.

Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de

Pgina:

Objetivo.

Hiptesis.

Marco Terico

Fotoluminiscencia

El fenmeno de fotoluminiscencia ocurre cuando una especie qumica es

excitada por medio de radiacin electromagntica y como consecuencia la
especie pierde la energa adquirida reemitiendo esta en forma parcial o total.
Esto es, parte de la energa adquirida por la especie qumica se reemite en
forma de choques moleculares y parte en forma de energa luminosa o el total
de la energa adquirida se reemite en forma de radiacin.
La fluorescencia es un proceso de fotoluminiscencia en el que los tomos o
molculas se excitan por absorcin de radiacin electromagntica. (Anlisis
Instrumental . Skoog, D.A., Leary J.J., 4ta ed., Ed. McGraw-Hill, 1994).
La fluorescencia es una proceso de emisin en la que se excitan tomos o
molculas por la absorcin de un haz de radiacin electromagntica .
Posteriormente, la especie excitada se relaja hasta el estado fundamental, con
lo que libera su exceso de energa en forma de fotones. La fluorescencia ocurre
mucho mas rpido que la fosforescencia y, en general, se completa en casi 10 -5
segundos o menos despus del momento de la excitacin. (Qumica
Analtica. D.A. Skoog, D.M. West y F.J. Holler 8 ed., Ed. Thomson, 2005).

Fluorescencia atmica

Los tomos gaseosos pueden emitir fluorescencia cuando estn expuestos a la

radiacin por una longitud de onda que es exactamente igual a la de una de las

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

lneas de absorcin (o emisin) del elemento qumico en cuestin. La relajacin

ocurre despus por reemisin de radiacin fluorescente de la misma longitud
de onda. Cuando la longitud de onda de excitacin y emisin es la misma, la
emisin resultante se llama fluorescencia de resonancia. (Qumica
Analtica. D.A. Skoog, D.M. West y F.J. Holler 8 ed., Ed. Thomson, 2005).

Fluorescencia molecular

La especie excitada posteriormente se relaja hasta el estado fundamental, con

la liberacin de su exceso de energa en forma de fotones. La vida de una
especie excitada es breve, ya que existen diverso mecanismos por los que el
tomo o molculas excitados liberan su exceso de energa y se relajan al
estado fundamental. Dos de los ms importantes mecanismos son la relajacin
no radiante y la emisin de fluorescencia. (Qumica Analtica. D.A. Skoog, D.M.
West y F.J. Holler 8 ed., Ed. Thomson, 2005).

Imagen 1. Se observa que la sustancia fluorescente emitir luz verde cuando es

estimulada con luz azul.

Relajacin no radiante

Dos tipos de relajacin no radiante se muestran en la imagen 2(b). La

desactivacion vibratoria o relajacin, que se muestra como pequeas flechas

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

ondulatorias entre los niveles de energia vivratoria, se debe a las colisiones

entre las moleculas excitadas y las del disolvente.

Imagen 2. Diagrama de niveles de energa que muestra algunos cambios de energa

ocurridos durante la absorcin, relajacin y fluorescencia de una especie molecular.

En esas colisiones , el exceso de energa vibratoria se transfiere a las

molculas del disolvente en una sucesin de pasos. La ganancia de energa
vibratoria solo se refleja en un pequeo aumento de la temperatura del medio.

Relajacin vibratoria

La relajacin vibratoria es un proceso tan eficaz que la vida promedio del

estado vibratorio excitado es de apenas 10 -15 segundos. Tambin es posible la
relajacin no radiante entre el nivel vibratorio mnimo de un estado electrnico

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

excitado y el nivel vibratorio superior de otro estado vibratorio. Este tipo de

relajacin, llamado conversin interna (imagen 2 (b)), es mucho mas eficaz
que la relajacin vibratoria, de modo que la vida promedio de un estado
electrnico excitado es de 10-9 a 10-6 segundos. (Qumica Analtica. D.A. Skoog,
D.M. West y F.J. Holler 8 ed., Ed. Thomson, 2005).

Conversin interna: En este proceso una molcula excitada pasa del

estado electrnico ms alto al estado electrnico ms bajo ocasionando
una serie de relajaciones vibracionales sin emisin de radiacin. Se
favorece cuando dos niveles electrnicos son de energa similar y puede
ocurrir un traslapamiento. (Anlisis Instrumental . Skoog, D.A., Leary J.J.,
4ta ed., Ed. McGraw-Hill, 1994).
Conversin externa: Este es el proceso que ocurre ms frecuentemente
en las especies atmicas y moleculares. Durante este proceso, el exceso
de energa que tiene la especie excitada se pierde por choques
moleculares entre la especie excitada y el disolvente, el resultado neto
es una transferencia de energa de la especie excitada a las molculas
vecinas y un incremento mnimo en la temperatura del disolvente.
(Anlisis Instrumental . Skoog, D.A., Leary J.J., 4 ta ed., Ed. McGraw-Hill,
1994).

Fluorescencia

El numero relativo de molculas que emiten fluorescencia es pequeo, ya que

la fluorescencia requiere caractersticas estructurales que desaceleran los
procesos de relajacin no radiante e intensifican la tasa de relajacin
fluorescente (imagen 2 (c)).
Muchas molculas carecen de esas caractersticas y experimentan relajacin
no radiactiva a una velocidad que es significativamente mayor que la velocidad
de relajacin radiactiva por lo que no ocurre fluorescencia.
Las bandas e fluorescencia molecular constan principalmente de lneas de
longitud de onda mayores que la banda de radiacin absorbida a la que se
debe su excitacin. Este cambio de longitud de onda a veces se llama
desplazamiento de stokes.

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Factores que afectan la fluorescencia

Estructura: La fluorescencia se presenta ms comnmente, y en forma

ms intensa, con compuestos que tienen grupos funcionales aromticos
con bajas energas de transicin. Compuestos que tienen estructuras de
carbonilos alifticos y alicclicos o de dobles enlaces cojugados con un
alto grado de estabilidad de resonancia tambin pueden presentar
fluorescencia, pero el nmero de estos es relativamente pequeo
comparado con el nmero de sistemas aromticos fluorescentes. La
sustitucin de grupo funcional en el anillo de benceno cambia la longitud
de onda de mxima absorcin con un cambio correspondiente en la
posicin e intensidad de la lnea de emisin de fluorescencia.

Temperatura y naturaleza del disolvente: El efecto de un aumento en la

temperatura incrementa el nmero de choques moleculares, por lo que
la desactivacin tiende a efectuarse a travs de procesos no radiactivos
y por lo tanto se inhibe la fluorescencia. La viscosidad del disolvente
tiene efectos similares, a mayor viscosidad menor nmero de choques
moleculares y mayor intensidad de fluorescencia. La polaridad del
disolvente tambin tiene influencia en la fluorescencia, debido al efecto
hipsocrmico y batocrmico que el disolvente ejerce sobre el compuesto.

Efecto del pH: Debido a las diferentes formas qumicas que son posibles
de existir a diferentes condiciones de pH, la intensidad de fluorescencia
tambin es afectado por este factor. Por ejemplo, el fenol y el in
fenolato tienen diferentes propiedades fluorescentes, por lo que si las
condiciones son de pH bsico la especie estar en el equilibrio qumico
en la forma del fenol y/o ion fenolato, afectando as la intensidad de
fluorescencia.

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Efecto del oxgeno disuelto: Debido al paramagnetismo de la molcula

de oxgeno, esta tiende a desactivar cualesquier estado activado por
oxidacin fotoqumica de la especie fotoluminiscente, provoca
cruzamiento en intersistemas y conversiones de las molculas excitadas
al estado triplete por lo que es deseable que el oxgeno no se encuentre
presente en solucin o su concentracin sea mnima.

Componentes del espectrofluormetro

Los componentes de un fluormetro o espectrofluormetro son muy similares a

los de un espectrmetro Visible- UV.

El haz de referencia pasa a travs de un atenuador de radiacin y se ajusta

ste hasta hacer que la intensidad de este haz sea igual a la intensidad del haz
de fluorescencia que pasa por el recipiente de muestra cuando se encuentra en
ste un blanco. El haz de radiacin dirigido al recipiente de muestra pasa por
un filtro (fluormetro) o por un monocromador (espectrofluormetro), donde se
selecciona la longitud de onda de la radiacin que va a incidir en la muestra. La
radiacin fluorescente emitida por la muestra es en todas direcciones pero es
ms convenientemente medida a un ngulo de 90 con respecto al haz
incidente ya que la radiacin dispersada por la solucin y por la celda misma
puede interferir con la radiacin emitida por la especie fluorescente. Tanto el
haz de referencia como el haz de muestra son dirigidos a un sistema de foto
tubos y posteriormente a un amplificador diferencial que se encuentra
conectado a un sistema de lectura, tal como una escala digital o de aguja.
(Mtodos pticos de Anlisis. Olsen Eugene D. Espaa. Editorial Revert;
1990).

Fuentes de radiacin: la lmpara de tungsteno ordinaria no da suficiente

intensidad para ser utilizada en fluorescencia. Son comunes las lmparas
de Xenn y de Mercurio. La lmpara de xenn es ms verstil que la
lmpara de mercurio, ya que la lmpara de xenn produce una intensa
radiacin por el paso de corriente en una atmsfera de xenn; el
espectro de este tipo de lmpara es continuo de 250 a 600 nm. Con un
pico de mxima intensidad a 470 nm.

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Filtros y monocromadores: se utilizan frecuentemente filtros de

absorcin y filtros de interferencia, la mayor parte de los fluormetros
usan monocromadores de red. Las redes tienen la ventaja de dar
dispersiones lineales, una mejor dispersin en la regin visible y tienen
menor perdida de luz en comparacin con los prismas. Los prismas de
cuarzo dan mejor dispersin en la regin ultravioleta y no poseen
espectros de segundo y tercer orden.

Los filtros se utilizan para realizar dos funciones. El primero es permitir

que solamente una luz de una longitud de onda especfica pueda pasar a
la celda de muestra y excitar una molcula especfica. Los filtros de
excitacin son siempre de Banda Corta (NB). Los filtros de emisin son
generalmente agudos de corte (SC), que permiten que slo la luz emitida
por encima de la longitud de onda especfica pueda pasar en el tubo
fotomultiplicador. Puesto que el tubo fotomultiplicador es sensible a una
amplia gama de longitudes de onda, un filtro permite al usuario elegir el
intervalo de longitud de onda detectada por el tubo fotomultiplicador,
para reducir el ruido de fondo y as aumentar la sensibilidad.

Detectores: debido a que la seal de fluorescencia es de baja intensidad

se requiere de un potente sistema de amplificacin. Por esto son
preferidos los tubos fotomultiplicadores, aunque tambin se usan
comnmente los fototubos. Es imprescindible usar detectores muy
sensibles; muchos instrumentos utilizan tubos fotomultiplicadores de
alta ganancia, tales como los RCA 1P28 y 2P21. El margen de respuesta
espectral de estos tubos es entre 210 y 670 y entre 310 y 670 nm,
respectivamente. Ambos tienen una ganancia alta y una corriente oscura
baja, siendo el 1P21 ligeramente mejor en los dos aspectos.

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Imagen 3. Instrumentos de fluorescencia tpicos. (a) Se muestra un fluormetro de

filtro. Se observa que la emisin se mide en ngulo recto a la fuente de la lmpara de
arco de mercurio. Como la radiacin fluorescente se emite en todas direcciones, la
geometra de 90 evita que el detector vea la fuente. (b) El espectrofluormetro utiliza
dos monocromadores de rejilla y se observa la emisin en ngulo recto. Los dos
monocromadores permiten el barrido de los espectros de excitacin (longitud de onda
de excitacin se barre a una longitud de onda de emisin fija), espectros de emisin
(longitud de onda de emisin se barre a una longitud de onda de excitacin fija) o
espectros sincronizados ( ambas longitudes de onda se barren con un ajuste de
longitud de onda fijo entre los dos monocromadores).

Mtodo oficial

Farmacopea
Pesar exactamente alrededor de 200 mg de Sulfato de Quinina, disolver en 20
ml de cido actico glacial, agregar 4 gotas de p-naftolbencena (SR) y titular
con cido perclrico 0.1 N (SV) hasta punto final color verde. Realizar una
determinacin con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada ml de
cido perclrico 0.1 N equivale a 24.90 mg de Sulfato de quinina.

Clculos

Mtodo sugerido

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Materiales y equipo

PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS

DIAGRAMA DE BLOQUES

1. BIBLIOGRAFA

Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos 11va edicin.

R.A. Day y A.L. Underwood 5 Ed. Prentice Hall, 1995.

Realiz: Revis: Aprob:

.
Grupo: Fecha de emisin: Laboratorio: No. de
Pgina:

Clarkes. Analysis of drugs and poisions. Vol. 2, Ed. Parmaceutical press, 3ra. Edicin;
2004.

Douglas A. Skoog. Anlisis instrumental. 2da edicin. McGraw Hill; 1989.

Anlisis Instrumental . Skoog, D.A., Leary J.J., 4ta ed., Ed. McGraw-Hill, 1994).

Realiz: Revis: Aprob: