonucletidos y otros compuestos orgnicos con
grupos cargados. Ha sido muy utilizada en el mapeo
bidimensional de protenas (huella gnica), para identificar
diferencias entre protenas similares, probar que una protena es
producto de otra de mayor tamao, etctera.
Dado que el papel tiene una alta actividad endosmtica*, lo
que causa algunos problemas en la electroforesis, ha sido
sustituido por el acetato de celulosa, que tiene una estructura
23
microporosa uniforme, actividad endosmtica baja y en el que la
adsorcin de las protenas ha sido eliminada.
En los aparatos en que se realizan estas tcnicas el soporte se
humedece al sumergirlo en el amortiguador y colocarlo de tal
manera que se establezca el contacto con las soluciones en que
estn los electrodos. Los aparatos se tapan para evitar la
evaporacin y para mantener una atmsfera hmeda dentro del
aparato.
Electroforesis en geles de agar y agarosa. El agar es una
mezcla de polisacridos que se obtiene de ciertas especies de
algas marinas. Est constituido de dos componentes principales:
uno lineal o agarosa y uno ramificado y muy cido llamado agar o
pectina. El agar y la agarosa son solubles en soluciones acuosas
a 100oC y solidifican a temperatura ambiente; forman geles de
buena firmeza cuando se usan a una concentracin de 0.5 a 2%.
Su estructura se mantiene por numerosos puentes de hidrgeno
entre cadenas adyacentes de polisacridos. El gel de agarosa
ofrece ciertas ventajas sobre otros soportes; posee una porosidad
elevada y uniforme, lo que favorece la migracin regular de las
sustancias cargadas, lo cual se traduce en una mayor resolucin.
Para realizar la electroforesis en estos medios se prepara el
gel sobre una superficie de vidrio. Una vez solidificado el gel, se
hacen pocillos en l para aplicar en ellos la muestra. Se lleva a
cabo, o se "corre", la electroforesis y, al final, se fija la
preparacin, se tie y se seca. La tcnica se ha usado en
combinacin con la inmunodifusin en el anlisis inmunolgico de
protenas y en la cuantificacin de protenas inmunoprecipitables.
La electroforesis en agarosa ha permitido el estudio de las
molculas del DNA, cuyo tamao impide que puedan penetrar en
los geles de poliacrilamida, pero que penetran fcilmente en
6
geles de agarosa a 0.2%, si tienen un peso hasta de 150 x 10 , o
6
a 0.8% si pesan hasta 50 x 10 .
Es posible separar molculas de DNA que difieren slo 1% de
peso molecular segn sea la concentracin de la agarosa. Para
detectar las bandas, se sumerge el gel en una solucin de
bromuro de etidio el cual se pega al DNA y fluoresce cuando se
excita con luz ultravioleta. El peso molecular se determina por la
distancia de migracin. Tambin se han usado estos geles de
agarosa para la obtencin de mapas de restriccin, los que
permiten ver diferencias entre dos molculas de DNA, localizar
mutaciones, detectar recombinaciones de fagos, aislar
fragmentos de DNA deseados, distinguir entre el DNA lineal,
circular o superenrollado.
Electroforesis en geles de poliacrilamida. Los geles de
poliacrilamida son geles totalmente sintticos que han sustituido a
los geles de almidn en el estudio rutinario de protenas por
mtodos electroforticos. Esto ha sido posible gracias a la gran
facilidad con que puede variarse segn el contenido total del
monmero y su grado de entrecruzamiento. Dada su capacidad
de filtrador molecular, se ha empleado para separar compuestos
con base en su peso molecular para lo que se usa lauril sulfato
de sodio (SDS) con el objeto de evitar las diferencias individuales
en las cargas de las protenas.
24
 Los amortiguadores que se usan pueden ser continuos (en los
que se utiliza el mismo amortiguador en los tanques de los
electrodos y los sistemas electroforticos) y discontinuos, en los
que hay dos tipos de geles: el de separacin, o de poro cerrado,
en el cual se resuelven los componentes de una mezcla (aqu es
importante el uso del amortiguador adecuado) y el gel
concentrador, o de poro abierto, que sirve para concentrar la
muestra. A los geles se les puede incorporar sustancias
disociantes como la urea y el SDS sin que sean afectados.
Tambin pueden emplearse agentes reductores como el 2
mercaptoetanol o ditiotreitol para romper los puentes disulfuro de
las protenas.
Las dos aplicaciones principales de la electroforesis
discontinua son la determinacin de la pureza de protenas y el
anlisis de los componentes de una mezcla. La electroforesis en
gel de poliacrilamida en presencia de SDS tambin se ha
empleado en la determinacin de los pesos moleculares de
protenas.
Electroenfoque. Si se coloca una protena en un gradiente de
pH sujeto a un campo elctrico, se mover hasta alcanzar su
punto isoelctrico, donde permanecer sin moverse. Esta tcnica
es lo que se conoce como electroenfoque. Para formar un
gradiente estable y continuo de pH se usan anfolitos sintticos de
una gran variedad de pesos moleculares y rangos de pH. Cuando
se establece el campo elctrico, los anfolitos migran y generan el
gradiente de pH segn sus propios puntos isoelctricos. Esta
tcnica ha sido utilizada en combinacin con la separacin por
pesos moleculares en la electroforesis bidimensional como
mtodo de anlisis de protenas.
*Nota: Cuando se aplica un potencial elctrico a un lquido
contenido en un soporte no conductor el lquido se mover hacia
uno u otro electrodo, en favor o en contra del movimiento
electrofortico, alterando la movilidad electrofortica de las
partculas cargadas. Este fenmeno se conoce como
endosmosis. Si el soporte est cargado, induce la orientacin de
las cargas con signo opuesto en el lquido, lo que ocasionar al
aplicar la corriente elctrica que ocurra un flujo del lquido dentro
del canal electrofortico. Este fenmeno es lo que se conoce
como actividad endosmtica y puede causar problemas en las
separaciones electroforticas.
SOLUCIONES
Una solucin es una mezcla homognea de por lo menos dos
componentes: una fase dispersa, que es el soluto (sustancia que
se disuelve), y una dispersora que constituye el solvente o
disolvente (la sustancia que disuelve al soluto) y que,
generalmente, se encuentra en mayor proporcin. Las soluciones
ms utilizadas en bioqumica son las que tienen agua como
solvente.
La solubilidad de un soluto en un solvente depende de la
naturaleza de stos, de la temperatura y, en el caso de un gas,
de la presin. La solubilidad generalmente est dada en gramos
de soluto por 100 g de solvente.
25
 Se llaman soluciones diluidas las que contienen una
proporcin relativamente pequea de soluto; se llaman
soluciones concentradas las que contienen una gran cantidad de
soluto. Slo son posibles soluciones concentradas cuando el
soluto es muy soluble.
Una solucin saturada contiene la cantidad de soluto disuelto
necesaria para la existencia de un equilibrio entre las molculas
disueltas y las molculas en exceso que no estn disueltas. Esta
solucin se forma por medio de una vigorosa agitacin con
exceso de soluto. Existe una solucin sobresaturada cuando en
la solucin hay presente ms soluto que en una solucin
saturada. Para prepararla se forma una solucin saturada a
temperatura elevada y se enfra cuidadosamente para evitar la
cristalizacin. Las soluciones sobresaturadas son inestables y
con facilidad se convierten en soluciones saturadas.
Las mencionadas soluciones son poco precisas y no indican,
de manera cuantitativa, el soluto ni el solvente; los mtodos
cuantitativos ms comunes, que sirven para expresar
concentracin (la medida numrica de la cantidad relativa de
soluto en la solucin) de las soluciones, son las porcentuales, las
molares y las normales.
Soluciones porcentuales
En las soluciones porcentuales no se toma en cuenta el peso
frmula del soluto. En este tipo de soluciones se debe especificar
si la relacin es peso a peso (p/p), peso a volumen (p/v) o
volumen a volumen (v/v). Ejemplos:
Solucin porcentual p/p. Solucin al 10% de NaCl contiene 10
g de la sal por 100 g de solucin. El peso/peso porcentual
expresa el nmero de gramos del soluto en 100 gramos de la
solucin final.
%p/p = g de soluto x 100
100 g de solucin
Solucin porcentual p/v. Solucin de NaCl a 10% p/v: 10 g de
NaCl en 100 ml de solucin. Esto expresa el nmero de gramos
de soluto en 100 ml de la solucin final. En bioqumica, si no se
especifica otra situacin, las soluciones porcentuales deben
entenderse como p/v.
%p/p = g de soluto x 100
100 ml de solucin
Solucin porcentual v/v. Se utiliza cuando el soluto y el
la
solvente son lquidos. El v/v indica el nmero de volmenes de
soluto por 100 volmenes de solucin. Solucin de etanol a 30%
v/v: 30 ml de ste en 100 ml de solucin. Esto quiere decir que
por cada 100 ml de solucin, 30 ml corresponden al soluto y el
resto, hasta completar 100 ml, al agua destilada o al solvente
empleado.
%v/v = volumen de soluto x 100
100 volmenes de solucin
Es importante insistir que los trminos porcentuales expresan
siempre una relacin, es decir, podemos variar los volmenes
26
siempre y cuando no perdamos dicha relacin. Por ejemplo, si
nos pidieran preparar 50 ml de una solucin de alcohol etlico a
20%, seguiramos el siguiente planteamiento:
100 ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
50 ml de sol. tienen x ml de alcohol puro
X = 20 x 50 x 10
100
Resultado: necesitamos 10 ml de alcohol puro y completar un
volumen de 50 ml.
El alcohol etlico comn es de 96% de pureza (v/v). Por lo
tanto, si no contamos con alcohol puro y quisiramos preparar
una solucin de alcohol a 20%, seguiramos el siguiente
planteamiento:
100 ml de sol. tienen 96 ml de alcohol puro
X ml de sol. tienen 20 ml de alcohol puro
X= 20 x 100 = ml de solucin
96
Resultado: necesitamos 20.83 ml de solucin de alcohol
a 96% y completar un volumen de 100 ml.
Si tan slo queremos 50 ml de esta nueva solucin,
entonces:
100 ml de sol. de alcohol a 20% tienen 20.83 ml de alcohol a
96%
50 ml de sol. de alcohol a 20% tienen X ml de alcohol a 96%
X= 50 x 20.83 = 10.41ml
100
Resultado: necesitamos 10.41 ml de alcohol de 96% y completar
con agua destilada hasta un volumen final de 50 ml.
Soluciones molares
Una solucin molar se define como el nmero de moles de
soluto en un litro de solucin:
M= No. de moles
litro de solucin
donde un mol es igual al peso atmico o molecular expresado en
gramos (tomo gramo o molcula gramo). Un mol contiene el
23
nmero de Avogadro (6.023x10 ) de partculas, tomos o
molculas.
Si un mol de una sustancia se disuelve en agua hasta un
volumen de un litro, se obtiene una solucin 1 molar (1M).
Por ejemplo, si quisiramos preparar una solucin 1 molar de
NaCl, tendramos que considerar, primero, su peso molecular
(Na: 23 + Cl: 35.5 = 58.5) y este valor en gramos disolverlo en
agua, hasta completar un litro.
Ahora bien, si nos piden preparar 400 ml de una solucin
0.5 M de NaCl: cuntos gramos de NaCl deben pesarse?
1. Sabemos que un mol de NaCl es de 58.5 g.
2. Haremos el siguiente planteamiento:
Una sol. 1M tiene 58.5g de NaCl.
Una sol. 0.5M tiene X g de NaCl.
27
 X= 0.5 x 58.5 = 29.25 g de NaCl Soluciones normales
100
3. De acuerdo con la definicin de solucin molar, los 29.25 g de
Son las que contienen el peso equivalente de una sustancia en
NaCl los consideramos en un litro de solucin, pero como nos
gramos por litro de solucin:
piden preparar 400 ml haremos el siguiente planteamiento:
En 1000 ml de sol. hay: 29.25g de NaCl N = peso equivalente
En 400 ml de sol. hay: X g de NaCl litro de solucin

X= 400 x 29.25 = 11.7 g de NaCl

donde el peso equivalente de una sustancia es el nmero de
1000
unidades de esta sustancia que puede combinarse con una
unidad de hidrgeno:
Resultado: necesitamos 11.7 g de NaCl y disolverlo hasta
completar un volumen de 400 ml
Peso equivalente = peso molecular
En este ejemplo, cmo podemos ver, hemos multiplicado la n
molaridad del problema (0.5 mol/L) por el peso molecular de NaCl
(58.5 g) y por el volumen del pro- n = nmero de hidrgenos sustituibles.
blema (400 ml). Posteriormente dividiremos entre 1 litro (1 000
Ejemplo: el peso equivalente de un cido se calcula dividiendo
ml). Para simplificar el procedimiento podemos aplicar la
el peso molecular entre el nmero de tomos de hidrgeno
siguiente frmula: sustituibles en la molcula. El cido sulfrico (H2SO4), de peso
V x PM x M = gramos de la sustancia
molecular 98, tiene dos tomos de hidrgeno sustituibles en cada
1000
molcula; por lo tanto, su peso equivalente es: 98/2 = 49.
En donde:
V= Volumen del problema en ml. El peso equivalente de un hidrxido se calcula dividiendo el

PM = Peso molecular de la sustancia en g. peso molecular entre el nmero de grupos hidroxilo (OH ) de la
M= Molaridad del problema. molcula. El hidrxido de aluminio Al (OH)3 contiene tres grupos

OH por molcula; su peso molecular es de 78; por lo tanto, su
peso equivalente es 78/3 = 26.

28
 El peso equivalente de una sal se calcula dividiendo el peso Resultado: necesitamos 1.67 g de CaCl2 para preparar
molecular entre la valencia total de los cationes (cargas positivas) 300 ml de una solucin 0.1 N.
que contenga la frmula. La valencia del sodio es 1, y el sulfato
de sodio Na2SO4 (peso molecular 144) tiene dos iones de sodio
Soluciones osmolares
en cada molcula; por lo tanto, el peso equivalente del sulfato de
sodio ser 144/2 = 72.
El fenmeno de la smosis se presenta cuando una solucin
est separada de su solvente por una membrana semipermeable.
El peso equivalente de un oxidante (reductor) se calcula
La smosis es la difusin de solvente a travs de la membrana
dividiendo el peso molecular entre el nmero de electrones
desde la parte de menor a la de mayor concentracin. La presin
ganados (o perdidos) que puedan aportar por molcula.
osmtica es la presin que debe aplicarse sobre la solucin de
mayor concentracin a fin de impedir el paso del solvente
Recordemos la frmula utilizada para calcular la cantidad de
(smosis) a travs de la membrana.
sustancia necesaria para preparar cualquier cantidad de una
solucin determinada:
Las membranas biolgicas tienen permeabilidades distintas y
Para calcular la cantidad de una sustancia que se necesita pesar
se dice que son semipermeables, es decir, que son permeables
para preparar un volumen determinado de una solucin de
de forma selectiva para las molculas del solvente o pequeas
cualquier normalidad, se aplica una frmula semejante:
molculas, pero no permiten el paso libre de todas las molculas
V x Eq x N = gramos de la sustancia disueltas.
1000
Las mediciones cuantitativas demuestran que la presin
Ejemplo: preparar una solucin 0.1 N de cloruro de calcio osmtica es proporcional a la concentracin molar (para
(CaCl2) para obtener un volumen de 300 ml: sustancias no disociables) del soluto, por lo que una solucin
osmolar es aquella que contiene un mol de la sustancia en
V = 300 ml
gramos en un litro de solucin; el osmol es una medida del
N = 0.1
nmero total de partculas en solucin. La concentracin
Eq = peso molecular del CaCl2 111/2 = 55.5
expresada en osmol por litro se llama osmolaridad; el osmol por
Sustituyendo= 300 ml x 55.5 g x 0.01 N= 1.67 kilogramo de disolvente se denomina osmolalidad; en las
1000
soluciones muy diluidas, como son las del cuerpo humano, las
dos medidas son tan cercanas que con gran frecuencia se utilizan
indistintamente.

29
 La presin osmtica depende del nmero de partculas y no de
su carga, ni de su masa; la misma fuerza osmtica es ejercida
por una molcula grande, como una protena, con peso molecular
de varios miles y muchas cargas, como por una molcula de
+
glucosa o un ion de Na o de Cl . As para determinar el efecto
osmtico de una solucin hay que sumar los efectos de todas las
partculas incapaces de atravesar la membrana
independientemente de su peso molecular.
Por ejemplo: el cloruro de sodio en solucin acuosa se disocia
+ cuando su concentracin es mayor de 300 mosm/l se denominan
casi completamente en iones sodio (Na ) y cloruro (Cl ). Por lo
tanto, cada molcula da origen a dos partculas osmticamente
activas, y una solucin osmolar contiene media molcula gramo
(peso molecular expresado en gramos) por litro, o sea:
1 osm/l = 58.5/2 = 29.25 g/l tambin
1 mol de NaCl = 2 osm/l
En cambio, la glucosa en solucin no se disocia y para
esta sustancia la solucin osmolar contiene un mol en gramos por
litro:
1 mol de glucosa = 180 g/l = 1 osm/l
La mayora de los lquidos corporales tiene una presin
osmtica que concuerda con la de una solucin de cloruro de
sodio a 0.9 % y se dice que esta solucin es isosmtica con los
lquidos fisiolgicos.
Soluciones isotnicas
Las soluciones isotnicas con respecto unas a otras ejercen la
misma presin osmtica; es decir, contienen la misma
concentracin de partculas osmticamente activas. Cuando se
habla de soluciones isotnicas en
el laboratorio, suele tratarse de las que tienen la misma presin
osmtica que el plasma sanguneo, que es aproximadamente de
0.3 osmolar (300 miliosmoles). Las soluciones fisiolgicas de
concentracin menor a 300 mosm/l se llaman hipotnicas;
hipertnicas.
Una solucin es isotnica con respecto a una clula viva
cuando no ocurre ganancia ni prdida neta de agua en la clula,
ni se produce ningn otro cambio en sta cuando entra en
contacto con la solucin.
El trmino isotnico, que significa: igualdad de tono, se emplea
en medicina como sinnimo de isosmtico; pero los trminos
isotnico y tonicidad slo deben emplearse en relacin con un
lquido fisiolgico. Por ejemplo, una solucin de cido brico que
es isosmtica con la sangre y el lquido lagrimal, slo es isotnica
con el lquido lagrimal, ya que esta solucin ocasiona hemlisis
de los eritrocitos porque las molculas de cido brico atraviesan
libremente la membrana eritrocitaria a cualquier concentracin.
En consecuencia, isotonicidad connota compatibilidad fisiolgica,
mientras que isoosmoticidad, no necesariamente. En otras
palabras, la tonicidad es una fraccin de la presin osmtica total
de la solucin; por tanto, la tonicidad de una solucin no se puede
30
predecir nicamente por su composicin ya que intervienen
tambin las propiedades distintivas de la membrana limitante.
Clculo y expresin de diluciones
La dilucin consiste en preparar una solucin menos
concentrada a partir de una solucin inicial ms concentrada. Las
diluciones se expresan usualmente como una razn matemtica,
como 1:10. Esto significa una unidad de solucin original diluida a
un volumen final de 10, esto es, 1 volumen de solucin original
con 9 volmenes de solvente (volumen final = 10).
Ejemplo: hacer una dilucin seriada 1:2, 1:4, 1:8, etctera, a un
volumen final de 1 ml.
Paso 1: a 0.5 ml de la solucin a diluir, aadirle 0.5 ml del
diluyente y etiquetarlo como tubo 1 (dilucin 1:2, volumen 1 ml).
Paso 2: transferir a otro tubo 0.5 ml de la dilucin anterior
y agregarle 0.5 ml de diluyente (dilucin 1:2). La dilucin final
obtenida se calcula al multiplicar la dilucin del tubo 1 (o anterior)
con la nueva dilucin (1/2 x 1/2), igual a 1:4. Los pasos siguientes
se hacen igual que para el paso 2. En el siguiente cuadro se
muestra un resumen de lo anterior.

Para calcular la concentracin de la solucin diluida se

multiplica la concentracin de la solucin original por la dilucin
expresada como fraccin. Tubo Dilucin
Ejemplo: una solucin de 300 mg/100 ml se diluye en la
1. 0.5 ml(1) = 0.5 ml (1) = 1:2(4)
razn 1:10. La concentracin de la solucin final es:
0.5 ml (1) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
300 x 1/10 = 30 mg /100 ml. 2. 0.5 ml(5) = 0.5 ml (1) = 1:4 (4)
0.5 ml (5) + 0.5 ml (2) 1 ml (3)
Si se hace ms de una dilucin, a partir de una misma
solucin, la concentracin de la solucin final se obtiene al es decir: x 1/2 = 1:4
multiplicar la concentracin original por el producto de las 3. 1/4 x 1/2 = 1:8
diluciones. Ejemplo: la solucin anterior se diluye a su vez en la
razn 1:100. La concentracin de la solucin ser: 300 x 1/10 x 4. 1/8 x 1/2 = 1:16
1/100 = 0.3 mg/100 ml. 5. x 1/2 = 1:32

(1) Volumen de la solucin original a diluir.

La dilucin y redilucin sistemticas de una solucin se llaman
diluciones seriadas. Para encontrar la concentracin en un tubo
dado de la serie, se multiplica la dilucin en ese tubo por cada
una de las diluciones precedentes, incluida la del tubo original.
(2) Volumen del agua necesaria para la dilucin.
(3) Volumen final.
(4) Dilucin obtenida.
(5) Volumen de la solucin diluida 1:2 (o anterior).

31
MANEJO DE MATERIAL BIOLGICO
Se le llama material biolgico al conjunto de seres vivos o sus
productos utilizado en el desarrollo del trabajo en el laboratorio.
La utilidad e importancia de este material es muy grande ya que
muchos fenmenos de los seres vivos slo pueden estudiarse en
ellos mismos, por ejemplo, la experimentacin de nuevos
frmacos o los mecanismos que se presentan en entidades
patolgicas y la produccin de las mismas en forma experimental.
Del correcto manejo depender en gran parte el xito de la
experimentacin y la veracidad de los resultados obtenidos. A
continuacin se darn algunas generalidades sobre el manejo del
material biolgico utilizado en las prcticas de este Manual.
Animales
El animal utilizado ms comnmente en el laboratorio de
bioqumica es la rata. Para su correcto manejo es importante la
forma cmo se sujeta, lo cual se har con firmeza, pero a la vez,
en forma suave para no lesionarla; no debe demostrrsele miedo
o repugnancia para evitar que se ponga nerviosa e intranquila, lo
que puede ocasionar que muerda.
La palma de la mano se coloca sobre el dorso del animal; la
cabeza de ste entre el dedo pulgar y el dedo ndice; de esta
manera se logra su inmovilidad y es posible levantar el animal y
moverlo de lugar.
Muchas veces es necesaria la inyeccin intraperitoneal de
alguna sustancia, para lo cual se sostendr al animal con una
mano, como se indic antes, mientras con la otra se introduce la
aguja de la jeringa formando un ngulo de 10 con la pared
abdominal en el cuadrante inferior izquierdo, ligeramente a la
izquierda de la lnea media; es importante mantener el ngulo de
la aguja porque, si ste se abre, la aguja puede llegar a la vejiga
o al intestino. Para tener la seguridad de estar en la cavidad
peritoneal, hay que jalar el mbolo de la jeringa para que se haga
el vaco; si el vaco no se hace y, por el contrario, se extrae
lquido, es probable que se haya puncionado la vejiga.
Para la extraccin de vsceras, como el hgado, es necesario
sacrificar al animal, lo cual se logra fcilmente y con menor
sufrimiento para la rata anestesindola o descerebrndola, o
sea, seccionando la mdula espinal a nivel del cuello mediante un
golpe certero en este lugar contra el borde de una mesa.
Despus se prosigue a la extraccin de la vscera y se abre la
pared abdominal con unas tijeras o bistur.
Extraccin de sangre para anlisis
El profesor a cargo del grupo deber estar presente en el
momento de la extraccin; de lo contrario, por ningn motivo, el
alumno podr hacerla por su cuenta.
Procedimiento para obtener una muestra de sangre venosa:
1. Para que un alumno sea considerado como voluntario
debern tomarse en cuenta algunos antecedentes como: no
padecer o haber padecido hepatitis o alguna otra enfermedad
infectocontagiosa; no tener problemas de coagulacin y no ser
muy aprensivo. El donador (de preferencia con las venas
visibles), estar sentado con el brazo sobre la mesa.
32
2. Con una ligadura elstica, aplicar un torniquete en el brazo 6. Mantener la presin por un momento o hasta que se haya
por encima del sitio de la puncin (esto causa congestin detenido el sangrado. Cubrir la puncin con una cinta
venosa y evita el retorno de la sangre). El uso prolongado del adhesiva.
torniquete causa estasis de la sangre y hemoconcentracin. Si 7. Retirar la aguja de la jeringa en el contenedor de
las venas no se hacen prominentes, pedir al donador que punzocortantes y vaciar lo ms pronto posible la muestra de
cierre y abra la mano varias veces. Escoger una vena fija y de sangre en un tubo de centrfuga procurando deslizar la sangre
buen calibre, localizarla y palparla con el dedo para sentir su suavemente por la pared del tubo (si es que no se utiliz el
consistencia y trayectoria; antes de puncionar, asegurarse de sistema Vacutainer).
que la jeringa no contenga aire y que el mbolo se deslice
Alerta clnica
suavemente. Las dimensiones de la aguja y la jeringa
dependen de la cantidad de sangre que se necesita as como
Si es difcil detener el sangrado de la puncin, elevar la zona y
del tamao e integridad de la vena que se usa. Tambin se
aplicar una cubierta que presione. Los hematomas se pueden
puede usar el sistema Vacutainer que consiste en un tubo al
evitar:
vaco, un mango y una aguja recolectora de muestras
Usando una buena tcnica.
mltiples.
Aflojando el torniquete antes de retirar la aguja.
3. Limpiar minuciosamente la zona con una torunda humedecida
Aplicando la presin suficiente sobre el sitio de puncin
con alcohol de 70 y dejar secar espontneamente. Sujetar la
despus de completar el procedimiento.
piel con el pulgar izquierdo; puncionar primero la piel y luego
La sangre obtenida puede tratarse de diferentes maneras
penetrar la vena con el bisel de la aguja hacia arriba siguiendo
segn el empleo que se le vaya a dar.
el trayecto de la vena.
4. Despus que se ha entrado a la vena, la sangre llenar los
Para obtener suero. La sangre se recibe en un tubo de ensayo
tubos vacos del sistema Vacutainer. Si se usa jeringa, se
o de centrfuga seco y se deja coagular a temperatura ambiente o
necesita una ligera succin con sta para obtener la muestra
en una estufa o bao de agua a 37 C. Si se va a trabajar
(por lo general, aparece una gota de sangre en la base de la
inmediatamente con el suero, separar con un aplicador de
aguja). Una succin excesiva puede causar colapso de la
madera el cogulo y centrifugar el resto del tubo. Si se desea la
vena. Tirar del mbolo de la jeringa hasta que se haya
separacin espontnea del suero, se deja a temperatura
extrado la cantidad de sangre deseada.
ambiente por unas horas para que el cogulo se retraiga. Debe
5. Soltar la ligadura antes de extraer la aguja con un movimiento
evitarse que el suero se mezcle con porciones de cogulo; si esto
rpido y uniforme mientras que se ejerce una presin sobre la
sucede, es necesario centrifugar y volver a separar el suero con
herida con una torunda.
una pipeta Pasteur.

33

Para obtener plasma. Hay que evitar la coagulacin por medio
de un anticoagulante (heparina, citrato de sodio o EDTA) en el
tubo que recibe la sangre.
Mezclar suavemente por inversin. Centrifugar a 2 500 rpm
durante 5 minutos y extraer enseguida el plasma sobrenadante
con una pipeta Pasteur; pasarlo a otro tubo.
La sangre, el plasma o el suero y todos los recipientes que los
contengan deben considerarse como material potencialmente
infectante, por lo que (torundas, agujas, tubos, etctera) debern
depositarse, de acuerdo a su clasificacin, en envases que
tengan impreso el smbolo de riesgo biolgico y entregarse a la
coordinacin del laboratorio para su desinfeccin y desecho.
MEDIDAS DE SEGURIDAD
Durante el desarrollo del curso de bioqumica, en el laboratorio
se pueden llegar a utilizar sustancias o muestras biolgicas que,
en ocasiones representan riesgos potenciales a la salud, debido a
que pueden ser: corrosivas, reactivas, explosivas, txicas,
inflamables o biolgico infecciosas.
Aunque los laboratorios se consideran en general lugares de
trabajo seguros, esto es as slo cuando conocemos y seguimos
las normas de seguridad existentes en la materia acerca de la
clasificacin, manejo y disposicin final de estas sustancias, lo
cual nos permite identificar los peligros y disminuir los riesgos.
Manejo de materiales peligrosos y/o biolgico infecciosos
Precauciones generales: Se refieren a las medidas para
minimizar la difusin de enfermedades transmisibles,
especialmente hepatitis B o SIDA y para evitar incendios,
cortaduras o exposiciones simples, de corta duracin o
accidentales a sustancias qumicas peligrosas.
1. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero,
orina, tejido, cadver o cultivo como potencialmente
infeccioso. Todas las sustancias qumicas proporcionadas,
equipos y materiales del laboratorio debern ser utilizados con
el mximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de
peligrosidad y cuidados especficos, segn el caso.
2. Se debe conocer los smbolos y los cdigos de color sobre las
precauciones y los peligros en el laboratorio. Asegurarse de
conocer la localizacin de extinguidores, del botiqun y de las
salidas de emergencia.
3. Usar bata en el laboratorio, la cual deber estar cerrada
durante todo el tiempo que se permanezca en el laboratorio.
4. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben usarse
para efectuar punciones vasculares y para manipular sangre,
lquidos corporales, cultivos de microorganismos, sustancias o
superficies contaminadas. Despus del uso de cualquier
material biolgico, se procede al lavado de manos con los
34
 guantes puestos. Despus de quitarse los guantes debemos
lavarnos nuevamente las manos.
5. Todos los materiales desechables y no desechables se deben
descontaminar en una solucin 1:10 de hipoclorito de sodio de
4 a 7 % de concentracin, durante ms de 20 minutos antes
de ser desechados.
6. Los elementos punzocortantes deben desecharse en
recipientes especiales destinados para ello, los cuales deben
estar etiquetados con la leyenda que indique "Peligro,
residuos punzocortantes biolgico-infecciosos" y marcados
con el smbolo universal de riesgo biolgico. Nunca
reencapuchar las agujas
7. Limpiar las superficies potencialmente contaminadas con
hipoclorito de sodio al 1%, con alcohol al 70% o con agua
oxigenada.
8. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y
peligrosas, por lo que se deber:
a) Conocer las propiedades (venenosas, custicas o corrosivas)
y el uso correcto de las mismas.
b) Nunca probar, as como tampoco inhalar, directamente las
sustancias. Para determinar el olor se acerca la tapa del
frasco cuidadosamente a la nariz, o bien, si se trata de
sustancias voltiles o vapores acercar stos con la mano a la
nariz.
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, especialmente la
cara; usar bata y guantes para proteger la ropa y el cuerpo;
nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de un matraz con
lquidos en ebullicin o material de reaccin hacia el vecino, o
a s mismo, ya que puede proyectarse el contenido; para las
sustancias que no tienen un efecto pronunciado sobre la piel,
pero cuya ingestin es peligrosa, evitar la contaminacin de
alimentos, cigarros o manos que despus se llevarn a la
boca o con las que se tocarn alimentos (nunca ingerir
alimentos en el laboratorio). Por ltimo, nunca pipetear con la
boca, especialmente los cidos fuertes, productos custicos,
oxidantes fuertes y compuestos venenosos.
9. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a cargo del
rea de prcticas. Es una regla de laboratorio que todos los
accidentes personales, por triviales que sean, se comuniquen
inmediatamente al profesor. Nunca realizar actividades
experimentales sin la supervisin del responsable del grupo.
10. Manejar adecuadamente los residuos peligrosos derivados de
las prcticas, identifique su nivel de riesgo y el mecanismo
para su desecho. Queda prohibido desechar sustancias a la
tarja o por cualquier otro medio, sin autorizacin del
responsable del grupo. Las hojas de seguridad
correspondientes incluyen qu hacer en caso de accidentes y
la forma correcta de desechar los residuos.
11. Indicaciones generales para evitar incendios o explosiones al
utilizar solventes inflamables. Los solventes inflamables
(alcohol, ter, cloroformo, acetona, tolueno, xilol, etctera) se
utilizan en todos los laboratorios, por lo que se recomiendan
las siguientes precauciones:
a) No fumar en el interior del laboratorio.
35
b) No utilizar la llama del mechero sin cerciorarse de que no hay presin en un punto ms arriba la herida o antes de ella (no
cerca lquidos inflamables. No mantener el mechero mantener la presin por ms de 5 minutos).
encendido cuando est fuera de uso.
10. Casi siempre, los choques elctricos en el laboratorio son de
c) Si se vierten accidentalmente sobre las mesas, secar de poca importancia; las precauciones de seguridad se deducen
inmediato con un trapo hmedo y enjuagar ste en el chorro de la naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato elctrico
de agua, exprimindolo. con las manos hmedas o cuando se est parado sobre un
piso hmedo. Siempre apagar y desconectar los aparatos
d) Nunca calentar un lquido orgnico sobre una flama. Para
antes de cualquier manipulacin.
calentar, usar bao de agua o parrilla elctrica.
Pictogramas de seguridad
En caso de incendio debe hacerse lo siguiente: para un
incendio pequeo en un vaso, un matraz, etctera, ste se
En las etiquetas de productos qumicos de uso en el
cubrir con un recipiente mayor o se ahogar el fuego con un
laboratorio adems de la identificacin del contenido, calidad y
trapo mojado o se combatir con un extinguidor.
lmite de pureza de lo que contiene, podemos encontrar
pictogramas (smbolos internacionalmente aceptados y
Cuando el fuego sea de un solvente derramado sobre la reconocidos) que indican los riesgos principales. Los pictogramas
mesa o el piso, se utilizar un extinguidor de bixido de carbono. de seguridad son:
Si el fuego no puede vencerse de inmediato, se evacuar el
laboratorio y se avisar al departamento contra incendios de la
institucin.
RIESGO BIOLGICO
12. Los accidentes ms frecuentes que ocurren en el laboratorio
son las lesiones debidas a cortes, laceraciones, etctera, por
cristalera rota.

En caso de heridas pequeas dejar que sangre unos

segundos; tener cuidado de no dejar partculas de vidrio en la
herida y aplicar un desinfectante. Todo aquello que pueda contener bacterias, virus u otros
microorganismos con capacidad de infeccin o cuando contiene
Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas
toxinas producidas por microorganismos que causen efectos
por un mdico. Mientras tanto, evitar el sangrado aplicando
nocivos a los seres vivos. Ejemplo: jeringas, sangre.

36
 Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y combustibles o inflamables avivan la reaccin pudiendo
las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal. desarrollar reacciones violentas. Ejemplo: nitrito de sodio,
hiposulfito de sodio.

E = EXPLOSIVO Medidas de prevencin: mantener alejadas de las sustancias

combustibles o inflamables, ya que pueden favorecer los
incendios y dificultar su extincin.

Es toda sustancia slida o lquida o mezcla de sustancias

que pueden desprender gases a una temperatura, presin y
Xn = NOCIVO
velocidad tales que pueden detonar, producir violentas
deflagraciones, o explotar al exponerse al calor cuando estn
parcialmente confinadas. Ejemplo: azida de plomo, fluoruro de Sustancias de menor toxicidad pero pueden causar daos a la
carbono. salud. Tambin se incluyen aquellas mezclas o preparados que
Medidas de prevencin: almacenarlas alejadas de otros tienen alguna sustancia que puede ser txica pero que se
productos, evitar todo choque, friccin y mantener alejadas de encuentra a una baja concentracin en la mezcla.
fuentes de calor, chispas o fuego.

Xi = IRRITANTE
O = OXIDANTE Sustancias que pueden causar irritacin a la piel, mucosas, o
los ojos, por contacto inmediato, prolongado o repetido, pudiendo

Sustancias capaces de aportar oxgeno cuando reaccionan tambin provocar inflamacin. Ejemplo: cloroformo, SDS,
con otra sustancia, por lo que cuando entran en contacto con hipoclorito de sodio, aminoantipirina.

37
 Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y Medidas de prevencin: evitar que los derrames alcancen los
las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal. desages, tratar los residuos en condiciones ambientalmente
adecuadas.

F+ = EXTREMADAMENTE INFLAMABLE
Sustancias cuyo punto de ignicin es menor de 0C y su punto de
ebullicin mximo de 35C.
T+ = ALTAMENTE TXICO, T TXICO
F = INFLAMABLE Sustancias que pueden causar dao en forma aguda o crnica
Sustancias lquidas cuyo punto de ignicin es menor a 40C. a la salud o causar la muerte si son inhaladas, ingeridas o se
Ejemplo: etanol, tolueno, ter dietlico. absorben por la piel, an en pequeas cantidades. Ejemplo: azida
Medidas de prevencin: mantener alejado de fuentes de de sodio, dinitrofenol, bromuro de etidio.
calor, de ignicin o eventuales chispas, de materiales Medidas de prevencin: evitar todo contacto directo. Utilizar
combustibles y oxidantes. elementos de proteccin personal. Emplear estrictas medidas de
higiene personal y del ambiente del laboratorio.

N = NOCIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE

Aquellas sustancias o preparados que cuando son liberados al
medio ambiente pueden presentar un efecto inmediato o diferido,
poniendo en peligro a alguna especie. Ejemplo: tiourea, o-
toluidina.
C = CORROSIVO
Sustancias capaces de atacar y destruir los tejidos orgnicos si
entran en contacto con ellos o bien atacar ciertos metales o
materiales. Ejemplo: hidrxido de sodio, cido clorhdrico, cido
actico.

38
 Medidas de prevencin: evitar el contacto con los ojos, la piel y tener en cuenta en el almacenamiento y en caso de emergencias,
las vas respiratorias. Utilizar elementos de proteccin personal. de derrames o salpicaduras.

Identificacin sobre los riesgos especficos y los consejos
de prudencia
Frases "R" stas advierten acerca del riesgo ms comn
asignado a esa sustancia qumica, por medio de la enumeracin
de riesgos especficos en frases cortas que son adaptables a las
distintas sustancias.
Las frases "S" brindan los consejos de prudencia o las
medidas de prevencin ms importantes relacionadas con el
riesgo asignado a esa sustancia qumica y que permitirn su
manipulacin y almacenamiento en forma segura. En algunos
casos se mencionan combinaciones de frases R o de frases S,
cuando dos o ms riesgos tienen relacin entre s (cuadro I.6).
La informacin se presenta por medio de una estructura
espacial en forma de rombo principal, dividido a su vez en otros
cuatro.
El rombo azul a la izquierda identifica el riesgo para la salud. El
rombo rojo en la parte superior indica el riesgo por inflamabilidad.
El rombo amarillo a la derecha seala el riesgo por reactividad
o inestabilidad. El rombo blanco en la parte inferior indica riesgos
especiales tales como: W reactivo al agua, COR corrosivo, AIR
reactivo al aire, OXY oxidante. Ejemplo:

El smbolo de la N.F.P.A. (National Fire Protection C

b o
Association) n
s
El smbolo de la N.F.P.A. es un sistema de identificacin de e
r
riesgos de un producto qumico, en tres categoras principales: v
"salud", "inflamabilidad" y "reactividad" indicando el grado de a
r
severidad por medio de una escala numrica desde (4) que indica cido clorhdrico
e
n
el riesgo mayor, (3) riesgo severo, (2) riesgo moderado, (1) riesgo
s
menor, hasta (0) que representa ausencia de riesgo. Hojas de seguridad it
i
o
Este smbolo es til para alertar acerca del riesgo de ese Cada prctica cuenta con las hojas
f de seguridad para cada
producto y, a su vez, puede ayudar a determinar los cuidados a reactivo o sustancia que se utilice en elre laboratorio.
s
c
o
S
39
3
P
u
e
d
e
 Las hojas de seguridad proveen informacin sobre (cuadro I.7,
pg. 100):
Residuos especiales CRETI: son aquellos residuos que
Los componentes de un producto, su reactividad, las medidas
constituyen un peligro para la salud por sus caractersticas
precautorias principales o las advertencias ms importantes.
agresivas tales como: Corrosividad, Reactividad, Explosividad,
Los elementos de proteccin personal que se recomienda
Toxicidad e Inflamabilidad Es importante no olvidar que, la
emplear en la manipulacin.
mezcla de residuos municipales con residuos biolgico
Las vas de ingreso y los rganos blanco.
infecciosos hace que se consideren en su totalidad como
Las medidas por derrame accidental y de primeros auxilios.
biolgico infecciosos, mientras que la mezcla de residuos
La informacin toxicolgica.
biolgico infecciosos con peligrosos CRETI se deben consideran
Las recomendaciones para su almacenamiento.
como peligrosos CRETI.
Las condiciones para la disposicin de los residuos.
Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.
Clasificacin de los residuos
Los residuos RPBI deben ser envasados de acuerdo con sus
caractersticas fsicas y biolgico infecciosas conforme la norma
Los residuos que se generan en laboratorios de instituciones
oficial mexicana 087-ECOL-95 (cuadro I.8).
de enseanza o investigacin as como en hospitales y clnicas
Es importante destacar que todos los envases tengan
contienen residuos no peligrosos o municipales, residuos
impreso el smbolo universal de riesgo biolgico y leyendas que
biolgicos infecciosos y residuos especiales.
indiquen la peligrosidad de los residuos y el tipo de residuos que
Residuos peligrosos biolgico infecciosos (RPBI): es todo contienen.
aquello que ha entrado en contacto con pacientes o animales,
Los contenedores para punzocortantes deben de ser:
sus muestras biolgicas y/o cepas de microorganismos, se
De color rojo.
clasifican en: sangre, cultivos, patolgicos (tejidos, rganos,
De paredes rgidas.
partes y fluidos corporales, etctera), no anatmicos (gasas,
De polipropileno.
algodones, jeringas, etctera) y punzocortantes (lancetas, agujas,
Resistentes a fracturas y prdida del contenido al caerse.
pipetas Pasteur, etctera).
Destruibles por mtodos fisicoqumicos.
Esterilizables y con tapa, la que puede tener o no separador de
Residuos municipales: son aquellos que no representan
agujas.
peligro para la salud y sus caractersticas son similares a los
Precauciones: depositar los RPBI, de acuerdo a su
residuos domsticos comunes.
clasificacin, inmediatamente despus de su generacin.

40
 en la hoja de seguridad. Las hojas de seguridad sern
No compactar los residuos durante el envasado y no mezclar proporcionadas para cada prctica en el laboratorio.
residuos de diferente clasificacin.
De manera general, los envases destinados a los residuos
Una vez identificados, separados y envasados correctamente CRETI deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno
los residuos peligrosos, el personal responsable del laboratorio se a cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad
encargar de su recoleccin, tratamiento y disposicin final as mxima de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico,
como de las medidas necesarias para la desinfeccin, siempre y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la
esterilizacin y limpieza del material y equipo utilizado en el sustancia a envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en
laboratorio. forma individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de
seguridad correspondiente.
De manera general, los envases destinados a los residuos
CRETI deben ser de cristal de color mbar, con capacidad de uno
a cuatro litros, latas de aluminio para solventes (capacidad
mxima de 20 litros) y, en algunos casos recipientes de plstico,
siempre y cuando las caractersticas fisicoqumicas de la
sustancia a envasar lo permita. Cada residuo debe envasarse en
forma individual y colocar en el frasco respectivo el pictograma de
seguridad correspondiente.

Manejo de residuos CRETI

El manejo, consistente en la separacin, envasado y

almacenamiento de cada uno de los reactivos peligrosos CRETI
utilizados en las prcticas deber realizarse de acuerdo a cada
reactivo en cuestin segn lo indicado en las hojas de seguridad.

El manejo de accidentes, tales como derrames, ingestin o

salpicaduras, as como la aplicacin de primeros auxilios debern
de realizarse de acuerdo al reactivo en cuestin segn lo indicado

41
 Frases R Frases S Combinacin de frases

R7 Puede provocar S3 Conservar en sitio fresco R 20/21 Nocivo por inhlacin y contacto
incendios por la piel
R 23 Txico por S 20 No comer ni beber durante la manipulacin R 39/25 Txico: peligro de efectos
inhalacin irreversibles graves por ingestin

R 36 Irrita los ojos S 29 No tirar los residuos por los desages S 3/7 Mantenga el contenedor bien
cerrado y en un lugar fresco
R 45 Puede ser S 37 Llevar guantes de proteccin adeacuados S 36/37/39 Utilice ropa protectora adecuada
cancergeno guantes y proteccin facil o gafas

Cuadro I.6 Ejemplos de frases S y R

TIPO DE RESIDUO ESTADO FSICO ENVASADO COLOR

Sangre Slido Bolsa de plstico Rojo

Lquido Recipiente hermtico

Cultivos y cepas de Slidos Bolsa de plstico Rojo

agentes infecciosos Lquidos Recipiente hermtico

Residuos no anatmicos Slidos Bolsa de plstico Rojo

Lquidos Recipiente hermtico

Patolgicos Slidos Bolsa de plstico Amarillo

Lquidos Recipiente hermtico
Objetos punzocortantes
usados y sin usar Slidos Recipientes rgidos Rojo

Cuadro I.7 Envasado y etiquetado de RPBI para su desecho.

42
 cido clorhdrico
Identificacin
Frmula qumica: HCl
Apariencia y olor: solucin de color ligeramente amarillo o incolora
con olor caracterstico muy penetrante.
Marcaje liqudo corrosivo
Sinnimos: cido muritico, cloruro de hidrgeno.
Generalidades
Est presente en el sistema digestivo de muchos mamiferos y una deficiencia
de ste provoca problemas en la digestin; un exceso provoca lceras
gastricas. La disolucin acuosa grado reactivo contiene aproximadamente
38% de HCl.
Propiedades fsica y qumicas
PM: 36.46
Solubilidad: soluble en agua
pH de disoluciones acuosas: 0.1 (1.0N), 4.0(0.001N).
Reacciona con la mayora de los metales desprendiendo hidrgeno.
Con agentes oxidantes como perxido de hidrogeno genera cloro, el cual es
muy peligroso.
Niveles de toxicidad.
DL50 (oral en conejos): 900 mg/Kg, inhalacin en ratas): 3124 ppm/1 h.
CLMo (concentracin letal minima publicada): (inhalacin en humanos) 1300
ppm/30 min; 3000ppm/5 min.
Riesgos
Produce gas inflamable cuando se encuentra en contacto con metales. Se
generan v apores txicos e irritantes de cloruro de hidrgeno cuando se
calienta.
Inhalacin: elgas causa dificultad para respirar, tos, inflamacin y ulceracin
de nariz, trquea y laringe. Exposiciones severas causan espasmo de la
laringe y edema en los pulmones.
Contaco con los ojos y piel: es un irritante severo de ojos y piel, puede causar
quemaduras serias, dermatitis, reducir la visin o, incluso, la prdida total de
sta.
Ingestin: produce corrosin de las membranas mucosas de la boca, esfago
y estmago, causa nusea, vmito, disfagia, sed intensa y diarrea
Cuadro I.8 Hoja de seguridad para el cido Clorhdrico
Primeros auxilios
Ojos: lavar inmediatamente con agua corriente durante 15 mi nutos.
Piel: quitar ropa y zapatos contaminados, lavar inmediatamente la zona
daada con abundante agua.
Inhalacin: mover a la persona al aire fresco; si se dificulta la respiracin
proporcionar oxigeno y mantenerlo caliente y en reposo, no dar a ingerir
nada.
Ingestin: no provocar vmito y dar a beber agua continuamente, por
ejemplo, una cucharada cada 10 minutos o dar a beber leche de
magnesia.
En todos los casos de exposicin, el afectado debe ser transportado al
hospital tan pronto como sea posible.
Manejo y almacenamiento
Peligro: corrosivo y venenoMantngase en envase de vidrio, en lugares
secos, bien ventilados, alejados de materiales oxidantes y fuentes de
ignicin o calor.
Tratamiento en caso de accidente
Control de fuego: en caso de accidente utilizar CO2, polvo qumico seco
o arena seca. Los extinguidotes de fuego se eligen dependiendo de los
alrededores, ya que el HCl no arde.
Fugas y derrames: ventilar el rea y protegerse con el equipo de
seguridad necesario. Cubrir el derrame con bicarbonato de sodio o una
mezcla de 50:50 de hidroxido de calcio y cal sodada, mezclar
cuidadosamente. Mantener el materil lejos de fuentes de agua y drenajes
hasta no ser neutralizado como se indic anteriormente.
Desechos
Neutralizar las soluciones concentradas de cido clorhdrico con
carbonato de calcio o cal y diluir con agua cuidadosamente. La disolucin
resultante puede verterse al drenaje, con abundante agua. En caso de
soluciones diluidas,
43
PRCTICAS DE LABORATORIO

44
45
 Prctica 1
Soluciones
Tiempo de la prctica: 3 horas
Objetivos
Que el alumno:
1. Identifique la existencia de soluciones en los sistemas
biolgicos.
2. Explique los clculos y procedimientos para preparar
soluciones porcentuales, molares y normales, as como las
diferentes diluciones de stas.
3. Que conozca y reconozca algunas de las soluciones
utilizadas en medicina (solucin isotnica, Ringer, Darrow y
Hartman).
Responda a las siguientes preguntas:
1.- Qu es una solucin?
2.- Cuntas clases de soluciones existen?
3.- Qu significan los siguientes trminos: mol, solucin
molar y solucin normal?
4.- Qu significan: v/v, p/v, p/p y ppm?
5.- Cules son los tipos de soluciones que existen in vivo?
Mencionar ejemplos.
6.- Qu es una solucin isotnica?
7.- Qu es una solucin osmolar?
8.- Cmo se calcula la osmolaridad de una solucin?
9.- Qu les pasa a los eritrocitos cuando se ponen en
contacto con soluciones salinas de diferente osmolaridad?
10.- Qu se entiende por dilucin y dilucin seriada de las
soluciones?
INTRODUCCION
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms
sustancias. La sustancia que se disuelve se llama soluto (la cual se
encuentra en menor cantidad) y el medio en que se disuelve es el
solvente o disolvente (de mayor cantidad). En el ser humano los
solutos se conforman de electrolitos (Na +, K +, Cl-, Ca2+) y de otras
molculas de mayor peso molecular (glucosa, urea, protenas). El
solvente ms importante es el agua siendo el 60% del peso corporal
total. Estos componentes se distribuyen en dos compartimientos
principales, como se muestra en la figura 1.
El cuerpo se mantiene en un equilibrio hdrico, esto significa
que cada uno de los compartimientos tiene las cantidades necesarias
de agua y solutos. Sin embargo cabe recordar que el intercambio de
agua y solutos es continuo entre los compartimientos, a travs de la
46
filtracin, la osmosis y otros procesos fsicos; el volumen del lquido
en cada compartimiento permanece casi constante sin que se pierda
el equilibrio hidroelectroltico.
Figura 1. Distribucin del agua corporal en el ser humano. El agua corporal total es el 60%, que equivale
a 42 L. El liquido intracelular (LIC) 28L (40% del peso corporal) el liquido extracelular(LEC) 14L (20 %
peso corporal ) del LEC el plasma es 2.8L ( 4% del LEC) y el liquido intersticial 11.2L ( 16% del LEC)
La smosis constituye el medio primario para el
desplazamiento del agua entre el lquido intracelular y el intersticial, y
la concentracin de solutos en ellos determina la direccin en la cual
el agua se va a desplazar.
La osmolaridad de las soluciones refleja la concentracin de
los diferentes solutos disueltos en su disolvente; definiendo
osmolaridad como el nmero de miliosmoles de soluto por litro de
agua.
La osmolaridad del plasma sanguneo es de 290-310 mOsm/Ly se
puede medir con un osmmetro o calcularse emplendose la
siguiente frmula:
mOsm/l = Na+ X 2 + glucosa + nitrgeno ureco
18 2.8
El nmero 2 de la ecuacin es para tener en cuenta la
ionizacin del sodio y los aniones negativos que lo acompaan. El
nmero 18 es la conversin de la glucosa de mg/dl a miliosmoles ya
que 100 mg /dl de glucosa equivale a 1 miliosmol y un miliosmol de
urea a 28 mg/dl. No obstante el nitrgeno ureico atraviesa la
membrana celular y se podra calcular la osmolaridad efectiva:
Para mantener o restablecer el equilibrio hdrico y electroltico de
un individuo, se necesitan determinadas soluciones las cuales se han de
calcular y preparar con precisin, estn van desde el simple suministro
de agua y sal (deshidratacin o quemadura mayor a 2 grado), hasta la
correccin de posibles deficiencias de otros iones, por ejemplo, potasio o
bien aporte de aminocidos o caloras en forma de solucin glucosada
(paciente en terapia intensiva o falla orgnica mltiple). Algunas de estas
soluciones suponen un soporte de lcali para tratar estados de acidosis o
alcalosis. Para poder realizar un clculo adecuado de las soluciones que
necesita se debe considerar los siguientes aspectos:
47
1.- Existe compartimientos celulares (intracelular y extracelular) y que
en los que se lleva a cabo el intercambio entre ellos para mantener un
equilibrio (homeostasis) integral.

AGUA CORPORAL TOTAL (%)

COMPLEXION LACTANTE HOMBRE MUJER
Delgado 80 65 55
Promedio 70 60 50
Obeso 65 55 45

Tabla 1. Porcentaje de agua corporal total por gnero y complexin

2.-El agua corporal total (TBW) depende del porcentaje de masa

muscular y del tejido graso como se muestra en la siguiente tabla.

As es que en un masculino de complexin promedio de 70 kg de

peso:
Figura 2. Homeostasis de los lquidos corporales. La ingestin est fluida por la disponibilidad de lquidos
y alimentos, la sed, el hambre. Las velocidades de respiracin y evaporacin y el volumen de orina
TBW = (peso Kg) (% agua corporal total) influyen en la prdida de agua. El organismo ajusta el volumen de la eliminacin urinaria para compensar
TBW= (70Kg) (0.60)=42 litros las variaciones de otros tipos de prdida de agua y las variaciones de la ingestin

Si 42 litros se tiene de agua corporal total y el volumen de lquido

extracelular corresponde al 40%:

42 litros-------100% del agua corporal total

x----------- 40% del LEC x=16.8 litros de LEC

3.- En cada compartimiento los electrolitos se distribuyen de manera

diferente esto se debe a su permeabilidad a travs de las membranas
celulares, la presencia de transportadores y canales que su
movimiento. El nmero de solutos determina la distribucin del agua

48
y la osmolaridad de la solucin. Por ejemplo en el lquido extracelular
(LEC) el sodio representa 90% de las partculas osmoticamente
2mEq/Kg/da
activas por lo cual si hay cambios en la concentracin del sodio
cambiara la osmolaridad por el movimiento del solvente.
4.- Necesidades de mantenimiento: para que se metabolice una
calora se necesita 1 ml de agua, por lo que las necesidades
calricas y por lo tanto de agua, son proporcionales al peso corporal.
3mEq/Kg/da
0 a 10 Kg 100 cal/Kg
Figura 3. Requerimientos basales.
11 a 20 Kg: 50 cal / Kg adicionadas por cada Kg despus de los 10 Kg
Ms de 20 kg: 20 cal/Kg adicionales por cada Kg despus de los 20 Kg

Entonces las necesidades diarias de agua se calcularan as: Con estos conceptos podramos concluir:

1 a 10 Kg: 100ml/Kg/da (4 ml /Kg/h) Un individuo en ayuno el cual pesa 6 Kg se requiere

11 a 20 Kg: 1000 ml + 50 ml/Kg/da (2 ml /Kg/hora) Necesidades diarias de lquido:
>20 Kg: 1500 ml + 20 ml /Kg /da (1ml /Kg/h adicional) 6 Kg x 100ml/Kg/da= 600 ml por da
Necesidades de sodio
5.- Existen factores que modifican las necesidades basales de agua 3 mEq /Kg/ da x 6 Kg de peso = 18 mEq/ L
Necesidades de potasio:
como:
2 mEq/Kg/ da x 6 Kg de peso= 12 mEq /L
a) Fiebre: por cada grado centgrado que aumente de la Por lo que con estos datos es mas facil poder decidir que solucion se
temperatura basal se incrementa 12% las necesidades de ocupara.
agua. Material
b) En estados hipometablicos como en el estado de coma las
necesidades de agua disminuyen en 20%. Por equipo:
6. La osmolaridad de los compartimientos depende de los electrolitos 4 vasos de precipitado de 10 ml
1 pipeta de 1.0 ml
ms abundantes disueltos. La osmolaridad extracelular depende de
1 pipeta de 5.0 ml
la [Na+] y la osmolaridad intracelular de la [K+]; por lo que es 1 pipeta de 10.0 ml
necesario mantener requerimientos basales siendo los siguientes: Gradilla con 9 tubos de ensayo

49
 Eritrocitos humanos lavados en solucin salina isotnica
Solucin de azul de metileno al 1.0%
Cloruro de sodio en cristales (NaCl)
Balanza granataria
1 Portaobjetos y 3 cubreobjetos

Por grupo:
1 Microscopio marca Leica.

Procedimiento Figura 4. Distribucin del las gotas de sangre en el porta-objetos.

1. Hacer los clculos correspondientes para comprobar que la 6. Hacer la dilucin y redilucin (dilucin seriada) de la
solucin a 0.9% de NaCl es isotnica con respecto al plasma solucin de azul de metileno como se muestra en el siguiente
(ver pag. 30). Considerar que: cuadro:
a) El cloruro de sodio se disocia en solucin acuosa en los
iones sodio y cloruro, por lo que la concentracin inica se DILUCIN SERIADA DE AZUL DE METILENO
duplica (1 mmol/l = 2 mosm/l).
b) La presin osmtica normal del plasma es de 290-310 Tubo H2O (ml) Sol de azul de Volumen de
mosm/l. metileno 1% transferencia
1 2 0.5 ml* -
2. Preparar 20 ml de una solucin de NaCl a 4.5% (etiquetar
2 2 - 0.5 ml
como solucin 1).
3 2 - 0.5 ml
3. A partir de la solucin1, preparar 25 ml a 0.9% (solucin 2) 4 2 - 0.5 ml
y 50 ml a 0.045% (solucin 3). 5 2 - 0.5 ml
6 2 - 0.5 ml
4. De las 3 soluciones preparadas tomar una gota de cada una
y por separado colocarlas en un porta-objetos, adicionar una *Nota: para mezclar al hacer las diluciones se debe
gota de sangre colocar un cubre-objetos y observarlas al succionar y soplar con cuidado la pipeta en cada tubo
microscopio, para valorar el efecto de las soluciones sobre el varias veces antes de transferir la dilucin al siguiente
eritrocitos, como se muestra en la figura 4. tubo.

50
Resultados
1. Expresar en forma ordenada los clculos efectuados para
cada uno de los ejercicios.
2. Deducir el movimiento o no del solvente cuando se ponen
en contacto eritrocitos con soluciones hipo, hiper e
isoosmticas.
3. Calcular la dilucin y la concentracin de azul de metileno
en cada uno de los seis tubos de la dilucin seriada (ver
pg.31). Asegrese que la coloracin obtenida disminuya
gradualmente conforme avanza la dilucin.
Problemas adicionales.
1.- Preparar 250 ml de una solucin de Na2CO3 0.200 M
2.- Preparar 150 ml de una solucin de NaCl al 4.5%.
3.- Preparar 250 ml de una solucin de NaOH al 35%.
4.- Preparar 1.5 litros de H3PO4 0.75 M
5.-Preparar 150 ml de una solucin 0.6 M de KMnO4
6.-Preparar 400 ml de una solucin de histidina al 0.03M PM =
155.15/mol
7.-Se requieren preparar 0.250 M de KOH a partir de una
solucin de KOH 0.400 M. Cuntos ml de esta solucin
concentrada deber utilizar?
8.-Cuantos miliequivalentes estn presentes en 100 ml de una
solucin de Ca2+ al 0.1%.
Referencias
1. Villazn SA, Crdenas CO,Villazn DO, Sierra UA. Fluidos y
electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.
2. Pea-Daz A, Arroyo BA, Gmez PA, Tapia IR, Gmez EC.
Bioqumica. Undcima reimpresin de la 2a. ed. Mxico:
Editorial Limusa; 2004.
3. Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 2002: p. 41-56.
4. Holum JR. Fundamentos de qumica general, orgnica y
bioqumica para ciencias de la salud. Mxico: Editorial Limusa
Wiley; 2001.
5. Farias GM. Qumica clnica. Dcima edicin Mxico:
Editorial El Manual Moderno; 1999.
6. Bloomfield MM. Qumica de los organismos vivos. Mxico:
Editorial Limusa; 1997.
7. Lieberman Allan. D. Marks. Bioqumica Bsica de Marks, un
enfoque clnico. 4 edicin Espaa. Lippincott Williams and
Wilkins 2013 Pgina 116 y 120.
8. Mota Hernndez Felipe; Velsquez Jones Luis. Trastornos
clnicos de agua y electrlitos. Vol. 1. pag. 04. Mc Graw Hill. 2004.
51
 Prctica 2
Regulacin del equilibrio cido-base despus del ejercicio
muscular intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio
5. Qu sistemas amortiguadores participan directamente en
Tiempo de prctica: 3 horas
la regulacin del pH sanguneo?
Objetivos
6. Cules son los sistemas extrasanguneos que tienden a
mantener el pH extracelular?
1. Al finalizar la prctica, el alumno constatar las actividades
reguladoras del pulmn y el rin para mantener el equilibrio
Escriba la ecuacin de Henderson y Hasselbach aplicada al
cido-base en condiciones que tienden a romperlo.
2. Mediante la determinacin del pH observar la variacin de sistema HCO3 /H2CO3 y, con base en ella, conteste la
la concentracin de hidrogeniones en la orina de un individuo siguiente pregunta:
que ha realizado ejercicio muscular intenso.
3. Relacionar los resultados obtenidos con los cambios Cmo participan el aparato respiratorio y el rin en el
metablicos originados por el ejercicio muscular intenso. control del pH sanguneo?

Conteste las siguientes preguntas: INTRODUCCIN

1. Por qu es importante que se mantenga constante, dentro Dentro de los mecanismos de regulacin de que
de ciertos lmites, el pH en el organismo?
+ dispone el organismo para mantener la integridad fisiolgica,
2. Cules son las fuentes de iones H en el organismo?
aquellos involucrados en la homeostasis del pH en los fluidos
3. Cules son los sistemas reguladores que facilitan la
+ extracelulares desempean un papel crucial para la
eliminacin del H producido en el organismo con el fin de
mantener constante el pH sanguneo? supervivencia del individuo. En este sentido cabe sealar que,
como resultado de la oxidacin de los alimentos, un humano
4. Cules son las reacciones de formacin del cido adulto promedio produce alrededor de 20 moles de CO2 al
carbnico (H2CO3) a partir de CO2 y H2O, y de su disociacin da, Al difundir a la sangre, gran parte de dicho gas se
para formar el ion bicarbonato? Escrbalas. combina con al agua en el interior de los eritrocitos,
produciendo cido carbnico (H2CO3), reaccin que es
seguida por la disociacin del H2CO3 para producir el anin

52
bicarbonato HCO3- y un in hidrgeno (H+). Dado el carcter de
cido dbil del H2CO3, la fraccin disociada del mismo es
pequea; sin embargo, considerando la gran cantidad de CO2
que produce el organismo, la acidificacin de los fluidos
extracelulares sera importante en ausencia de mecanismos
reguladores. En el hombre, la intervencin de los pulmones y
los riones evita que ocurra tal acidificacin manteniendo en
un nivel constante la concentracin de H+ y, por consiguiente,
del pH.
Para entender el papel que juegan ambos rganos en
la homeostasis del equilibrio cido-base, debe tenerse
presente que el sistema del cido carbnico implica la
participacin de un componente gaseoso o voltil (el CO2) y
dos componentes no voltiles (el HCO3- y el H+). En la sangre,
el equilibrio entre dichos componentes determina el valor del
pH sanguneo, que puede evaluarse mediante la bien
conocida ecuacin de Henderson-Hasselbach. En el individuo
normal, dicho valor flucta en un promedio 7.4, siendo la
sangre venosa enriquecida en CO2 ligeramente ms cida en
relacin con la sangre arterial. Ahora bien, ya que a
temperatura ambiente el CO2 existe en estado gaseoso, la
cantidad de CO2 disuelto en la sangre depender de la presin
parcial (PCO2) ejercida por el mismo a nivel de los alvolos
pulmonares. En el humano, la magnitud de dicha PCO2 es de
aproximadamente 40 mmHg lo que se traduce en una
concentracin de CO2 sanguneo de aproximadamente 1.2
mEq/l (CO2) + 24 mEq/l (HCO3-); este ltimo valor incluye no
solo el CO2 como tal, sino tambin el bicarbonato y el cido
carbnico. Considerando el pH sanguneo normal y el pKa del
sistema bicarbonato-cido carbnico. Es precisamente la PCO2
la que es controlada por los pulmones, ya que durante el
proceso de la exhalacin se elimina CO2, manteniendo
constante la PCO2 en los alvolos y evitando as que aumente
el nivel de CO2, disuelto en la sangre. Todo proceso o
patologa que se manifieste en una alteracin en la frecuencia
y/o profundidad del proceso de inhalacin -exhalacin, dar
como resultado una alteracin de la PCO2 alveolar
aumentndola o disminuyndola, con la siguiente modificacin
del nivel de CO2 disuelto en sangre y, por consiguiente, del
pH.
Por lo que respecta a los riones, su participacin en el
mantenimiento de un pH extracelular constante se da a travs
de dos mecanismos: la excrecin de equivalentes cidos (H+)
hacia la orina y la regulacin de la cantidad de HCO3-
reabsorbido hacia la sangre desde el filtrado glomerular. A
diferencia del intercambio gaseoso en los pulmones, los
mecanismos de regulacin renal son de largo plazo, por lo que
su efecto ser manifiesto en cuestin de horas. Su importancia
se enfatiza en situaciones patolgicas donde se altera el
intercambio de gases pulmonar (es decir, en la acidosis y
alcalosis respiratorias), en cuyo caso es necesario aumentar o
disminuir la tasa de reabsorcin del HCO3- , o bien en estados
fisiolgicos que producen cantidades importantes de cidos
orgnicos (por ejemplo, en la diabetes no controlada o durante
el ejercicio intenso) donde se incrementa la excrecin de H+ .
Gran parte de este ltimo aparece en la orina acomplejado
con el amoniaco en forma de in amonio (NH4+) o asociado
con el fosfato en forma de fosfato monobsico de sodio
53
(NaH2PO4), representando este ltimo la llamada acidez
titulable. En general, el pH de la orina ser un reflejo de la
produccin de cidos no voltiles por el organismo. El
resultado final de los mecanismos fisiolgicos que participan
en el mantenimiento del equilibrio cido-base es el de
mantener el pH extracelular en un rango compatible con el
funcionamiento adecuado del organismo.
.

54
Figura 5 Equilibrio cido base. Los pulmones, los riones y los eritrocitos contribuyen a mantener el equilibrio acido base. Los pulmones controlan el intercambio gaseoso con el aire atmosfrico. El dixido de carbono que
se genera en los tejidos, se transporta en el plasma como bicarbonato; la hemoglobina (Hb) del eritrocito contribuye tambin al trasporte del CO 2. La hemoglobina amortigua el ion hidrgeno derivado del cido carbnico.
Los riones reabsorben el bicarbonato en los tbulos distales, donde hay una secrecin neta del ion hidrogeno

55
Material
Vasos de precipitado.
Orina.
Potencimetro.
Frasco para muestra.
Mtodo
Un alumno por equipo desayunar o comer
normalmente (evitar ingestin de jugos cidos, bebidas
alcohlicas); despus har lo que se indica a continuacin. bicarbonato de sodio.
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase prctica.
Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco
para muestra
4. Realizar ejercicio muscular intenso, como subir y bajar
varias veces las escaleras de tres o cuatro pisos u otro
ejercicio sugerido por el profesor.
5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta
completar por lo menos cinco muestras.
6. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida ya que con el tiempo el pH
tiende a aumentar debido a la prdida de dixido de carbono
y a que el crecimiento bacteriano produce amoniaco a partir
de la urea.
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las 5
muestras de orina, trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.
Objetivos (Segunda parte)
1. El alumno constatar el papel del rin en el
mantenimiento del equilibrio cido-base en una situacin de
alcalosis metablica provocada por la ingestin de
2. Mediante la medicin del pH, observar la variacin de la
concentracin de hidrogeniones en la orina de un individuo
que ha ingerido una carga de bicarbonato de sodio.
Material
Vasos de precipitados
Orina.
Solucin de bicarbonato de sodio al 3%.
Potencimetro.
Mtodo
1. Tomar 250 ml de agua una hora antes de la clase prctica.
Vaciar la vejiga y descartar esa orina.
2. Tomar 250 ml de agua inmediatamente antes de la clase
prctica.
3. Recolectar aproximadamente 25 ml de orina en el frasco
para muestra
4. Ingerir 250 ml de agua con 7.5 g de bicarbonato de sodio.
5. Obtener muestras de orina cada 15 minutos, hasta
completar por lo menos 5 muestras.
6. A cada muestra se le determinar el pH inmediatamente
despus de haber sido obtenida.
56
Anlisis de resultados
Una vez obtenido el valor del pH para cada una de las cinco
muestras de orina, trazar una grfica de pH contra tiempo;
interpretar los resultados y discutirlos en grupo.

Referencias
1. Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones
clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Reverte; 2004.

2. Montgomery R. Bioqumica: casos y texto. 6a. ed. Editorial

Harcourt-Brace; 1998: cap.4.

3. Baynes W. Jhon PhD. Bioqumica mdica. 3 ed. Editoral

ELSEVIER; 2011 cap 24.

4. Villazn SA, Crdenas CO, Villazn DO, Sierra UA

Fluidos y electrlitos. Mxico: JGH Editores; 2000.

57
 Prctica 3
Cintica enzimtica.
Efecto de la concentracin del sustrato
sobre la velocidad de reaccin enzimtica

Tiempo de prctica: 2 horas Hiptesis

Objetivo
El alumno:
1. Explicar el efecto de la concentracin de sustrato sobre
la velocidad de una reaccin enzimtica.
2. Calcular por mtodos grficos la velocidad mxima y la
constante de Michaelis de una reaccin enzimtica.
3. Conocer los diferentes tipos de inhibidores que existen y
estudiar su efecto sobre la Km y V mx.
Si la velocidad de una reaccin enzimtica es
proporcional a la concentracin del sustrato; cuando la
concentracin del sustrato es muy alta, por lo tanto la enzima
se satura y alcanza su velocidad mxima.
La enzima que sirve de modelo en esta prctica es la
glucosa oxidasa acoplada a la peroxidasa.
INTRODUCCIN

Las enzimas son las protenas ms notables de la

Para lograr los objetivos de esta prctica contestar las
siguientes preguntas:
1. Qu es la velocidad de una reaccin enzimtica?
2. Cmo se define la constante de Michaelis (Km) de una
reaccin enzimtica?
3. Cmo se define la velocidad mxima (Vmx) de una
reaccin?
4. Para qu le sirve a un mdico la determinacin de la
actividad de algunas enzimas?
5. Cules son las enzimas cuya determinacin tiene valor
diagnstico?
naturaleza; sin ellas, la vida como la conocemos no sera
posible. Las enzimas son catalizadores, esto es, aceleran la
velocidad de las reacciones sobre las que actan sin
consumirse en el proceso. El poder cataltico de las enzimas
es mucho mayor que el de los catalizadores inorgnicos,
algunas de ellas estn limitadas solo por la velocidad con
que colisionan con sus sustratos; son catalizadores
perfectos.
Aunque las reacciones que ocurren en la clula son

58
termodinmicamente favorables, la velocidad a la cual
transcurren la mayora de ellas es extremadamente lenta; sin
la presencia de las enzimas, las reacciones necesarias para
sostener la vida ocurriran a una velocidad incompatible con
sta. Adems de su enorme poder cataltico, las enzimas son
altamente especficas por sus sustratos y tienen la capacidad
de regular su velocidad en respuesta a las concentraciones
de sustrato y la presencia de inhibidores, activadores,
reguladores alostricos, etc. As pues, las enzimas
desempean un papel central en los procesos biolgicos,
son las responsables de degradar y sintetizar las molculas
que nos forman y de extraer, transformar y utilizar toda la
energa relacionada con estos procesos. Por ltimo, las
enzimas son las responsables de regular y coordinar todas
las reacciones que ocurren en un organismo para lograr el
delicado balance que representa la vida.
El primer modelo matemtico que explic de manera
general la cintica de las enzimas no alostricas, donde la
velocidad de la reaccin se incrementa hiperblicamente
conforme aumenta la concentracin de sustrato, fue
propuesto en 1913 por Leonor Michaelis y Maud Menten a
partir de los trabajos previos de Victor Henri y Archibald Hill.
Este modelo postula la idea central de que la enzima y el
sustrato libres establecen un equilibrio rpido con el complejo
enzima-sustrato; en un segundo paso ms lento, este
complejo se rompe liberando el producto y regenerando la
enzima libre. La ecuacin de Michelis-Menten explica la
relacin entre la velocidad de la reaccin catalizada por una
enzima y la concentracin de sustrato a travs de los dos
parmetros de la ecuacin, Vmax y Km. La ecuacin de
Michaelis-Menten puede ser re-arreglada matemticamente
para obtener su forma lineal, permitiendo determinar de
manera sencilla los parmetros cinticos de una enzima a
travs del grafico de Lineweaver-Burk. Este mismo grfico
permite inspeccionar rpida y visualmente las diferentes
formas de inhibicin enzimtica.
El estudio de las enzimas es de suma importancia
dentro de las ciencias mdicas; las enzimas estn implicadas
en el origen, diagnostico y tratamiento de una gran cantidad
de patologas y es claro que en el futuro, su preponderancia
ser cada vez mayor. Por ejemplo, la deficiencia de algunas
enzimas, como las proteasas de la coagulacin en la
hemofilia, es causa de enfermedades hereditarias. La
presencia anormal de algunas enzimas en el torrente
sanguneo ayuda a diagnosticar el dao especfico de
tejidos, este es el caso de la amilasa y lipasa en las
patologas pancreticas y las transaminasas en las
enfermedades hepticas. Las enzimas son tambin el blanco
de varios frmacos: la aspirina inhibe a la ciclooxigenasa, el
omeprazol a la ATPasa de protones y el captopril a la enzima
convertidora de angiotensina; estas inhibiciones redundan en
un efecto teraputico. La capacidad de producir enzimas
recombinantes abri la posibilidad de utilizarlas
rutinariamente con fines teraputicos, tal es el caso de la
estreptocinasa para la terapia fibrinoltica en el infarto agudo
al miocardio. Es claro que todas estas aplicaciones no seran
posibles sin la previa y profunda comprensin de la
estructura y funcin de estas fascinantes molculas.
59
Fundamento etilbencentiazolin-6-sulfnico) o la 4-amino-antipirina (y fenol)
El mtodo se basa en el hecho de que la glucosa, en que se colorean al oxidarse.
presencia del oxgeno del aire y con la participacin de la
La reaccin se expresa:
glucosa oxidasa, se oxida hasta cido glucnico. El perxido
de hidrgeno que se forma en el curso del proceso se
descompone mediante la peroxidasa. El oxgeno atmico
que se desprende en esta ltima reaccin se combina con un
cromgeno que se colorea al oxidarse. La intensidad de la
coloracin del cromgeno oxidado es proporcional a la
concentracin de glucosa.

La glucosa oxidasa (-D-glucosa:oxgeno xidorreductasa,

EC1.1.2.4) tiene un peso molecular de 160 000. Existe en
forma dimrica y contiene dos moles de FAD+ como grupo
prosttico por mol de enzima. La glucosa oxidasa es
altamente especfica, hecho que ha permitido su empleo
para el anlisis cuantitativo de glucosa. La reaccin consiste
de dos pasos:

Glucosa + glucosa oxidasa-FAD -gluconolactona +

glucosa oxidasa-FADH2

Glucosa oxidasa-FADH2 + O2 glucosa oxidasa-FAD + H2O2 Figura 6 Diagrama que muestra los niveles de energa de los sustratos a medida que estos progresan
a la formacin de productos en ausencia de la enzima. Los sustratos deben pasar a travs de un
La 4-gluconolactona se hidrata espontneamente dando estado de transicin de alta energa durante la reaccin. Aunque ocurre una prdida favorable de
cido glucnico. La reaccin global se expresa: energa durante la reaccin, la velocidad de la reaccin es enlentecida por la barrera de energa para
formar el estado de transicin. La barrera de energa se refiere a la energa de activacin.
Glucosa oxidasa
Glucosa + O2 Acido glucnico + H2O2

Material y reactivos
La peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del
perxido a un aceptor que es cromgeno como la
2 Gradillas con 8 tubos de ensaye cada una.
ortotoluidina, la ortodianisidina, la 2,2-azino-bis (3-
1 Pipeta de 5 ml.

60
 2 Pipetas de 1 ml. 3.- Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al
Fotocolormetro con filtro azul. agregar la enzima.
Solucin estndar de glucosa 40 mmol/l y una dilucin 1:10
de sta para los tubos 2, 3 y 4. *
4.- Agitar cada tubo e incubar a temperatura ambiente y de
2 frascos con solucin de enzimas: 41.6 Uml1 de glucosa inmediato detener la reaccin agregando 3 gotas de HCl
oxidasa, 4.6 Uml1 de peroxidasa, ortodianisidina 0.21 concentrado. Considerar un intervalo de 30 segundos para
mmol/l. cada tubo al agregar el HCl.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l como inhibidor.
Gotero con HCl. *NOTA: El tiempo de incubacin para la reaccin
enzimtica se indicara al inicio de la prctica
Tabla 1. Preparacin de tubos
Mtodo II (sin inhibidor)
Tubo H2O Solucin de Solucin de
No. (ml) glucosa (ml) enzimas (ml) 1.- Preparar nuevamente una serie de tubos como lo indica
1 1.0 0.0 3 la tabla 1.
2 0.9 dil 1:10 0.1 3
3 0.75 dil 1:10 0.25 3 2.- Considerar un intervalo de 30 segundos para cada tubo al
4 0.5 dil 1:10 0.5 3 agregar la enzima.
5 0.9 0.1 3
6 0.75 0.25 3 3.- Agitar cada tubo e incubar1 a temperatura ambiente y de
7 0.5 0.5 3 inmediato detener la reaccin agregando 3 gotas de HCl
8 0.0 1.0 3 concentrado. Considerar un intervalo de 30 segundos para
cada tubo al agregar el HCl.

Mtodo I (con azida de sodio) Leer ambas series de tubos en el fotocolormetro; utilizar
como blanco el tubo 1. Todos los tubos en la gradilla son
1. Preincubar 20 minutos la solucin de enzimas con 0.5 ml
tubos Klett.
del inhibidor.
Resultados (cuadro 5.2)
2. Preparar la siguiente serie de tubos (tabla 1).

61
1. Clculo de la concentracin inicial de sustrato en cada
tubo; tomar en cuenta que la solucin de glucosa contiene 40
molas ml1. Tubo Concentracin de Velocidad de la Velocidad de la
2. La velocidad ser igual a las unidades Klett por tiempo de sustrato molas de reaccin unidades reaccin con el
-1
incubacin (min-1) glucosa ml Klett/min inhibidor
ABCISAS (X) ORDENADAS (Y) unidades Klett/
3. Con los datos obtenidos completar el cuadro 5.2 y hacer min
las dos grficas en papel milimtrico. 1
4. Hacer una segunda grfica con los valores de 1/v vs 1/[S]. 2
5. Calcular el valor de la velocidad mxima (Vmx) y de la 3
constante de Michaelis (Km) con y sin inhibidor. 4
6. Determinar el tipo de inhibidor de acuerdo con las grficas 5
del punto anterior. 6
7. Analizar si los resultados obtenidos estn de acuerdo con 7
la hiptesis planteada. 8

Cuadro 5.2 Resultados

62

Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los
inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes.
Tiempo de prctica: 2 horas
Objetivos
1. Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los
cambios de pH producidos por las levaduras.
2. Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa
genera los cambios de pH.
3. Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los
desacoplantes sobre la salida de protones.
Responda a las siguientes preguntas:
1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los
carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los
carbohidratos en las levaduras?
Prctica 4
5. Cules son los inhibidores de la cadena respiratoria de
los sitios I, II y III? Describa su efecto sobre el consumo de
O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del cual los
protonforos desacoplan la fosforilacin oxidativa? Describa
su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.
INTRODUCCION
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos
unicelulares que se dividen por gemacin. En comn con
otras clulas eucariontes, las levaduras tienen un ncleo -en
donde reside la informacin gentica de la clula-,
mitocondrias -en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP- y
un retculo endoplsmico y aparato de Golgi que se encargan
de la sntesis de protenas cuya localizacin final es la
membrana plasmtica o el exterior.
A nivel de la membrana plasmtica, las levaduras tienen
una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del ATP con el
bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta protena
es semejante desde un punto de vista estructural y funcional
a la ATPasa de Na+/K+ de las clulas animales y, al igual que
la bomba de sodio/potasio, se inhibe con concentraciones
micromolares de vanadato. Como resultado de la actividad
63
de la ATPasa de H+ en la levadura, se genera un gradiente
electroqumico de protones que se utiliza para impulsar el
transporte de nutrientes al interior de la clula, proceso
catalizado por sistemas de transporte llamados
simportadores o uniportadores. Para darse una idea de la
importancia de esta enzima en la economa celular y en la
energizacin de la membrana celular, basta decir que la
ATPasa de H+ consume hasta un 25 % del ATP que se
sintetiza en la clula.
+ Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Adems de esta ATPasa de H de la membrana
plasmtica, las levaduras tienen otra bomba de protones en
la membrana interna de las mitocondrias, la ATP sintasa, que
se encarga de la sntesis del ATP. En contraste con la
enzima de membrana plasmtica, el flujo de protones a
travs de la ATP sintasa induce la sntesis de ATP. Uno de
los inhibidores ms efectivos de esta enzima es la
oligomicina.
As, se puede proponer uno de los muchos ciclos en los
que interviene el ATP en la levadura: por un lado, el ATP se
sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP sintasa, y a
+ luego cada 10 minutos 2 veces ms.
nivel de la membrana plasmtica, la ATPasa de H lo
hidroliza para bombear protones al exterior de la clula. El
factor comn en ambos casos es un flujo de protones a
travs de la membrana.
Hiptesis
Si las levaduras consumen glucosa, se observar una
disminucin progresiva de su concentracin en el medio de
cultivo con el tiempo y cambios en el pH extracelular.
Material
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
. Probeta
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae) 200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de
1%.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 35 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
EXPERIMENTO 2 (DINITROFENOL)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 35 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2 ml de la solucin
de dinitrofenol 40 mmol/l, concentracin final de 200 mol/l.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
64
4. Esperar 5 minutos.
5. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
6. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y
luego cada 10 minutos 2 veces ms.
EXPERIMENTO 3 (AZIDA)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 35 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5 ml de la solucin
de azida de sodio 400 mmol/l, concentracin final de 5
mmol/l. Agitar con cuidado.
3. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos
veces ms con intervalos de 3 minutos para obtener la lnea
basal.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar sus datos en la tabla

Glucosa pH
Tiempo Control Dinitrofenol Azida de
(min) sodio
3 (basal)
ADP + Pi (B((basal
6 (basal)
Glucosa
Agregar 5 ml de glucosa
+ +
H H 0
ATP ADP 5
ATP 10
Etanol 15
20
+ + + 30
H H H 40

+ Anlisis de resultados
H
NAD NADH ADP + Pi
1. Hacer una grfica de cada uno de los experimentos;
utilizar los valores de las lecturas de pH contra tiempo.
ATP

Acetaldehdo

Mitocondria ADP
65
ADP
2. Analizar el significado de los cambios de pH en el
experimento control, con dinitrofenol como desacoplante y
con azida de sodio.
3. Hacer una relacin de las vas que producen estos
cambios; tomar en cuenta que las levaduras poseen una
ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que se
encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de
protones en la membrana plasmtica cuya funcin es similar
+ +
a la bomba de Na /K en las clulas de los mamferos (ver
fig.7.1).

Referencias
1. Pea A. Studies on the mechanism of K+ transport in
yeast. Arch Biochem Biophys. 1975; 167:397-409.

+
2. Pardo JP. La ATPasa de H de la membrana plasmtica
de los hongos. Mensaje Bioqumico. 1990; 13: 119-172.

66
 Prctica 5
Determinacin de glucosa en sangre total
Tiempo de la prctica: 3 horas
Objetivos
1. Que el estudiante comprenda el metabolismo de la glucosa
en sujetos sanos en diferentes condiciones.
2. Que el estudiante corrobore los cambios de glucosa e
insulina durante la ingesta de alimentos.
3. Que el alumno sea capaz de interpretar y relacionar las
mismas condiciones en ayuno.
4. Que el alumno sea capaz de ver las curvas de ndice
glicmico de diferentes monosacridos.
Introduccin
En el estado de postabsorcin (ayuno) de los
individuos normales, la relacin insulina/glucagn sangunea
es baja, haciendo que el glucgeno muscular y heptico sea
degradado como una fuente de glucosa. Un ayuno adicional
resulta en la degradacin de las protenas a aminocidos en el
msculo esqueltico, y en la liplisis de los triacilglicroles a
cidos grasos en el tejido adiposo. El aminocido alanina y el
glicerol son usados para sintetizar glucosa por medio de la
gluconeognesis estimulada por glucagn. Adems, los cidos
grasos libres pueden ser usados como combustible por el
corazn, los msculos esquelticos y el hgado.
Algunos minutos despus de la ingesta de una comida,
los niveles de insulina sangunea aumentan. La glucosa y los
aminocidos de la dieta tales como la leucina, isoleucina y
lisina, son estimulantes potentes de las clulas beta del
pncreas haciendo que stas segreguen insulina. La mayor
parte de las clulas perifricas responden al aumento de la
glucosa sangunea con un aumento rpido del transporte de la
glucosa dentro de las clulas. De esta manera, los niveles de
glucosa sangunea aumentan solamente de un 20% a un 40%
en los individuos no-diabticos. Sin embargo,
aproximadamente el 80% de la entrada de glucosa no es
insulino dependiente, ya que el cerebro, los glbulos rojos, el
hgado y los intestinos no requieren de insulina para la entrada
creciente de glucosa cuando est presente glucosa sangunea
elevada. El msculo es el tejido dependiente de insulina ms
importante. Los niveles crecientes de insulina y glucosa
sanguneas inhiben la liplisis as como a aproximadamente el
60% de la liberacin normal de glucosa heptica.
67
 Las concentraciones de glucosa en los nios menores Transportador Distribuidor Propiedades
de 5 aos de edad son aproximadamente del 10 al 15% ms GLUT 1 Eritrocitos, barrera hematoenceflica, Ingreso basal de glucosa.
800 mg/l (1.11 a 4.44 mmol/l), aun cuando las concentraciones placenta, retina, Km 1.6 mM.
de baja que los niveles encontrados en los adultos. Los recin rin y cerebro.
nacidos muestran concentraciones de glucosa desde 200 a GLUT 2 Hgado, pncreas Transportador de
800 mg/l (1.11 a 4.44 mmol/l), aun cuando las concentraciones e intestino delgado glucosa, galactosa y
de glucosa sangunea en los infantes prematuros son fructosa.
menores. Las concentraciones de glucosa en los adultos Sensor de glucosa en
saludables varan entre 700 a 1050 mg/l (3.9 a 5.8 mmol/l). pncreas.
Las concentraciones de glucosa del lquido cefalorraqudeo Km de 15 mM o ms.
son aproximadamente del 40% al 80% de aquellos valores GLUT 3 Cerebro, placenta, Ingreso basal de
encontrados en el suero o en el plasma. Las concentraciones hgado, rin glucosa.
de glucosa en el suero son aproximadamente 15% ms altas y corazn. KM 2 mM.
que las concentraciones de glucosa en la sangre total. Debe Transportador de
tomarse en cuenta que las concentraciones totales en la glucosa y galactosa.
sangre varan con el hematocrito. La glucosa sangunea total
se aproxima muy marcadamente a la glucosa plasmtica GLUT 4 Tejido adiposo, Dependiente de
cuando el hematocrito es bajo. La diferencia del 15% entre la corazn y msculo esqueltico. insulina.
glucosa sangunea total y la glucosa plasmtica descrita arriba Km de 5 mM.
es para un valor del hematocrito de aproximadamente del
45%. GLUT 5 Yeyuno, espermatozoides, rin, Transportador de
cerebro. fructosa.

68
69
Determinacin de glucosa. 1.-Lave sus manos y limpie con una torunda de algodn con
Requisito para la prctica: ayuno de 6-8 horas alcohol la zona donde se realizar la puncin.

Podr participar un integrante por equipo, de manera que

en todo el grupo se puedan trabajar las diferentes
condiciones.

Glucmetros One Touch Ultra 2. -Aplique un suave masaje a la punta de

Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa Oxidasa (Aspergillus su dedo que le ayudar a obtener una gota
nger)]. de sangre adecuada. No exprima en
Lancetas estriles. exceso el rea de puncin.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico infeccioso
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol.

Sujetos con diferentes ingesta de carbohidratos:

3.- Acerque y mantenga la gota de sangre
a).-15 gramos de glucosa.1er Equipo en el canal estrecho del borde superior de
b).-15 gramos de sacarosa. 2 Equipo la tira reactiva.
c).-15 gramos de cereal. 3er Equipo

Mtodo.
Determinacin de glucosa.

1.-A cada uno de los sujetos se les determinar la

concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos: 4.- a) Muestra adecuada
0 minutos (antes de ingerir la carga de los diferentes b) Muestra insuficiente
monosacridos).
30 minutos, 60 minutos y 90 minutos, despus de de ingerir
los alimentos.
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos: a) b)

5.- Inserte la tira reactiva en el de las barras de contacto de primero y mirando hacia arriba.
puerto de anlisis, con el extremo Empjela hasta que no avance ms.

70
 8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la lancetas.
Para el desecho de las lancetas siga los siguientes pasos:
6.- Hasta que la ventana de confirmacin
este completamente llena de sangre, antes
que el medidor comience la cuenta Deposite la lanceta en un recipiente para material
regresiva. punzo cortante.

Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material

biolgico-infeccioso junto con las torundas de algodn
7.-Lectura: el resultado de la prueba de glucosa de su sangre empleadas en la prctica.
aparecer despus de que el medidor cuente en forma
Con los datos obtenidos completar el cuadro y hacer
Anotar el resultado en la tabla correspondiente. una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.

Referencias

Nombre:
Edad: Sexo:
Tiempo en (min.) [Glucosa mg/dl]
0
30
60
90
1. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,
anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan
Publicaciones, Captulos: 32.

2. NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para

la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus en
la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud.

71

3. MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015-
SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la
diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.
4. Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.
Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica SSA. Mxico.
5. BaynesW Jhon, Dominiczak.(2011)Bioqumica mdica 3 E
dicin ELSEVIER MOSBY, Espaa. Captulo 21.

72
 Prctica 6
Determinacin de colesterol y lipoprotenas plasmticas

Tiempo de prctica: 2 horas capa superficial de molculas de fosfolpidos, colesterol y

protenas o polipptidos que rodean al ncleo y estabilizan la
Objetivos partcula para que permanezca en solucin dentro del plasma.
Las lipoprotenas principales que circulan en el plasma humano
1.Recordar la estructura de los diferentes lpidos circulantes y
son los quilomicrones, las lipoprotenas de muy baja densidad
sus funciones.
(VLDL), las lipoprotenas de baja densidad (LDL) y las
2.Describir las diferentes fuentes de colesterol, su funcin y la
lipoprotenas de alta densidad (HDL).
dinmica del colesterol plasmtico.
3.Investigar el papel del colesterol y otros lpidos en el desarrollo
El colesterol es esencial para el crecimiento y la viabilidad
de la aterosclerosis.
de las clulas de los organismos superiores; sin embargo, los
4.Describir la composicin y la funcin de las lipoprotenas.
altos niveles de colesterol srico son considerados como un
5.Describir los principios analticos para la determinacin del
importante factor de riesgo de enfermedad y muerte porque
colesterol total, colesterol de HDL y de LDL, apolipoprotenas y
contribuyen a la formacin de placas aterosclerticas. El
triacilgliceroles plasmticos.
colesterol se transporta en la sangre por tres diferentes
6.Calcular la concentracin de colesterol de VLDL y de LDL a
lipoprotenas: LDL, HDL y VLDL. Los estudios epidemiolgicos
partir de las concentraciones de colesterol total, de colesterol de
han establecido con claridad que mientras mayor sea el valor del
HDL y triacilgliceroles.
colesterol-LDL mayor ser el riesgo de enfermedad cardiaca
aterosclertica; por el contrario, mientras mayor sea la
INTRODUCCIN
concentracin del colesterol-HDL menor ser el riesgo de
Los dos lpidos de la sangre con un mximo inters en el enfermedad cardiaca coronaria. En otras palabras, las cifras
diagnstico clnico son el colesterol y los triacilgliceroles (TAG); elevadas de LDL son atergenas, en tanto que las de HDL son
ambos se transportan en las lipoprotenas, que son partculas protectoras, por lo que el clculo del cociente colesterol-
globulares de alto peso molecular con un ncleo formado por HDL/colesterol-LDL que es normalmente de 0.34 0.11
lpidos hidrofbicos -TAG y steres de colesterol-, los cuales constituye un ndice de aterogenicidad.
aportan la mayor parte de la masa de la partcula, y por una sola

73
 En general, se cree que las lipoprotenas que contienen
apoB 100 son potencialmente atergenas.
ALTERACIONES DE LAS LIPOPROTENAS
PLASMTICAS Y ATEROGNESIS
Desde el punto de vista clnico se ha atribuido a
determinadas lipoprotenas el papel de factores esenciales
directos en el desarrollo o en la prevencin de ciertas
enfermedades, principalmente de tipo vascular. Las anomalas
en el transporte de lpidos ocurren bsicamente en los sitios de
produccin o en los de utilizacin de las lipoprotenas del plasma
y provocan varios tipos de hipo e hiperlipoproteinemias
disminucin o elevacin de los niveles plasmticos de
lipoprotenas.
El anlisis de las lipoprotenas plasmticas tiene valor
diagnstico, ya que permite el reconocimiento de defectos
primarios -hipertrigliceridemia e hipercolesterolemia familiares,
deficiencia familiar de lipoprotena lipasa o apoprotena CII,
etctera- y es de gran valor para describir la alteracin
lipoproteica subyacente a otro trastorno clnico, como la diabetes,
la obesidad, la hepatitis, el hipotiroidismo, el consumo de alcohol,
el uso de anticonceptivos orales.
Cabe destacar que la mayor parte de las hiperlipo-
proteinemias, aquellas que consisten en una elevacin de la
concentracin de colesterol de LDL, de VLDL y de Lp(a),
conllevan un alto riesgo de producir accidentes cardio y
cerebrovasculares, necrosis o prdida de la funcin en las
extremidades, lo cual se debe a que el colesterol es el agente
causal de la aterosclerosis subyacente en dichos padecimientos.
De ah el inters actual por el diagnstico temprano y el
tratamiento de estas hiperlipoproteinemias.
Se desconoce el mecanismo exacto por el cual la
hipercolesterolemia conduce a la aterosclerosis. Sin embargo, se
cree que al alterarse la relacin colesterol/fosfolpido que lleva
consigo un incremento en la viscosidad y maleabilidad de las
membranas se inducen cambios en el endotelio y en los
monocitos con un aumento en su migracin y adherencia
probablemente la primera anomala celular de la aterognesis.
Segn la hiptesis de respuesta a la lesin, la ms
aceptada sobre la patognesis de la aterosclerosis, cualquier
lesin en el endotelio o msculo liso de la pared vascular que
puede ser causada por la hipercolesterolemia,
hipertrigliceridemia, el estrs mecnico de la hipertensin arterial,
agresiones qumicas como el tabaquismo, etctera altera la
relacin existente entre el endotelio vascular, las clulas del
msculo liso, los monocitos, los macrfagos, las plaquetas y los
componentes de la sangre circulante, en particular los lpidos, y
genera una respuesta inflamatoria fibroproliferativa, con la
participacin de un gran nmero de factores de crecimiento,
citocinas y molculas vasorreguladoras, que dan origen a las
placas aterosclerticas.
Por otro lado, se ha observado que las partculas LDL
oxidadas por los macrfagos lo cual ocurre normalmente causan
lesin al endotelio, lo que puede ser, de manera particular,
atergeno. La formacin de anticuerpos contra LDL oxidadas
tambin puede ser importante en la formacin de la placa. Por
tanto, hay un inters clnico cada vez mayor en la funcin de los
antioxidantes, como las vitaminas C, E y el -caroteno. Los
estrgenos tambin pueden actuar como antioxidantes en la
prevencin de aterosclerosis. Inclusive, se ha visto que las
lipoprotenas HDL tienen efectos antioxidantes in vitro.
Tradicionalmente, las anomalas de los lpidos sanguneos
se han valorado con un examen global de colesterol y TAG. En la
74
actualidad estos datos son insuficientes para valorar
correctamente una hiperlipemia, por lo que se deben investigar
tambin las diferentes fracciones lipoproteicas.

FUNDAMENTO DE LAS DETERMINACIONES

La evaluacin de pacientes en los que se sospecha alguna
alteracin en los lpidos plasmticos puede incluir la medicin de
colesterol total y TAG y de una o ms lipoprotenas. Adems, la
cuantificacin de Lp(a), apoAI y apoB, o la actividad de la
lipoprotena lipasa u otras enzimas, est siendo ampliamente
valorada para incluirla como procedimiento clnico de rutina.
Determinacin del colesterol total. El colesterol total es
igual a la suma del colesterol contenido en las tres lipoprotenas
que lo transportan:
Determinacin de triacilgliceroles. El mtodo utilizado se
basa en la hidrlisis de los TAG por una lipasa y la determinacin
del glicerol liberado en la reaccin. Para ello, el glicerol es
fosforilado por la glicerol cinasa formando glicerol-3-fosfato, el
cual se oxida por la glicerolfosfato oxidasa a dihidroxiacetona
fosfato generando en la reaccin perxido de hidrgeno. La
peroxidasa cataliza la transferencia de oxgeno del perxido a un
aceptor que es cromgeno, como la 4-aminoantipirina (4-AAP) y
el 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfonato (DHBS), que se colorean
al oxidarse. La absorbencia del cromgeno oxidado a 520 nm es
proporcional a la concentracin de TAG.

La reaccin completa se expresa:

Adems, el colesterol existe en el organismo en dos

fracciones: una en estado libre y otra esterificado 60 a 75%,
por lo que, para la determinacin del colesterol total, se utiliza
una serie de reacciones enzimticas en donde, en una primera
reaccin, los steres se hidrolizan dejando libre el grupo 3-OH
del colesterol. En la segunda reaccin este grupo se oxida y se
obtiene, como un producto, el perxido de hidrgeno, el cual, por
efecto de la peroxidasa, transfiere uno de sus oxgenos a un
aceptor cromgeno. La absorbencia del cromgeno 4-
benzoquinona-monoimino-fenazona) se determina a 520 nm y es Determinacin de colesterol-HDL. Por regla general, el
proporcional a la concentracin de colesterol. La reaccin global anlisis de las lipoprotenas del plasma requiere, primero, la
es la siguiente: separacin de las clases de lipoprotenas y, segundo, la medicin
de la lipoprotena o del componente lipoproteico de inters.

75
 La determinacin es relativamente simple si se precipitan
todas las lipoprotenas que contienen apoB100 VLDL, IDL, LDL
y Lp(a) a excepcin de las HDL con un polianin, generalmente
glucosaminoglicanos con carga negativa heparina, dextran o
fosfotungsteno y un catin bivalentepor lo comn, Mn2+ o
Mg2+ y se determina el colesterol-HDL que queda en solucin
por el mtodo descrito para el colesterol total.
La relacin colesterol total/colesterol-HDL se considera
como un indicador de riesgo coronario. Normalmente esta
relacin es menor de cinco; mientras menor sea el valor, mejor
ser el pronstico para el paciente.
Determinacin de colesterol-VLDL. En general, la
concentracin de TAG en el plasma sanguneo proporciona un
parmetro excelente de la concentracin de las lipoprotenas
ricas en TAG como las VLDL. Esta apreciacin parte de que en
condiciones normales de ayuno no se encuentran quilomicrones
en el plasma y la proporcin TAG/colesterol de la VLDL es
invariable de 5:1 en mg/dl o de 2.2:1 en mmol/l, de tal modo
que la cuantificacin de la concentracin de TAG es suficiente
para calcular la concentracin de la VLDL con un porcentaje de
error pequeo en la estimacin. Si la concentracin de colesterol-
VLDL es la quinta parte de la concentracin de TAG cuando sta
se expresa en mg/dl, entonces:
o si las concentraciones se expresan en mmol/l:
Esta frmula no es apropiada para muestras con una
concentracin de TAG mayor a 400 mg/dl (10.390 mmol/l) o en
muestras que tengan quilomicrones.
Determinacin del colesterol LDL. Aproximadamente las dos
terceras partes del colesterol plasmtico total son transportadas
en las LDL de tal manera que, la concentracin de este lpido
proporciona una medida bastante precisa del nivel de LDL en la
mayora de las personas. Por ello es posible estimar con
bastante exactitud, en casi todos los casos, la concentracin de
LDL sobre la base del conocimiento de la concentracin de VLDL
(estimada por los TAG) y la del colesterol total. No obstante, para
estimar con mayor exactitud la concentracin de LDL debe
cuantificarse la concentracin de colesterol de las HDL, lo cual es
relativamente simple. Las LDL se estiman como sigue:
Si se determina la concentracin de lpidos en moles en
lugar de en peso y se sustituye el valor estimado de VLDL a
partir de la concentracin de TAG, la frmula equivalente se
transforma en la expresin descrita por Fridewald (1972):
Otra forma sencilla de determinacin indirecta del
colesterol-LDL es el mtodo del polivinilsulfato (PVS). El PVS
provoca la precipitacin de las LDL y deja en el sobrenadante las
VLDL y las HDL. El valor del colesterol-LDL se calcula restando
al valor del colesterol total (colesterol en VLDL, LDL y HDL) el
valor del colesterol en el sobrenadante de la precipitacin
(colesterol en VLDL y HDL).
Colesterol LDL = colesterol total (colesterol HDL / colesterol VLDL)
76
 La determinacin de LDL se puede hacer directamente
mediante procesos inmunoqumicos que requieren una especial
destreza y un equipamiento especfico, por lo que resulta de
difcil adaptacin a fines acadmicos. La tcnica consiste en
hacer reaccionar esferas de ltex revestidas con anticuerpos
contra apolipoprotenas de las LDL. Estas partculas se separan La mayora de los mtodos de cuantificacin, todos los cuales
del resto y se determina el colesterol. requieren un equipamiento especial, se basan en la identificacin
inmunolgica de las apolipoprotenas. La tcnica ms usada es
Quilomicrones. Cuando existen quilomicrones pueden ser
el inmunoanlisis ligado a enzimas y de fluorescencia (ELIHDL)
detectados si se deja el tubo de ensayo que contiene el plasma
sanguneo en el refrigerador durante una noche. Los
quilomicrones de mayor tamao, pero no las VLDL, se ubicarn
Material
en la superficie del tubo formando una capa cremosa que puede
Gradilla con 6 tubos de ensayo.
detectarse visualmente. La presencia de quilomicrones en el
Pipetas de 5 y 10 ml.
plasma en ayunas se considera anormal.
Pipetas automticas
Determinacin de Lp(a). La Lp(a) se determina Puntas para pipetas automticas
directamente por mtodos inmunoqumicos al igual que las LDL Solucin de enzimas para colesterol: amortiguador Tris 100
y, como ya se dijo, su concentracin constituye un factor mmol/l, pH 7.7; MgCl2 50 mmol/l, 4-amino-antipirina 1 mmol/l,
independiente de riesgo coronario. Normalmente la Lp(a) se
precipita junto con las lipoprotenas que contienen apoB, por lo 100 U/l y peroxidasa 2 000 U/l.
que la medicin del colesterol de la LDL incluye la contribucin Patrn de colesterol de 200 mg/dl (5.17 mmol/l) para colesterol
de colesterol de la Lp(a). total.
Determinacin de apoAI y apoB. La determinacin de Solucin de enzimas para TAG: amortiguador Tris 100 mmol/l,
apolipoprotenas, particularmente la apoA y la apoB, es un dato pH 6.7, ATP 0.7 mmol/l, MgCl2 4 mmol/l, 4-aminoantipirina 0.4
complementario para la cuantificacin de otros componentes mmol/l, 3,5-dicloro-2-hidroxibencen-sulfonato 0.8 mmol/l, lipasa
lipoproteicos y ayuda a evaluar si un individuo tiene un riesgo 1000 U/l; glicerol cinasa 1000 U/l, glicerol fosfato oxidasa
aumentado de cardiopata coronaria, sobre todo en los estados 4000U/l y peroxidasa 2000 U/l.
hiperlipidmicos donde hay un aumento de TAG en los Patrn de TAG (triolena) de 200 mg/dl (2.8 mmol/l)
quilomicrones o en las VLDL, y cuando las LDL y HDL contienen Reactivo precipitante para HDL: sulfato de dextrn 10g/l, MgCl2
menos cantidad de steres de colesterol y ms TAG en su 0.5 mol/l.
ncleo debido al intercambio de los componentes de stos entre Espectrofotmetro a 520
las lipoprotenas. En tales circunstancias, la cuantificacin de las
apoprotenas proporciona clculos ms seguros y tiles de la
concentracin de partculas lipoproteicas.

77
 Mtodo 1 ml de solucin de enzimas para colesterol
Determinar colesterol total, TAG y colesterol-HDL como
se describe a continuacin:

1.- A un tubo eppendorf que ya contiene 20 l de la solucin

precipitante de VLDL y LDL para determinacin de colesterol-
HDL; agregarle 50 l ml de plasma; mezclar perfectamente y
dejar reposar 10 minutos. Centrifugar 10 minutos a 3 000 rpm. El
sobrenadante libre de lipoprotenas, excepto HDL que contina
siendo soluble, ser utilizado para determinar el colesterol.

2.-.Para la determinacin de colesterol total y colesterol-HDL

preparar la siguiente serie de tubos:

Preparacin de los tubos (volumen en ml)

Tubo 1 2 3 10 l
Estndar de 10 l - - Estn 10 l 20 l
colesterol dar de Plasma Sobrenadante con
colesterol HDL
Plasma - 10 l -

Sobrenadante con - - 20 l
HDL
4.-Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm;
Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para calibrar a cero con el blanco.
colesterol. Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10
min. Para determinar los TAG preparar la siguiente serie de tubos:

78
 Preparacin de los tubos (volumen en ml).
Resultados
Tubo 1 2
Estndar de TAG 10 l - 1. De acuerdo al estndar de colesterol, calcular la concentracin
Plasma - 10 l de colesterol correspondiente a los tubos 2 y 3 (tubos que
contienen el plasma y el sobrenadante) de la siguiente manera:
Agregar a todos los tubos 1 ml de solucin de enzimas para
TAG.
1 ml de solucin de enzimas para TAG

Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l.

As = Absorbancia del estndar.
Ap = Absorbancia del problema.

2.-Calcular la concentracin de TAG de la siguiente manera:

Cs = Concentracin del estndar en mg/dl o mmol/l.

As = Absorbencia del estndar.
Ap = Absorbencia del problema

10 l Estndar de 10 l Plasma 3.-Compare sus resultados con los valores normales del
TAG colesterol total, del colesterol-HDL y de los triacilglicridos en el
plasma.
4.-Calcular la concentracin de colesterol VLDL por la frmula:
Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 10 min.
5.-Calcular la concentracin de colesterol LDL a partir de las
5. Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro a 520 nm; concentraciones de colesterol total, HDL y VLDL.
calibrar a cero con el blanco. 6.-Estimar el cociente colesterol-HDL/colesterol-LDL y de
colesterol total/colesterol-HDL (ndices aterognicos).

79
7.-Analizar el significado de los datos obtenidos y hacer un
informe de los resultados y de las conclusiones que de stos se
deriven.
Referencias
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Enzymatic determination of total serum cholesterol. Clin
Chem. 1974; 20: 470-475.
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Editorial Harcourt-Brace; 1998: 332-389.
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4. Alba Zayas EL, Pereira RG, Aguilar BA. Lipoprotena
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10. Mohammed HM, Frohlich J. Effects of dietary phytosterols on
cholesterol metabolism and atherosclerosis: clinical and
experimental evidence. Am J Med. 1999; 107: 588-592
80
 Prctica 7
Integracin Metablica
Tiempo de prctica: 3 horas
Objetivos
1.-Que el alumno pueda integrar las vas metablicas de los
carbohidratos, de los lpidos y protenas en (condiciones
normales) en un paciente sano.
2.-Que el alumno reconozca los sitios denominados
encrucijadas metablicas y las enzimas de las vas
reguladoras.
3.-Que el alumno pueda correlacionar el papel que tienen las
hormonas en la regulacin de las vas.
4.-Que el alumno sea capaz de analizar los datos de las
pruebas clnicas en un sujeto normal.
5.-Que el alumno relacione que vas se encuentran alteradas
en un paciente diabtico.
INTRODUCICON
Los alimentos que ingerimos deben estar constituidos
por los 6 componentes bsicos que son protenas,
carbohidratos, lpidos, vitaminas, minerales y agua, la cantidad
que se requiere ingerir de cada uno de los componentes vara
de acuerdo a la constitucin y la actividad fsica que se realiza,
tanto la falta como en el exceso de consumo de alguno de los
componentes bsicos conlleva a diversos trastornos
metablicos.
Aproximadamente del 40 al 45% de nuestra ingesta
calrica proviene del consumo diario de carbohidratos
complejos los cuales al ser digeridos dan lugar a los diferentes
monosacridos entre los que se encuentra la glucosa, la cul
se distribuye por la sangre a las clulas para poder captar la
glucosa, siendo la principal fuente de energa. Algunos tipos
celulares son dependientes de la liberacin de insulina por el
pncreas como es el caso de las clulas musculares. Si la
insulina no funciona adecuadamente, la glucosa se queda en
el flujo sanguneo causando elevacin de los niveles de
glucosa en la sangre y a esto se le denomina hiperglucemia;
una de las enfermedades que se caracteriza por la
hiperglucemia en sus primeras etapas es la diabetes mellitus.
La diabetes mellitus est caracterizada por una hiperglucemia
resultante de defectos en la secrecin de insulina, en la accin
de la insulina o en ambas. La hiperglucemia crnica de la
diabetes est asociada a lesiones, disfuncin y fallo de varios
rganos, especialmente de los ojos, los riones, el corazn y
los vasos sanguneos.
Varios procesos patognicos estn implicados en el
desarrollo de la diabetes. Estos van desde una destruccin
autoinmunolgica de las clulas del pncreas, con la
consiguiente deficiencia de insulina, hasta anormalidades, en
81
las que el pncreas no produce suficiente insulina o la que
produce no es eficiente. La accin deficiente de la insulina en
los tejidos diana es la responsable del metabolismo anmalo
de los carbohidratos de carbono, grasas y protenas en la
diabetes.
La accin deficiente de la insulina ocasiona una
respuesta inadecuada en uno o ms puntos de la compleja
trama metablica en la que esta hormona tiene papel
regulatorio.
Frecuentemente coexisten en el mismo paciente una
inadecuada secrecin de insulina as como defectos de la
accin de sta, en la actualidad no se sabe si una de estas
anormalidades es la consecuencia o la causa de la otra. En
cualquier caso, el resultado es la hiperglucemia.
La gran mayora de los casos de diabetes pueden
incluirse en dos amplias categoras etiopatognicas. En el
primer caso (diabetes de tipo I) la causa es una deficiencia
absoluta en la secrecin de insulina. Los individuos con alto
riesgo de desarrollar este tipo de diabetes pueden ser a
menudo identificados mediante evidencias serolgicas de un
proceso autoinmune que se produce en los islotes
pancreticos y tambin mediante marcadores genticos. En la
segunda categora (diabetes de tipo II), mucho ms
prevalente, la causa es una combinacin de una resistencia a
la accin de la insulina y de una inadecuada respuesta
secretora compensadora. La diabetes tipo II se caracteriza por
estar presente muchos aos antes de ser detectada una
hiperglucemia sin sntomas clnicos (sed, prdida de peso),
pero suficiente para ocasionar cambios patolgicos y
funcionales sobre los rganos blanco. Durante este perodo
asintomtico, es posible demostrar trastornos en el
metabolismo de los carbohidratos midiendo la glucosa
plasmtica en ayunas o despus de una sobrecarga de
glucosa por va oral.
El exceso en la ingesta de carbohidratos no solamente
mantiene la reserva de energa en forma de glucgeno sino
que tambin el exceso de carbohidratos es convertido en
triacilgliceroles. En el hgado los triacilgliceroles se sintetizan a
partir de acil CoA y glicerol 3-fosfato siendo empaquetados
con apoprotenas y en lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL), secretados al torrente sanguneo siendo almacenados
en tejido adiposo. Para su consumo los triacilgliceroles son
hidrolizados a glicerol y cidos grasos. En la dieta es
importante la presencia de lpidos ya que son precursores de
diferentes componentes de la clula como los fosfolpidos, uno
de los lpidos que tiene una gran importancia en la clula es el
colesterol, ya que proporciona rigidez a las membranas
celulares y es precursor de las sales biliares as como de
hormonas esteroideas. El colesterol se puede obtener por la
alimentacin y por sntesis del propio organismo, siendo las
clulas hepticas y las suprarrenales las de mayor sntesis.
Para llevar a cabo la sntesis de colesterol se requiere la
presencia de acetil-CoA el cual proviene de la degradacin de
glucosa, cidos grasos y aminocidos por lo cual se denomina
a la acetil-CoA la encrucijada metablica.
El colesterol es insoluble en agua por lo que
transportado en la sangre por tres lipoprotenas que son de
82
muy baja densidad (VLDL), de baja densidad (LDL) y las de
alta densidad (HDL). Los niveles normales de colesterol total
en sangre en un adulto son de < 200 mg/dl y cuando estos
valores se ven aumentados se asocian a la formacin de
placas aterosclerticas que pueden ocluir los vasos
sanguneos y como consecuencia provocar infarto al
miocardio y alteraciones cardiovasculares.
La cuantificacin de las LDL representa un papel clave
en la esclerosis coronaria ya que concentraciones elevadas
indican desarrollo de la aterosclerosis.
En el caso de las HDL al disminuir su concentracin
aumenta el riesgo de desarrollar aterosclerosis.
Las protenas constituyen la fuente primaria del
metabolismo del nitrgeno en el organismo.
Los aminocidos producto de la digestin de las
protenas que se consumen en los alimentos, son utilizados
para la sntesis de protenas y de compuestos nitrogenados o
se puede oxidar para producir energa.
El hgado es el rgano principal en donde se realiza la
oxidacin de los aminocidos. El nitrgeno de los aminocidos
forma amoniaco el cual es toxico para el organismo. El
amoniaco y los grupos amino se convierten en urea en el
hgado, que no es toxica y se elimina fcilmente por la orina ya
que es hidrosoluble.
Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado
son los nucletidos. Las purinas y las pirimidinas, que son
esenciales para la sntesis de nucletidos y cidos nuclecos.
Los nucletidos son precursores del DNA y el RNA, as
como tambin forman parte de la estructura de muchas
coenzimas adems de ser componentes del metabolismo
energtico.
La degradacin de las purinas no genera energa y el
producto de la degradacin del anillo purnico es el cido
rico, que se elimina por la orina, tiene una solubilidad limitada
por lo que su exceso da como resultado la formacin de
cristales en regiones del organismo como pueden ser los
dedos gordos del pie, trastorno que se conoce como gota.
Los valores elevados de cido rico se presentan en:
ingestin de alimentos ricos en nucleoprotenas, insuficiencia
renal, azoemias prerrenales.
Otro de los componentes del metabolismo nitrogenado es la
creatinina que en el msculo en su forma fosorilada sirve
como almacn de alta energa y se transforma con facilidad en
ATP por la enzima creatina fosfocinasa. La creatina fosfato es
inestable y se cicla espontneamente forma la creatinina que
se elimina en la orina. La produccin de creatinina es
proporcional a la masa muscular corporal. La cantidad de
creatinina que se elimina diariamente puede utilizarse como
indicador de la normalidad de la funcin renal.
83
MATERIALES La muestra de orina deber ser del alumno a quien se
le haya determinado glucosa, colesterol y triacilgliceroles para
Determinacin de glucosa poder discutir todos los valores en conjunto y poder enlazar en
Glucmetros One Touch Ultra. un mismo individuo el efecto que tiene la dieta sobre el
Tiras reactivas One Touch Ultra metabolismo.
[Glucosa oxidasa (Aspergillus nger)].
Lancetas estriles Determinacin de urea
Recipiente para material punzo cortante. Pipetas automticas (10 a 200l)
Recipiente para material biolgico-infeccioso. Puntas para micropipetas
Jabn para manos. Propipetas.
Torundas de algodn con alcohol. Reactivo para determinacin de urea.
Estndar de urea (50 mg/dl).
Determinacin de colesterol y triacilgliceroles. Espectrofotmetro.
Dichas determinaciones solo se realizaran al tiempo 0 y Celdas.
a los 120 minutos. Agua destilada.
Accutrend Roche para determinacin de colesterol y
triacilgliceroles. Determinacin de cido rico
Tiras reactivas para determinacin de colesterol. Pipetas de 5 ml.
Tiras reactivas para determinacin de triacilgliceroles. Gradilla con 2 tubos de ensaye
Lancetas estriles Reactivo para cido rico
Estndar de cido rico (6 mg/dl)
Las determinaciones de urea, creatinina y cido rico, se
realizaran en orina. Determinacin de creatinina
Reactivo para determinacin de creatinina
Las muestras de orina se realizaran solo al tiempo 0 y a
los 120 minutos. Estndar de creatinina (2 mg/dl).
Espectrofotmetro.
Nota: La muestra de orina del tiempo 0 es a la que se le Celdas.
realizar el EGO

84
METODO
Determinacin de glucosa
Podr participar un integrante por equipo, de manera que en
todo el grupo se puedan trabajar las diferentes condiciones.
1.-Dos sujetos, uno de los cuales consumir una dieta rica en
carbohidratos y el otro una dieta rica en protenas.
2.-A cada uno de los sujetos se les determinar la
concentracin de glucosa en sangre total por medio de un
glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos).
30 minutos, 60 minutos y 120 minutos, despus de ingerir
los alimentos.
Para realizar la determinacin de glucosa en sangre total
seguir los siguientes pasos:
1.- Lave sus manos y limpie con una
torunda de algodn con alcohol la zona
donde se realizar la puncin.
2.- Aplique un suave masaje a la punta de
su dedo que le ayudar a obtener una
gota de sangre adecuada No exprima en
exceso el rea de puncin.
3.-Acerque y mantenga la gota de sangre en
el canal estrecho del borde superior de la
tira reactiva.
4 a) Muestra adecuada
b) Muestra insuficiente
a b
5.- Inserte la tira reactiva en el puerto de
anlisis, con el extremo de las barras de
contacto de primero y mirando hacia
arriba. Empjela hasta que no avance
ms.
6.- Hasta que la ventana de confirmacin este completamente
llena de sangre, antes que el medidor comience la cuenta
regresiva.
7.-Lectura el resultado de la prueba de
glucosa de su sangre aparecer
despus de que el medidor cuente en
forma regresiva de 5 a 1.
85
Anotar el resultado en la tabla correspondiente
Determinacin de colesterol y triacilgliceroles

8.-Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta 1.-Lavarse las manos cuidadosamente
usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se esto es con la finalidad de retirar residuos
produzcan lesiones accidentales con las puntas de la de crema o grasa en las manos para evitar
lancetas, colquelas en un recipiente para material punzo determinaciones errneas principalmente
cortante. cuando se realiza la determinacin de
triacilgliceroles.
9- Deseche las tiras reactivas en una bolsa para material
biolgico-infeccioso junto con las torundas de algodn
empleadas en la prctica. 2.- Con la ayuda de unas pinzas extraer una tira reactiva del
envase y taparlo inmediatamente para evitar que las tiras se
10.-Con los datos obtenidos completar el cuadro 10.1 y hacer sequen.
una grfica de todas las variantes en papel milimtrico.
Cuadro 7.1 Resultados
3.-Con la tapa cerrada inserte en la
Fecha:_________________ ranura, en la direccin indicada por la
flecha, la tira reactiva con el cuadrado
Nombre: amarillo hacia arriba hasta que encaje y
Edad: Sexo: deje verse la marca TG o CHOL impresa
Tiempo [Glucosa mg/dl] en la tira reactiva.
(min.)
0
30
60 4.-Frote y masajee la yema del dedo para
120 facilitar la extraccin y aplicacin de la
sangre.

86
5.-Con la lanceta introduzca para hacer la puncin y realice la NOTA: Tener cuidado al realizar la determinacin, ya que
toma de muestra. solo cuentan con una tira reactiva para cada prueba.

6.-Aplicar directamente la gota de sangre 8.-Anote la lectura

a la tira reactiva
Determinacin de urea en orina

La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftaldehdo

en medio cido originando un complejo coloreado puede
identificarse espectrofotomtricamente.
7.-Abrir la tapa y colocar la tira reactiva
con la muestra de sangre

La urea es estable 5 das a 2-8 C.

1.-Para la determinacin de urea en orina, tomar la muestra
como se esquematiza en el cuadro.

Tubo 1 2
8.-Bajar la tapa
Muestra 10 l --
Estndar -- 10 l
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
para urea

La determinacin se realiza en tubos de ensaye

9.-Realice la lectura de la concentracin de colesterol y Estndar de urea (50 mg/dl).
triacilgliceroles segn sea el caso. Mezclar e incubar 20 minutos a temperatura ambiente.

87
 1ml Determinacin de creatinina en orina
Sol reactiva para urea

1.-Para la determinacin de creatinina en orina, tomar la

muestra como se esquematiza en el cuadro.

Celda 1 2
10 l Orina 100 l -
Muestra Estndar - 100 l
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
de creatinina
10
Estandar
1ml
Sol
reactiva
para
urea

1ml sol. 100 l Estndar

100 l Reactiva de
1ml sol. creatinina
orina Reactiva de
creatinina

TUBO 1 TUBO 2
CELDA1 CELDA2

Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a

blanco de reactivos a 520 mn. Leer la absorbancia (A) en el espectrofotmetro frente a
blanco de reactivos a 492 mn.
El resultado se obtiene en mg/dl

88
El resultado se obtiene en mg/dl. A Muestra X [Estndar] = [Creatinina]
A Estndar
Estndar de creatinina (2 mg/dl).
El resultado se obtiene en mg/dl.
La determinacin se realiza directamente en las celdas con la
finalidad de tomar la lectura de las absorbancias exactamente Determinacin de cido rico en orina
a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos. 1.-Para la determinacin de cido rico en orina, tomar la
muestra como se esquematiza en el cuadro.
Mezclar y poner en marcha el cronmetro, anotar las
absorbancias a los 30 (A1) y a los 90 (A2) segundos.
Leer frente blanco de reactivos en el espectrofotmetro a Tubo 1 2
492 nm. Orina 100 l -
Estndar - 100 l
1ml
Solucin reactiva 1 ml 1 ml
sol.
de cido rico
React
iva
de
1ml sol. Reactiva de 100 l orina cido rico
100 l Estndar La determinacin se realiza en tubos de ensaye.
cido rico Estndar de cido rico (6 mg/dl)Mezclar e incubar 10 minutos
a temperatura ambiente. Leer la absorbancia (A) en el
espectrofotmetro frente a blanco de reactivos a 520 mn.
Clculo de la concentracin de cido rico.

A Muestra X [Estndar] = [cido rico]

Estndar
TUBO 1 TUBO 2
El resultado se obtiene en mg/dl.
Calcular el incremento de la absorbancia A = A2 A1.
Con las diferencias de absorbancias anotadas A, aplicar la Referencias
siguiente ecuacin: 1. Koolman J, Roehm KH (2004). Bioqumica Texto y Atlas: 3
Edicin, Ed. Mdica Panamericana, pp.: 158, 308-310.

89
2. Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). Marks 5. MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015-
Basic Madical Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott SSA2-1994, Para la prevencin, tratamiento y control de la
Williams & Wilkins. Pag. 24-26. diabetes. Listado de Normas Oficiales Mexicanas de la
Secretara de Salud.
3. Kaplan LA, Pesce AJ. (2002). Qumica Clnica. Teora,
anlisis y correlacin. 3 Edicin. Ed. Pesce Kaplan 6. Manual para el manejo de las insulinas 2001. 2 Edicin.
Publicaciones, Captulo: 32. Subsecretara de Prevencin y Proteccin de la Salud. Centro
Nacional de Vigilancia Epidemiolgica. SSA. Mxico.
4. NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para
la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus en 7. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-030-SSA2-1999, Para
la atencin primaria. Listado de Normas Oficiales Mexicanas la prevencin, tratamiento y control de la
de la Secretara de Salud. hipertensin arterial. Listado de Normas Oficiales Mexicanas
de la Secretara de Salud.

90
 Prctica 8
Examen general de orina (EGO)

Objetivos En una tira reactiva se llevan a cabo las siguientes

1.-Que el estudiante sea capaz de interpretar o analizar los
resultados de un examen general de orina (EGO).
2.-Que el estudiante sea capaz de correlacionar los resultados
del examen general de orina (EGO) en un sujeto sano.
3.- Que el estudiante conozca la utilidad del empleo de las tiras
reactivas para un diagnstico presuntivo de las diversas
patologas.
determinaciones:
Urobilingeno, glucosa, cuerpos cetnicos, bilirrubina,
protenas, nitritos, leucocitos, indicios de sangre, pH y densidad.
La realizacin del Examen General de Orina (EGO),
proporciona informacin que puede ser til en el diagnstico
diferencial de enfermedades que se pueden presentar no solo a
nivel renal, sino tambin a nivel heptico, la diabetes as como la
preeclampsia.

INTRODUCICION Examen Fsico

Los riones excretan de 0.5 a 10 l aproximadamente de El examen comprende la evaluacin de color, olor,
orina al da, siendo 0.5 l el mnimo necesario para eliminar los volumen y densidad.
productos del metabolismo, en condiciones fisiolgicas normales
la orina no presenta glucosa, as como tampoco aminocidos y Color: el color normal de la orina es amarilla y transparente, la
pueden presentarse mayores cantidades de aminocidos debido presencia de otros colores sugieren una patologa.
a diversas fisiopatologas el rin permite la salida de diferentes
compuestos como protenas.

El anlisis de orina se puede llevar a cabo con tiras

reactivas, stas contienen los reactivos y las enzimas en un
soporte de plstico que al interaccionar con la orina se
desencadena una reaccin que se manifiesta con un producto
coloreado.

91
 A continuacin se presentan una serie de colores que El olor de la orina en condiciones normales es
puede presentar la orina y su posible causa caracterstico, sin embargo algunos padecimientos pueden
alterarlo
Color Posible causa
Olor amoniacal Infeccin urinaria
Plido Orina diluida Olor a rancio Tirosinemia
Olor a ratn Fenilcetonuria
Obscuro Fosfatos, uratos, oxalatos,
Jarabe de arce Enfermedad de jarabe de arce
leucocituria, bacteriruria, y Olor a pies Acidemia glutrica
contaminacin fecal.
El volumen de la orina solo es influido por la ingesta de
Blanquecino Leucocituria, lipiduria y quiluria agua. Un adulto puede presentar un volumen urinario de 600 a
2,000 ml al da, sin embargo algunas patologas pueden
Amarillo-naranja Orina concentrada o la
aumentar el volumen de orina como es el caso de la diabetes,
presencia de bilirrubina tambin la diuresis osmtica, por el contrario en algunos casos el
volumen de excrecin puede ser menor y esto como
Amarillo verdoso Presencia de bilirrubina-
consecuencia de la obstruccin del tracto urinario o la
biliverdina disminucin del volumen plasmtico.
Rojizo Hemoglobina, eritrocituria,
Gravedad o densidad especfica: Indica la cantidad relativa de
mioglobinuria, porfiria, solutos que contiene un volumen definido de orina, del 70 al 80 %
de estos solutos corresponde a la urea.
contaminacin menstrual, as
como ingestin de betabel o Electrolitos como el sodio, cloro, urea, fosfatos y sulfatos
intervienen de manera importante en la densidad de la orina.
tratamiento con rifampicina
Caf-negruzco Metahemoglobina y melanina El examen qumico comprende: pH, protenas, glucosa,
cetonas, hematuria, bilirrubina, urobilingeno, nitritos y
leucocitos.

pH: Riones y pulmones trabajan de manera equilibrada

para mantener un equilibrio cido-base en todos los lquidos
corporales.

La orina es normalmente cida, los valores de pH oscilan

entre 4.5 a 8.5

92
Alteraciones del pH urinario Lupus eritematoso generalizado
Sndrome nefrtico
Intoxicacin con mercurio, opiceos
Disminucin en el pH Aumento en el pH Obstruccin crnica de las vas urinarias
Acidosis metablicas Ingestin de bicarbonato Trombosis de la vena renal

Dietas ricas en protenas Utilizacin de acetozolamida Glucosa: Se presentan cantidades detectables de glucosa en
Cetoacidosis diabtica Neomicina kanamicina la orina, cuando los valores de glucosa srica se encuentran por
arriba de los 180 mg/dl, debido a que superan la capacidad de
Alcalosis hipokalmica Kanamicina reabsorcin tubular.

Cetonas: La presencia de cuerpos cetnicos como el acetato

Protenas: Las protenas circulantes acceden a las
clulas renales y no deben de excretarse ms de 150 mg de
protena en la orina de 24 horas, de esta cantidad
aproximadamente la tercera parte es albmina y el resto se
refiere a , y -globulinas.
La protena de Tamm-Horsfall (uromucoide) se investiga
para confirmar si el sitio de sangrado se localiza a nivel renal.
La presencia en la orina de un exceso de albmina es un
indicador de lesin glomerular o tubular.
y el hidroxibutirato productos del metabolismo de cidos grasos,
refieren algn defecto en la utilizacin de los carbohidratos de la
dieta, por lo que se asocia a diabetes mellitus descontrolada.
Sangre: La tira reactiva positiva ndica tres posibilidades
Hematuria: La presencia de clulas sanguneas en orina
y puede presentarse en traumatismos de los rganos
urinarios, lesiones neoplsicas, hemofilia,
glomerulopatas, clculos, lupus eritematoso
generalizado, as como en padecimientos hematolgicos y
pacientes que utilizan anticoagulantes.

Por la cantidad de protena excretada se puede clasificar en:
Proteinuria leve: menos de 1 gr/da
Proteinuria moderada: entre 1 y 4 gr/ da
Proteinuria grave: mayor de 4 gr por da
Mioglobinuria: Indica la presencia de mioglobina en orina
y es una protena que se libera de las clulas musculares
y la patologa asociada es el dao muscular severo que
puede ser causado por convulsiones, ejercicio
prolongado, shock elctrico.

Patologas que presentan proteinuria Hemoglobinuria: Es secundaria a crisis hemolticas de

cualquier etiologa
Glomerulonefritis
Enfermedad renal poliqustica Bilirrubina: Una reaccin positiva indica enfermedades
Fiebre hepticas. La presencia de trazas refiere realizar una
Diabetes mellitus investigacin con enzimas hepticas.

93
Este metabolito proviene de la hemoglobina de los eritrocitos que
son destruidos en el sistema retculo endotelial distribuido en
todo el organismo, la Hb es transportada al hgado donde se lleva
a cabo su conjugacin, misma que le permite ser filtrada a travs
del glomrulo renal. Por el contrario la bilirrubina no conjugada o
indirecta no es capaz de pasar a la orina.
Leucocitos y bacteriuria: Se aceptan 5 clulas por
campo y cuando esta cifra es superada se sugiere infeccin, la
presencia de leucocitos en orina, se denomina piuria.
Las tiras reactivas detectan a estas clulas por la presencia de
esterasas producidas por los neutrfilos. La leucocituria es muy
valiosa para detectar infeccin.

Urobilingeno: ste deriva principalmente de la Material

bilirrubina transformada por accin de bacterias intestinales,
parte del urobilingeno es excretada por las heces y una mnima
fraccin es removida por el hgado, llevado al rin para ser Muestra de orina
excretada y finalmente dar color a la orina.
Se encuentra en la orina cuando hay un aumento de
bilirrubina no conjugada en sangre, por ejemplo en anemias
hemolticas.
Alteraciones del urobilingeno y la bilirrubina
Vaso con tapa para la muestra de orina
Tira reactiva para examen general de orina
Recipiente para desechos biolgicos
Mtodo
1.-Para la toma de muestra: El alumno deber recolectar del
chorro intermedio de la orina y deber ser la primera orina de la
maana

Color Enfermedad Enfermeda Enfermedad 2.-Una vez obtenida la muestra, observar el color y la claridad de
hemoltica d heptica obstructiva la muestra.
Urobilingeno Normal Incremen Incremen Bajo o 3.-Tomar con una pinza la tira reactiva.
urinario Tado tado ausente 4.-Poner en contacto la tira reactiva con la orina evitando el
exceso de la misma. Leer los resultados de acuerdo con la
Bilirrubina Negativa Negativa Positiva o Positiva
etiqueta de colores del frasco.
urinaria negativa 5.-Anotar los datos en la tabla de resultados.

Nitritos: Su presencia en orina sugiere la posibilidad de
infeccin urinaria, incluso en pacientes asintomticos. El cido
ascrbico puede dar resultados falsos negativos y esto no indica
ausencia de infeccin, ya que algunos grmenes no producen
nitritos. La enzima reductasa bacteriana metaboliza los nitratos
urinarios en nitritos, lo que indica presencia de bacterias.
NOTA: Debido a los horarios en que se realizan las prcticas
y considerando que en la prctica de integracin se requiere
de una muestra de orina, la determinacin de EGO se
realizara en dicha prctica con la muestra del tiempo cero,
sin olvidar las condiciones en que debe ser tomada la
muestra, sin embargo por fines prcticos no se podr
cumplir con este requisito para todos los grupos.

94
Referencias
1. Diana Nicoll; Stephen McPhee; Michael Pignone. Manual de
pruebas diagnosticas. Manual Moderno. 4. Edicin.

2. Jacques Wallch. Interpretacin clnica de las preubas de

laboratorio. Masson. 4. Edicin

3. G. Ruz reyes; A. Ruz Argelles Fundamentos de

interpretacin clnica de los examenes de laboratorio., 2010,
Editorial Panamericana. 2. Edicin.

4. John W Baynes y Marek H Dominiczak. Bioqumica Mdica.

Elsevier Mosby. 3 Edicin.

95
 Prueba Valores de Resultados
referencia
Densidad 1.016 a 1.0035
pH 4.5 a 8.5
Sangre Ausencia
Leucocitos Ausencia
(esterasa)
Nitritos Ausencia
Protena Ausencia
Bilirrubina Ausencia
Glucosa Ausencia
Cuerpo Ausencia
cetnicos
Urobilingeno Ausencia

Tabla de resultados

96
 Prctica 9
Pipeteo
Tiempo de prctica: 1 hora
Objetivos
1. Que el estudiante adquiera la habilidad de pipetear
cantidades de volmenes pequeos, del orden de microlitros
(l).
2. Que el estudiante adquiera la destreza para colocar la
muestra en los pozos del gel de agarosa.
3. Que el estudiante considere la importancia de seguir
correctamente la metodologa para obtener los resultados
deseados.
JUSTIFICACIN
Para realizar la prctica de pipeteo es importante que
los alumnos consideren las cantidades de volmenes que van
a manejar, por lo que la siguiente prctica les proporcionar
un ensayo previo de la original, con la idea de tomen en
cuenta pequeos detalles que pueden modificar el resultado
deseado.
NOTA: Todo el material que se proporcione ser una
simulacin del original.
MATERIAL
- Tubo verde con 10 l de DNA de la escena del crimen
- Tubo azul con 10 l DNA del sospechoso 1
- Tubo naranja con 10 l DNA del sospechoso 2
- Tubo violeta con 10 l DNA del sospechoso 3
- Tubo rojo con 10 l DNA del sospechoso 4
- Tubo amarillo con10 l DNA del sospechoso 5
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl, 1800 U,
con 80 l
- Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III
0.2g /l, 12 l.
- Geles de agarosa al 1.0%.
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA).
Tris-base 39 mM, cido actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM.
- Gradillas para microtubos.
- Recipiente para teir geles.
- Pipeta automtica de 10-100 l.
- Puntas para pipetas automticas.
- Marcador indeleble.
- Cmara horizontal de electroforesis.
- Microcentrfuga
PROCEDIMIENTO
1.-Se le proporcionar a cada equipo una gradilla con cada
uno de los tubos conteniendo los 10 l de la muestra.
97
Rotular cada uno de los microtubos de la siguiente forma:

Verde EC= Escena del crimen

Azul S1= Sospechoso 1
Naranja S2=Sospechoso 2
Violeta S3=Sospechoso 3
Rojo S4=Sospechoso 4
Amarillo S5=Sospechoso 5

EC S1 S2 S3 S4 S5
4.-Tapar los tubos y mezclar los componentes golpeando
2.-Observar cuidadosamente que los 10 l de la muestra se
encuentren en el fondo del tubo, si se encuentra dispersa en la
suavemente los tubos con el dedo, posterior a la agitacin,
paredes del mismo, con la ayuda de una centrfuga, dar un pulso proceder como lo indica el punto 2.
para que todo el lquido quede en el fondo del tubo.

Golpear con el dedo

Microcentrfuga
3.-Pipetear 10 l de la mezcla de enzimas en el fondo de cada
tubo. Tener cuidado de cambiar la punta para cada muestra,
para evitar contaminacin.
5.-Colocar los tubos en una gradilla e incubar a 37 C por 45
minutos.
Nota: en este caso no se realizar pero si considerarlo
para la prctica original, ya que en este caso es solo una
simulacin

98
 negro (-) y que la base del gel est del lado del electrodo rojo
(+).

(-)

(+)
6.-Utilizando una pipeta diferente para cada muestra, aadir
10 l del amortiguador de carga en cada tubo. Cerrar los tubos
y mezclar los componentes golpeando suavemente con los
dedos y repetir lo indicado en el punto 2. 8.-Utilizando una punta de pipeta diferente para cada muestra,
cargar el gel de la siguiente manera:

Pozo 1: Marcador de peso molecular (PM)

Pozo 2: Sin muestra
Pozo 3: Verde EC= Escena del crimen
Pozo 4 : Azul S1= Sospechoso 1
Pozo 5: Naranja S2=Sospechoso 2
Pozo 6: Violeta S3=Sospechoso 3
Pozo 7: Rojo S4=Sospechoso 4
Pozo 8: Amarillo S5=Sospechoso 5

Nota: En el momento de depositar la muestra en el pozo,

tomar la micropipeta de manera normal (con la mano derecha)
y apoyar con la mano izquierda la punta de la micropipeta para
obtener mayor equilibrio, introducir la punta de la micropipeta
7.-Colocar un gel de agarosa en la cmara de electroforesis.
en el pozo de forma que no se rompa el gel, ya que de esta
Llenar la cmara con buffer de corrida hasta cubrir el gel,
manera el pozo se quedara vaco.
compruebe que los pozos del gel estn del lado del electrodo

99
Otra indicacin es que cuando la punta de la micropipeta se Hasta este paso se considera la simulacin de la prctica con
encuentre en el pozo irla subiendo poco a poco y al mismo el objetivo de obtener los siguientes resultados
tiempo dejar caer la muestra lentamente para que el espacio
que ocupa la punta no obstruya el espacio del pozo y la
muestra no salga del mismo. Tratar de no contaminar los
pozos con las otras muestras a la hora de cargar el gel.

PM EC S1 S2 S3 S4 S5

Nota: Considerar que el patrn puede ser modificado.

Referencias
1. Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting Kit
Instruction Manual BIORAD.

100
 Prctica 10
Huella gnica
Tiempo de prctica: 3 hora
Objetivos
1. Que el estudiante conozca la aplicacin de las tcnicas de
DNA recombinante.
2. Que el estudiante sea capaz de analizar e interpretar los
datos generados a partir de una prueba de huella gnica.
3. El alumno adquirir la capacidad de manejar muestras para
anlisis de cidos nucleicos.
4. El alumno desarrollar destreza en la interpretacin de
resultados de metodologas bsicas de anlisis molecular.
FUNDAMENTO
El DNA es un polmero lineal formado por
desoxirribonucletidos que contienen a las bases nitrogenadas
adenina, guanina, citosina y timidina. La interaccin de las
bases nitrogenadas por puentes de hidrgeno permite la
formacin de la doble cadena de DNA. Cada grupo fosfato
est unido al carbono 5 de una desoxirribosa y al carbono 3
de la otra desoxirribosa del nucletido contiguo.
Las cadenas se mantienen unidas por puentes de hidrgeno
entre las bases.
En la molcula de DNA reside la informacin gentica de un
organismo, especficamente en la secuencia de los
nucletidos, de tal manera que cada tres bases forman un
codn que corresponde a su vez a uno de los 20 aminocidos.
Hay un total de 64 codones, los cuales conforman el cdigo
gentico. En ciertas regiones del DNA una de las hebras tiene
la misma secuencia del RNA mensajero y se le llama hebra
sentido o codificante y a la complementaria hebra antisentido
o molde. La hebra que se transcribe para dar al RNAm es la
antisentido o hebra molde.
Algunas de las secuencias de nucletidos no
codificantes se caracterizan por ser cortas, estar alineadas en
tndem y repetirse miles de veces de manera constante a lo
largo del DNA. Un ejemplo de esta secuencia puede ser la
siguiente: ATTCGGTATTCGGTATTCGGT. A estas
secuencias se les denomina STR por sus siglas en ingls
(Short Tandem Repeat). El genoma eucaritico contiene
muchas de estas secuencias de DNA, y se ha visto que el
nmero de unidades repetidas presenta diferencias de
individuo a individuo, por lo que se consideran como las
huellas digitales. En el caso de gemelos idnticos estas
secuencias son idnticas. Estas regiones pueden ser aisladas
del DNA con enzimas de restriccin apropiadas y separadas
de acuerdo a su longitud mediante electroforsis en gel.
Cuando se completa el proceso de separacin, el resultado se
parece a un cdigo de barras de un envase de supermercado.
Este cdigo de barras de DNA huella gnica, ha permitido
esclarecer algunos hechos criminales y pruebas de
paternidad, a la cual se denomina tcnica de Huella gnica
101
 Es muy frecuente que en la escena de un crimen se
encuentren, en pequeas cantidades, muestras de naturaleza
biolgica como son la sangre, la saliva, la piel, el msculo, el
cabello, el semen, los dientes y el hueso, entre otros, a partir
de las cuales se puede extraer el DNA.
Un mtodo que permite tomar una pequea cantidad
de DNA y en pocas horas sintetizar millones de copias de una
regin del mismo, es el conocido como PCR (reaccin en
cadena de la polimerasa), el cual fue desarrollado por K. Mullis
(1990). En este mtodo se requiere conocer la secuencia de
nucletidos de los extremos del fragmento que se desea
amplificar. Estas secuencias se usan para disear
desoxioligonucletidos sintticos de DNA complementarios a
cada uno de estos extremos de la cadena de la doble hlice
(CEBADOR). La muestra de DNA se coloca en una solucin
que contiene una DNA polimerasa, grandes cantidades de los
cuatro y los dos desoxioligonucletidos sintetizados
previamente. El mtodo se basa en un ciclo de tres reacciones
sucesivas: en la primera reaccin, la solucin se calienta para
que el molde de DNA se separe en sus dos cadenas. En la
segunda reaccin, la temperatura se reduce para permitir que
los desoxioligonucletidos se apareen por complementariedad
de bases con el DNA molde y en la tercera reaccin, la DNA
polimerasa cataliza la sntesis simultnea de las dos cadenas
a partir de cada desoxioligonucletido que acta como
cebador. Al cabo del primer ciclo de tres reacciones, el
fragmento de DNA elegido se ha duplicado y por lo tanto, la
cantidad de DNA molde disponible para el segundo ciclo es
doble.
La obtencin de mltiples copias requiere 20 a 40
ciclos. El xito de esta tcnica radica en el uso de una DNA
polimerasa termoestable, que no se desnaturaliza por los
repetidos ciclos de calentamiento. Esta enzima se aisl
originalmente de la bacteria termfila Thermus aquaticus.
La base de la tcnica conocida como huella gnica se
basa en las diferencias individuales de estas secuencias.
Generalmente se trata de cambios en un solo par de bases
pertenecientes a diferentes individuos, que se presentan una
vez cada 500 a 1,000 pares de bases, como promedio.
Referencias
1. Curtis, H; Barnes, N; Biologa. Sexta edicin. Editorial
Mdica Panamericana.
2. Lewin, B; Genes VI. Editorial Oxford.
Nelson, D; Cox, M; Lehninger. Principios de Bioqumica.
Tercera edicin. Ediciones Omega.
3. Yuri Sivolap, Ph.D., G. Krivda, Ph.D., N. Kozhuhova., S.
Chebotar., and Mark Benecke, PH.D. A Homicide in the
Ukraine. DNA-based identification of a Boiled, Skeletozined,
and Varnished Human Skull, and of Bone Fragments Found in
a Fireplace. The American journal of Forensic Medicine and
Pathology. 22 (4): 412-414 ,2001.
4. Lennie Pineda Bernal. El anlisis de DNA para pruebas de
paternidad e identificacin forense. Acta Cientfica
Venezolana. 50: 24-28, 1999.
5. Andra Carla de Souza Ges, Dayse Aparecida da Silva,
Cristiane Santana Domingues, Joo Marreiro Sobrinho, Elizeu
102
Fagundes de Carvalho. Identification of a criminal by DNA
typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. So Paulo
Medical Journal. Revista Paulista de Medicina. 120 (3): 77-80,
2002.

6. Centre for Genetics Education. Genetic Testing and

Screening II Forensic and Other Applications. Directory of
Genetics Support Groups, Services and Information. Genetics.
235-239, 2004-2005.

7. Jeffreys Alec Genetic Fingerprinting Naure Medicine Vol

11(10).1035-1039. 2005.

8. Mullis K.B the Unusual Origen of the Polymerase Chain

Reaction Science Am. 262 (4) 56-65. 1990.

103
SESIN 1 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA DE
HUELLA GNICA
ESCENA DEL CRIMEN
El crimen se lleva a cabo en la calle Lago Manitoba No.
520, Col. Ampliacin Granada, Delegacin Miguel Hidalgo. En
el sof de la sala se encuentra el cuerpo de la duea de la
casa, una mujer de 42 aos de edad. El cadver presenta
signos de estrangulamiento pero sin marcas de sogas o
cinturones; tampoco se encuentran huellas digitales en su
cuello. La vctima presenta una lesin defensiva en el brazo
derecho con arma punzo cortante. En el sof se observan
varias manchas de sangre, algunas de ellas secas. Las ms
abundantes todava estn frescas. Se ignora si la sangre
pertenece a la vctima o a sus agresores.
El laboratorio forense se encarga de recopilar la
informacin de la escena dando a conocer los siguientes
aspectos: el cuerpo de la vctima se descubri 20 minutos
despus del asesinato. Presentaba un golpe en la cabeza, y
haba seales de forcejeo en su brazo; debajo de las uas se
encuentran depositados restos de piel, sangre, y de cabellos.
Algunos de ellos presentan folculos. Todo seala que la
vctima forceje con su o sus agresores.
En el lugar tambin se hall un florero con restos de sangre, la
cual no se sabe es de la vctima o de los agresores. En un
extremo del sof se encuentra una pieza dental y, debido a
que la vctima conserva su dentadura completa, es probable
que el diente sea del victimario. En el brazo izquierdo, la
victima presenta varias mordidas, algunas con sangre
coagulada y otras con restos de saliva mezclados con sangre
.
En el interior de la casa faltan algunas piezas de valor,
lo que sugiere que el mvil fu el robo.
La polica cuenta con varios sospechosos, entre los que se
encuentra el esposo, con el cual la vctima tuvo una discusin
la noche anterior. Se desconoce el tema de la discusin y el
paradero del esposo. Otros sospechosos son los dos
repartidores del gas, que una hora antes haban
proporcionado el servicio. Uno de ellos tiene problemas con la
dentadura y aclara que se encuentra en tratamiento dental, ya
que ha presentado sangrado y prdida de algunas piezas
dentales. Los otros sospechosos son los dos empleados de la
casa, el jardinero, que tiene una antigedad de 4 aos y
presenta una lesin en el brazo que confiesa se hizo
arreglando el jardn, y la cocinera, quien tiene slo 3 meses
laborando en la casa.
Con esta evidencia se compara el DNA de cada sospechoso
para encontrar al culpable o culpables del crimen, por lo que
debe determinar si las muestras de sangre, cabellos, pieza
dental y saliva sirven para estudiar el DNA y establecer las
caractersticas que permitan utilizar alguna o todas las
muestras para el estudio.
Cada equipo debe escoger alguna de las evidencias
previamente descritas y justificar su eleccin.
Para realizar la comparacin entre el DNA encontrado
en la escena con el DNA de los sospechosos deben contarse
con muestras proporcionadas por los mismos. Mencione de
dnde obtendra dicho material. En el caso del esposo debe
tenerse en cuenta que no se conoce su paradero, por lo cual
la muestra debe ser extrada de algn objeto de uso personal;
defina cul sera ste y justifique la eleccin del mismo.
104
 - Recipiente con hielo.
- Microcentrfuga
SESION 2 DE LABORATORIO PARA LA PRCTICA
HUELLA GNICA PROCEDIMIENTO
MATERIAL 1.- Cada uno de los microtubos de colores que se les
- DNA de la escena del crimen con amortiguador. proporcionen ya contienen los 10 l de la muestra:
- DNA del sospechoso 1 con amortiguador.
- DNA del sospechoso 2 con amortiguador. a) Tubo verde (muestra de la escena)
- DNA del sospechoso 3 con amortiguador. b) Tubo azul (sospechoso 1)
- DNA del sospechoso 4 con Amortiguador. c) Tubo naranja (sospechoso 2)
- DNA del sospechoso 5 con amortiguador. d) Tubo violeta (sospechoso 3)
- Mezcla de enzimas de restriccin EcoRI/Pstl, 1800 U. e) Tubo rojo (sospechoso 4)
- Agua estril, 2.5 ml. f) Tubo amarillo (sospechoso 5)
- Marcador de DNA de fago lambda digerido con Hind III
0.2g /l, 100 l. 2.-Colocar los microtubos marcados en la gradilla.
1.- 23,130 pb
2.- 9,416 pb 3.-Adicionar 10 l de la mezcla de enzimas de restriccin a
3.- 6,557 pb cada uno de los tubos que contienen la muestra de DNA. Se
4.- 4,361 pb debe tener cuidado de no contaminar la mezcla de enzimas,
5.- 2,322 pb por lo cual se sugiere el empleo de una punta nueva por cada
6.- 2,027 pb tubo.
- Colorante de DNA (Biorad biosafe).
- Microtubos de colores. Muestras Enzimas de Volumen total
- Microtubos blancos. de DNA restriccin de la
EcoRI y reaccin
- Geles de agarosa al 1.0%.
PstI
- Amortiguador de electroforesis TAE (Tris-Acetato-EDTA).
Muestra de la 10 l 10 l 20 l
Tris-base 39 mM, cido actico glacial 18 mM, EDTA 10 mM. escena
- Amortiguador de carga Sospechoso 1 10 l 10 l 20 l
- Gradillas para microtubos. azul
- Recipiente para teir geles. Sospechoso 2 10 l 10 l 20 l
- Pipeta automtica de 10-100 l. naranja
- Puntas para pipetas automticas. Sospechoso 3 10 l 10 l 20 l
- Marcador indeleble. violeta
- Fuente de poder. Sospechoso 4 10 l 10 l 20 l
- Cmara horizontal de electroforesis. rojo
- Parrilla para bao mara. Sospechoso 5 10 l 10 l 20 l
- Vaso de precipitado de 300 ml. amarillo

105

4.-Cierre los microtubos y mezcle la muestra golpeando
suavemente los tubos con los dedos. Si se cuenta con una
microcentrifuga aplique un pulso de 2 segundos para
asegurarse que toda la muestra se quede en el fondo del
microtubo, permitiendo que se mezcle adecuadamente y se
lleve a cabo la reaccin.
5.-Coloque los microtubos en la gradilla e incbelos a 37C
por 30 minutos.
6.-Transcurrido el tiempo de incubacin, adicione 10 l del
amortiguador de carga a cada tubo tpelos y agtelos
suavemente con los dedos.
7.-Coloque en la cmara de electroforesis el gel de agarosa,
teniendo cuidado que los pozos se encuentren orientados
hacia el ctodo [polo negativo (terminal negra)].
8.-Adicione 275 ml del amortiguador de corrida o lo que se
requiera para que se cubran los pozos.
9.-Coloque 10 l de las muestras en el gel empleando una
punta nueva para cada muestra, las cuales se depositan de
izquierda a derecha en el siguiente orden:
a) Carril 1: marcador de peso molecular, HindIII,10 l
b) Carril 2: escena del crimen verde, 10 l
c) Carril 3: sospechoso 1 azul , 10 l
d) Carril 4: sospechoso 2 naranja, 10 l
e) Carril 5: sospechoso 3 violeta, 10 l
f) Carril 6: sospechoso 4 rojo, 10 l
g) Carril 7: sospechoso 5 amarillo, 10 l
10.-Cierre la cmara de electroforesis y asegrese que
concuerden las terminales rojo con rojo y negro con negro.
Conecte la cmara a la fuente de poder, manteniendo la
orientacin de las terminales.
11.-Encienda la fuente de poder. Ajuste el voltaje a 120 V y
realice la electroforesis por 40 60 minutos.
12.-Detenga la electroforesis cuando el colorante muestra
llegue a una distancia aproximada de 2 cm del final del gel.
Apague la fuente de poder, remueva la tapa y retire
cuidadosamente el gel.
13.-Coloque en una charola 120 ml de la solucin teidora
100X y el gel, asegurndose que se encuentre sumergido en
la solucin. Tia los geles por 2 minutos y recupere el
colorante en el envase original.
14.- Despus se deben colocar los geles en una charola que
contenga 500700 ml de agua limpia y caliente (40-55C),
agite suavemente el gel por aproximadamente 10 segundos y
retire el agua, realizar los lavados que sean necesarios con
agua limpia, hasta la aparicin de las bandas de DNA para
poder hacer la comparacin de las muestras.
Referencias
1. Biotechnology Explorer DNA Fingerprinting Kit
Instruction Manual BIORAD.
106
 Cortar en pequeas
piezas con enzimas -ve Ms
de restriccin grandes

DNA total Fragmentos

de una de DNA en el
persona gel Ms
pequeas

+ve

Fragmentos separados y
transferidos a membrana
de nylon

107
APENDICE

108
SOLUCIONES concentracin individual de cada in, las condiciones prximas a la
normalidad fisiolgica.
Para el tratamiento de los pacientes en la clnica se utilizan
bsicamente 2 familias o grupos de soluciones: cristaloides y Concentracin normal de electrlitos
coloides. En el grupo de cristaloides se encuentran soluciones
con base en dextrosa, soluciones con base en el contenido de Plasma Lquido
cloruro de sodio y otros lquidos incluyendo Lactato de Ringer. La intersricial
Electrlito mg/dl meq/l meq/l
concentracin de electrolitos, tonicidad y osmolaridad pueden Cationes
variar segn cada formulacin (Tabla 1). En la familia de los Sodio 326.0 142.0 144.0
coloides se encuentran la albumina, almidones, dextranes y Potasio 16.0 4.0 4.0
gelatinas . Calcio 10.0 2.5 2.5
Magnesio 2.5 1.5 1.5

Aniones
Cloro 362.0 103.0 114.0
Bicarbonato 60.0 25.0 30.0
Fosfato 3.5 2.0 2.0
Sulfato 1.5 1.0 1.0
cidos 15.0 5.0 5.0
orgnicos
Protenas 7000.0 14.0 0.0

Tabla 1. Composicin de soluciones parenterales comerciales

Pero no solamente el manejo de soluciones se encuentra dentro

de la clnica sino que en el laboratorio, el trabajo con rganos
aislados tambin exige la preparacin de un medio artificial
(solucin fisiolgica) que rena en el aspecto osmtico y en la

109
INSTRUCCIONES PARA EL USO DEL
MICROSCOPIO MARCA LEICA 9. Gire el revlver hasta situar el objetivo 4X en la posicin
de trabajo. (pg. 50)
1. Nunca use un adaptador entre el cable y la fuente de
alimentacin. 10. Suba la platina girando el mando de enfoque
macromtrico hasta que observe la preparacin y,
2. Use siempre el microscopio sobre una superficie dura y finalmente, enfoque la muestra con precisin utilizando el
estable. mando de enfoque micromtrico.

3. Conecte el cable de alimentacin del microscopio a una
toma de corriente con conexin a tierra. Se suministra un
cable de tres terminales con toma a tierra.
4. Encienda el microscopio girando el interruptor de control
de la iluminacin situado en la parte inferior izquierda del
instrumento.
11. Ajuste los tubos oculares a la distancia de los ojos.
12. Al trmino del uso del microscopio retirar la muestra de
la platina.
13. Bajar la platina hasta el tope y regresarla a su posicin
original si es necesario.

5. Coloque el interruptor de control de la iluminacin en el 14. Colocar el revolver de los objetivos de manera que el
nivel ms bajo. El control de iluminacin le permite ajustar objetivo de 4X sea el que quede en direccin de la lmpara.
la intensidad de luz.
15. Desconectar el equipo y enrollar el cable.
6. Abra completamente el diafragma de apertura del
condensador girando el anillo hacia el extremo derecho. 16. Limpiar la platina y oculares con un pao humedecido
con metanol o con un limpia cristal comercial.
7. Usando el botn de enfoque del condensador, suba el
condensador hasta el extremo superior de su 17. Colocar al microscopio la funda contra el polvo para
desplazamiento. Iluminacin critica nicamente: si el mantenerlo en buenas condiciones fsicas y mecnicas.
desplazamiento del condensador es excesivo, limtelo con
el tornillo situado debajo de la platina hasta que la lente
superior del condensador se encuentre debajo de la
superficie de la platina.

8. Coloque la preparacin de la muestra con la muestra en

la platina.

110
 1 Partes del microscopio:

2 1) Oculares.
2) Revolver con 4 objetivos 4X, 10X, 40X y 100X.
3) Platina.
4) Diafragma.
6 5) Lmpara.
6) Tornillo de la platina para desplazar la muestra.
7) Interruptor de control de la iluminacin.
8) Tornillo macromtrico.
9 3
9) Tornillo micromtrico.

4
8

7 5

111
 intento de apreciar mayor exactitud es innecesario, pues
Instrucciones para la operacin del fotocolormetro la construccin del instrumento no proporciona una
Klett-Summerson precisin mayor.
1. Antes de encender el fotocolormetro cercirese que el 7. Contine con la lectura de otros problemas y, de vez en
filtro (F) est en su sitio. La luz sin el filtro puede daar cuando, compruebe el cero con el blanco.
la fotocelda.
2. Asegrese que la aguja indicadora (C) est en cero. En
caso contrario, ajstese a cero con la perilla (D) que slo
debe usarse cuando la lmpara del colormetro est
apagada.
3. Ajuste la escala del potencimetro (B) a cero usando la
perilla (A).
4. Ponga una cubeta limpia llena con el blanco de reactivos
en el hueco del instrumento en tal forma que la marca
del tubo (ej. Pyrex) se site directamente al frente. Es
una buena prctica limpiar la superficie externa de la
cubeta con un pauelo desechable antes de cada
lectura. Slo deben usarse tubos seleccionados como
"cubetas" para las determinaciones.
5 Por medio de la perilla (G) ajuste la lectura del
galvanmetro a cero; esto es, la aguja (C) debe coincidir
con el trazo central y, al mismo tiempo, con la escala (B)
en cero.
6. Para leer las soluciones problema retire el blanco y
ponga en el hueco del instrumento la cubeta con la
solucin problema. La aguja (C) se desviar de su
posicin en la lnea de cero; por medio de la perilla (A)
grese la escala (B) hasta que la aguja (C) sea llevada
exactamente a cero. La lectura de la escala (B) se anota
y corresponde a la lectura del problema; lase
nicamente hasta la marca ms prxima. Cualquier

112
 Lancetas
USO DE GLUCOMETRO

Partes del glucmetro

Paso 1.
Inserte una tira reactiva en
el puerto de anlisis, con
las barras de contacto de
primero y mirando hacia
arriba.
Introdzcala firmemente
hasta que no avance ms.
El medidor se encender y
aparecern brevemente
todos los segmentos de la
pantalla. Luego aparecer
el nmero de cdigo,
seguido por el smbolo y
mg/dL.

113

Paso 2. Aplique la muestra.
Obtenga una gota de
sangre utilizando el
dispositivo de puncin. La
muestra de sangre debe
tener al menos un microlitro
(1 l) de volumen (gota de
sangre en tamao real)
para llenar la ventana de
confirmacin.
Mantenga la gota de
sangre en el borde superior
de la tira reactiva hasta que
la ventana de
confirmacin est
completamente llena de
sangre, antes de que el
medidor comience la
cuenta regresiva. Si la
ventana de confirmacin no
se hubiera llenado por
completo antes de que el
medidor comience la
cuenta regresiva, no aada
ms sangre a la tira
reactiva; deseche la tira y
comience de nuevo la
prueba
Paso 3
El resultado de la prueba
de glucosa de su sangre
aparecer despus de que
el medidor cuente en forma
regresiva de 5 a 1.
MENSAJES ESPECIALES
Si el resultado de su
prueba es inferior a 20
mg/dL, aparecer lo (Bajo)
en la pantalla del medidor.
Esta condicin podra
indicar una hipoglucemia
grave. Aunque este
mensaje podra deberse a
un error de la prueba
114
Si el resultado de su PASO 1. Coloque el
prueba es superior a 600 instrumento sobre
mg/dL, aparecer una superficie plana y sin
h1 (Alto) en la pantalla del vibraciones, a continuacin
medidor. encindalo presionando el
Esto podra indicar una botn.
hiperglucemia grave (alto
contenido de glucosa en PASO 2. Asegrese de que
sangre). la pantalla est iluminada.

Es importante desechar con mucho cuidado la lanceta

usada luego de cada uso, con el fin de evitar que se
produzcan lesiones accidentales con las puntas de las PASO 3. Con la tapa
lancetas. Las tiras reactivas y las lancetas usadas cerrada, introduzca la tira
posiblemente se consideren en su rea como un de codificacin, hasta el
desecho de riesgo biolgico. tope y luego retrela de
inmediato.

PASO 4. Si la codificacin se ha realizado correctamente,

USO DEL ACCUTREND el
instrumento emitir un breve pitido. Si se ha producido
un error, repita el proceso transcurridos unos
segundos.

PASO 5. Extraiga una tira

reactiva del tubo y cirrelo
de inmediato para evitar
que el desecante pierda su
efecto.

115
PASO 6. Sujete la tira reactiva segn se indica e
introdzcala a hasta el tope. Si la tira se ha introducido PASO 10. Para la
correctamente, el aplicacin de la muestra de
instrumento emitir dos pitidos. sangre fuera del
instrumento:
PASO 7. Abra la tapa de la Extraiga la tira reactiva y
cmara de medicin. deje la tapa abierta. Aplique
la
sangre directamente desde
el lugar de la puncin.
NO toque la zona de
aplicacin con la piel.
PASO 8. Utilice el dispositivo de puncin, para obtener una
muestra de sangre del dedo o del lbulo de la oreja PASO 11. Vuelva a
introducir la tira reactiva en
PASO 9. Para la aplicacin el instrumento y cierre la
de la muestra tapa.
de sangre en el
instrumento:
Aplique la gota de sangre
directamente en la zona de
aplicacin amarilla de la tira
reactiva, la zona amarilla
debe quedar
completamente cubierta.
NO toque la zona de
aplicacin con el dedo.
NO aplicar una segunda
gota. La sangre debe
aplicarse en un espacio de
15 segundos tras la
puncin para evitar un
resultado incorrecto debido
al inicio de la coagulacin.

116
 mg/dL
VALORES DE REFERENCIA Microalbuminuria Negativo

Glucosa 70 -105 Fibringeno 180 - 350

mg/dL mg%
Urea 6 - 20 Saturacin de trasferrina 20 - 50
mg/dL %
Creatinina 0,7 - 1,5 Fijacin del hierro 250 - 410
mg/dL g/dL
Depuracin de Hombres 97 - 137 Colesterol 140 - 200
Creatinina mL/min/1,73m2 mg/dL
Mujeres 88 - 128 HDL Hombres 55
mL/min/1,73m2 mg/dL
cido rico Hombres 3,4 - 7,0 Mujeres 65
mg/dL mg/dL
Orina 250 - 750 LDL 130
mg/24 h mg/dL
Protenas totales LCR 6,6 - 8,7 Triglicridos 80 - 150
mg/dL mg/dL
Orina 28 - 15 - 45 Lpidos totales 400 - 800
141 mg/24H mg/dL mg/dL
1,0 - 15,0 Fosfolpidos 150 - 200
mg/dL mg/dL
Albmina 3,5 - 5,5 Fructosamina Hasta 285
mg/dL mol/L
Bilirrubina Total 0,32 - 1,08 Hb Glicosilada Total Total 5,3 - 9,0
mg/100 mL %
Conjugada 0,10 - 0,50 Hb Glicosilada A1C A1C 4-5
mg/100 mL %
No 0,08 - 0,72 ELECTROLITOS PACIENTE RANGOS
conjugada mg/100 mL S UNIDADES
Globulina 1,46 - 2,54 Calcio inico 4,0 - 5,4
mg/dL mg/dL
Mucoprotenas 1,9 - 4,9 Calcio Orina 8,8 - 11,0

117
 mg/dL U/L
60 - 180 TGO, transaminasa 10 - 34
mg/24 h glutmico-oxalactica U/L
Hierro srico 250 -460 (Sinn: AST, aspartato
g/dL aminotransferasa)
Sodio Orina 40 - 220 TGP, transaminasa 5 - 59
mg/24 h glutmico-pirvica U/L
Sangre 136 -145 (Sinn.: ALT, alanino
mEq/L aminotransferasa)
Potasio Sangre 3,6 - 5,5 Colinesterasa 1000 - 4000
mmol/L U/L
Cloro Orina 98 - 107 Deshidrogenasa lctica 210 - 420
mmol/L DHL U/L
110 - 250 CPK Hombres 24 - 195
mg/24 h U/L
Fsforo Nios 3,0 - 7,0 Mujeres 24 - 170
mg/dL U/L
Adultos 2,5 - 4,8 Gamma GT 0 - 51
mg/dL Ul/L
Orina 340 - 1000 Aldolasa Hasta 5,7
mg/24 h U/L
Amilasa Hasta 95
U/L
Lipasa 10 -150
U/L
Fosfatasa cida total Hombres Hasta 6,50
U/L
Mujeres Hasta 5,50
U/L
Fosfatasa cida Hasta 2,6
prosttica U/L
Fosfatasa alcalina Adultos 98 - 279
U/L
Nios 151 - 471

118
 Colaboradores

scar Flores Herrera (figuras: ciclo energtico, vas que siguen los
protones en las levaduras, ciclo de Krebs y esquema de un
OBJETIVOS DEL CURSO
potencimetro).
Guillermo lvarez Llera
Patricia del Arenal Mena Alberto Hamabata Nishimuta (aspectos bsicos de fisicoqumica, niveles
Alicia Cea Bonilla de regulacin de la expresin gentica).
Leonor Fernndez Rivera Ro
Noem Meraz Cruz (sntesis y degradacin de fosfolpidos, regulacin del
Rebeca Miln Chvez
metabolismo de lpidos).
Sara Morales Lpez
Celia Virginia Snchez Meza Rebeca Miln Chvez (equilibrio hidroelectroltico).

Sara Morales Lpez (agua, qumica y metabolismo de carbohidratos,

SYLLABUS
Guillermo lvarez Llera (agua, ciclo de Krebs, oxidacin de los
aminocidos, qumica y metabolismo de carbohidratos, qumica y
metabolismo de lpidos).
Patricia del Arenal Mena (ciclo celular).
Alicia Cea Bonilla (fundamentos del metabolismo, protenas, enzimas y
coenzimas, estructura de carbohidratos, metabolismo de
carbohidratos, regulacin de la glucemia, regulacin del metabolismo
de lpidos, sntesis y degradacin de fosfolpidos, regulacin e
integracin metablica, biologa molecular).
Leonor Fernndez Rivera Ro (nucletidos).
qumica y metabolismo de lpidos).
Celia Virginia Snchez Meza (tabla peridica, enlaces, fundamentos del
metabolismo, equilibrio hidroelectroltico, protenas, radicales libres,
descarboxilacin del piruvato, regulacin de la glucemia, sntesis y
degradacin de fosfolpidos, metabolismo del colesterol, estructura y
metabolismo de las lipoprotenas, regulacin del metabolismo de
lpidos).
Hayde Torres Guerrero (modificaciones postraduccionales).
Ada Uribe Medina (caractersticas de la materia viva).
Alejandro Zentella Dehesa (virus, oncogenes y transformacin).

119
 7. Integracin Metablica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores
INTRODUCCIN AL MANUAL DE PRCTICAS Robles.
DE LABORATORIO
8. Examen General de Orina (EGO). Rebeca Miln Chvez y Eugenia
Flores Robles.
Alicia Cea Bonilla (potenciometra y electroforesis).
Rebeca Miln Chvez (gota). 9. Pipeteo. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores Robles.
Celia Virginia Snchez Meza. 10. Huella gnica. Rebeca Miln Chvez y Eugenia Flores Robles.

La revisin y la actualizacin de los Objetivos del curso se realiz en

ELABORACIN O REVISIN DE LAS PRCTICAS
colaboracin con el proyecto: Mejoramiento de la Enseanza de la
DE LABORATORIO
Bioqumica y Biologa Molecular (EN-206603) del Programa de Apoyo a
Proyectos Institucionales para el Mejoramiento de la Enseanza
1. Soluciones. Celia Virginia Snchez Meza y Rebeca Miln Chvez.
(PAPIME), siendo el responsable del proyecto el doctor Federico
2. Regulacin del equilibrio cido-base despus de ejercicio muscular Martnez Montes.
intenso y de la ingestin de bicarbonato de sodio. Concepcin
Gonzlez Lpez, Celia Virginia Snchez Meza y Juan Luis Rendn Correccin y cuidado de la edicin: Juan Pablo Pardo Vzquez,
Rebeca Milln Chvez, Eugenia Flores Robles.
Gmez.

3. Cintica enzimtica. Efecto de la concentracin del sustrato en la

velocidad de la reaccin enzimtica. Celia Virginia Snchez Meza,
Rebeca Miln Chvez y Jess Antonio Oria Hernndez.

4. Estudio del bombeo de protones por levaduras; efecto de los

inhibidores de la cadena de transporte de electrones y de los
desacoplantes. Juan Pablo Pardo Vzquez y Federico Martnez
Montes.

5. Determinacin de glucosa en sangre total. Rebeca Miln Chvez y

Eugenia Flores Robles.

6. Determinacin de colesterol y lipoprotenas. Celia Virginia Snchez

Meza y Rebeca Miln Chvez.

120