Produccin de bioetanol a partir de caa de azcar mediante

fermentacin con saccharomyces cerevisiae.

1
Marcelo Valle, Maida Ramrez, Liliana Molina, Cesar Pinto, Leidys Marin, Haiger
Blanchar, Nelsy Cervantes, Wilman Gmez, Andrs Nieves, Greilis Quintero, Manuel
Reyes, Yisela Daza, Mara Daz, Carlos Osorio, Yeiner Mindiola, Jelitza

1
Programa de Ingeniera Agroindustrial, Facultad de Ingeniera Agroindustrial, Universidad Popular del Cesar,
Sede Sabanas, Valledupar, Cesar

RESUMEN.
Actualmente el biocombustible ms importante es el alcohol carburante (Etanol), producto 100% renovable
obtenido a partir de cultivos bioenergticos y biomasa, el cual es utilizado como oxigenante de la gasolina,
elevando su contenido en O2, lo que permite una mayor combustin en la misma disminuyendo las emisiones
contaminantes de hidrocarburos no oxidados completamente. Este alcohol se puede obtener de materias
primas como la caa de azcar, almidn entre otros.
La materia prima a utilizar es la caa de azcar, desarrollando procedimientos para efectuar la fermentacin
alcohlica de azucares derivados del jugo de la misma, utilizando la levadura Saccharomyces Cerevisiae,
estableciendo condiciones iniciales de operacin a pH de 4.5, Brix 16, Temperatura de 30C, 200 RPM, en
un intervalo de 46 horas; complementndolo con algunos sustratos.

Palabras Claves: Bioetanol, caa de azcar, fermentacin, Saccharomyces Cerevisiae, azucares reductores.

ABSTRACT
Currently the most important fuel is the fuel alcohol (ethanol), a product 100% renewable obtained from
energy crops and biomass, which is used as an oxygenate in gasoline, raising its O2 content, allowing greater
combustion in the same decreasing emissions of hydrocarbons not fully oxidized. This alcohol can be
obtained from raw materials such as sugarcane, starch and others.
The raw material used is sugar cane, devela procedures to effect the fermentation of sugar juice deriv from
the same, using the yeast Saccharomyces cerevisiae, establishing initial operating conditions at Ph 4.5, 19
Brix Temperature 30 C, 200 RPM in a 48 hour interval; complementing it with some substrates.
 1. INTRODUCCION.
La generacin de combustibles a partir de
productos agrcolas llamados agro-combustibles o
biocombustibles ha sido impulsada recientemente
como alternativa a los altos precios del petrleo y
la contaminacin debida al dixido de carbono.
Debido a que las materias primas usadas para la
obtencin de bioetanol o biodiesel son empleados
original y primordialmente en la produccin de
alimentacin humana, esta alternativa plantea un
dilema para los productores frente al uso del
suelo, en especial al sopesar los precios pagados
por el sector energtico los del sector alimentario.
Entre los cultivos bioenergticos ms usados para
la produccin de etanol la caa de azcar es la
materia prima ms utilizada en pases tropicales
tales como Brasil e India (1).
La caa de azcar es una de las materias primas
con mayor rendimiento para la produccin de
bioetanol y es de especial relevancia para
Colombia, siendo este pas el segundo productor
de panela en el mundo despus de la India.
Colombia tuvo una produccin de Etanol en los
aos de 2005-2015 (miles de litros) de 369.722.
Con una tasa de rendimiento de 9000
(Lt/HA/AO) (2).
El proceso de obtencin de etanol a partir de caa
de azcar comprende la extraccin del jugo de
caa (rico en
Azcares) y su acondicionamiento para hacerlo
ms asimilable por las levaduras durante la
fermentacin.
La fermentacin alcohlica es un proceso
biolgico de fermentacin en ausencia de oxgeno
(figura 1), originado por la actividad de algunos
microorganismos que procesan los hidratos de
carbono (por regla general azcares: como por
ejemplo la glucosa, la fructosa, la sacarosa, sirve
con cualquier sustancia que tenga la forma
emprica de la glucosa, es decir, que sea una
Hexosa.) para obtener como productos finales: un
alcohol en forma de etanol (cuya frmula qumica
es: CH3-CH2-OH), dixido de carbono
(CO2) en forma de gas y unas molculas de ATP
que consumen los propios microorganismos en su
metabolismo celular energtico anaerbico. El
etanol resultante se emplea en la elaboracin de
algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la
cerveza, la sidra, el cava, etc (3).
Figura 1. Ecuacin de fermentacin alcohlica de
glucosa (Ward, O.P.1991)
6126 -------- > 225 + 22
El etanol es un combustible que puede producirse
a partir de un gran nmero de plantas, con una
variacin, segn el producto agrcola, del
rendimiento entre el combustible consumido y el
generado en dicho proceso. Este etanol, conocido
como bioetanol, est sujeto a una fuerte polmica:
para unos se perfila como un recurso energtico
potencialmente sostenible que puede ofrecer
ventajas medioambientales y econmicas a largo
plazo en contraposicin a los combustibles fsiles,
mientras que para otros es el responsable de
grandes deforestaciones y del aumento del precio
de los alimentos.
El bioetanol tiene las mismas caractersticas y
composicin qumica que el etanol ya que se trata
del mismo compuesto. La diferencia radica en su
proceso de produccin. El bioetanol ha de ser
obtenido desde biomasa, no pudiendo obtenerse
del petrleo (4).
2. MATERIALES Y MTODOS.
2.1. Materiales y equipos.
El jugo de caa fue comprado a una venta
ambulante de la ciudad de Valledupar, Colombia.
Antes de la fermentacin del jugo de caa se filtr
y luego se pasteurizo. Para la preparacin del
sustrato se utiliz una jugo de caa, peptona,
fosfato dicico de potasio (KH2PO4), sulfato de
magnesio-heptahidratado (MgSO4*7H20),
glucosa y levadura (Saccharomyces cerevisiae).
En cuanto a los equipos usados bioflo 2000
fermenter, plancha calefactora con agitador
magntico, autoclave, horno, balanza analtica.
2.2. Curva patrn de glucosa.
Para la realizacin de la curva patrn se emple el
reactivo DNS (3,5-dinitrosalicilico).
Se elabor la solucin patrn de glucosa a las
siguientes concentraciones: 0.00, 0.04, 0.08, 0.12,
0.16, 0.20, 0.24, 0.28, 0.32, 0.36, 0.40.
Posteriormente se tomaron 1 ml de cada solucin
anterior y la agregamos a tubos de ensayo,
agregando a cada tubo 1 ml de reactivo de DNS.
Se agitaron los tubos en el vortex, despus se
llevaron a bao mara a una temperatura de 90C
por 5 minutos, seguidamente enfriamos en un
bao de hielo a 4C y transferimos el contenido de
cada tubo a una celdilla por separado, finalmente
con el espectrofotmetro lemos las absorbancias
de las muestras a 540nm (5).
2.3. Hidrolisis del jugo de caa.
Se tomaron 2Ml del jugo de caa y se adicionaron
en un tubo de ensayo, enseguida se agregaron 2
ml de una solucin 50%(v/v) de HCL al 37%. El El erlenmeyer donde estaba el sustrato, se inocul
tubo fue agitado en un vortex y calentado a 92 C 2g/L de levadura, luego se mantuvo con agitacin
por 10 minutos. La reaccin se fren en hielo. constante a 200rpm, 30C y durante 3 horas.
Posteriormente, se adicionaron tres gotas de
fenolftalena al tubo, luego se agreg NaOH al 25
% (p/v), hasta obtener un color ligeramente
rosado. Por ltimo se neutralizo con una solucin Imagen 1. Activacin de la levadura
5%(v/v) de HCL al 37% y se agito nuevamente en saccharomyces cerevisiae.
el vortex (6).

2.4. Determinacin de azucares reductores

en el jugo de caa.
Del jugo hidrolizado se tomaron 0,2 ml y se aforo
a un volumen de 100 ml con agua destilada. Para
la determinacin de azucares reductores, se
realiz por duplicado adicionando a dos tubos de
manera individual 1 ml del jugo diluido y se
adicionaron a cada tubo de ensayo 1 ml de
reactivo DNS. Se agitaron los tubos en el vortex,
despus se llevaron a bao mara a una
temperatura de 90C por 5 minutos, seguidamente
enfriamos en un bao de hielo a 4C y
transferimos el contenido de cada tubo a una
celdilla por separado, finalmente con el 2.8. Fermentacin.
espectrofotmetro lemos las absorbancias de las
muestras a 540nm. Se verti el jugo de caa esterilizado (1350ml) al
bioreactor previamente esterilizado donde se le
2.5. Tratamiento del jugo de caa de adiciono el sustrato en donde ya estaba activada la
azcar. levadura, la reaccin fermentativa se mantuvo a
30C, 200rpm por 48 horas, en ausencia de
Se utiliz jugo de caa de azcar, comercializado oxgeno.
en la ciudad de Valledupar con condiciones
iniciales de Brix 16, pH 5.3. se filtr el jugo con Imagen 1. Vertido de jugo de caa para
papel filtro, utilizando una bomba de vaco para fermentacin.
una excelente filtracin Posteriormente se ajust
pH a 4,5 con HCl a 0,1N, los Brix se
mantuvieron, luego se agreg el 10% ( 0,15L) del
volumen del jugo en un Erlenmeyer
adicionndose a este un enriquecimiento de
Pectona 5g/Lts, glucosa 50g/Lt,MgSO4-7H20 0,5
g/Lts, KH2PO4 1 g/Lts; el 90% (1.350Lt) de jugo
se verti en tres Erlenmeyer de 500 mL cada uno
para su posterior esterilizacin.

2.6. Esterilizacin.

Se llevaron los Erlenmeyer que contenan el jugo

de caa hermticamente cerrados al autoclave
donde se realiz la esterilizacin a 15 psi, 101C
por 15 minutos, se baj la temperatura a 30C. 2.9. Determinacin de azucares reductores
del jugo fermentado.
2.7. Activacin de la levadura
saccharomyces cerevisiae. Se tomaron muestras en los siguientes intervalos
0, 10, 22, 34 y 46 horas, a los que se les midieron
absorbancia con el espectrofotmetro a 540nm;
para hacer la lectura se diluyo cada una de las Se obtuvieron los siguientes datos de absorbancia
muestras, usando una relacin 0,2: 100. para cada una de las diluciones de glucosa. (Tabla
1).
Se toma un 1ml de cada una de las diluciones y se
aadi 1ml de DNS, llevndolas a bao de mara a Tabla 1. Datos para la construccin de la curva
90C por 5min, luego se sumergieron en agua 4C patrn.
por 5min. Seguidamente se hicieron las lecturas

por duplicado. Vol. Vol. Concentraci Absorbanc

2.10. Evaluacin del grado de Gluc Agua n Estndar ia
alcohol. osa Destila 540nm
en da
ml
0.0 1.0 0.00 0.0
0.1 0.9 0.04 0.014
0.3 0.7 0.12 0.156
0.4 0.6 0.16 0.246
0.5 0.5 0.20 0.315
0.6 0.4 0.24 0.397
0.7 0.3 0.28 0. 481
0.8 0.2 0.32 0.588
0.9 0.1 0.36 0.701
1.0 0.0 0.40 0.806

Absorbancia (nm)
1

0.8
f(x) = 2.2x - 0.11
0.6
R = 0.99
0.4

0.2

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

Concentracion (mg/mL)

Grafica 1. Curva patrn de glucosa.

3. RESULTADOS Y DISCUSIN.
3.1. Curva Patrn.
 2 10 183.1223244

3.2. Determinacin de azcares reductores

en jugo de caa. 3 22 244.4894799
Muestra Absorbancia (nm)
1 0.450
2 0.446
Abs. promedio 0.448 4 34 111.1667729
Se calcul la concentracin de azucares reductores
sobre la curva de calibracin y se obtuvo el
resultado de 126,08 gL-1. 5 46 110.3697969

3.3. Determinacin de Azucares

Reductores en la Fermentacin.
Tabla 4. Variacin de los grados Brix en
Utilizando la ecuacin de la recta obtenida por la Funcin del tiempo para el proceso
tendencia lineal de la curva de calibracin Fermentativo.
observada en la (grfica 1) y el valor de las
absorbancias que se encuentran en la (Tabla 2) se Muestras Tiempo Brix
llega a el valor de la concentracin de azucares (Horas)
reductores (g/l) de la muestra del jugo de caa en 1 0 15.60
la (Tabla 3).
2 10 13.20
Tabla 2. Datos de absorbancia tomadas para la
3 22 12.05
muestra.

No de 4 34 9.15
Muestra Tiempo Absorbancia
5 46 8.25
(Horas) 540

1 0 0.205
Grafica 2. Variacin de los grados Brix en
2 10 0.6985 Funcin del tiempo para el proceso
Fermentativo.
3 22 0.968
20
4 34 0.3825
15
5 46 0.379
brix 10

5
Tabla 3. Datos de concentracin de azucares
reductores en g/l de las muestras de jugo de
0
caa de azcar. 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

No de Tiempo (horas)
Muestra Tiempo Concentracin de
(Horas) Azucares
Reductores en gr/l La curva refleja la disminucin de los grados Brix
a medida que aumenta el tiempo. Esto es debido a
1 0 70.74870207 la conversin de los sustratos a Etanol.
 300 I: obtencin a partir de diferentes materias primas.
[5] Interciencia: Revista de ciencia y tecnologa
250 de Amrica, 30(11), 671-678.
200 [6] Miller, G. L. (1959). Use of dinitrosalicylic
acid reagent for determination of reducing sugar.
150
Azucares Reductores en gr/l Analytical chemistry, 31(3), 426-428.
100
[7]Godoy, R. (2002). Mtodo DNS para la
50 determinacin de azucares reductores totales en
melaza, sustrato de fermentacin y vinos.
0
50 Ingeniero Qumico. Manual de Mtodos
0 Analticos. Universidad Nacional de Colombia. p
1-3.
Tempo (horas)

Gr
afica 3. Curva concentracin Azucares
Reductores vs el tiempo.

4. Conclusiones.

5. Referencias.

[1] Castro, J. A. O., Huertas, I., Garca, J. C. F.,

Kalenatic, D., & Cadena, K. (2011). Potencial de
produccin de Bioetanol a partir de Caa
Panelera: dinmica entre contaminacin,
seguridad alimentaria y uso del suelo. Ingeniera,
16(1), 6-26.

[2] PROCOLOMBIA (2013) Perfil del sector de

biocombustibles en Colombia. Sitio Web:
http://www.inviertaencolombia.com.co/images/Ad
juntos/Inversi
%C3%B3n_en_el_sector_biocombustibles.pdf

[3] Vzquez, H. J., & Dacosta, O. (2007).

Fermentacin alcohlica: Una opcin para la
produccin de energa renovable a partir de
desechos agrcolas. Ingeniera, investigacin y
tecnologa, 8(4), 249-259.

[4] Alzate, C. A. C., & Snchez, O. J. (2005).

Produccin biotecnolgica de alcohol carburante