UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

QUI01048 Qumica Analtica Instrumental II

Food Chemistry 146 (2014) 6570

Contamination of cachaa by
PAHs from storage containers
Ana Maria de R. Machado, Maria das Graas Cardoso, Haroldo S. Drea, Elissandro S.
Emdio, Marcell M.S. Silva, Jeancarlo P. dos Anjos, Adelir Aparecida Saczk, David L.
Nelson

Bruna Dinarte dos Santos

Jos Daniel Souza
Introduo

Importncia econmica;

Estado de Minas Gerais o maior produtor, com 8466 produtos;

Somente 452 registrados;

Introduo

Produo clandestina trabalha em condies precrias;

Atendimento s exigncias legislativas;

Inexistncia de legislao que regule a presena de HPAs na

cachaa.

Alguns compostos da famlia dos HPAs

Introduo

Principal fonte de contaminao: antropognica

Limite da Unio Europia: 2 g.L-1 de benzo [a]pireno em alimentos

Materiais e mtodos - Amostras

Destilaria Joo Mendes, municpio de Perdes, Minas Gerais;

A cana recebeu duas fontes de nitrognio (uria e nitrato de amnio),

representando 5 nveis de nitrognio (0, 40, 80, 120 e 160 kg N/ha);

No houve queima prvia das folhas;

Moagem realizada separada para cada dose de fertilizante;

Estocagem por 24 meses das 10 cachaas com doses diferentes;

Materiais e mtodos - Reagentes e solventes

Solventes utilizados:
Acetonitrila
Metanol
Etanol
Diclorometano
Hexano
Acetato de etila
gua Milli-Q

Padres internos HPAs: naftaleno, naftaleno-d8, acenafteno,

acenaftileno, fluoreno, acenafteno-d10, fenantreno, antraceno,
fluoranteno, pireno, benzo[a]antraceno, fenantreno-d10, criseno,
benzo[b]fluoranteno, benzo[k]fluoranteno, benzo[a]pireno, criseno-
d12, peryleno-d12, indeno[1,2,3-c, d]pireno, dibenzo[a, h]antraceno e
benzo[-g, h, i]peryleno.
Materiais e mtodos - Reagentes e solventes

Soluo estoque: 2000,0 mg.L-1 dos 16 HPAs

6 pontos em duplicata: 2,0; 10,0; 20,0; 50,0; 100,0; e 140,0 g.L-1 para
naftaleno, acenaftileno, acenfateno, fluoreno, fenantreno, antraceno,
pireno, benzo[a]antraceno, fluoranteno e criseno. Para os demais, a
curva inicia em 5 g.L-1 .
Materiais e mtodos - Extrao e pr-concentrao

Extrao em fase slida, utilizando uma fase C18;

Condicionamento: pores de 5 mL de CH2CL2, CH3OH e gua ultra
pura;
Alquota de 50 mL de amostra mais 10 mL de acetonitrila;
Eluio com 50 mL de acetato de etila;
Extrao do concentrado em evaporador rotatrio;
Adio de 50 L de padro interno.
Volume final ajustado a 1 mL.
Materiais e mtodos - Anlise cromatogrfica

Cromatgrafo a gs Varian CP 3800 acoplado a um espectrmetro de

massas Varian 4000 MS e autoinjetora CP 8400.

Coluna: HP 5MS (30 m x 0,25 mm x 0,25 m)

Programa de temperatura: 40 C (1 min) 40 C/min 120 C (1 min) 20

C/min 220 C (1 min) 5 C/min 300 C (5 min)

Gs de arraste: He (grau 4,5)

Injetor: modo splitless (1 min) 1 L injetado.

Materiais e mtodos - Identificao e Quantificao

Quantificao por normalizao interna;

Identidade dos picos: tempo de reteno dos padres e ons

caractersticos no MS;

Utilizao do Teste de Scott-Knott

Resultados e discusso
A curva construda com a matriz apresentou o melhor resultado em
comparao com o solvente testado (acetato de etila).

Padres em acetato de etila

Padres na matriz
Matriz sem padres

Maior poder de dissoluo dos

HPAs, picos mais intensos e as
substncias interferentes na
bebida no comprometeram a
identificao dos HPAs.
Resultados e discusso

O efeito da matriz foi estudado para determinar se os compostos

prprios da aguardente interfeririam na resposta dos HPAs.

A maioria das substncias presentes na cachaa apresentou tempos

de reteno menores do que 10 min.

No houve interferncia na separao dos HPAs, com exceo do

naftaleno.
Resultados e discusso Padres de HPAs
Amostra de cachaa
armazenada no tanque de
polietileno
Resultados e discusso
Dados para a identificao dos HPAs : tempos de reteno e os ons presentes no
espectro de massa.
Resultados e discusso
Os dados quantitativos foram obtidos a partir da relao concentrao/rea
proporcional de padro interno deuterado e concentrao/ rea
proporcional ao HPAs correspondente (mtodo da USEPA 8270C).

A linearidade foi definida de acordo com os dados da curva analtica obtida

por padronizao interna.

A maioria dos HPAs apresentaram R2 maior do que 0,994.

Boa correlao linear das concentraes das substncias com as reas dos
picos.
Resultados e discusso

Sensibilidade do detector: obtida a partir da curva analtica da matriz,

sem a utilizao de padres internos.

Maior sensibilidade: pireno

Menor sensibilidade: dibenzo [a, h] antraceno.

Faixa de sensibilidade: 80-652 contagens /g L-1.

A preciso do mtodo foi determinada em termos de repetibilidade.

7 testes foram realizados e os resultados foram avaliados de acordo

com o desvio padro relativo.
Resultados e discusso

Valores de repetibilidade: abaixo do limite de 10% para a maioria dos

compostos analisados na faixa de 1,45% para 23,09%.

Limite de deteco (LOD) e quantificao (LOQ): relao de sinal/rudo

(S/N), medida com as solues padro dos HPAs nas concentraes
de 2 e 5 g L-1.

A relao S/N foi de 3 para o LOD e 10 para o LOQ.

Para HPAs de menor massa molecular: LOD de 0,05 g L-1; LOQ de

0,20 g L-1.

Para HPAs de maior massa molecular: LOD de 0,10 g L-1 ; LOQ de

0,30 g L-1 .
Resultados e discusso

Relao direta entre a natureza do recipiente de armazenagem e o

nvel de contaminao.

Perfis qualitativos e quantitativos diferentes para os dois recipientes.

Resultados e discusso
Compostos com 3 anis: comuns em ambos recipientes.
Compostos com 5 e 6 anis: identificados apenas na bebida
armazenada no tanque de polietileno.

As concentraes mais elevadas foram encontradas na bebida

armazenada em recipientes de polietileno.

As concentraes abaixo do limite legal (1,00 mg L-1 para compostos

com no mximo 3 anis e 2,00 g de L-1 para maiores do que 3 anis)
na bebida armazenada em recipientes de vidro, com exceo de
naftaleno e fenantreno.

Naftaleno e fenantreno: concentraes acima do permitido pela

legislao escocesa.
Resultados e discusso
HPAs na amostra armazenada em recipiente de vidro possuem menor
massa molecular (naftaleno a pireno, sendo o fenantreno com maior
concentrao mdia - mais de 3 g L-1 ).

Indica que a contaminao provem de uma fonte petrognica (resduo

de leo proveniente da etapa de moagem).

HPAs de elevado peso molecular (HMW) esto presentes em

concentraes mais altas do que os de baixo peso molecular (LMH):
indica que as amostras so provenientes de fontes pirolticas.

Todos os HPAs estudados estavam presentes nas amostras

armazenadas em tanque de polietileno.
Resultados e discusso
Anlise de varincia: diferena significativa na concentrao de HPA total
sob as 2 condies de armazenamento.

Limite de 25 g L-1 foi superado em recipientes de plstico O

armazenamento nesse tipo de tanque leva a um aumento de 7 vezes na
concentrao de HPAs.

49,24 g L-1 durante o tempo em que a aguardente foi armazenada.

Resultados e discusso

As amostras so consideradas diferentes: diferenas no processo de

adubao.

No houve diferenas em outras etapas do processo de produo para os

10 tipos de amostras.

A adubao nitrogenada no influenciou a formao de HPA.

Nenhuma literatura tem discutido a formao de HPA durante a

produo da bebida alcolica. Discusses existentes mostram que estes
compostos so incorporados na bebida, por alguma fonte.

Esses fatos levam a considerar que a contaminao de cachaa deve-se

exclusivamente embalagem no mesmo recipiente de plstico .
Concluses

16 HPAs selecionados foram identificados em cachaas armazenadas

em tanque de polietileno: predominncia dos HPAs mais txicos e os
de alto peso molecular.

10 estavam presentes em concentraes superiores aos limites

permitidos em bebidas.

Amostras armazenadas em embalagens de vidro: apenas 2 HPAs

estavam presentes em concentraes superiores aos limites
permitidos.

As concentraes de HPA nas amostras armazenadas em tanque de

polietileno foram maiores do que as armazenadas em embalagens de
vidro, o que indica que os recipientes de polietileno foram as fontes
de contaminao de HPA.
Obrigado!