SEPARACION DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEINA

USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCION

1.-DATOS EXPERIMENTALES E INFORME:

TABLA 1. Valores de absorbancia obtenidos para la separacin
de fluorescena y azul de metileno.
Tubo No. Volumen A(494nm A(668nm Observacio
de ) ) nes:
elucin(
mL)
1 3 0.041 0.032 T
2 6 0.045 0.056 T
3 9 0.153 1.229 A
4 12 0.093 0.399 A
5 15 0.087 0.122 A
6 18 0.093 0.110 T
7 21 0.090 0.103 T
8 24 0.042 0.044 T
9 27 0.084 0.077 T
10 30 0.014 0.029 T
11 33 0.021 0.015 T
12 36 0.132 0.030 V
13 39 0.609 0.065 V
14 42 0.852 0.085 V
15 45 0.307 0.078 V
16 48 0.219 0.134 V
17 51 0.074 0.045 T
18 54 0.060 0.041 T
19 57 0.133 0.106 T
20 60 0.069 0.051 T
NOTA: T=Transparente, A=Azul, V= Verde
2.-CALCULOS:
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USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCION

1.4

1.2

0.8

Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 10 20 30 40 50 60 70

Vol. de elucion

3.-GRAFICA:
Figura No. 1 Grafica de absorcin contra volumen de elucin
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USANDO CROMATOGRAFIA POR ADSORCION

4.-DISCUSION:
Al montar la columna cromatografa y adicionar la mezcla de
colorantes en el lecho estacionario esperbamos que el azul
de metileno saliera primero debido a que este no tiene una
afinidad por la fase estacionaria ya que ambos poseen cargas
iguales y se repelen, en la experimentacin observamos que
efectivamente el azul de metileno sali primero que la
fluorescena ya que esta tiene una afinidad por la fase
estacionaria debido a sus cargas opuestas y por lo tanto la
fase estacionaria la retuvo mientras el azul de metileno eluia.
Posteriormente al recolectar todas las fracciones de azul de
metileno agregamos regulador de fosfatos esperando
alcalinizar el pH de la fase estacionaria y de este modo
invertir la carga positiva de la almina, a una carga negativa,
y como consecuencia la fluorescena, que tiene carga
negativa, dejo de tener afinidad por la fase estacionaria y
eluyo.
Tambin observamos que en el tubo #3 en la tabla No.1 a 668
nm la absortividad del azul de metileno es mucho mayor que
a 494 nm, por lo pensamos que el azul de metileno se lee
mucho mejor a 668 nm que a 494 nm. De la misma manera la
fluorescena se lee mejor a 494 nm.
En la figura No. 1 observamos 2 picos de gran relevancia que
estn separados entre s esto nos indica que efectivamente la
mezcla de azul de metileno y fluorescena se separ
completamente.
5.-CONCLUSIONES:
La mezcla de azul de metileno y fluorescena se separ
completamente
El azul de metileno eluyo primero y la fluorescena eluyo
en segundo lugar
A 668 nm se lee mucho mejor el azul de metileno y a 494
nm se lee mucho mejor la fluorescena
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