Los mtodos estndar

de laboratorio:

1. Pesado
2. Punto de fusion
3. ndice de refraccin
4. Conductividad
5. Potenciometra
6. Filtrado
7. Precipitacin
8. Centrifugacin
Los mtodos estndar
de laboratorio:

ndice de refraccin
Los mtodos estndar de laboratorio
La pureza e identidad de una sustancia orgnica puede quedar
establecida cuando sus constantes fsicas (punto de fusin, punto de
ebullicin, color, densidad, ndice de refraccin, rotacin ptica,
etc.), corresponden con las indicadas en la literatura. Por ser de fcil
determinacin y por ser los ms citados, tanto el punto de fusin como
el de ebullicin son operaciones de rutina en los laboratorios de Control
de Calidad.

ndice de refraccin
La balanza analtica
En general en todos los mtodos
de anlisis qumicos es
necesario determinar la masa
(pesar) exacta en alguna etapa,
y para esto se utiliza una balanza
analtica de precisin
generalmente de 0.1 mg.

En otras ocasiones no es
necesario conocer la masa de
una manera tan precisa, y
entonces se utilizan balanzas
monoplato que son ms
resistentes y de menor precisin.
 PESADO DE MUESTRAS

Las balanzas se caracterizan por su exactitud y por su

sensibilidad. La primera cualidad se refiere a la propiedad que
posee cualquier instrumento fsico para suministrar el resultado de
una medida con un valor coincidente con el verdadero; ello implica
que el error sea lo ms reducido posible. La sensibilidad est
determinada por la aptitud de determinar con exactitud resultados
de valores muy reducidos, es la mnima que una determinada
tcnica es capaz de detectar o a partir de la cual puede generar
una seal.
 La balanza analtica
El platillo se asienta sobre el brazo de un suspensor mvil (2), y este sistema mvil est
compensado por una fuerza electromagntica constante. La posicin del suspensor es
monitoreada por un escner elctrico de posicin (1), que devuelve el sistema de
pesado a la posicin cero. La corriente de compensacin es proporcional al peso
colocado sobre el platillo. Esta corriente se enva en forma digital a un microprocesador
que la convierte en el correspondiente valor de peso que aparece en la pantalla digital
La balanza analtica

Tipo Capacidad sensibilidad

Macrobalanza 160 g 0.1 mg
Semimicrobalanza 30 g 0.01 mg
Microbalanzas 1 ug (0.001 mg) 0.1 ug

La exactitud o la fiabilidad de los resultados de pesada estn muy relacionados

con su emplazamiento (ubicacin o posicionamiento) y por esto se ha de colocar
en un lugar:

a) Con muy pocas vibraciones. b) Sin corrientes de aire. c) Con una

temperatura y humedad lo ms constantes posible.
La balanza analtica
Normas de utilizacin de una balanza analtica
Antes de empezar se ha de asegurar que la balanza est bien
nivelada (la mayora de las balanzas tienen una burbuja de aire que
permite comprobar su nivel). Es necesario verificar que la balanza
seale exactamente el cero; es caso de no ser as, hay que calibrarla
nuevamente.
La balanza analtica
Para efectuar la pesada hay que tener en cuenta:
1.No pesar las sustancias directamente sobre el plato de la balanza.
2.Utilizar un recipiente limpio y seco: un vidrio de reloj o un recipiente
lo ms pequeo posible.

3.El recipiente y la carga que se han de pesar tienen que estar a la

misma temperatura que el entorno.

4.Colocar el material que se quiere pesar en el centro del plato de la

balanza.

5.Al acabar el proceso de medida, retirar la carga del plato de la

balanza.
PESADO

Procedimiento :

Se pesa el recipiente idneo que ha de contener a la muestra (esto

se llama tarar). Se retira de la balanza y una vez fuera se aade la
sustancia que se quiere pesar con una esptula, si es un slido, o se
adiciona con una pipeta, si es un lquido. Siempre se debe retirar el
recipiente del plato de la balanza para adicionar el producto, para
evitar que se nos caiga un poco sobre el plato y deteriore la balanza.
El recipiente con la muestra se vuelve a colocar en el centro del plato
de la balanza y se efecta la lectura de pesada. Hay que anotar el
peso exacto, indicando todas las cifras decimales que d la balanza
utilizada. La diferencia entre este valor de pesada y la tara nos dar
el peso del producto.
PESADO

Procedimiento :
Despus de pesar se ha de descargar la balanza, es decir ponerla
a cero (a menos que las indicaciones del fabricante aconsejen otra
cosa).

La cmara de pesada y el plato de la balanza se deben dejar

perfectamente limpios.

Entre dos pesadas independientes hay que lavar la esptula con el

disolvente adecuado, en general agua destiladaa y secarla.
ERRORES DE PESADO

Lectura de peso inestable Soluciones

Manipulacin incorrecta de la carga Colocar la carga en el centro del plato

Diferencia de temperatura entre la carga y Aclimatar la muestra

el entorno

Absorcin de humedad Poner un agente desecante en la cmara

de pesada

Evaporacin Utilizar un recipiente con tapa

Oscilacin del valor Evitar las corrientes de aire

Punto de Fusin

Esta tcnica sirve para el control de la pureza de un producto

qumico de naturaleza slida.

El punto de fusin de un compuesto slido cristalino es la

temperatura a la cual se encuentran en equilibrio la fase slida y
la fase lquida y generalmente es informado dando el intervalo
entre dos temperaturas: la primera es cuando aparece la primera
gotita de lquido y la segunda es cuando la masa cristalina termina
de fundir. Por ejem., el pf del cido benzoico se informa como:

pf = 121 122O
Punto de Fusin

El punto de fusin de un compuesto puro, en muchos casos se d

como una sola temperatura, ya que el intervalo de fusin puede
ser muy pequeo (menor a 1o). En cambio, si hay impurezas,
stas provocan que el pf disminuya y el intervalo de fusin se
ample. Por ejem., el pf del cido benzoico impuro podra ser:

pf = 117 120o

Cabe indicar que:

a) Las sustancias slidas puras tienen un punto de fusin constante y funden en
un intervalo pequeo de temperaturas.
b) La presencia de impurezas disminuye el punto de fusin y hace que la
muestra funda en un intervalo grande de temperaturas.
c) La presencia de humedad o de disolvente dar puntos de fusin incorrectos.
Punto de Fusin

Aprovechando esta caracterstica, se emplea el punto

de fusin mixto (punto de fusin de una mezcla) para
determinar la identidad de un compuesto:

Si se mezclan dos muestras diferentes de la misma

sustancia, el resultado sigue siendo la misma sustancia
pura.
Si se mezclan dos muestras de sustancias diferentes,
stas se impurifican entre s, por lo cual la mezcla fundir
a una temperatura ms baja y el intervalo de fusin ser
ms amplio.
Punto de Fusin

Preparacin de la muestra

Se toma un tubo capilar de paredes finas cerrado por un

extremo, si se dispone de ellos, o bien se cierra un tubo capilar
por un extremo hacindolo girar ligeramente sobre la llama de un
mechero Bunsen o de otro mechero o quemador.

Se pone el producto pulverizado sobre un vidrio de reloj. Se

introduce la muestra en el capilar hasta que llegue a una altura
aproximada de 2 mm y se deja caer suavemente por el interior
de un tubo de vidrio de aproximadamente 1 m de longitud que
est apoyado en una madera. Se repite esta ltima operacin
hasta que el slido est bien compactado dentro del tubo.

Se introduce el tubo capilar en el aparato, de manera que el

contenido sea visible a travs del visor.
Punto de Fusin

Se observa el aspecto del capilar que contiene la muestra.

La temperatura inicial es aquella en la que se observa que la sustancia

empieza a fundirse y se desprende de la pared del capilar (fase B) ,
mientras que la temperatura final es aquella en la cual ha desaparecido el
slido y toda la muestra es lquida (fase E)
 ndice de Refraccin
En el vaco, la luz se propaga a una
velocidad de C=3,0x108 m/s mientras que
en cualquier otro medio, se propaga ms
lentamente. La relacin entre C y la
velocidad de la luz en cualquier otro
medio se denomina ndice de refraccin
de ese material, representado como n
Se llama ndice de refraccin absoluto
"n" de un medio transparente al cociente
entre la velocidad de la luz en el vaco
,"c", y la velocidad que tiene la luz en ese
medio, "v". El valor de "n" es siempre
adimensional y mayor que la unidad, es
una constante caracterstica de cada
medio: n = c/v

El ndice de refraccin se rige por la ley

de Snell, por la cual, esta propiedad
corresponde a la divisin entre los senos
de los ngulos de incidencia (el ngulo
entre el rayo en el primer medio y la
perpendicular en la superficie divisoria) y
de refraccin (ngulo correspondiente al
segundo medio) n= sen(1)/sen(2) .
 ndice de Refraccin
La determinacin del ndice de
Refraccin se ve influenciada por la
temperatura y la longitud de onda de la
luz emitida. Bajo condiciones controladas
de medida, es una propiedad constante
para un medio y permite determinar la
pureza de una sustancia o cuantificar un
determinado compuesto en mezclas
binarias de constituyentes conocidos.
ndice de Refraccin
 ndice de Refraccin
Equipos
 ndice de Refraccin
Aplicaciones
Pureza de un componente
Determinacin de masa molecular
Calculo de coeficientes de
difusin Combinada
Calculo de radio hidrodinmico
Concentracin de azcares
 Conductividad
Definicin

Conductividad elctrica,
capacidad de una sustancia de
conducir la corriente elctrica,
los iones cargados positiva y
negativamente son los que
conducen la corriente, y la
cantidad conducida depender del
nmero de iones presentes y de su
movilidad.

La ley de Ohm plantea que cuando

se mantiene una diferencia de
potencial (E), entre dos puntos de
un conductor, por ste circula una
corriente elctrica directamente
proporcional al voltaje aplicado
(V) e inversamente proporcional a
la resistencia del conductor (R).

I=V/R.(1)
 Conductividad
Definicin

Conductividad elctrica, En disoluciones acuosas, la resistencia

capacidad de una sustancia de es directamente proporcional a la
conducir la corriente elctrica, distancia entre electrodos (l) e
los iones cargados positiva y inversamente proporcional a su rea
negativamente son los que (A)
conducen la corriente, y la
cantidad conducida depender del
R=r*l/A
nmero de iones presentes y de su
movilidad.
Donde r se denomina resistividad
La ley de Ohm plantea que cuando
especfica, con unidades Wcm, siendo su
se mantiene una diferencia de inversa (1/r), la llamada conductividad
potencial (E), entre dos puntos de especfica (k), con unidades W-1cm-1 o
un conductor, por ste circula una mho/cm (mho, viene de ohm, unidad de
corriente elctrica directamente resistencia, escrito al revs).
proporcional al voltaje aplicado
(V) e inversamente proporcional a
la resistencia del conductor (R).

I=V/R.(1)
 Conductividad
Un instrumento mide conductividad posicionando dos
piezas de material conductivo en un rea determinada
sobre una muestra. Se aplica un voltaje (potencial) y la
corriente resultante es medida.

Usando la ley de Ohm V = I. R (1)

V = voltaje
I = corriente
R = resistencia
y sabiendo que G = 1/R (2)
G = conductividad
Entonces podemos deducir, trabajando las frmulas (1) y (2)
que:
G = I/V
 Conductividad-Soluciones acuosas
Terminologa
La terminologa usada para expresar la unidad de conductancia elctrica es el microSiemen.
Altos valores de conductividad pueden expresarse en miliSiemens. Por debajo de 1
microSiemen, la unidad de medida se expresa en ohms de resistencia, que es la inversa del
Siemen:

1.000.000 ohms = 1 megaohm = 1 microSiemen

Conductividad elctrica (CE) y TDS

ndice TDS o Slidos totales disueltos (siglas en ingles de Total Dissolved Solids) es una
medida de la concentracin total de iones en solucin. CE es realmente una medida de la
actividad inica de una solucin en trminos de su capacidad para transmitir corriente. En
soluciones en dilucin, TDS y CE son comparables mediante la siguiente ecuacin:

TDS (mg/l) = 0.5 * 1000 mS/cm

Efectos de temperatura y compensacin

El aumento de temperatura puede hacer que los iones en el agua se

muevan ms rpido.
El nivel de conductividad aumenta cerca de 4 a 5% por oC en aguas
resistivas (tomando como parmetro 25 oC).
 Conductividad-Soluciones acuosas

Hace muchos aos, la industria de tratamiento de agua a

adoptado la nomenclatura del PPM (partes por milln). La
correlacin de microSiemens a PPM puede ser dificultosa, ya
que el agua puede contener diferentes concentraciones de
sales y metales disueltos, que alteran el factor de
conversin. Es preferible por esto usar microSiemens como
unidad de medida, pero se puede tomar la siguiente relacin
a modo de entendimiento:

1 ppm = 1,5 microSiemen

1 ppm (hipoclorito de sodio) = 2 microSiemens

1 ppm (sales mixtas) = 1,5 microSiemens

El factor de conversin ms usado en la industria es: ppm = 0,64 x conductividad

Conductividad-Soluciones acuosas
 Conductividad-Soluciones acuosas

Constante de la celda (K)

La constante de la celda define el volumen entre los electrodos. La constante k es
directamente proporcional a la distancia que separa las dos piezas conductoras
(generalmente de metal), e inversamente proporcional al area de la pieza. K=L/a

L = distancia
a = rea = A x B
 Conductividad-Soluciones acuosas

Material de construccin
La celda bsica de conductividad est compuesta por dos superficies
conductores separadas por una distancia dada por el cuerpo de la celda. El
material del cuerpo puede ser PVC, PVDF, TEFLON, entre otros, incluso
acero inoxidable. Las superficies de medicin pueden ser construidas en
grafito, acero inoxidable, titanio o platino. El criterio de seleccin de los
materiales esta basado en el costo y los requerimientos del proceso.
 Conductividad-Soluciones acuosas

Limpieza y mantenimiento
Se debe tener cierto cuidado al limpiar las celdas de conductividad. Abrasiones o
incrustaciones en la superficie aumenta el rea de medicin, afectando la constante k de la
celda, y la medicin. Adems al estar retenidas las incrustaciones causan problemas en la
calibracin y medicin por aumento del rea de retencin.
El grafito al ser un material suave es recomendable la limpieza se debe realizar con qumicos
no abrasivos (por ejemplo: HCl).
 Conductividad-Soluciones acuosas
Aplicaciones industriales
-En torres de enfriamiento: 0 10000 microSiemens (0 10 miliSiemens)
Electrodo con constante K = 1
Material de la celda: PVC / grafito
-En calderas: 0 10000 microSiemens (0 10 miliSiemens)
Electrodo con constante K = 1
Material de la celda: acero inoxidable
-En osmosis inversa: 0 200 microSiemens (0 0,2 miliSiemens)
Electrodo con constante K = 1
Material de la celda: PVC / grafito
-Soluciones amortiguadoras: 0 10000 microSiemens (0 10 miliSiemens)
Electrodo con constante K = 1
Material de la celda: platino
-En lavanderias: 0 20000 microSiemens (0 20miliSiemens)
Electrodo con constante K = 1
Material de la celda: PVC / grafito
 Medicin de pH
Debido a que todas las reacciones bioqumicas dependen en gran medida
del pH (que se define como log[H+]), es importante medir el pH con gran
exactitud.

Esta medicin se realiza con un potencimetro comercial sumergiendo

simplemente el o los electrodos en la disolucin y leyendo el valor del pH.

Sin embargo, es importante saber cmo

efecta el instrumento la medicin del pH
ya que existen diversos factores que
pueden hacer variar los valores que se
observan respecto al valor real de ph.
 Medicin de pH
Debido a que todas las reacciones bioqumicas dependen en gran medida
del pH (que se define como log[H+]), es importante medir el pH con gran
exactitud.

Esta medicin se realiza con un potencimetro comercial sumergiendo

simplemente el o los electrodos en la disolucin y leyendo el valor del pH.

Sin embargo, es importante saber cmo

efecta el instrumento la medicin del pH
ya que existen diversos factores que
pueden hacer variar los valores que se
observan respecto al valor real de ph.
 Medicin de pH
Un potencimetro mide la diferencia de voltaje en una disolucin. La pieza
clave del sistema es un electrodo cuyo potencial es dependiente del pH.

El que se usa con mayor frecuencia es el electrodo de vidrio. El vidrio de

borosilicato es permeable a los iones H+.

Debido a que el paso de los iones H+ a

travs del vidrio aade un ion positivo a
la disolucin con una baja concentracin
de iones H+, y deja en la disolucin inicial
un ion negativo, se desarrolla un potencial
elctrico a travs del vidrio.

E: potencial elctrico
R: constante de los gases.
T: temperatura absoluta.
F: constante de Faraday
H+1 y H+2 : conentraciones
de los iones hidrneo en el
exterior e interior del vidrio
 Medicin de pH
Si la concentracin de H+ se fija en una de las disoluciones , el
potencial ser proporcional al pH de la otra disolucin.

Sin embargo, No es posible determinar en el

laboratorio los valores absolutos para
potenciales de semicelda, es decir,
experimentalmente slo se pueden
determinar los potenciales de la celda con
respecto a una referencia.

El voltaje que se mide es este sistema

es, la diferencia entre el potencial del
Calomelanos Hilo de plata
(Hg, HGCl2, recubierto

electrodo de vidrio y el de referencia

KCL) con AgCl

KCl saturado HCl 0.1 N

Vidrio
permeab
le a H+

Disolucin
 Medicin de pH
Si la concentracin de H+ se fija en una de las disoluciones , el
potencial ser proporcional al pH de la otra disolucin.

Sin embargo, No es posible determinar en el Debido a que el electrodo de vidrio

laboratorio los valores absolutos para est, por lo general, lleno de HCl
potenciales de semicelda, es decir, 0.1N,
experimentalmente slo se pueden
determinar los potenciales de la celda con
respecto a una referencia.
Y como el pH= -log [H+]
El voltaje que se mide es este sistema
es, la diferencia entre el potencial del
electrodo de vidrio y el de referencia

constante
 Complicaciones en la medicin del pH

1. Dependencia del pH con respecto a la concentracin de iones

El pH de una disolucin amortiguadora no depende de la concentracin de los
iones de sta, sino de una cantidad termodinmica denominada coeficiente
de actividad. Este parmetro esta fuertemente relacionado con la
concentracin total de iones en la solucin (en realidad la fuerza inica).
De esta forma, el pH del buffer variar con su propia concentracin y con la
concentracin de otras sales.

pH1 7.0
Esto es importante a
considerar sobre todo, para
la utilizacin de las
pH2 7.0 0.5
disoluciones estndar o
concentradas que deben
diluirse generalmente 25x o
ms. La solucin concentrada debe prepararse de
forma que cuando se mida el pH de la
solucin diluida, el valor sea el requerido.
 Complicaciones en la medicin del pH

2. Contaminacin o alteracin de los electrodos

Cualquier sustancia que pueda ser adsorbida por el vidrio permeable a los H+
del electrodo, puede afectar la lectura del pH al interferir con la
permeabilidad de los iones H+.
a) Soluciones de protena: formacin de pelcula de protena sobre el vidrio.
b) Soluciones amortiguadoras de Tris: reacciona con los componentes de algunos electrodos
comerciales.

3. Error de Sodio
Los electrodos de vidrio corriente son casi siempre permeables a los iones
Na+. Por consiguiente, puede producirse un potencial relacionado con los
iones Na+, del mismo modo que se produce con los iones H+.
Si esto paso, el ion Na+ ocasiona un descenso en el pH a medida que la
concentracin de sodio aumenta, debido a que el electrodo detecta la suma
de las concentraciones de ambos iones.
Este efecto es ms importante a valores altos de pH (cuando se utiliza
NaOH) y puede ser del orden de una o dos unidades de pH en soluciones de
iones Na+ 1 M.
 Complicaciones en la medicin del pH

4. Un problema especial con el buffer Tris

Esta solucin amortiguadora es posiblemente una de las ms utilizada en
procesos bioqumicos, debido a su elevada capacidad de amortiguar el pH,
baja toxicidad, baja interferencia con las reacciones bioqumicas, la
ausencia de interaccin con iones metlicos y su disponibilidad en su forma
pura.
Sin embargo, presenta tres inconvenientes:
1. Reacciona con algunos electrodos
2. Su pH vara ms con la temperatura ( su pH desciende aproximadamente 0.03 por
cada grado oC.
3. Su dependencia con respecto a su concentracin es tambin mayor.
 Tipos de electrodos

1. Electrodos de vidrio
Permeables al ion H+ son de cuatro tipos:
I. De uso corriente.
II. Para alta temperatura
III. De bajo error de sodio (electrodos para pH elevados).
IV. Ultrasensibles al ion Na+.
 Tipos de electrodos

2. Electrodos de referencia
impermeables al ion H+ son de tres tipos:
I. De uso corriente (normalmente de calomelanos).
II. De alta temperatura (en general de Ag-AgCl).
III. Libres de cloruro (emplean Hg-HgSO4 en lugar de Cl).
IV. Ultrasensibles al ion Na+.
 Tipos de electrodos

3. Electrodos combinados
Constante de un electrodo de vidrio y uno de referencia, en una sola unidad.
Empleados casi exclusivamente en bioqumica.
Una de sus ventajas es que requieren de un menor volumen para la
determinacin del pH.
Desventajas: elevado precio y si uno de los dos electrodos falla, hay que
desechar ambos
 Tipos de electrodos

4. Otros
Existen tambin otros electrodos para mediciones distintas del pH.
I. Electrodos metlicos para la medicin del potencial redox y la concentracin de
iones especficos.
i. Electrodos de plata para la medicin directa de iones Cl-, Br-, I-, HS-.
II. Sondas sensibles a gases
 Tipos de electrodos

4. Otros
Existen tambin otros electrodos para mediciones distintas del pH.
III. Electrodos enzimticos
 Utilizacin del papel de pH
Otros
Existen un amplio surtido de papeles indicadores de color (algunas
supuestamente sensibles a 0.2 unidades de pH
Son tiles para mediciones rpidas y aproximada.
Sin embargo pueden introducir errores del orden de varias
unidades de pH debido a altas concentraciones de sales,
protenas o materiales cromatogrficos como la DEAE-celulosa.
En algunos casos los colorantes del papel pueden reaccionar con
sustancias orgnicas.
En soluciones de bajo poder amortiguador el colorante puede
actuar como tampn y cambiar el pH y dar lugar a lecturas falsas.
 Preparacin de soluciones amortiguadoras

cido Formula pKa1 pKa2 pKa3

Actico CH3COOH 4.757

Asprtico HO2CCH(NH2)CH2CO2H 1.99 3.9 10

Fosfrico H3PO4 2.12 6.8 12.66
c. Brico H3BO3 9.24 12.4 13.3
c. Ctrico C6H8O7 3.15 4.77 6.4
Tris-HCl (HOCH2)3CNH2HCL 8.06
Materiales utilizados

Disolver uno por uno cada

componente
Disolver en un volumen menor
al volumen de aforo (50 al 75
% volumen final)
De preferencia a temperatura
ambiente.
En el caso de soluciones
concentradas, verificar el valor
de saturacin de la especie en
la solucin
Calibrar el electrodo con
estndares de referencia a
temperatura ambiente
Problema

Se requiere preparar 1 L de solucin amortiguadora de

fosfatos 20 mM a pH 7.5.
Calcular la cantidad de Fosfato de sodio monobsico y
dibsico a utilizar.

Datos:
NaH2PO4. H2O PM= 137.99 gr/mol
Na2HPO4 PM= 141.96 gr/mol