LACTOSE & D-GALACTOSE

(Rapide)

NOTICE TECHNIQUE
Version notice : K-LACGAR 03/14
Se rfrer toujours la version de notice incluse dans le kit

Incluant une procdure pour lanalyse des

chantillons Low- Lactose Ou Lactose-Free
contenant des fortes teneurs en monosaccharides.

(Format Rapide)
(115 T e s t s p a r K it)

Votr e i nter loc ute ur

LIBIOS
8 3 R u e E d m o n d M i c h el e t ,
69490 Pontcharra Sur Turdine, FRANCE
Tl : +33 (0)4 74130302 Fax : +33 (0)4 74052825
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Brevets : US 7,785,771 B2 et EP1 828 407 (GB, FR, IE, DE)

Megazyme International Ireland 2014

INTRODUCTION :
Le lactose, un glucide du lait, est un disaccharide qui comprend le
D-glucose et le D-galactose. Il est secrt par les glandes
mammaires des femelles de diffrentes espces de mammifres et est
prsent dans leur lait. Labsorption du lactose dpend de la prsence de
lactase (-galactosidase) (enzyme prsente dans le suc gastrique) qui
hydrolyse le lactose en D-glucose et D-galactose. Le lactose non absorb
est ferment par la flore qui produit de lacide lactique, des acides gras
courte chane, de lhydrogne et pour certains du mthane. Lorsque les
capacits de fermentation de la flore sont dpasses apparaissent des
douleurs et des diarrhes, cest ce que lon appelle Lintolrance au
lactose . Ces symptmes apparaissent 30 minutes 2 heures aprs la
consommation daliments ou boissons contenant du lactose. Les individus
qui perdent lactivit lactase intestinale durant leur dveloppement ne
peuvent plus digrer le lait et sont considrs intolrants au lactose. Entre
30 et 50 millions damricains sont intolrants au lactose, certaines
populations thniques tant plus largement affectes que dautres. 75%
dafro-amricains et indiens dAmrique et 90% damricains dorigine
asiatique sont intolrants au lactose. Environ 70% des individus perdent
lactivit lactase durant leur dveloppement (Mah, 1996).
Les mthodes enzymatiques de dosage du lactose sont bien connues et
sont gnralement bases sur lhydrolyse du lactose en D-galactose et D-
glucose par la galactosidase, suivie par la dtermination du D-
galactose ou du D-glucose.
La mthode (79B:1991) de la Fdration Internationale de Laiterie pour la
dtermination de la teneur en lactose dans le lait en poudre, mlanges
secs pour crmes glaces et fromages fondus comprend une
dprotinisation des chantillons et une hydrolyse du lactose et puis
dosage enzymatique par la voie du D-glucose libr ou par la voie du D-
galactose libr.
La dtermination de la teneur en lactose par la voie du D-galactose libr
est gnralement plus fiable que par la voie du D-glucose libr car les
prparations contiennent gnralement plus de D-glucose libre que du D-
galactose libre.
Les kits enzymatiques pour la dtermination du D-galactose sont trs
lents. Ceci est d un taux faible de mutarotation naturelle entre les
formes - et - du D-galactose. Seule la forme - est reconnue par la -
galactose dshydrognase. Dans des incubations contenant NAD+, D-
galactose et -galactose dshydrognase, il y a une augmentation initiale
trs rapide de labsorbance en raison de la consommation de -D-
galactose et ceci est suivi par une approche trs lente jusquau point-final.
Cette approche trs lente rsulte dun taux trs faible de mutarotation
chimique du -D-galactose vers -D-galactose. En utilisant la technologie
dveloppe et brevete par Megazyme, une galactose mutarotase est
incorpore dans le kit K-LACGAR afin de catalyser rapidement cette
2
tape du taux faible de mutarotation. Le temps danalyse est trs rapide :
5 minutes approximativement temprature ambiante (Figure 1).
En plus du dosage de lactose dans des chantillons normaux , le
kit K-LACGAR est aussi appropri pour le dosage de lactose dans
les chantillons low-lactose ou lactose-free contenant des
fortes teneurs en monosaccharides (voir Procdure B, page 9).

PRINCIPE :
Dans cette procdure dcrite (une modification de la mthode
AOAC 984.15; lactose dans le lait) le lactose est hydrolys en D-
galactose et D-glucose par les -galactosidase d Aspergillus niger
pH 5.0 (1).
(-galactosidase)
(1) Lactose + H2O D-galactose + D-glucose

Linter-conversion des formes - e t - du D-galactose est catalys

par la galactose mutarotase (GalM) (2).

(GalM)
(2) -D-Galactose -D-galactose

Le -D-galactose est oxyd par le NAD+ en acide D-galactonique en

prsence de -galactose dshydrognase (-GalDH) pH 8,6 (3).

(-GalDH)
(3) -D-Galactose + NAD+ acide D-galactonique + NADH + H+

La quantit de NADH forme au cours de cette raction est

stchiomtrique avec la quantit de lactose. Cest le NADH q u i
est mesur par laugmentation de labsorbance
340nm.

SPECIFICITE, SENSIBILITE, LINEARITE ET PRECISION :

Les dosages sont spcifiques du lactose et D-galactose. La plus faible
absorbance permettant une diffrentiation dans ce dosage est de 0,010 units
dabsorbance. Cela correspond 1,48 mg/L de lactose (ou 0,74 mg de D-
galactose/L) de solution chantillon au volume maximal de 1,00 mL. La
limite de dtection est de 2,96 mg de lactose/L, drive dune diffrence
dabsorbance de 0,020 pour le volume maximal dchantillon de 1,00 mL.
Le dosage est linaire sur une gamme allant de 4 80 g de D-galactose
(ou 8 160 g de lactose) par dosage. Dans les dosages en duplicat
dune solution chantillon, une diffrence dabsorbance entre 0,005 et
0,010 est possible. Avec un volume dchantillon de 1,00 mL, cela
correspond une concentration de lactose denviron 0,74 1,48 mg/L de
solution chantillon. Si lchantillon est dilu durant sa prparation, le
3
rsultat est multipli par le facteur de dilution, F. Si, lors de la prparation
de lchantillon, lchantillon est pes, par exemple 10 g/L, une diffrence
de 0,02 0,05 g/100g peut tre attendue.

INTERFERENCES :
Si, lissue des 10 minutes temprature ambiante, la conversion du D-
galactose est termine, on peut gnralement conclure quaucune
interfrence ne sest produite. Cela peut toutefois tre vrifi en ajoutant
du D-galactose (environ 40 g dans 0,1 mL) dans la cuvette la fin de la
raction. Une augmentation significative de labsorbance doit tre
observe.
Les substances interfrentes prsentes dans lchantillon
analys peuvent tre identifies en incluant une rfrence
interne. Une rcupration (recouvrement) quantitative de cette
rfrence est attendue. Les pertes lies la manipulation et
lextraction de lchantillon sont identifies par la conduite
dexpriences de rcupration, c.--d. en ajoutant du lactose ou
D-galactose lchantillon lors des premires tapes
dextraction.
Afin de confirmer que le lactose est compltement hydrolys par
la -galactosidase, raliser lincubation pendant la dure
recommande et pendant le double de la dure recommande.
Les valeurs finales obtenues pour le lactose doivent tre les
mmes.
Comme les ions mtalliques bivalents inhibent la -galactose
dshydrognase utilise dans ce dosage, de lEDTA a t
incorpor dans le tampon 2.

SECURITE :
Les mesures gnrales de scurit applicables toutes les substances
chimiques doivent tre respectes.
Pour plus dinformations sur les mesures de scurit et de manipulation de
ce produit, se rfrer la fiche de scurit (MSDS) disponible sur notre site
web ou par simple demande.

COMPOSITION DES KITS :

Le kit K-LACGAR permet de raliser 115 dosages, incluant une

notice technique complte dutilisation, ainsi que :
Flacon 1 : Tampon (2,5 mL, pH 5,0).
Stable pendant > 2 ans 4C.
Flacon 2 : Tampon (25 mL, pH 8,6) plus EDTA et azoture de
sodium (0,02% m/v) jouant un rle de conservateur.
Stable pendant > 2 ans 4C.

4
Flacon 3 : NAD+.
Stable pendant > 5 ans -20C.
Flacon 4 : -Galactosidase suspension (1,2 mL).
Stable pendant > 4 ans 4C.
Flacon 5 : -Galactose dshydrognase plus galactose mutarotase
suspension, 2,4 mL.
Stable pendant > 2 ans 4C.
Flacon 6 : D-Galactose standard solution (5 mL, 0,4 mg/mL d ans
0,02% m/v azoture de sodium).
Stable pendant > 2 ans 4C.

PREPARATION DES SOLUTIONS/SUSPENSIONS DE

REACTIFS :
1. Diluer le contenu du flacon 1 avec 24 mL deau distille.
Utiliser cette solution pour diluer le contenu du flacon 4. Utiliser
immdiatement.
2. Le contenu du flacon 2 doit tre utilis tel quel.
Stable pendant > 2 ans 4C.
3. Dissoudre le contenu du flacon 3 dans 12 mL deau distille.
Stable pendant > 1 an 4C ou stable pendant > 2 ans
-20C. (Pour viter des cycles rptitifs de
conglation/dconglation, rpartir en aliquote de taille
approprie et conserver dans des tubes en polypropylne).
4. Transfrer le contenu du flacon 4 (1,2 mL) au 24 mL du
tampon dilu avec le flacon 1. Ceci est devenu
maintenant Solution 4. Rpartir en aliquote de taille
approprie et conserver dans des tubes en polypropylne
-20C entre les utilisations et maintenir au frais, si
possible, pendant son utilisation.
Stable pendant > 2 ans -20C.
5. Le contenu du flacon 5 doit tre utilis tel quel. Agiter le flacon
avant de louvrir la premire fois, afin dliminer les dpts
enzymatiques ventuellement prsents sur le bouchon en
caoutchouc. Conserver ensuite le flacon en position verticale.
Agiter le flacon pour mlanger le contenu avant utilisation.
Stable pendant > 2 ans 4C.
6. Le contenu du flacon 6 doit tre utilis tel quel.
Stable pendant > 2 ans 4C.

5
EQUIPEMENT (RECOMMANDE) :
1. Fioles jauges (50 mL, 100 mL et 500 mL).
2. Cuves jetables en plastique (trajet optique 1 cm, 3,0 mL).

3. Micropipettes, par exemple Pipetman Gilson
(20 L et 100 L).
4. Pipettes dplacement positif,

par exemple Multipette Eppendorf :

- avec Combitip de 5,0 mL (permettant de dlivrer des
aliquotes de 0,2 mL de -galactosidase dilue, tampon
1 et de 0,1 mL des aliquotes de solution NAD+).

- avec Combitip de 25 mL (permettant de dlivrer des
aliquotes de 2,0 mL deau distille).
5. Balance analytique.
6. Spectrophotomtre rgl 340 nm.

7. Mlangeur Vortex (par exemple, IKA Yellowline
Test Tube Shaker TTS2).
8. Chronomtre compte rebours.
9. Papier filtre W hatman N 1 (9 cm).

6
PROCEDURE A : (Procdure Standard)
Longueur donde : 340 nm
Cuve : trajet optique 1 cm (verre ou plastique)
Temprature : ~ 25C
Volume final : 2,72 mL
Solution chantillon : 4-80 g de D-galactose (ou 8-160 g de
lactose) par cuve (dans un volume
dchantillon de 0,20 1,00 mL)
Effectuer la lecture par rapport lair (sans cuve dans le trajet
optique) ou par rapport leau.

Lactose Galactose
Pipeter dans les cuves
Blanc Echantillon Blanc Echantillon

Solution chantillon - 0,20 mL - 0,20 mL

solution 4 (-Galactosidase) 0,20 mL 0,20 mL - -

Sassurer que toutes les solutions sont dlivres dans le fond de la cuve. Mlanger
dlicatement par agitation. Couvrir les cuves et les incuber 10 min. ~ 25C.
Puis ajouter :

Eau distille ( ~ 25C) 2,20 mL 2,00 mL 2,40 mL 2,20 mL

Solution 2 (tampon) 0,20 mL 0,20 mL 0,20 mL 0,20 mL
Solution 3 (NAD+) 0,10 mL 0,10 mL 0,10 mL 0,10 mL

Mlanger*, lire les absorbances des solutions (A1) aprs environ 3 min. et dmarrer
les ractions par addition de :

Suspension 5 (-GalDH/GalM) 0,02 mL 0,02 mL 0,02 mL 0,02 mL

Mlanger*, lire les absorbances des solutions (A2) la fin de la raction (< 5 min). Si la
raction nest pas termine au bout de 6 min. continuer lire les absorbances
toutes les minutes jusqu ce que les absorbances restent identiques sur 1 min.**.

* par exemple avec une spatule en plastique ou par dlicate

inversion aprs avoir scell la cuve au moyen dun bouchon
spcial ou de Parafilm.
** Si labsorbance A2 continue daugmenter, extrapoler labsorbance
au temps daddition de la suspension 5 (-GalDH/GalM).

CALCUL :
Dterminer les diffrences dabsorbance (A2-A1) pour les blancs et
les chantillons. Soustraire la diffrence dabsorbance du blanc de
la diffrence dabsorbance de lchantillon. Cela fournit (A) de
lchantillon de la manire suivante :
Dosage du D-galactose :
AD-galactose = (A2-A1)galactose chantillon - (A2-A1)galactose blanc

7
Dosage du lactose + D-galactose :
Alactose + D-galactose = (A2-A1)lactose chantillon - (A2-A1)lactose blanc

Dosage du lactose :
Alactose = Alactose + D-galactose - AD-galactose

Les valeurs AD-galactose et Alactose + D-galactose doivent, en rgle

gnrale, tre dau moins 0,100 units dabsorbance pour obtenir un rsultat
dune prcision suffisante. Cependant, dans le lait, la teneur en D-galactose
est trs faible.
La concentration du D-galactose et du lactose peut tre calcule comme suit :

c = V x MW x A [g/L]
x d x v
o :
V = volume final [mL]
MW = masse molculaire de la substance dose [g/mol]
= coefficient dextinction du NADH 340 nm
= 6300 [l x mol-1 x cm-1]
d = trajet optique [cm]
v = volume chantillon [mL]

Il sen suit pour le D-galactose :

c = 2,72 x 180,16 x AD-galactose [g/L]
6300 x 1 x 0,2
= 0,3889 x AD-galactose [g/L]
Pour le lactose :
c = 2,72 x 342,3 x Alactose [g/L]
6300 x 1 x 0,2
= 0,7389 x Alactose [g/L]
Si lchantillon a t dilu lors de sa prparation, le rsultat doit
tre multipli par le facteur de dilution, F.
Lors de lanalyse dchantillons solides et semi-solides pess
lors de leur prparation, la teneur (g/100 g) D-galactose ou
lactose est calcule partir de la quantit pese, de la manire
suivante :
= c [g/L solution chantillon] x 100 [g/100 g]
massechantillon [g/L solution chantillon]

REMARQUE : Pour faciliter ces calculs, il est possible de

tlcharger une feuille de calcul Mega-Calc disponible sur la
page du site internet prsentant le produit.

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PROCEDURE B : (Pour les chantillons low-lactose ou
lactose-free contenant des fortes teneurs en monosaccharides)
Etape 1 :
Ajouter 1 mL de lait (ou chantillon homognis) 4 mL deau,
mlanger puis ajouter 1 mL de solution borohydride de sodium 10
mg/mL (dissout dans 50 mM NaOH et prpar depuis moins de 5 heures).
Incuber la solution dans un container en plastique ferm 40C pendant
30 min. puis neutraliser par addition de 2,5 mL dacide actique 0,2M.
Filtrer sur un papier filtre Whatman N 1 ou centrifuger 13000 x g et
utiliser le filtrat ou le surnageant directement pour le dosage ou avec
une dilution approprie dans leau distille (si ncessaire).
Le filtrat peut avoir un aspect brumeux mais il est stable lors du dosage et
contribue trs peu labsorbance. Utiliser typiquement un volume
chantillon de 0,2 mL dans lEtape 2.
Etape 2 :
Longueur donde : 340 nm
Cuve : trajet optique 1 cm (verre ou plastique)
Temprature : ~ 25C
Volume final : 2,72 mL
Solution chantillon : 4-80 g de D-galactose (ou 8-160 g de
lactose) par cuve (dans un volume
dchantillon de 0,20 1,00 mL)
Effectuer la lecture par rapport lair (sans cuve dans le trajet
optique) ou par rapport leau.
Lactose Galactose
Pipeter dans les cuves
Blanc Echantillon Blanc Echantillon

Solution chantillon - 0,20 mL - 0,20 mL

solution 4 (-Galactosidase) 0,20 mL 0,20 mL - -

Sassurer que toutes les solutions sont dlivres dans le fond de la cuve. Mlanger
dlicatement par agitation. Couvrir les cuves et les incuber 2 heures ~ 25C.
Puis ajouter :

Eau distille ( ~ 25C) 2,20 mL 2,00 mL 2,40 mL 2,20 mL

Solution 2 (tampon) 0,20 mL 0,20 mL 0,20 mL 0,20 mL
Solution 3 (NAD+) 0,10 mL 0,10 mL 0,10 mL 0,10 mL

Mlanger*, lire les absorbances des solutions (A1) aprs environ 3 min. et dmarrer
les ractions par addition de :

Suspension 5 (-GalDH/GalM) 0,02 mL 0,02 mL 0,02 mL 0,02 mL

Mlanger*, lire les absorbances des solutions (A2) la fin de la raction (< 5 min). Si la
raction nest pas termine au bout de 6 min. continuer lire les absorbances
toutes les minutes jusqu ce que les absorbances restent identiques sur 1 min.**.

9
* par exemple avec une spatule en plastique ou par dlicate
inversion aprs avoir scell la cuve au moyen dun bouchon
spcial ou de Parafilm.
** Si labsorbance A2 continue daugmenter, extrapoler labsorbance
au temps daddition de la suspension 5 (-GalDH/GalM).

CALCUL : (Procdure B)
Le calcul des rsultats pour la procdure B est identique ce qui est
dcrit dans la procdure A (voir page 7) mais un facteur de dilution de
8,5 de ltape 1 doit tre pris en compte et plus toute dilution
additionnelle de lchantillon pralable lEtape 2.

PREPARATION DES ECHANTILLONS :

1. Dilution de lchantillon.
La quantit de D-galactose prsent dans la cuve (c.--d. dans
les 0,2 mL dchantillon analys) doit tre comprise entre 4 et
80 g (i.e. la quantit de lactose prsent dans la solution
chantillon doit tre comprise entre 8 et 160 g). La solution
chantillon doit par consquent tre suffisamment dilue pour
conduire une concentration e n l a c t o s e s i tue entre 0,04
et 0,8 g/L.

Tableau de dilution
Concentration estime
Dilution dans leau Facteur de dilution (F)
du lactose (g/L)
< 0,8 Aucune dilution requise 1
0,8-8,0 1 + 9 10
8,0-80 1 + 99 100
> 80 1 + 999 1000

Si la valeur de AD-galactose or Alactose + D-galactose est trop

faible (par exemple, < 0,100), utiliser une quantit
dchantillon plus importante ou une dilution plus faible de
lchantillon. Le volume dchantillon pipet dans la cuve peut
galement tre augment 1,00 mL, en sassurant que la
somme des composants chantillon, eau distille et solution 4
dans la raction est de 2,40 mL et en utilisant le nouveau
volume dchantillon dans lquation.

10
2. Clarification de lchantillon.
a. Solutions :
Solution de Carrez I. Dissoudre 3,60 g dhexacyanoferrate de
potassium (II) {K4[Fe(CN)6].3H2O} (Rf. Sigma P-9387) dans
100 mL deau distille. Conserver temprature ambiante.

Solution de Carrez II. Dissoudre 7,20 g de sulfate de zinc

(ZnSO4.7H2O) (Rf. Sigma Z-4750) dans 100 mL deau
distille. Conserver temprature ambiante.

Hydroxyde de sodium (NaOH, 100 mM). Dissoudre 4 g de

NaOH dans 1 L deau distille. Conserver temprature
ambiante.

b. Procdure :
Pipeter lchantillon liquide dans une fiole jauge de 100 mL
contenant environ 60 mL deau distille, ou peser une quantit
suffisante de lchantillon dans une fiole jauge de 100 mL et
ajouter 60 mL deau distille. Ajouter avec pr c aution 5 mL
de solution de Carrez I, 5 mL de solution de Carrez II et 10 mL
de solution de NaOH (100 mM). Mlanger aprs chaque
addition. Complter la fiole jauge jusqu la marque, mlanger
et filtrer.

3. Considrations gnrales.
(a) chantillons liquides : les chantillons liquides clairs,
lgrement colors et approximativement neutres, peuvent tre
utiliss directement pour le dosage.

(b) chantillons acides : si > 0,1 mL dchantillon acide doit

tre analys non dilu (tel que du vin ou du jus de fruit), le pH
de la solution doit tre augment environ 8,6 en utilisant du
NaOH 2 M et la solution doit tre mise en incubation
temprature ambiante pendant 30 minutes.

(c) Dioxyde de carbone : les chantillons ayant une forte

teneur en dioxyde de carbone, comme la bire, doivent tre
dgazs en augmentant le pH environ 8,6 au moyen de
NaOH 2 M et en les agitant doucement, ou en les agitant avec
une baguette de verre.
11
(d) chantillons colors : dans le cas des chantillons
colors, il peut tre ncessaire danalyser un blanc
supplmentaire, cest--dire un chantillon sans -GalDH/GalM.

(e) chantillons fortement colors : en cas dutilisation non

dilus, les chantillons fortement colors doivent tre traits par
addition de 0,2 g de polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)/10 mL
dchantillon. Agiter le tube vigoureusement pendant 5 min puis
filtrer avec du papier filtre Whatman N1.

(f) chantillons solides : homogniser ou broyer les

chantillons solides dans leau distille et filtrer si ncessaire.

(g) chantillons contenant des graisses : extraire ces

chantillons leau chaude une temprature suprieure au
point de fusion des graisses, par exemple dans une fiole jauge
de 100 mL 60C. Ajuster temprature ambiante et
complter la fiole jauge jusqu la marque avec de leau.
Conserver sur de la glace ou au rfrigrateur pendant 15 30
min puis filtrer. liminer les quelques premiers mL de filtrat et
utiliser le surnageant clair (pouvant tre lgrement opalescent)
pour le dosage. Il est galement possible de clarifier la solution
au moyen des ractifs de Carrez.

(h) chantillons contenant des protines : dprotiniser les

chantillons contenant des protines p a r a d d i t i o n d u n
volume gal dacide perchlorique glacial 1 M et
mlanger. Centrifuger 1500 g par min et
neutraliser le surnageant avec KOH 1 M.
A l t e r n a t i v e m e n t , c l a r i f i e r au moyen des ractifs de
Carrez.

EXEMPLES DE PREPARATION DECHANTILLONS :

(a) Dosage du lactose dans le lait, crme, yaourt ou
lait concentr.
Peser prcisment environ 1 g dchantillon dans une fiole
jauge de 100 mL, ajouter environ 60 mL deau distille et
incuber pendant 15 min environ 50C en agitant de temps
12
autre. Pour la clarification, ajouter 2 mL de solution de Carrez I
et mlanger. Ajouter 2 mL de solution de Carrez II et mlanger.
Ajouter 4 mL de solution de NaOH (100 mM) et mlanger.
Complter jusqu la marque avec de leau distille, mlanger et
filtrer un aliquote avec du papier filtre Whatman N 1. Eliminer
les premier mL du filtrat. Utiliser le filtrat clair (solution
chantillon) pour le dosage.
Gnralement, pour le lait, crme et yaourt aucune dilution nest
requise et un volume dchantillon de 0,2 mL est satisfaisant.
Pour le lait concentr, une dilution de 1:3 et un volume
dchantillon de 0,2 mL sont satisfaisants.

(b) Dosage du lactose dans le fromage et le chocolat.

Ajouter 10 g de fromage rp ou 0,5 g ce chocolat rp
dans un bcher de 200 mL. Ajouter environ 60 mL deau
distille et un barreau aimant et agiter sur un agitateur
magntique 50C pendant environ 15 min. Pour la clarification,
ajouter 2 mL de solution de Carrez I et mlanger. Ajouter 2 mL
de solution de Carrez II et mlanger. Ajouter 4 mL de solution
de NaOH (100 mM) et mlanger. Transfrer quantitativement la
solution dans une fiole jauge de 100 mL et complter jusqu
la marque avec de leau distille. Mlanger et filtrer un aliquote
avec du papier filtre Whatman N 1. Eliminer les premier mL
du filtrat. Utiliser le filtrat clair (solution chantillon) pour le
dosage.
Gnralement, pour le chocolat et la plupart des fromages,
aucune dilution nest requise et un volume dchantillon de 0,2
mL est satisfaisant. Cependant, pour le fromage cheddar rouge,
une dilution de 1:10 et un volume dchantillon de 0,2 mL sont
satisfaisants.

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES :
Beutler, H. -O. (1988). Lactose and D-Galactose. In Methods of
Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.), 3rd ed., Vol. VI, pp.
104-
112, VCH Publishers (UK) Ltd, Cambridge, UK.

13
Figure 1. Effet de lenzyme galactose mutarotase sur le taux
doxydation du D-galactose par la -D-galactose dshydrognase.
Les incubations ont t ralises avec 20 L de -D-galactose
dshydrognase 100, 200 et 400 U/mL et aussi avec de la -D-
galactose dshydrognase (200 U/mL) plus galactose mutarotase,
comme indiqu dans le schma ci-dessus.

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 Reprsente par :

LIBIOS
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SANS GARANTIE
Dans ltat actuel de nos connaissances, les informations contenues dans cette
brochure sont valables et prcises, mais les conditions dutilisation ntant pas
sous notre contrle, aucune garantie expresse ni implicite ne peut tre fournie
quant de quelconques recommandations ou suggestions pouvant tre faites ou
sur le fait quune quelconque utilisation ne portera pas atteinte de quelconques
brevets.

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