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Cintica de Michalis-Menten y de Briggs-Haldane para la glucosa

isomerasa
Moiss Guerrero Esperanza

Resumen
El estudio de la cintica enzimtica es importante desde una perspectiva cientfica porque gracias a esto
es posible formular modelos moleculares y desde el punto de vista tecnolgico porque permite el diseo
de reactores. Para describir la cintica enzimtica existen modelos distintos, en los que se encuentra la
cintica de Michaelis-Menten y la de Briggs-Handane, las cuales suponen una formacin rpida y
reversible de un enlace no covalente (ES) a partir del sustrato (S) y la enzima (E), y un estado de
estabilidad respectivamente. Sin embargo, estas ecuaciones son llevadas a cabo planteando un mecanismo
en el que se considera que la reaccin del complejo enzima-sustrato (ES) a la enzima y el producto no es
una reaccin reversible. De tal manera que al realizar las ecuaciones a un modelo de comportamiento
reversible como lo es el de la glucosa isomerasa se obtienen ecuaciones distintas, y al igual que en los
modelos considerados por los modelos Michaelis y de Briggs es posible, a partir de consideraciones de
las constantes, obtener la ecuacin de Michaelis a partir del modelo de Briggs.

Introduccin
-------ec. (1)
El estudio de cintica enzimtica es importante
desde una perspectiva cientfica porque gracias Esto lleva a la ecuacin de Michaelis-Menten:
a esto es posible formular modelos moleculares
de la accin enzimtica, y, desde el punto de k cat C E 0 C s V m xCs
vista tecnolgico, permite la formulacin de = = ec .( 2)
k M +C s k M +C
modelos cinticos usados para el diseo y S

desarrollo de reactores. (Andrs, 2008). La


velocidad de las reacciones catalizadas por Donde kM es a constante de Michaelis la cual es
enzimas depende de las condiciones en las que la concentracin del sustrato a la cual la
se lleva a cabo la reaccin, y su cintica se velocidad inicial es la mitad de la velocidad
determina en primer lugar por las propiedades mxima de saturacin, Vmx. La constante de
del catalizador de modo que es ms compleja velocidad de primer orden para la
que la cintica de las reacciones no catalizadas. descomposicin de ES es kcat. A bajas
(Koolman & Rhm, 2004). concentraciones de sustrato, donde [S]<<KM, v
est dada por la ecuacin 1, con kcat/kM siendo
Cintica de Michaelis Menten una constante de velocidad de segundo orden
aparentemente.
Experimentalmente la velocidad inicial v de
reacciones catalizadas por enzimas muestra
k cat
cintica de saturacin con respecto a la =
kM 0
[ E ] [S ]
concentracin de sustrato S. A bajas
concentraciones de sustrato la velocidad inicial
incrementa al incrementar la concentracin de ec. (3)
sustrato S pero se vuelve independiente de [S] a
A altas concentraciones de S, donde [S]>>kM, v
altas o bajas saturaciones de [S]. Esta
est dado por la ecuacin 4 y se vuelve
observacin fue interpretada por Michaelis y
independiente de S.
Menten debido a la formacin rpida y
reversible de un enlace no covalente (ES) a =k cat [ E 0 ]=V m x ec .(4 )
partir del sustrato (S) y la enzima (E), que luego
se descompone en los productos (P) como se
muestra en la siguiente ecuacin A pesar de que la ecuacin de Michalis-Menten
(ec. 2) es vlida para varias reacciones
catalizadas por enzimas el mecanismo (ec. 1) no [ E ] =[ E0 ] + [ ES ] ec .( 7)
siempre es el mismo. Los valores de k M y kcat no
son siempre iguales a la constante de
disociacin, k1, para el complejo enzima- Y sustituyendo la ec. 7 en la ecuacin 6
sustrato y la constante de descomposicin de podemos obtener:
ES, respectivamente. (Page, 1984)
[ E0 ]
Cintica de Briggs-Haldane [ ES ] = ec .(8)
k M +[S ]
Las ecuaciones propuestas por Michaelis-
Menten son dependientes de un rpido Esta ecuacin es comparable con la de
acercamiento al equilibrio por cualquier Michaelis. La nica diferencia es el cambio de
reaccin enzimtica. Sin embargo, este enfoque la constante en el denominador. (Shanmugan &
puede ser nicamente aplicable para mediciones Sathishkumar, 2009)
de cinticas de reaccin rpida. Generalmente
cuando una enzima es inicialmente mezclada Fosfoglucosa isomerasa
con un exceso de sustrato, existe un periodo
inicial, llamado estado pre-estable, donde la La segunda reaccin de la gluclisis es la
concentracin de [ES] se acumula lentamente. conversin de glucosa-6-fosfato a fructosa-6-
Este periodo es normalmente poco observado fosfato catalizada por la fosfoglucosa isomerasa.
debido a que su duracin dura apenas algunos Esto es, la isomerizacin de una aldosa a una
microsegundos. Luego de esto la reaccin cetosa. (Voet, Voet, & Pratt, 2009) Esta reaccin
alcanza un estado en el que [ES] permanece transcurre con facilidad en ambas direcciones,
constante ante el tiempo. El estado estable fue como puede predecirse de la pequea variacin
introducido por G. E. Briggs y J. B. S. Haldane de la energa libre estndar. La
2+
en 1925, que no es ms que una modificacin al fosfoglucoisomerasa necesita de Mg y es
mtodo de Michaelis-Menten y es referido especfica para la glucosa-6-fosfato y la
como cintica de estado estable. En el estudio fructosa-6-fosfato. (Melo & Cumatzi, 2006)
de Michaelis-Menten slo la formacin de [ES],
La cintica de isomerizacin de glucosa a
no su consistencia, se le da importancia,
fructosa catalizada por la glucosa isomerasa a
mientras que en el mtodo Briggs-Haldane, el
una concentracin especificada de sustrato
mantenimiento de una concentracin constante
puede ser relacionada a un comportamiento de
de [ES] y su descomposicin a productos se
reaccin reversible catalizada por una enzima,
discute a detalle.
representada en la siguiente ecuacin:
Considerando la ec. 1 podemos decir que el
estado estable se atribuye al tiempo de duracin
en el que, la velocidad de formacin de [ES]
ser igual a su velocidad de descomposicin de Donde representa la concentracin de glucosa, F
los productos. a la fructosa, e a la glucosa isomerasa libre, q al
complejo enzima-sustrato y E la glucosa
k 1 [ E ][ S ] =k 2 [ ES ] ec .(5) isomerasa total. (Macallister, 1979)

De tal manera que podemos obtener: Metodologa


Se realiz una homologa de las ecuaciones de
[ E ] [ S] k 2
= =k M ec .(6) los modelos de Michaelis-Menten y Briggs-
[ ES] k1 Haldane entre el mecanismo mediante el cual se
deducen estos modelos (ec. 1) y el mecanismo
Que se observa la igualdad de la constante de de la glucosa isomerasa (ec. 9) para obtener las
Michaelis-Menten, kM. ecuaciones con los modelos respectivos de
Michalis-Menten y Briggs Haldane para la
Considerando a la enzima total [E] como: glucosa isomerasa.
Resultados Para obtener una ecuacin de [q] podemos restar
la ec. 16 de la 15, y que el cambio de q con
Modelo Michaelis-Menten para la glucosa respecto al tiempo es despreciable:
isomerasa
d [q]
=k 1 [ G ][ e ] k 2 [ q ]k 4 [ F ][ e ] k 3 [ q ] 0 ec .(17)
Considerando la ec. 9 podemos deducir la dt
frmula:

d [ F] d [G] Si sustituimos ec 12 en la 17:


V= = =k 3 [ q ]k 4 [ F ][ e ] ec . (10)
dt dt
[ E 0 ] [G] k 4 [F ]
[ q ]= + ec .(18)
k 4 [ F] k 2 +k 3 k 1 [G]+ k 4 [ F ]+k 2 +k 3
Debido a que el complejo q puede relacionarse [ G ]+ +
con la concentracin de la glucosa
k 1 k1

k 1 [ G ] [ e ]=k 2 [ q ] ec .(11) Sustituyendo la ec 18 en la ec 15:

k4[F]
Se considera que la concentracin total de
enzima E0 se conserva y se puede relacionar con d [F ]
=
(
[ E0 ] [ G ] + k1 )
(k 3+ k 4 [F ])
k 4 [ F ] [ E0 ] ec .(19)
la enzima libre e. dt k [ F] k +k
[ G ]+ 4 + 2 3
k1 k1
[ E0 ]= [ e ] + [ q ] ec .( 12)

Sustituyendo la ec. 2 en la ec. 3 obtenemos: Conclusin

[ E0 ] [G] Las aproximaciones de Michaelis-Menten y de


[ q ]= ec .(13) Briggs-Handane se formularon a partir de un
k2 mecanismo de reaccin como se muestra en la
+[G]
k1 ecuacin 1, obteniendo las ecuaciones 4 y 8 para
cada cintica respectivamente, de tal forma que
al trabajar con un mecanismo diferente como lo
Al sustituir la ec. 13 en la ec. 10 y considerando
es el de la glucosa isomerasa (ec. 9) se obtienen
que la constante de Michaelis-Menten kM est
ecuaciones muy distintas (ec. 14 y 19) a las
dada por k2/k1 obtenemos:
obtenidas por el mecanismo mostrado en la ec.
1.
d [ F] d [G] k 3 [ E 0 ] [G]
V= = = +k 4 [ F ] [ q]k 4 [ F ] [ E0 ] ec .(14)
dt dt k M +[G] Al comparar las ecuaciones obtenidas de la
glucosa isomerasa, es posible pasar del modelo
de Briggs-Handane (ec. 19) al de Michaelis-
Modelo Briggs-Haldane para la glucosa Menten (ec. 14) haciendo la consideracin de
isomerasa que k1>>k3 as como que k1>>k4.
A partir de la ecuacin 9 se pueden obtener las
siguientes ecuaciones para la velocidad de
reaccin:
Bibliografa
Andrs, I. (2008). Enzyme biocatalysis:
d [F ] principles and applications. (A. Illanes, Ed.)
=k 3 [ q ] k 4 [ F ][ e ] ec .(15) Edit. Springer.
dt
Koolman, J., & Rhm, K.-H. (2004).
d [G] Bioqumica: Texto y atlas (Tercera ed.).
=k 1 [ G ] [ e ] k 2 [ q ] ec .(16) Editorial mdica panamericana.
dt
Macallister, R. V. (1979). Advances in Shanmugan, S., & Sathishkumar, T. (2009).
carbohydrate chemistry and biochemistry. Enzyme technology. I. K. International
Academic Press inc. publishing house pvt. ltd.

Melo, V., & Cumatzi, . (2006). Bioqumica de Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. (2009).
los procesos metablicos. Editorial Revert. Fundamentos de bioqumica: la vida a nivel
molecular (Segunda ed.). Editorial mdica
Page, M. I. (1984). The chemistry of enzyme panamericana.
action. Editorial Elsevier.