UNIVERSIDAD NACIONAL

JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA

AO DE LA CONSOLIDACIN DEL MAR DE GRAU

Practica n 06

Tema : DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE GLUCOSA

ASIGNATURA : bioqumica

ESTUDIANTE : CRDENAS CHAMBILLA LEYDI MARYORI

CODIGO N : 20115-122019

AO DE ESTUDIOS : 2do / CICLO: IV

DOCENTE : Dr. Roberto castellanos cabrera

TACNA, PER-2017
PRACTICA N 06
DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE GLUCOSA

MARCO TERICO

La glucosa es un azcar que es utilizada como fuente de energa para el organismo, esta se
incrementa en la sangre al ingerir alimentos diferentes al agua, lo que se consume desaparece de
la sangre mediante el empleo de una hormona reguladora producida por el pncreas conocida
como insulina, cuando ocurre lo contrario se secreta otra hormona llamada glucagn que permite
mantener los niveles de glucosa en sangre. El anlisis de la glucosa permite medir la
concentracin de esta presente en la sangre para la prevencin o diagnstico de una diabetes
mellitus o sacarina, esta enfermedad se caracteriza por presentar valores superiores a 140 mg/dL,
entre 70y 110 mg/dL se consideran valores normales, pero inferiores a 60 mg/dL desencadena una
hipoglicemia. Su determinacin se realiza despus de la oxidacin enzimtica en presencia de
glucosa oxidasa. El perxido de hidrogeno formado reacciona bajo la catlisis de peroxidasa con
fenol

Objetivos:

Aprender la importancia de calcular con gran exactitud las cantidades de reactivos.

Determinar la absorbancia de glucosa mediante el uso del espectrofotmetro

RESULTADOS
Luego de preparar los tubos de ensayo con las cantidades indicadas en el cuadro y llevar a bao
mara 90 C por 5 min.

Seguidamente se procedi a medir la absorbancia donde se obtiene:

CURVA DE CALIBRACION DE LA GLUCOSA

CONCENTRACI ABSORBAN
ON CIA
 0 0
0.2 0.194
0.4 0.22
0.6 0.433
0.8 0.557
1 0.865

DATOS OBTENIDOS
0,80385714
PENDIENTE
3
-
INTERSECCION 0,02376190
5
COEF. DE. 0,97693742
CORRELACION 6

0.9 0.87

0.8
f(x) = 0.16x - 0.18
0.7 R = 0.95

0.6 0.56

ABSORBANCIA 575 nm 0.5

0.43
0.4

0.3
0.22
0.19
0.2

0.1
0
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

CONCENTRACION DE GLUCOSA

Estadsticas de la regresin
Coeficiente de correlacin 0.9769374
mltiple 26
Coeficiente de determinacin 0.9544067
 R^2 35
0.9430084
R^2 ajustado 18
0.0734990
Error tpico 12
Observaciones 6

ANLISIS DE VARIANZA

Promedio de
Grados de Suma de los Valor crtico de
libertad cuadrados cuadrados F F

83.732255
Regresin 1 0.452330414 0.452330414 15 0.00079169

Residuos 4 0.021608419 0.005402105

Total 5 0.473938833

Coeficien Error Estadstic Probabilid Inferior Superior Inferior Superior

tes tpico ot ad 95% 95% 95.0% 95.0%
- - - -
Intercepci 0.05319 0.678211 0.123930 0.12393
0.023761 0.446697 0.171454 0.171454
n 46 8 0 2 02
9 0 0
Variable X 0.803857 0.08784 9.150533 0.55995 1.047762 0.559951 1.04776
0.000791
1 1 81 0 16 6 6 26

CONCLUSIONES

Se puede concluir decidiendo que la lnea de calibracin no coincide con los puntos
obtenidos del absorbancia, esto probablemente se deba a que no se midieron bien los
compuestos deba contener cada tubo.

CUESTIONARIO

1. Cunto tiempo se necesita para que el color se desarrolle completamente? Justifique su

respuesta con una parcela de intensidad de color en funcin del tiempo
 El tiempo en el cual acta el DNS es de 5 min. El aumento de la absorbancia en el segundo
desarrollo de color es equivalente a la cantidad incremental de azcar aadido. Una tcnica
colorimtrica que emplea acido 3,5 dinitrosalicilico para la hidrolisis de polisacridos presentes
en una muestra. Determina las absorbancias por medio de un espectrofotmetro a 575 nm.

2. Obtener un espectro de absorcin a travs de longitudes de rango visible (i, e. 400-700 nm).
Justificar el uso de 575 nm seleccionados en el procedimiento.

3. Encuentra los procedimientos para al menos otros dos mtodos comnmente empleados para
medir las concentraciones de azcar. Enumerar las ventajas y desventajas de estos
procedimientos.

LA PRUEBA DE BARFOED:
Sirve para distinguir monosacridos reductores de disacridos reductores, basndose en
la velocidad de reaccin; en los monosacridos la formacin del xido cuproso es ms
rpido que en los disacridos. Este reactivo se compone de una solucin de 0.33 molar
de acetato de cobre neutro en una solucin de 1% de cido actico. En la prueba de
barfoed la reaccin es positiva para la galactosa y ribosa, porque al utilizar acetato
cprico y cido actico con lo que solo los monosacridos son capaces de reducir el
cobre, formando as un precipitado rojo ladrillo, en tanto que el almidn es un disacrido
que tienen menor poder de reductor al tener comprometido uno de sus carbonos
anomricos en el establecimiento del enlace glicosdico, no reaccionan y por lo tanto dan
un resultado negativo.

REACCIN DE SELIWANOFF:
Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que las cetosas en el
carbono 2 tienen una funcin cetona, que en presencia de un cido fuerte producen
rpidamente derivados furfricos que reaccionan con un difenol llamado resorcina que
est contenido en el reactivo de Seliwanoff. La fluctos da positiva porque pertenece al
grupo cetona y como Esta prueba es especfica para cetosas y se basa en la conversin
de la cetosa en 5-hidro- metil-furfural y su posterior condensacin con resorcinol
formando as complejos coloreados rojo o rosado. La razn por que dio negativo en la
glucosa es sencilla porque esta pertenece al grupo aldehdo como ya aviamos
mencionado anterior mente y de esta forma no puede reaccionar con esta reaccin.

Referencias Bibliogrficas:

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf
 http://www.academia.edu/8255551/DETERMINACI%C3%93N_DE_AZ
%C3%9ACARES_REDUCTORES_POR_LA_T%C3%89CNICA_DE_MILLER_DNS
https://prezi.com/jgnoejnnebir/determinacion-de-azucares-reductores-por-el-metodo-dns/